Name: disclosing hemolymph collection and inoculation of metarhizium blastospores into rhipicephalus microplus ticks towards invertebrate pathology studies
Uploaded: 2019-06-01T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies at JoVE.

이 연구는 브라질, 금융 코드 001에서 Coordenacão 드 아 페로 멘토 드 Pessoal 드 Nível 우수한 (망 토)에 의해 부분적으로 재정 되었다. 케이프는 A.F. 마 르 치아 노에 대 한 박사 학위 장학금을 제공 했습니다. J. 피 오 로티에 대 한 박사 학위 장학금을 제공 하기 위해 브라질의 과학 기술 개발 (CNPq)에 대 한 국가 협의회에 감사 드립니다. 이 연구는 또한 리오 데 자네이로 (F공포증) 및 CNPq의 국가의 연구를 위한 카를로스 샤 가스 Filho 재단의 보조금에 의해 지원 되었다. V.R.E.P. 비 텐 코트는 CNPq 연구원 이다.

본 연구에서 사용 되는 진드기는 척추 동물 동물 (CEUA/UFRRJ #037/2014)의 사용에 대 한 윤리 위원회에 의해 승인 된 리오 데 자네이로의 연방 농촌 대학에서, 인공 식민지 로부터 얻어 졌다.
1. 진드기를 안은 여성
<ol><li>진드기 채집 후, 수돗물을 사용 하 여 암컷을 세척 하 고 500 mL 유리 비 커 수용자에 3 분 동안 0.5%의 차 아 염소 산 나트륨 용액에 담가 두고, 큐티 클 위생을 위해 (...

<ol>
	<li>Grisi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reassessment+of+the+potencial+economic+impact+of+cattle+parasites+in+Brazil.">Reassessment of the potencial economic impact of cattle parasites in Brazil.</a> Revista Brasileira de Parasitologia Veterin&#225;ria. 23 (2), 150-156 (2014).</li><li>Schrank, A., Vainstein, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metarhizium+anisopliae+enzymes+and+toxins.">Metarhizium anisopliae enzymes and toxins.</a> Toxicon. 56 (7), 1267-1274 (2010).</li><li>Camargo, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metarhizium+anisopliae+for+controlling+Rhipicephalus+microplus+ticks+under+field+conditions.">Metarhizium anisopliae for controlling Rhipicephalus microplus ticks under field conditions.</a> Veterinary Parasitology. 223, 38-42 (2016).</li><li>Perinotto, W. M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+pathogenicity+of+different+Metarhizium+anisopliae+s.l.+isolates+in+oil+formulations+against+Rhipicephalus+microplus.">In vitro pathogenicity of different Metarhizium anisopliae s.l. isolates in oil formulations against Rhipicephalus microplus.</a> Biocontrol Science and Technology. 27 (3), 338-347 (2017).</li><li>Pedrini, N., Crespo, R., Juarez, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry+of+insect+epicuticle+degradation+by+entomopathogenic+fungi.">Biochemistry of insect epicuticle degradation by entomopathogenic fungi.</a> Comparative Biochemistry and Physiology. Part C: Toxicology and Pharmacolpgy. 146 (1-2), 124-137 (2007).</li><li>Ortiz-Urquiza, A., Keyhani, N. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+on+the+surface:+Entomopathogenic+fungi+versus+the+insect+cuticle.">Action on the surface: Entomopathogenic fungi versus the insect cuticle.</a> Insects. 4 (3), 357-374 (2013).</li><li>Angelo, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+serpins+involved+in+cellular+immune+response+of+Rhipicephalus+microplus+challenged+with+fungi.">Detection of serpins involved in cellular immune response of Rhipicephalus microplus challenged with fungi.</a> Biocontrol Science and Technology. 24 (3), 351-360 (2014).</li><li>De Paulo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhipicephalus+microplus+infected+by+Metarhizium:+unveiling+hemocyte+quantification,+GFP-fungi+virulence,+and+ovary+infection.">Rhipicephalus microplus infected by Metarhizium: unveiling hemocyte quantification, GFP-fungi virulence, and ovary infection.</a> Parasitology Research. 117, 1847-1856 (2018).</li><li>Marmaras, V. J., Lampropoulou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulators+and+signalling+in+insect+haemocyte+immunity.">Regulators and signalling in insect haemocyte immunity.</a> Cell Signal. 21, 186-195 (2009).</li><li>Hinzmann, M. F., Lopes-Lima, M., Gon&#231;alves, J., Machado, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiaggregant+and+toxic+properties+of+different+solutions+on+hemocytes+of+three+freshwater+bivalves.">Antiaggregant and toxic properties of different solutions on hemocytes of three freshwater bivalves.</a> Toxicological &amp; Environmental Chemistry. 95, 790-805 (2013).</li><li>Nation, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Insect Physiology and Biochemistry. , (2016).</li><li>Gene, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M&#233;moires+de+l'Acad&#233;mie+royale+des+sciences.">M&#233;moires de l'Acad&#233;mie royale des sciences.</a> Torino. 9, 751 (1848).</li><li>Lees, A. D., Beament, J. W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organ+waxing+in+ticks.">An organ waxing in ticks.</a> The Quarterly Journal of the Mythic Society. 7, 291-332 (1948).</li><li>Sonenshine, D. E., Roe, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of ticks. , (2014).</li><li>Tan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+proliferation+in+larval+silkworm+Bombyx+mori.">Characterization of hemocytes proliferation in larval silkworm Bombyx mori.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (6), 595-603 (2013).</li><li>Bowden, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+humoral+immune+systems+of+the+American+lobster+(Homarus+americanus)+and+the+European+lobster+(Homarus+gammarus).">The humoral immune systems of the American lobster (Homarus americanus) and the European lobster (Homarus gammarus).</a> Fish Research. 186, 367-371 (2017).</li><li>Sonenshine, D. E., Hynes, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+and+related+aspects+of+the+innate+immune+response+in+ticks.">Molecular characterization and related aspects of the innate immune response in ticks.</a> Frontiers in Bioscience. 13, 7046-7063 (2008).</li><li>Tsakas, S., Marmaras, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+immunity+and+its+signaling:+an+overview.">Insect immunity and its signaling: an overview.</a> Invertebrate Survival Journal. 7, 228-238 (2010).</li><li>Burgdorfer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolymph+Test.+A+technique+for+detection+of+Rickettsiae+in+ticks.">Hemolymph Test. A technique for detection of Rickettsiae in ticks.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 19, 1010-1014 (1970).</li><li>Dunham-Ems, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+reveals+a+biphasic+mode+of+dissemination+of+Borrelia+burgdorferi+within+ticks.">Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks.</a> Journal of Clinical Investigation. 119, 3652-3665 (2009).</li><li>Patton, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva,+salivary+gland,+and+hemolymph+collection+from+Ixodes+scapularis+ticks.">Saliva, salivary gland, and hemolymph collection from Ixodes scapularis ticks.</a> Journal of Visualized Experiments. 60, e3894 (2012).</li></ol>

병원 균의 접종은 병원 균이 숙주 내에 있다는 것을 보장 하기 때문에 실험에 있어서 미생물의 생체 내 작용을 조사 하는 것을 목적으로 연구를 하는 것이 유용 하다. 이 기술은 또한 RNA 간섭 (RNAi)과 같은 예방 접종 분자에 적용 될 수 있다. 스 쿠 툼과 카피 수 사이에 접종 하는 것은 수행 하기가 더 쉽지만, 종종 계란 생존 율12를저해 하는 게 나의 기관?...

가축 진드기, Rhipicephalus 마이크로 플러스, 열 대 지역에서 가축에 엄청난 부정적인 영향을 미치는 적혈구. 이 진드기는 직접적인 혈액 공급 손상과 결합 하 여 우유와 육류 생산을 감소 시키고, 빈 혈을 일으키고 궁극적으로 사망을 유발할 수 있는 babesia 우 황, babesia비에 미 나, 그리고 anaplasma 마르지 오와 같은 병원 성 대리인의 벡터입니다. 이 ectoparasite에 기인한 손실은 브라질1에 있는 32억4000만 달러에서 해마다 추정 되었습니다. 지속 가능한 방법은 요구 되 고,도 토모 병원 성 대리인의 사용은 화학 살 비제의 사용을 감소 시키기 위하여 유망한 대 안으로 고려 됩니다2,3,4.
곤충 병원 성 진 균, 예컨대 Metarhizium 의 미생물은 진드기를 포함 한 절지동물의 자연 적 이며, 일부 분리는 바이오 컨트롤러로 서 사용 될 수 있다. 이 병원 체는 표 피를 통해 호스트를 활발 하 게 감염 시키고 그들의 바디2,5,6를 식민지 화 합니다. 감염이 발달 함에 따라, 세포 및 체액 반응은 진드기 면역 계통에 의해 중재 됩니다. 진드기 혈 림프의 분석은 병원 균7,8에 도전 한 후 면역 반응을 평가 하는 유용한 도구로 보고 된다.
절지동물의 면역 반응은 체액 성 및 세포 반응으로 나뉩니다. 체액 성 반응은 hemagglutination 과정 및 항균 단백질/펩 티 드의 생산을 포함 하는 반면, 세포 면역 반응은 혈액 세포를 통해 수행 됩니다. 이 세포는 모든 절지동물에서 혈 림프에 존재 하며 식 균 작용 및 캡슐화 과정과 직접적으로 관련 되어 있기 때문에 타고 난 면역 반응9를 포함 하는 연구에서 표현 역할을 개발 하는 것으로 보고 됩니다. 따라서, 혈 세포에 대 한 연구는 죽음 통로를 조사 하 고 자동 포식, 세포 사 멸 및 괴 사와 같은 과정을 이해 하는 것을 도울 수 있습니다. 이중 밸브로 서 일부 무척 추 동물에서, 혈 세포의 수집은 세포 파괴, 낮은 혈 림프 부피 및 회복 된 세포의 낮은 농도와 같은 한계를 직면 하 게 된다10. 매우 자주 적용 되는 방법론에 따라 세포의 농도가 감소 하 여 세포 정량화 및 분석에 직접적으로 영향을 미칩니다.
혈 림프에서 순환 하는 혈 세포의 수는 다른 절지동물 들 사이에서 가변적 이며 성, 나이 및 절지동물의 발달 단계11과 같은 상이한 생리 적 단계 들로 인해 동일한 종에서 변할 수 있다. 혈 세포는 또한 몇몇 기관에 고착 하 고 감염 과정11직후에 회람으로 풀어 놓을 수 있습니다. 그럼에도 불구 하 고, 대부분의 연구 보고 사용 곤충, 진드기 남아 그들의 생리학 및 병리학에 대 한 탐구. 진드기에 있는 병원 체 접종 그리고 혈 림프 수집은 적게 사용 된 기술에도 불구 하 고, 표준 방법을 확립 하는 것은 더 정확한 연구의 발달을 돕습니다.
본 연구의 목적은 병원 균의 혈 림프 수집 및 접종을 위한 가장 많이 사용 되는 방법을 r. 마이크로 플러스 틱에 비교 하 여 혈 림프 획득 및 혈 세포 농도에서의 효능을 평가 하는 것 이었습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:668px;" width="668">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Alkaline Hypochlorite solution</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">A1727</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">G8270-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">EDTA</td>
			<td style="width:116px;">Synth</td>
			<td style="width:158px;">2706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">16000036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flexible rubber</td>
			<td style="width:116px;">BD</td>
			<td style="width:158px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Giemsa stain</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">48900-500ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Glass capillary</td>
			<td style="width:116px;">CTechGlass</td>
			<td style="width:158px;">CT95-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Insulin syringe (needle)</td>
			<td style="width:116px;">BD</td>
			<td style="width:158px;">SKU:&#160;324910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET014512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Leibovitz&#39;s L-15 culture medium&#160;</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">11415-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Methanol</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">34860-1L-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Microscope slides</td>
			<td style="width:116px;">Kasvi</td>
			<td style="width:158px;">K5-7105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Microtubes</td>
			<td style="width:116px;">BRAND</td>
			<td style="width:158px;">Z336769-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET014593</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">NaCl</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">S7653-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Neubauer chamber&#160;</td>
			<td style="width:116px;">Kasvi</td>
			<td style="width:158px;">K5-0111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Penicillin</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">15140163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">P2714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Tween 80</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET003662</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

disclosing hemolymph collection and inoculation of metarhizium blastospores into rhipicephalus microplus ticks towards invertebrate pathology studies

진드기는이 빈 혈, 체중 감량, 동물의 감가 상각을 유발 하 고 또한 여러 병원 체의 벡터로 작용할 수 있기 때문에, 적 혈 기생충 및 Rhipicephalus 마이크로 플러스 는 수의학에서 매우 중요 하다. 이러한 기생충을 제어 하는 엄청난 비용으로 인해, 화학 살 비제 부적절 하 게 사용 하 여 발생 하는 환경에 대 한 손상, 전통적인 parasiticides에 대 한 저항성 증가, 진드기의 대체 제어, 사용 병원 성 진 균은 예를 들어, 흥미로운 접근법으로 간주 되어 왔다. 그럼에도 불구 하 고, 진드기의 면역 체계가이 병원 균을 싸우는 것을 어떻게 작용 하는지 몇몇 연구 결과는 보여주었습니다. 따라서,이 프로토콜은 혈 림프 수집 및 혈 세포 채취에 사용 되는 두 가지 기술, 튀 여성에 게 토모 병원 균 접종에 사용 되는 두 가지 방법을 보여줍니다. 진드기 여성의 몸에서 다리 삽입 시 병원 균의 접종은 종종 제의 기관을 손상 시키는 스 쿠 툼과 카피 수 사이의 접종과는 달리 여성 생물학 매개 변수를 평가할 수 있습니다. 등 쪽 혈 림프 컬렉션은 다리를 통해 수집 보다 더 높은 볼륨 복구를 산출. 진드기 혈 림프 수집 및 처리의 몇 가지 제한 포함 i) 혈 세포의 붕괴의 높은 속도, ii) 혈 림프 오염 된 미드 창 및 iii) 낮은 혈 림프 볼륨 복구. 혈 림프이 다리 절단을 통해 수집 될 때, 혈 림프는 다리 개 구 부에 축적 되어 응고 과정을 선호 하는 데 시간이 걸립니다. 또한, 첫 번째 방법이 수행 되기 쉬운 것으로 간주 되더라도, 등 쪽 컬렉션에 비해 다리를 통해 수집에서 얻어진 혈 세포 수가 적습니다. En토모 병원 성 에이전트에 의해 매개 된 진드기에 있는 면역 반응을 이해 하는 것은 그들의 병 인을 공개 하 고 진드기 통제를 위한 새로운 표적을 개발 하는 것을 돕습니다. 여기에 설명 된 접종 과정은 매우 낮은 기술 자원이 필요 하며 병원 성 미생물에 진드기를 노출 시키는 데에만 사용할 수 있습니다. 유사 하 게, 틱 혈 림프의 수집은 많은 생리 적 연구를 위한 첫 번째 단계를 나타낼 수 있다.

이 문서에서는 틱에 적용 된 접종 및 혈 림프 수집 방법에 접근 합니다. 다리 허벅지와 진드기 여성의 몸 사이에 접종 후, 일부 유체 (혈 림프) 과정 동안 분 비 될 수 있다; 그러나 접종이 완료 되 면 바늘 끝 이나 접종 현장에 액체 나 조직이 존재 하지 않아 곰 팡이 현 탁 액이 완전히 접종 되었는지 확인 하는 것이 중요 합니다. 접종 과정이 올바르게 수행 되 면, 바늘 삽입?...

Watch this Scientific Journal Video about Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies at JoVE.

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

진드기 혈 림프의 분석은 몇몇 병원 체가 질병을 일으키는 원인이 되는 방법에 대 한 정보의 중요 한 근원 및 어떻게 진드기 면역 학적으로이 감염에 반응 하는지 나타냅니다. 본 연구는 곰 팡이 propagules 접종 하 고 rhipicephalus 마이크로 플러스 튀 여성에서 혈 림프를 수집 하는 방법을 보여줍니다.

무척 추 병리학 연구를 향한 Rhipicephalus 마이크로 플러스 진드기에 Metarhizium 발 파 포자의 혈 림프 수집 및 접종을 공개

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight ...

진드기는 조혈 균 국 외 항문, Rhipicephalus microplus, 널리 가축 진드기로 알려진 열대 지역에서 가축에 엄청난 부정적인 경제적 영향을 미칠. 또한, 화학적 카카르티드의 부적절한 사용과 전통적인 기생충에 대한 진드기 집단의 저항증가로 인한 환경 상태 및 공중 보건 에 대한 우려가 증가하고 있으며, 내모병원성 균류의 사용과 같은 대체 제어 방법에 대한 연구를 자극하고 있다. 이 내모 병원균은 적극적으로 절지동물 호스트를 감염, 그들의 큐티클을 통해 자신의 몸을 식민지.절지동물은 곰팡이 감염에 다른 반응을 가질 수 있습니다. 절지동물 면역 체계는 유머와 세포 반응으로 나뉩니다. 유머 반응은 헤마글루티네이션 공정과 항균 분자의 생산을 포함하지만, 혈구세포는 세포 면역 반응을 중재합니다.절지동물 면역 반응에 대한 대부분의 연구는 곤충을 사용하여 보고되는 반면 진드기 반응은 덜 탐구된 채로 남아 있습니다. 또한, 병원균 접종과 진드기 혈청량 수집은 절지동물의 면역 반응을 더 잘 이해하는 데 필요한 기술이 거의 널리 퍼져 있지 않다. 따라서,이 비디오 주소 기술 \접종, 혈청량 수집 및 처리를 촬영하는 데 사용.진드기 혈류량 수확은 세포 중단, 낮은 혈청계 값 획득 및 회복 된 세포의 낮은 농도와 같은 몇 가지 한계에 직면하기 때문에. 세포 구성 및 분석에 직접 감염됩니다. 진드기 수집 후, 여성을 씻어.수돗물을 사용하고 500 밀리리터 유리 비커 수신자에 3 분 동안 0.5 %의 나트륨 hypochlorite 용액에 담급하십시오. 큐티클 위생을 위해, 20 명의 여성과 동질적인 그룹으로 여성을 분할합니다. 각 그룹의 세 복제가 수행되었습니다.메타리슘 로버츠이 발아 과정에서 사용하였다. 플라스틱 파라핀 필름 표면에 5개의 마이크로리터 메타리슘 블라스트포레스 서스펜션의 액체에 추가합니다. 접종 과정을 가속화하기 위해 플라스틱 파라핀 필름 표면에 여러 기포를 추가할 수 있으며, 각 기포는 5개의 마이크로리터에 해당한다.1밀리미터 초미세 인슐린 주사기와 0.3 밀리미터 바늘을 사용하여 서스펜션을 넣고 진드기에 접종하십시오. 그것을 사용하기 전에 주사기에서 모든 공기를 꺼내는 것을 기억하십시오. 비골과 카피쿨룸 사이의 진드기 여성에게 곰팡이 서스펜션 5 마이크로리터를 접종하십시오.소량의 혈몰리프는 바늘 절개 후 프레임에 존재할 수 있다. 공기를 접종하지 않도록주의하십시오. 0.3 밀리미터 바늘에 결합 된 1 밀리리터 초미세 인슐린 주사기를 사용하여 다리 허벅지와 여성의 몸 사이에 곰팡이 현탁액을 가진 여성을 접종합니다.전이균 블라스트포스포라접종이 다리 허벅지와 진드기 여성의 몸 사이에 수행되면 바늘 삽입 후 허벅지에 소량의 혈류가 존재할 수 있다. 공기를 접종하지 않도록주의하십시오. 날개 달린 주입세트의 고무 부분을 사용하여 0.3 밀리미터 모세관 튜브와 필터 팁을 사용하여 혈굴량 수집을 수행합니다.0.3 밀리미터 바늘을 사용하여 여성 등쪽 표피를 방해하십시오. 중단 후 진드기 몸체의 동맥 부분에 부드러운 압력을 적용합니다. 중단 현장에서 거의 투명한 액체풀링을 관찰하십시오.날개 달린 주입 세트의 고무 부분과 0.3 밀리미터 모세관 튜브에 결합 된 필터 팁을 통해 액체를 빨아 서 혈류를 수집합니다. 이 미드 구트를 방해하고 혈굴을 오염 시킬 수 있기 때문에 그것은 고정 하는 동안 거의 진드기의 시체를 누르지 마십시오. 부드러운 압력이 오염없이 유체를 추방 할 때까지 기다립니다.진드기를 고정합니다. 앞다리 조각을 잘라냅니다. 하나 이상의 다리를 절단 할 수 있을 뿐만 아니라 동일한 다리는 한 번 이상 절단 될 수 있습니다.진드기의 후방 신체 부위에 부드러운 압력을 가하십시오. 투명 액체 거품이 절단 측에 나타나모세피 튜브로 수집합니다. 진드기의 몸을 거의 누르지 마십시오, 그것은 중구를 방해하고 혈우경을 오염 시킬 수 있기 때문에 동원하는 동안.부드러운 압력이 오염없이 유체를 추방 할 때까지 기다립니다. 혈굴량 수집 후, 이전에 30 마이크로 리터 프로테아제 칵테일과 82 마이크로 리터 식염수 버퍼로 가득 1.5 밀리터 마이크로 튜브에 입금. 혈굴량 컬렉션 전체에 걸쳐 얼음에 마이크로 튜브를 유지합니다.혈청량 원심 분리 후 원심분리기 샘플과 혈구의 부드러운 펠릿이 형성될 것이다. 혈청량 정량화를 위해 마이크로튜브 내부의 총 부피를 계산하고 프로테아제 칵테일및 식염수 버퍼의 양을 할인하여 얻은 혈류량을 정량화하십시오. 상체 세포없는 혈청을 조심스럽게 제거하고 세포를 부드럽게 다시 중단하십시오.노이바우어 챔버에 다시 매달린 혈구 10마이크로리터를 배치하여 혈청을 정량화한다. 세포재현수의 경우 배양배지가 사용되었다. 진드기의 앞다리를 자르고, 진드기의 후방 신체 부위에 부드러운 압력을 가하고, 컷 부위에 투명한 액체 거품이 보이는 것을 관찰합니다.깨끗한 현미경 슬라이드에 직접 혈류 강하를 적용합니다. 그 후 세포를 얼룩에 적절한 방법을 사용합니다. 다리 허벅지와 진드기 여성 몸 사이의 접종은 또한 미드구트와 말피기안 튜블러와 같은 진드기 내부 장기를 손상시킬 수 있습니다.진드기 미드구트가 등막혈수집에서 바늘에 의해 중단되면 얻어진 유체는 빨간색이며 투명하지 않습니다. 이는 잘못된 혈몰리프 컬렉션을 나타냅니다. 이 경우 혈모 림프는 오염된 대로 폐기되어야 합니다.혈굴림 오염은 진드기가 높은 병원체에 자연적으로 감염될 때, 또는 접종된 병원체에 기인한 죽음 과정 후에 마지막 단계에서 관찰될 수 있습니다. 등쪽 컬렉션 후 얻은 혈청량은 다리를 통해 컬렉션에서 얻은 부피보다 높다. 오염의 용이함에도 불구하고 첫 번째 수집 방법에서 더 높다.혈구 농도도 등대 수집에서 상당히 높았다. 올바른 혈구 수집이 수행되면 좋은 얼룩을 얻을 수 있으며 염색 후 다른 혈구를 구별 할 수 있습니다. 이 비디오는 병원균, 특히 내모 병원성 곰팡이를 진드기로 접종하고 혈류를 수집하는 방법에 대한 정보를 제공했습니다.여기에서 제시된 기술은 진드기 생리학, 진드기 병리학 및 진드기의 면역 반응에 관하여 연구를 위한 우리의 고전적인 단계에 있는 아주 낮은 기술 자원을 요구합니다. 절지동물 세포의 올바른 수확과 세포없는 혈청은 후속 연구를위한 신뢰할 수있는 정보를 제공하는 데 중요합니다. 이러한 이유로 이러한 기술의 실행에서 관찰되는 가장 일반적인 실수를 인식하는 것도 중요합니다.또한, 이 연구의 제안은 얻어진 부피의 차이와 오염 확률을 고려하여 다리를 변형하거나 절단하여 혈청량 수집에 더 적합한 부위를 결정한다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

RNA Interference in Ticks

진드기의 RNA 간섭

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites of wild and domestic animals and humans, and are considered to be second worldwide to mosquitoes as vectors ...

연구

면역학 및 감염병학

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito (Aedes aegypti) and Tick (Rhipicephalus microplus) G Protein-coupled Receptors

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito Aedes aegypti and Tick Rhipicephalus microplus G Protein-coupled Receptors

모기의 기능 분석을 위해 칼슘 Bioluminescence 분석 ( Aedes aegypti)와 틱 ( Rhipicephalus microplus) G 단백질 결합 수용체

Arthropod hormone receptors are potential targets for novel pesticides as they regulate many essential physiological and behavioral processes.  The ...

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

의 실험 마우스 모델에서 질 접종 및 샘플 수집을위한 프로토콜 칸디다 질염

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Ixodes Scapularis 진드기의 타액, 침샘 및 Hemolymph 컬렉션

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

T Lymphocytes쪽으로 유도 Pluripotent 줄기 세포의 분화 감독

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

라임 병 연구의 변속기 및 Xenodiagnosis에 대한 동물에 진드기의 먹이

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the  attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on ...

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

그만큼<em&gt; 전의 VIVO</em항균 호스트 방어 연구에&gt; 콜론 오르간 문화와 그것의 사용

The intestine displays an architecture of repetitive crypt structures consisting of different types of epithelial cells, lamina propia containing immune ...

Intratracheal Inoculation of Fischer 344 Rats with Francisella tularensis

Intratracheal Inoculation of Fischer 344 Rats with Francisella tularensis

Intratracheal 접종의 Fischer 344 쥐 Francisella tularensis 와

Pulmonary infection with the bacterium Francisella tularensis can lead to the serious and potentially fatal disease, tularemia, in humans. Due to the ...

Isolation and Characterization of Neutrophil-derived Microparticles for Functional Studies

절연 및 특성화 Neutrophil 파생 된 미의 기능 연구

Polymorphonuclear neutrophil-derived microparticles (PMN)-MPs) are lipid bilayer, spherical microvesicles with sizes ranging from 50&#8211;1,000 nm in ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

수집 및 RNA 분석에 대 한 큰 동물에서 림프절의 처리: 큰 동물 종의 림프 노드 Transcriptomic 연구에 대 한 준비

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...