Name: disclosing hemolymph collection and inoculation of metarhizium blastospores into rhipicephalus microplus ticks towards invertebrate pathology studies
Uploaded: 2019-06-01T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies at JoVE.

इस अध्ययन भाग में ब्राजील, वित्त कोड 001 से Coordenacão de Aperfeiçoamento डी Pessoal डी Nível सुपीरियर (CAPES) द्वारा वित्त पोषित किया गया । CAPES A.F. Marciano के लिए पीएचडी छात्रवृत्ति प्रदान की है । हम जे Fiorotti के लिए पीएचडी छात्रवृत्ति प्रदान करने के लिए ब्राजील के राष्ट्रीय वैज्ञानिक और तकनीकी विकास परिषद (CNPq) का शुक्रिया अदा करते हैं । यह शोध भी रियो डी जनेरियो (FAPERJ) और CNPq. V.R.E.P. Bittencourt के राज्य के अनुसंधान के लिए कार्लोस Chagas Filho फाउंडेशन के अनुदान द्वारा समर्थित किया गया है एक CNPq शोधकर्ता है ।

वर्तमान अध्ययन में प्रयुक्त Ticks एक कृत्रिम कॉलोनी, रियो डी जनेरियो के संघीय ग्रामीण विश्वविद्यालय में mantained द्वारा प्राप्त किया गया था, जो तरीकों कशेरुकी जानवरों (CEUA-IV/UFRRJ #037/२०१४) के उपयोग के लिए आचार समिति द...

<ol>
	<li>Grisi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reassessment+of+the+potencial+economic+impact+of+cattle+parasites+in+Brazil.">Reassessment of the potencial economic impact of cattle parasites in Brazil.</a> Revista Brasileira de Parasitologia Veterin&#225;ria. 23 (2), 150-156 (2014).</li><li>Schrank, A., Vainstein, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metarhizium+anisopliae+enzymes+and+toxins.">Metarhizium anisopliae enzymes and toxins.</a> Toxicon. 56 (7), 1267-1274 (2010).</li><li>Camargo, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metarhizium+anisopliae+for+controlling+Rhipicephalus+microplus+ticks+under+field+conditions.">Metarhizium anisopliae for controlling Rhipicephalus microplus ticks under field conditions.</a> Veterinary Parasitology. 223, 38-42 (2016).</li><li>Perinotto, W. M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+pathogenicity+of+different+Metarhizium+anisopliae+s.l.+isolates+in+oil+formulations+against+Rhipicephalus+microplus.">In vitro pathogenicity of different Metarhizium anisopliae s.l. isolates in oil formulations against Rhipicephalus microplus.</a> Biocontrol Science and Technology. 27 (3), 338-347 (2017).</li><li>Pedrini, N., Crespo, R., Juarez, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry+of+insect+epicuticle+degradation+by+entomopathogenic+fungi.">Biochemistry of insect epicuticle degradation by entomopathogenic fungi.</a> Comparative Biochemistry and Physiology. Part C: Toxicology and Pharmacolpgy. 146 (1-2), 124-137 (2007).</li><li>Ortiz-Urquiza, A., Keyhani, N. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+on+the+surface:+Entomopathogenic+fungi+versus+the+insect+cuticle.">Action on the surface: Entomopathogenic fungi versus the insect cuticle.</a> Insects. 4 (3), 357-374 (2013).</li><li>Angelo, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+serpins+involved+in+cellular+immune+response+of+Rhipicephalus+microplus+challenged+with+fungi.">Detection of serpins involved in cellular immune response of Rhipicephalus microplus challenged with fungi.</a> Biocontrol Science and Technology. 24 (3), 351-360 (2014).</li><li>De Paulo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhipicephalus+microplus+infected+by+Metarhizium:+unveiling+hemocyte+quantification,+GFP-fungi+virulence,+and+ovary+infection.">Rhipicephalus microplus infected by Metarhizium: unveiling hemocyte quantification, GFP-fungi virulence, and ovary infection.</a> Parasitology Research. 117, 1847-1856 (2018).</li><li>Marmaras, V. J., Lampropoulou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulators+and+signalling+in+insect+haemocyte+immunity.">Regulators and signalling in insect haemocyte immunity.</a> Cell Signal. 21, 186-195 (2009).</li><li>Hinzmann, M. F., Lopes-Lima, M., Gon&#231;alves, J., Machado, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiaggregant+and+toxic+properties+of+different+solutions+on+hemocytes+of+three+freshwater+bivalves.">Antiaggregant and toxic properties of different solutions on hemocytes of three freshwater bivalves.</a> Toxicological &amp; Environmental Chemistry. 95, 790-805 (2013).</li><li>Nation, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Insect Physiology and Biochemistry. , (2016).</li><li>Gene, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M&#233;moires+de+l'Acad&#233;mie+royale+des+sciences.">M&#233;moires de l'Acad&#233;mie royale des sciences.</a> Torino. 9, 751 (1848).</li><li>Lees, A. D., Beament, J. W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organ+waxing+in+ticks.">An organ waxing in ticks.</a> The Quarterly Journal of the Mythic Society. 7, 291-332 (1948).</li><li>Sonenshine, D. E., Roe, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of ticks. , (2014).</li><li>Tan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+proliferation+in+larval+silkworm+Bombyx+mori.">Characterization of hemocytes proliferation in larval silkworm Bombyx mori.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (6), 595-603 (2013).</li><li>Bowden, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+humoral+immune+systems+of+the+American+lobster+(Homarus+americanus)+and+the+European+lobster+(Homarus+gammarus).">The humoral immune systems of the American lobster (Homarus americanus) and the European lobster (Homarus gammarus).</a> Fish Research. 186, 367-371 (2017).</li><li>Sonenshine, D. E., Hynes, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+and+related+aspects+of+the+innate+immune+response+in+ticks.">Molecular characterization and related aspects of the innate immune response in ticks.</a> Frontiers in Bioscience. 13, 7046-7063 (2008).</li><li>Tsakas, S., Marmaras, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+immunity+and+its+signaling:+an+overview.">Insect immunity and its signaling: an overview.</a> Invertebrate Survival Journal. 7, 228-238 (2010).</li><li>Burgdorfer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolymph+Test.+A+technique+for+detection+of+Rickettsiae+in+ticks.">Hemolymph Test. A technique for detection of Rickettsiae in ticks.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 19, 1010-1014 (1970).</li><li>Dunham-Ems, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+reveals+a+biphasic+mode+of+dissemination+of+Borrelia+burgdorferi+within+ticks.">Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks.</a> Journal of Clinical Investigation. 119, 3652-3665 (2009).</li><li>Patton, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva,+salivary+gland,+and+hemolymph+collection+from+Ixodes+scapularis+ticks.">Saliva, salivary gland, and hemolymph collection from Ixodes scapularis ticks.</a> Journal of Visualized Experiments. 60, e3894 (2012).</li></ol>

रोगजनकों का टीका उपयोगी है जब अध्ययन करने के लिए प्रयोगात्मक आर्थ्रोपॉड मॉडल में सूक्ष्मजीवों के vivo में कार्रवाई की जांच करना है क्योंकि यह आश्वस्त करता है कि रोगज़नक़ मेजबान के अंदर है । इस तकनीक को आ?...

पशु टिक, राइपिसेफेलस माइक्रोप्लस, एक हेमेटोफेगस ectoparasite उष्णकटिबंधीय क्षेत्रों में पशुधन पर एक भारी नकारात्मक प्रभाव के साथ है । इस टिक के रोगजनक एजेंटों के वेक्टर जैसे babesia बोविस, babesia बिजेमिना, और एनाप्लाज्मा marginale कि, प्रत्यक्ष hemofeeding नुकसान के साथ संयुक्त, दूध और मांस उत्पादन को कम कर सकते हैं, एनीमिया और अंत में मौत का कारण । इस ectoparasite की वजह से नुकसान ब्राजील1में ३,२४०,०००,००० डॉलर सालाना में अनुमान लगाया गया । टिकाऊ तरीकों की मांग कर रहे है और एंटोमोपैथोजेनिक एजेंटों का उपयोग एक आशाजनक विकल्प के लिए रासायनिक acaricides का उपयोग कम माना जाता है2,3,4।
मेटार्ज़ियम एसपीपी के रूप में entomopathogenic कवक, ticks सहित आर्थ्रोपोड के प्राकृतिक दुश्मन हैं, और कुछ आइसोलेट्स biocontrollers के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है । ये रोगजनक सक्रिय रूप से क्यूटिकल के माध्यम से मेजबान को संक्रमित करते हैं और उनके शरीर को2,5,6उपनिवेश करते हैं । के रूप में संक्रमण विकसित, सेलुलर और humoral प्रतिक्रियाओं टिक प्रतिरक्षा प्रणाली द्वारा मध्यस्थता कर रहे हैं । टिक hemolymph का विश्लेषण रोगजनकों7,8के साथ चुनौतीपूर्ण के बाद प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन करने के लिए एक उपयोगी उपकरण के रूप में रिपोर्ट की है ।
आर्थ्रोपोड्स ' प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया humoral और सेलुलर प्रतिक्रियाओं में विभाजित है । ह्यूरल प्रतिक्रिया hemocytes के माध्यम से किया जाता है और रोगाणुरोधी प्रोटीन/पेप्टाइड्स, जबकि सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का उत्पादन हेमग्लूटानेशन प्रक्रियाओं और निर्माण शामिल है । इन कोशिकाओं को सभी आर्थ्रोपोड से रक्तलसीका में मौजूद हैं और जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया9से जुड़े अध्ययनों में एक अर्थपूर्ण भूमिका विकसित करने के लिए सूचित कर रहे हैं, के रूप में यह सीधे फैगोसाइसिस और encapsulation प्रक्रियाओं से संबंधित है. तदनुसार, hemocytes के बारे में अध्ययन मौत मार्ग की जांच करने के लिए और इस तरह के autophagy, apoptosis, और परिगलन के रूप में प्रक्रियाओं को समझने में मदद कर सकते हैं । Bivalves के रूप में कुछ अकटेरूरों में, hemocytes संग्रह सेल व्यवधान की तरह सीमाओं का सामना करना पड़ता है, कम hemocytes मात्रा प्राप्त की, और बरामद कोशिकाओं की कम एकाग्रता10. बहुत बार, लागू पद्धति पर निर्भर करता है, कोशिकाओं की कम एकाग्रता प्राप्त की है, सीधे कोशिकाओं परिमाणीकरण और विश्लेषण पर असर.
Hemocytes में परिसंचारी hemocytes की संख्या अलग आर्थ्रोपोड के बीच चर रहा है और यह एक ही प्रजातियों में सेक्स, उंर के रूप में विभिंन शारीरिक चरणों के कारण बदल सकते हैं, और आर्थ्रोपॉड के विकास के चरण11। Hemocytes भी कुछ अंगों का पालन पाया जा सकता है और सिर्फ संक्रमण की प्रक्रिया के बाद11संचलन में जारी किया । फिर भी, सबसे अध्ययन कीड़े का उपयोग की सूचना दी, जबकि ticks कम उनके शरीर विज्ञान और विकृति के बारे में पता लगाया रहना । रोगज़नक़ टीका के बावजूद और ticks में हेलिम्पीएच संग्रह कम इस्तेमाल किया तकनीकों रहे हैं, मानक तरीकों की स्थापना और अधिक सटीक अध्ययन के विकास में मदद करता है ।
वर्तमान अध्ययन के उद्देश्य के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया तरीकों की तुलना करने के लिए था hemolymph संग्रह और रोगजनकों के टीका में R. microplus ticks, hemolymph अधिग्रहण और hemolymph एकाग्रता में प्रभावकारिता का मूल्यांकन.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:668px;" width="668">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Alkaline Hypochlorite solution</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">A1727</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">G8270-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">EDTA</td>
			<td style="width:116px;">Synth</td>
			<td style="width:158px;">2706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">16000036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flexible rubber</td>
			<td style="width:116px;">BD</td>
			<td style="width:158px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Giemsa stain</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">48900-500ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Glass capillary</td>
			<td style="width:116px;">CTechGlass</td>
			<td style="width:158px;">CT95-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Insulin syringe (needle)</td>
			<td style="width:116px;">BD</td>
			<td style="width:158px;">SKU:&#160;324910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET014512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Leibovitz&#39;s L-15 culture medium&#160;</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">11415-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Methanol</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">34860-1L-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Microscope slides</td>
			<td style="width:116px;">Kasvi</td>
			<td style="width:158px;">K5-7105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Microtubes</td>
			<td style="width:116px;">BRAND</td>
			<td style="width:158px;">Z336769-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET014593</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">NaCl</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">S7653-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Neubauer chamber&#160;</td>
			<td style="width:116px;">Kasvi</td>
			<td style="width:158px;">K5-0111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Penicillin</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">15140163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">P2714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Tween 80</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET003662</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

disclosing hemolymph collection and inoculation of metarhizium blastospores into rhipicephalus microplus ticks towards invertebrate pathology studies

Ticks बाध्य hematभक्षी ectoparasites और Rhipicephalus microplus पशु चिकित्सा में बहुत महत्व है क्योंकि यह एनीमिया, वजन घटाने, ' जानवरों के चमड़े का मूल्यह्रास का कारण बनता है और भी कई रोगजनकों के एक सदिश के रूप में कार्य कर सकते हैं । इन परजीवी को नियंत्रित करने के लिए अत्यधिक लागत के कारण, रासायनिक acaricides के अनुचित उपयोग की वजह से पर्यावरण को नुकसान, और पारंपरिक परजीवी के खिलाफ वृद्धि हुई प्रतिरोध, ticks के वैकल्पिक नियंत्रण के उपयोग के द्वारा, उदाहरण के लिए, एंटोमोपैथोजेनिक कवक एक दिलचस्प दृष्टिकोण माना गया है । फिर भी, कुछ अध्ययनों का प्रदर्शन किया है कि कैसे टिक प्रतिरक्षा प्रणाली के लिए इन entomopathogens से लड़ने के लिए कार्य करता है । इसलिए, इस प्रोटोकॉल engorged महिलाओं में कीट और दो तकनीकों hemolymph संग्रह और hemolymph संचयन के लिए इस्तेमाल किया में entomopathogen के लिए इस्तेमाल किया दो तरीकों को दर्शाता है । टांग निवेशन पर रोगजनकों के टिकटिक महिला के शरीर में टीका स्कूटम और घुटने के बीच टीका के विपरीत महिलाओं के जीवविज्ञान के मापदंडों के मूल्यांकन की अनुमति देता है, जो अक्सर gené's अंग को नुकसान. पृष्ठीय रक्तलसीका संग्रह में पैरों के माध्यम से संग्रह की तुलना में अधिक मात्रा में वसूली हुई । टिकटिक hemolymph संग्रह और प्रसंस्करण की कुछ सीमाएं शामिल हैं) hemolymph व्यवधान की उच्च दर, द्वितीय) बाधित midgut के साथ रक्तलसीका संदूषण, और iii) कम hemolymph मात्रा वसूली. जब रक्तलसीका पैर काटने के माध्यम से एकत्र किया जाता है, हेलिम्पीएच पैर खोलने पर जमा करने के लिए समय लगता है, थक्के प्रक्रिया पक्ष । इसके अलावा, कम hemocytes पृष्ठीय संग्रह की तुलना में पैर के माध्यम से संग्रह में प्राप्त कर रहे हैं, भले ही पहली विधि का प्रदर्शन किया जा करने के लिए आसान माना जाता है । एंटोमोपैथोजेनिक एजेंटों द्वारा मध्यस्थता ticks में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को समझने के लिए उनके रोगजनन अनावरण और टिक नियंत्रण के लिए नए लक्ष्यों को विकसित करने में मदद करता है । यहाँ वर्णित टीका प्रक्रियाओं बहुत कम तकनीकी संसाधनों की आवश्यकता है और न केवल रोगजनक सूक्ष्मजीवों के लिए ticks का पर्दाफाश करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । इसी प्रकार, टिक hemolymph का संग्रह कई शारीरिक अध्ययन के लिए पहला कदम का प्रतिनिधित्व कर सकते हैं ।

यह आलेख टीका और रक्तलसीका संग्रह के लिए ticks पर लागू तरीकों दृष्टिकोण । पैर जांघ और टिक महिला के शरीर के बीच टीका के बाद, कुछ तरल पदार्थ (hemolymph) प्रक्रिया के दौरान स्रावित किया जा सकता है; हालांकि, ...

Watch this Scientific Journal Video about Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies at JoVE.

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

टिक hemolymph का विश्लेषण कैसे कुछ रोगजनकों रोग के कारण और कैसे ticks immunologically इस संक्रमण के लिए प्रतिक्रिया के बारे में जानकारी का एक महत्वपूर्ण स्रोत का प्रतिनिधित्व करता है । वर्तमान अध्ययन यह दर्शाता है कि फफूंद के प्रवर्त को कैसे अभिगृहीत किया जा सके और राइपिसेफैलस माइक्रोप्लस एवरगेड मादा से रक्तलसीका एकत्रित करें ।

रक्तलसीका संग्रह का खुलासा और मेटारिज़ियम ब्लाकोस्पोरस में आरएचपीसेफैलस माइक्रोप्लस Ticks में अकटेरुकी विकृति अध्ययन की ओर

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight ...

टिक हेमेटोपेगस एक्टोपैरासिट, रिपिपेफलस माइक्रोप्लस हैं, जिन्हें मवेशियों के टिक के रूप में जाना जाता है, उष्णकटिबंधीय क्षेत्रों में पशुधन पर भारी नकारात्मक किफायती प्रभाव पड़ता है। इसके अलावा, रासायनिक acaricides के अनुचित उपयोग और पारंपरिक परजीवी के लिए टिक आबादी के बढ़ते प्रतिरोध के कारण अपमानित पर्यावरणीय स्थितियों और सार्वजनिक स्वास्थ्य चिंताओं के बारे में बढ़ती चिंताओं, वैकल्पिक नियंत्रण विधियों पर अनुसंधान उत्तेजक हैं, जैसे एंटोमोपैथोजेनिक कवक का उपयोग। ये एंटोमोपैथोजन सक्रिय रूप से अपने क्यूटिकल के माध्यम से आर्थ्रोपोड मेजबानों को संक्रमित करते हैं और अपने शरीर को उपनिवेश बनाते हैं।आर्थ्रोपोड में फंगल इंफेक्शन के लिए अलग-अलग प्रतिक्रियाएं हो सकती हैं। आर्थ्रोपोड प्रतिरक्षा प्रणाली को विनोदी और सेलुलर प्रतिक्रियाओं में विभाजित किया गया है। विनोदी प्रतिक्रिया में हेमेग्लूटिनेशन प्रक्रिया और रोगाणुरोधी अणुओं का उत्पादन शामिल है, जबकि हीमोसाइट्स सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में मध्यस्थता करते हैं।आर्थ्रोपोड प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया पर अधिकांश अध्ययनों कीड़ों का उपयोग करके सूचित किया जाता है जबकि टिक प्रतिक्रियाएं कम होती हैं। इसके अलावा, रोगजनक टीका और टिक हीमोलिम्फ संग्रह आर्थ्रोपोड की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को बेहतर ढंग से समझने के लिए आवश्यक खराब व्यापक तकनीकें हैं। तदनुसार, इस वीडियो पता तकनीकों टीका, हीमोलिम्फ संग्रह और प्रसंस्करण फिल्म के लिए इस्तेमाल किया ।चूंकि टिक हीमोसाइट्स संचयन कुछ सीमाओं का सामना करता है, जैसे कोशिकाओं में व्यवधान, कम हीमोलिम्फ मूल्य प्राप्त करना, और बरामद कोशिकाओं की कम एकाग्रता। कोशिकाओं के विन्यास और विश्लेषण पर सीधे संक्रमित। टिक सभा के बाद, महिलाओं को धो लें।नल के पानी का उपयोग करें और उन्हें 500 मिलीलीटर ग्लास बीकर प्राप्तकर्ता में तीन मिनट के लिए 0.5% सोडियम हाइपोक्लोराइट समाधान में विसर्जित करें। क्यूटिकल स्वच्छता के लिए, महिलाओं को 20 महिलाओं के साथ सजातीय समूहों में विभाजित करें। प्रत्येक समूह की तीन प्रतिकृति प्रदर्शन किया गया ।टीका प्रक्रिया में मेटारिज़ियम रॉबर्ट्सी ब्लास्टोसपोर का उपयोग किया जाता था। प्लास्टिक पैराफिन फिल्म की सतह पर पांच माइक्रोलीटर मेटारिज़ियम ब्लास्टोसपोर्स निलंबन के तरल पर जोड़ें। टीका प्रक्रिया को गति देने के लिए, प्लास्टिक पैराफिन फिल्म सतह में कई बुलबुले जोड़े जा सकते हैं, प्रत्येक बुलबुले पांच माइक्रोलीटर के अनुरूप होते हैं।एक मिलीमीटर अल्ट्रा-फाइन इंसुलिन सिरिंज और एक 0.3 मिलीमीटर सुई का उपयोग करें ताकि निलंबन डाला जा सके और इसे टिक में टीका लगाया जा सके। इसका उपयोग करने से पहले सभी हवा को सिरिंज से बाहर निकालना याद रखें। स्कूटी और कैपिटुलम के बीच टिक मादा में कवक निलंबन के 5 माइक्रोलीटर टीका लगाएं।हीमोलिम्फ की एक छोटी मात्रा सुई चीरा के बाद तैयार करने पर मौजूद हो सकती है। हवा का टीका न लगाने में सावधानी बरतें। पैर जांघ और महिला के शरीर के बीच कवक निलंबन के साथ टीका एक मिलीलीटर अल्ट्रा ठीक इंसुलिन सिरिंज एक ०.३ मिलीमीटर सुई के साथ युग्मित ।जब पैर की जांघ और टिक मादा के शरीर के बीच मेटारिज़ियम ब्लास्टोसपोर टीका किया जाता है, तो सुई प्रविष्टि के बाद जांघ पर हीमोलिम्फ की एक छोटी मात्रा मौजूद हो सकती है। हवा का टीका न लगाने में सावधानी बरतें। एक पंखों वाला जलसेक के रबर भाग का उपयोग करें एक 0.3 miliimeters केशिका ट्यूब और एक फिल्टर टिप हीमोलिम्फ संग्रह प्रदर्शन करने के लिए सेट।0.3 मिलीमीटर सुई का उपयोग करके मादा पृष्ठीय क्यूटिकल को बाधित करें। व्यवधान के बाद टिक शरीर के एंटेरियल भाग पर कोमल दबाव लागू करें। व्यवधान स्थल से बाहर एक लगभग पारदर्शी तरल पूलिंग का निरीक्षण करें।एक पंखों वाला जलसेक सेट और एक 0.3 मिलीमीटर केशिका ट्यूब के एक रबर भाग के साथ मिलकर फिल्टर टिप के माध्यम से तरल चूसने से हीमोलिम्फ ले लीजिए। टिक के शरीर को शायद ही स्थिरीकरण के दौरान न दबाएं क्योंकि यह मिडगुट को बाधित कर सकता है और हीमोलिम्फ को दूषित कर सकता है। जब तक कोमल दबाव संदूषण के बिना तरल पदार्थ को निष्कासित कर सकते हैं रुको।टिक को स्थिर करें। सामने के पैर का एक टुकड़ा काट लें। एक या एक से अधिक पैर काटे जा सकते हैं साथ ही एक ही पैर को एक से अधिक बार काटा जा सकता है।टिक के पीछे शरीर के हिस्से पर कोमल दबाव लागू करें। कट साइड पर एक पारदर्शी तरल बुलबुला दिखाने का निरीक्षण करें और इसे केशिका ट्यूब के साथ इकट्ठा करें। टिक के शरीर को शायद ही न दबाएं, इसके जुड़ाव के दौरान क्योंकि यह मिडगुट को बाधित कर सकता है और हीमोलिम्फ को दूषित कर सकता है।जब तक कोमल दबाव संदूषण के बिना तरल पदार्थ को निष्कासित कर सकते हैं रुको। हीमोलिम्फ संग्रह के बाद, इसे पहले 30 माइक्रोलीटर प्रोटीज कॉकटेल और 82 माइक्रोलीटर खारा बफर से भरे 1.5 मिलीलीटर माइक्रोट्यूब में जमा करें। हीमोलिम्फ संग्रह में बर्फ पर माइक्रोट्यूब रखें।हीमोलिम्फ अपकेंद्रित्र के बाद सेंट्रलाइज नमूने और हीमोसाइट्स के सॉफ्ट पेलेट का गठन किया जाएगा। हीमोलिम्फ मात्राकरण के लिए, माइक्रोट्यूब के अंदर कुल मात्रा की गणना करके प्राप्त हीमोलिम्फ मात्रा की मात्रा को निर्धारित करें और प्रोटीज़ कॉकटेल और खारा बफर की मात्रा को छूट दे। सुपरनेट सेल-फ्री हेमोलिम्फ को सावधानी से हटा दें, और धीरे-धीरे कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें।न्यूबॉयर चैंबर में 10 माइक्रोलीटर पुनः निलंबित हीमोसाइट्स रखकर हीमोसाइट्स की मात्रा निर्धारित करें। कोशिकाओं के लिए फिर से निलंबन एक संस्कृति मीडिया का इस्तेमाल किया गया था । टिक के फ्रंट लेग को काटें, टिक के पीछे के शरीर के हिस्से पर कोमल दबाव लागू करें, कट साइट पर एक पारदर्शी तरल बुलबुला दिखाएं।हीमोलिम्फ बूंदों को सीधे साफ माइक्रोस्कोप स्लाइड पर लगाएं। उसके बाद कोशिकाओं को दाग करने के लिए उचित तरीकों का उपयोग करें। पैर की जांघ और टिक महिला शरीर के बीच टीका भी मिडगुट और मालपिगियन ट्यूबल्स जैसे टिक आंतरिक अंगों को नुकसान पहुंचा सकता है।जब टिक मिडगुट को पृष्ठीय हीमोलिम्फ संग्रह में सुई द्वारा बाधित किया जाता है तो प्राप्त तरल पदार्थ लाल होता है, पारदर्शी नहीं। यह एक गलत हीमोलिम्फ संग्रह को इंगित करता है। इस मामले में, हीमोलिम्फ को दूषित होने के रूप में छोड़ दिया जाएगा।हेमोलिम्फ संदूषण भी देखा जा सकता है जब टिक स्वाभाविक रूप से रोगजनकों के उच्च भार से संक्रमित होता है, या टीका लगाने वाले रोगजनकों के कारण मृत्यु प्रक्रिया के बाद अंतिम चरणों में होता है। पृष्ठीय संग्रह के बाद प्राप्त हीमोलिम्फ मात्रा पैर के माध्यम से संग्रह में प्राप्त मात्रा से अधिक है। संदूषण की सहजता के बावजूद पहले संग्रह विधि में अधिक है।पृष्ठीय संग्रह में हीमोसाइट्स एकाग्रता भी काफी अधिक थी। जब सही हीमोसाइट्स संग्रह किया जाता है तो एक अच्छा धब्बा प्राप्त किया जा सकता है और धुंधला होने के बाद विभिन्न हीमोसाइट्स को अलग करना संभव है। इस वीडियो ने रोगजनक, विशेष रूप से एंटोमोपैथिक कवक के टीका लगाने के तरीकों के बारे में जानकारी प्रदान की, जो टिकों में है और उनके हीमोलिम्फ एकत्र करते हैं।यहां प्रस्तुत तकनीकों को टिक फिजियोलॉजी, टिक पैथोलॉजी और टिक की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के बारे में अध्ययन के लिए हमारे शास्त्रीय चरणों में बहुत कम तकनीकी संसाधनों की आवश्यकता होती है। आर्थ्रोपोड कोशिकाओं की सही कटाई, और सेल मुक्त हीमोलिम्फ बाद के अध्ययनों के लिए विश्वसनीय जानकारी प्रदान करने के लिए महत्वपूर्ण है। इस कारण से, इन तकनीकों के निष्पादन में देखी गई सबसे आम गलतियों के बारे में पता होना भी महत्वपूर्ण है।इसके अतिरिक्त, इस अध्ययन के प्रस्ताव प्राप्त मात्रा में अंतर और संदूषण की संभावना को ध्यान में रखते हुए, पैरों को विकृत या काटने के माध्यम से हीमोलिम्फ संग्रह के लिए अधिक उपयुक्त साइट निर्धारित करेंगे।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

RNA Interference in Ticks

Ticks में शाही सेना हस्तक्षेप

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites of wild and domestic animals and humans, and are considered to be second worldwide to mosquitoes as vectors ...

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito (Aedes aegypti) and Tick (Rhipicephalus microplus) G Protein-coupled Receptors

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito Aedes aegypti and Tick Rhipicephalus microplus G Protein-coupled Receptors

मच्छर के कार्यात्मक विश्लेषण के लिए एक कैल्शियम bioluminescence परख ( एडीज aegypti) और (टिक Rhipicephalus microplus) जी प्रोटीन युग्मित रिसेप्टर्स

Arthropod hormone receptors are potential targets for novel pesticides as they regulate many essential physiological and behavioral processes.  The ...

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

योनि और प्रायोगिक माउस मॉडल में नमूना संग्रह टीका के लिए प्रोटोकॉल Candida योनिशोथ

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

लार लार ग्रंथि, Ixodes Scapularis Ticks से और Hemolymph संग्रह

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

टी lymphocytes की ओर प्रेरित pluripotent स्टेम सेल की निर्देशित भेदभाव

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

लाइम रोग अनुसंधान में पारेषण और Xenodiagnosis के लिए पशु पर लगे निशान से दूध पिलाने

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the  attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on ...

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

<em&gt; पूर्व विवो</em&gt; पेट के अंग संस्कृति और रोगाणुरोधी होस्ट रक्षा अध्ययन में इसके उपयोग

The intestine displays an architecture of repetitive crypt structures consisting of different types of epithelial cells, lamina propia containing immune ...

Intratracheal Inoculation of Fischer 344 Rats with Francisella tularensis

Intratracheal Inoculation of Fischer 344 Rats with Francisella tularensis

Francisella tularensis के साथ फिशर ३४४ चूहों का Intratracheal टीका

Pulmonary infection with the bacterium Francisella tularensis can lead to the serious and potentially fatal disease, tularemia, in humans. Due to the ...

Isolation and Characterization of Neutrophil-derived Microparticles for Functional Studies

अलगाव और न्युट्रोफिल के लक्षण वर्णन-कार्यात्मक अध्ययन के लिए व्युत्पंन Microparticles

Polymorphonuclear neutrophil-derived microparticles (PMN)-MPs) are lipid bilayer, spherical microvesicles with sizes ranging from 50&#8211;1,000 nm in ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

आरएनए विश्लेषण के लिए बड़े जानवरों से लिम्फ नोड्स के संग्रह और प्रसंस्करण: बड़े पशु प्रजातियों के लिम्फ नोड Transcriptomic अध्ययन के लिए तैयारी

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...