Name: disclosing hemolymph collection and inoculation of metarhizium blastospores into rhipicephalus microplus ticks towards invertebrate pathology studies
Uploaded: 2019-06-01T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies at JoVE.

Bu çalışmada Brezilya 'dan Coordenacão de Aperfeiçoamento de pessoal de nível Superior (CAPES), Finance Code 001 tarafından finanse edilmiştir. CAPES A.F. Marciano için Doktora Bursu sağladı. Biz J. Fiorotti için Doktora Bursu sağlamak için Brezilya bilimsel ve Teknolojik Kalkınma (CNPq) Ulusal Konseyi teşekkür ederiz. Bu araştırma aynı zamanda Rio de Janeiro (FAPERJ) ve CNPq devlet araştırma Carlos Chagas Filho Vakfı Hibe tarafından desteklenmektedir. V.R.E.P. Bittencourt bir CNPq araştırmacıdır.

Bu çalışmada kullanılan keneler, bir yapay koloniden elde edildi, Rio de Janeiro Federal kırsal Üniversitesi 'nde bulunan, hangi yöntemleri omurgalı hayvanların kullanımı için Etik Komitesi tarafından onaylandı (CEUA-IV/UFRRJ #037/2014).
1. tik dişiler
<ol><li>Kene toplama sonra, musluk suyu kullanarak kaynadı kadın yıkayın ve 0,5% (v/v) sodyum hipoklorit solüsyonu 3 dakika için bir 500 ml cam kabı alıcı, manikür hijyeni (Şekil 1), sonr...

<ol>
	<li>Grisi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reassessment+of+the+potencial+economic+impact+of+cattle+parasites+in+Brazil.">Reassessment of the potencial economic impact of cattle parasites in Brazil.</a> Revista Brasileira de Parasitologia Veterin&#225;ria. 23 (2), 150-156 (2014).</li><li>Schrank, A., Vainstein, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metarhizium+anisopliae+enzymes+and+toxins.">Metarhizium anisopliae enzymes and toxins.</a> Toxicon. 56 (7), 1267-1274 (2010).</li><li>Camargo, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metarhizium+anisopliae+for+controlling+Rhipicephalus+microplus+ticks+under+field+conditions.">Metarhizium anisopliae for controlling Rhipicephalus microplus ticks under field conditions.</a> Veterinary Parasitology. 223, 38-42 (2016).</li><li>Perinotto, W. M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+pathogenicity+of+different+Metarhizium+anisopliae+s.l.+isolates+in+oil+formulations+against+Rhipicephalus+microplus.">In vitro pathogenicity of different Metarhizium anisopliae s.l. isolates in oil formulations against Rhipicephalus microplus.</a> Biocontrol Science and Technology. 27 (3), 338-347 (2017).</li><li>Pedrini, N., Crespo, R., Juarez, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry+of+insect+epicuticle+degradation+by+entomopathogenic+fungi.">Biochemistry of insect epicuticle degradation by entomopathogenic fungi.</a> Comparative Biochemistry and Physiology. Part C: Toxicology and Pharmacolpgy. 146 (1-2), 124-137 (2007).</li><li>Ortiz-Urquiza, A., Keyhani, N. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+on+the+surface:+Entomopathogenic+fungi+versus+the+insect+cuticle.">Action on the surface: Entomopathogenic fungi versus the insect cuticle.</a> Insects. 4 (3), 357-374 (2013).</li><li>Angelo, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+serpins+involved+in+cellular+immune+response+of+Rhipicephalus+microplus+challenged+with+fungi.">Detection of serpins involved in cellular immune response of Rhipicephalus microplus challenged with fungi.</a> Biocontrol Science and Technology. 24 (3), 351-360 (2014).</li><li>De Paulo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhipicephalus+microplus+infected+by+Metarhizium:+unveiling+hemocyte+quantification,+GFP-fungi+virulence,+and+ovary+infection.">Rhipicephalus microplus infected by Metarhizium: unveiling hemocyte quantification, GFP-fungi virulence, and ovary infection.</a> Parasitology Research. 117, 1847-1856 (2018).</li><li>Marmaras, V. J., Lampropoulou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulators+and+signalling+in+insect+haemocyte+immunity.">Regulators and signalling in insect haemocyte immunity.</a> Cell Signal. 21, 186-195 (2009).</li><li>Hinzmann, M. F., Lopes-Lima, M., Gon&#231;alves, J., Machado, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiaggregant+and+toxic+properties+of+different+solutions+on+hemocytes+of+three+freshwater+bivalves.">Antiaggregant and toxic properties of different solutions on hemocytes of three freshwater bivalves.</a> Toxicological &amp; Environmental Chemistry. 95, 790-805 (2013).</li><li>Nation, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Insect Physiology and Biochemistry. , (2016).</li><li>Gene, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M&#233;moires+de+l'Acad&#233;mie+royale+des+sciences.">M&#233;moires de l'Acad&#233;mie royale des sciences.</a> Torino. 9, 751 (1848).</li><li>Lees, A. D., Beament, J. W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organ+waxing+in+ticks.">An organ waxing in ticks.</a> The Quarterly Journal of the Mythic Society. 7, 291-332 (1948).</li><li>Sonenshine, D. E., Roe, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of ticks. , (2014).</li><li>Tan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hemocytes+proliferation+in+larval+silkworm+Bombyx+mori.">Characterization of hemocytes proliferation in larval silkworm Bombyx mori.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (6), 595-603 (2013).</li><li>Bowden, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+humoral+immune+systems+of+the+American+lobster+(Homarus+americanus)+and+the+European+lobster+(Homarus+gammarus).">The humoral immune systems of the American lobster (Homarus americanus) and the European lobster (Homarus gammarus).</a> Fish Research. 186, 367-371 (2017).</li><li>Sonenshine, D. E., Hynes, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+and+related+aspects+of+the+innate+immune+response+in+ticks.">Molecular characterization and related aspects of the innate immune response in ticks.</a> Frontiers in Bioscience. 13, 7046-7063 (2008).</li><li>Tsakas, S., Marmaras, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+immunity+and+its+signaling:+an+overview.">Insect immunity and its signaling: an overview.</a> Invertebrate Survival Journal. 7, 228-238 (2010).</li><li>Burgdorfer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolymph+Test.+A+technique+for+detection+of+Rickettsiae+in+ticks.">Hemolymph Test. A technique for detection of Rickettsiae in ticks.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 19, 1010-1014 (1970).</li><li>Dunham-Ems, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+reveals+a+biphasic+mode+of+dissemination+of+Borrelia+burgdorferi+within+ticks.">Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks.</a> Journal of Clinical Investigation. 119, 3652-3665 (2009).</li><li>Patton, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva,+salivary+gland,+and+hemolymph+collection+from+Ixodes+scapularis+ticks.">Saliva, salivary gland, and hemolymph collection from Ixodes scapularis ticks.</a> Journal of Visualized Experiments. 60, e3894 (2012).</li></ol>

Patojenlerin inoculation çalışması, çalışmada deneysel Artropod modellerinde mikroorganizmaların in vivo eylemini araştırmayı amaçladığından, çünkü patojenin ev sahibinin içinde olduğunu garanti eder. Bu teknik Ayrıca RNA parazitleri (RNAi) gibi aşılamak moleküllere de uygulanabilir. Scutum ve başkentlik arasında inoculation gerçekleştirmek için daha kolay kabul edilir ama sık zarar Gené organı, yumurtalarını zayıflatır12,13. G...

Sığır kene, Rhipicephalus Microplus, tropikal alanlarda Hayvancılık üzerinde büyük bir olumsuz etkisi olan bir hematofagus antiparazitik olduğunu. Bu kene, Babesia Bovis, Babesia bigeminave anaplasma obtus gibi patojenik ajanların vektörü olup, doğrudan hemofeeding hasar ile birlikte, süt ve et üretimini azaltabilir, anemi ve sonuçta ölüm neden olabilir. Bu ektoparasitin neden olduğu kayıplar Brezilya 'da yıllık 3.240.000.000 dolar olarak tahmin edildi1. Sürdürülebilir Yöntemler talep edilir ve entomopatogenik ajanların kullanımı, kimyasal akarisitlerin kullanımını azaltmak için umut verici bir alternatif olarak kabul edilir2,3,4.
Metarhizyum spp. gibi entomopati ojenik mantarlar, keneler de dahil olmak üzere eklemropodların doğal düşmanlarıdır ve bazı izolatlar biyodenetleyici olarak kullanılabilir. Bu patojenler aktif olarak manikür yoluyla ev sahibi enfekte ve vücudunu kolonize2,5,6. Enfeksiyon geliştikçe, hücresel ve humoral tepkiler kene bağışıklık sistemi tarafından aracılık edilir. Kene hemolymph Analizi patojenler ile zorlu sonra bağışıklık yanıtlarını değerlendirmek için yararlı bir araç olarak bildirilen7,8.
Arthropods ' bağışıklık tepkisi humoral ve hücresel tepkiler ayrılmıştır. Humoral yanıt hemaglütinasyon süreçleri ve antimikrobiyal proteinler/peptidler üretimi içerir, hücresel bağışıklık yanıtı hemanositler aracılığıyla gerçekleştirilir ise. Bu hücreler tüm eklemropodlar hemolymph mevcut ve doğal bağışıklık tepkisi içeren çalışmalarda ifade rol geliştirmek için bildirilen9, doğrudan fagositoz ve kapsülleme süreçleri ile ilgili olduğu gibi. Buna göre, hemanositler hakkında çalışmalar ölüm yolunun araştırılması ve otophagy, apoptozis ve nekroz gibi süreçleri anlamanıza yardımcı olabilir. Bazı omurgasızlar olarak biyvalfler, hemanosit koleksiyonu hücre bozulması gibi sınırlamalar, düşük hemolymph hacmi elde, ve düşük konsantrasyon kurtarılmış hücreler10. Çok sık, uygulanan metodolojiye bağlı olarak, hücrelerin miktarlama ve analizini doğrudan etkileyen, azaltılmış hücre konsantrasyonu elde edilir.
Hemolymph içinde dolaşan hemanosit sayısı farklı eklemropodlar arasında değişkendir ve seks, yaş ve Artropod 'un gelişimsel aşaması11gibi farklı fizyolojik aşamalar nedeniyle aynı türde değişebilir. Hemanositler de bazı organlara yapışmış bulunabilir ve enfeksiyon işleminden hemen sonra dolaşım içine salınabilir11. Yine de, çoğu çalışmada böcek kullanımı bildirilmiştir, keneler ise fizyolojisi ve patolojileri ile ilgili daha az incelenmiştir. Patojen inokülasyon ve hemolymph koleksiyonuna rağmen keneler daha az kullanılan tekniklerdir, standart yöntemler kurulması daha doğru çalışmaların gelişmesine yardımcı olur.
Bu çalışmanın amacı, hemolymph toplama ve patojenlerin inokülasyon için en çok kullanılan metotlarını R. Microplus Ticks olarak karşılaştırmaya, hematositlerin elde edilmesi ve hemanosit konsantrasyonunda etkinliğini değerlendirmek idi.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:668px;" width="668">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Alkaline Hypochlorite solution</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">A1727</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">G8270-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">EDTA</td>
			<td style="width:116px;">Synth</td>
			<td style="width:158px;">2706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">16000036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flexible rubber</td>
			<td style="width:116px;">BD</td>
			<td style="width:158px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Giemsa stain</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">48900-500ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Glass capillary</td>
			<td style="width:116px;">CTechGlass</td>
			<td style="width:158px;">CT95-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Insulin syringe (needle)</td>
			<td style="width:116px;">BD</td>
			<td style="width:158px;">SKU:&#160;324910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET014512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Leibovitz&#39;s L-15 culture medium&#160;</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">11415-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Methanol</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">34860-1L-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Microscope slides</td>
			<td style="width:116px;">Kasvi</td>
			<td style="width:158px;">K5-7105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Microtubes</td>
			<td style="width:116px;">BRAND</td>
			<td style="width:158px;">Z336769-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET014593</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">NaCl</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">S7653-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Neubauer chamber&#160;</td>
			<td style="width:116px;">Kasvi</td>
			<td style="width:158px;">K5-0111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Penicillin</td>
			<td style="width:116px;">Gibco</td>
			<td style="width:158px;">15140163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:158px;">P2714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Tween 80</td>
			<td style="width:116px;">Vetec</td>
			<td style="width:158px;">60REAVET003662</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

disclosing hemolymph collection and inoculation of metarhizium blastospores into rhipicephalus microplus ticks towards invertebrate pathology studies

Keneler, hematofajöz Ektoparazitleri ve Rhipicephalus mikroplus , anemi, kilo kaybı, hayvanların deri amortismanı ve aynı zamanda çeşitli patojenlerin bir vektör olarak hareket edebilir çünkü veteriner tıbbında büyük önem taşımaktadır. Bu parazitler kontrol etmek için fahis maliyetleri nedeniyle, kimyasal akaritelerin uygunsuz kullanımı nedeniyle çevreye zarar, ve geleneksel parazit karşı artan direnç, keneler alternatif kontrol, kullanımı ile Örneğin entomopatogenik mantar, ilginç bir yaklaşım olarak kabul edilmiştir. Yine de, birkaç çalışmada Tick bağışıklık sistemi bu entomopathogens mücadele nasıl davranır göstermiştir. Bu nedenle, bu protokol Entomopatojen aşı için kullanılan iki yöntem gösterilmiştir dişi ve iki teknikleri hemolymph toplama ve hemanosit hasat için kullanılır. Kene dişi vücudunda bacak eklemesinde patojenlerin aşı dişi biyolojik parametrelerin değerlendirilmesine izin verir, skutum ve başkentin arasındaki aşı, hangi sıklıkla Gené organı zarar. Dorsal hemolymph koleksiyonu bacaklardan koleksiyonundan daha yüksek hacimli iyileşme sağladı. Kene hemolymph toplama ve işleme bazı sınırlamalar dahil i) yüksek oranları hemanosit ' bozulma, ii) bozmuş midgut ile hemolymph kontaminasyonu, ve iii) düşük hemolymph ses kurtarma. Hemolymph bacak kesme yoluyla toplandığında, hemolymph bacak açılışında birikmesi için zaman alır, pıhtılaşma sürecini tercih. Buna ek olarak, ilk yöntemin gerçekleştirilmesi daha kolay kabul edilse bile, dorsal koleksiyona kıyasla bacak aracılığıyla koleksiyonda daha az hemanosit elde edilir. Entomopatogenik ajanlar tarafından aracılık edilen kenlerde bağışıklık tepkisini anlamak, patogenezini ortaya çıkarmak ve kene kontrolü için yeni hedefler geliştirmek için yardımcı olur. Burada açıklanan aşı süreçleri çok düşük teknolojik kaynaklar gerektirir ve sadece keneler patojen mikroorganizmalara maruz bırakmak için kullanılabilir. Benzer şekilde, kene hemolymph koleksiyonu birçok fizyolojik çalışmalar için ilk adımı gösterebilir.

Bu makalede kenelere uygulanan aşı ve hemolymph toplama yöntemleri yaklaşmaktadır. Bacak uyluk ve kene dişi vücudu arasındaki aşı sonra, bazı sıvı (hemolymph) süreci sırasında salgılanan olabilir; Ancak, aşı bittiğinde, iğne ucunda veya aşı bölgesinde sıvı veya doku bulunmadığını, mantar süspansiyonun tamamen inoculated olduğundan emin olmak önemlidir. Aşı işlemi doğru şekilde gerçekleştirildiğinde, iğne ekleme kene kadınların ölümü neden olm...

Watch this Scientific Journal Video about Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies at JoVE.

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

Kene hemolymph analizi, bazı patojenlerin hastalığa neden olduğu ve keneler immünolojik olarak bu enfeksiyona nasıl yanıt vereceği konusunda önemli bir bilgi kaynağını temsil eder. Bu çalışmada, mantar propagülleri aşılamak ve Rhipicephalus Microplus tıkanmış kadınlarda hemolymph toplamak gösterilmiştir.

Hemolymph toplama ve Metarhizyum blastosporların omurgasız patoloji çalışmalarına doğru Rhipicephalus Microplus ticks içine inoculation

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites and Rhipicephalus microplus has great importance in veterinary medicine because it causes anemia, weight ...

Keneler hematophagous ektoparazitler vardır, Rhipicephalus microplus, halk sığır kene olarak bilinen tropikal alanlarda hayvancılık üzerinde büyük olumsuz ekonomik etkisi vardır. Buna ek olarak, kimyasal acarisitlerin uygunsuz kullanımı ve kene popülasyonlarının geleneksel parazitlere karşı artan direncinden kaynaklanan bozulmuş çevre koşulları ve halk sağlığı endişeleri hakkındaki endişeler, entomopatojenik mantar kullanımı gibi alternatif kontrol yöntemleri üzerine araştırma yığılmasıdır. Bu entomopatojenler eklembacaklı konaklarını etkenolarak enfekte eder ve vücutlarını kolonize ederler.Eklembacaklımantar enfeksiyonuna farklı tepkiler verebilir. Eklembacaklı bağışıklık sistemi mizahi ve hücresel tepkiler e ayrılır. Humoral yanıt hemagglutinasyon süreci ve antimikrobiyal moleküllerin üretimini içerir, hemositler hücresel immün yanıt aracılık ederken.Eklembacaklı immün yanıt üzerine yapılan çalışmaların çoğu böcekler kullanılarak rapor edilirken kene yanıtları daha az araştırılmış durumdadır. Ayrıca, patojen aşılama ve kene hemolenf toplama eklembacaklı bağışıklık yanıtını daha iyi anlamak için gerekli kötü yaygın tekniklerdir. Buna göre, bu video adresi teknikleri \aşılama, hemolenf toplama ve işleme filme kullanılır.Kene hemositleri hasat, hücre bozulması, düşük hemolenf değeri elde edilmesi ve kurtarılan hücrelerin düşük konsantrasyonu gibi bazı sınırlamalarla karşı karşıya dır. Doğrudan hücre yapılandırma ve analiz enfekte. Kene toplama sonra, tıkanmış dişiler yıkayın.Musluk suyu kullanın ve 500 mililitre cam kabı alıcı üç dakika boyunca% 0.5 sodyum hipoklorit çözeltisi onları batırın. Kütikül hijyeni için dişileri homojen gruplara, her biri 20 dişiile bölün. Her gruptan üç kopya yapıldı.Aşılama sürecinde metarhizium robertsii blastosporlar kullanıldı. Plastik bir parafin filminin yüzeyine beş mikrolitre metarhizium blastospores süspansiyon bir sıvı ekleyin. Aşılama işlemini hızlandırmak için, her kabarcık beş mikrolitreye karşılık gelen plastik parafin film yüzeyine birden fazla kabarcık eklenebilir.Bir milimetreultra ince insülin şırınga ve 0.3 milimetrelik bir iğne kullanarak süspansiyon uyup kenenin içine aşılamak için kullanın. Kullanmadan önce şırınganın tüm havasını almayı unutmayın. Scutum ve capitulum arasında kene kadın içine mantar süspansiyon 5 mikrolitre aşılamak.İğne kesiğinden sonra çerçevelemede küçük bir hacim de hemolenf olabilir. Hava aşılamamaya dikkat edin. 0.3 milimetrelik bir iğne ile bir mililitre ultra ince insülin şırınga kullanarak bacak uyluk ve kadın vücudu arasında mantar süspansiyon ile aşılamak.Metarhizium blastospores aşılama bacak uyluk ve kene kadın vücudu arasında yapıldığında, hemolenf küçük bir hacim iğne yerleştirildikten sonra uyluk üzerinde mevcut olabilir. Hava aşılamamaya dikkat edin. Kanatlı bir infüzyon kauçuk parçası kullanın 0.3 miliimeters kılcal tüp ve hemolenf toplama gerçekleştirmek için bir filtre ucu ayarlayın.0.3 milimetrelik bir iğne kullanarak dişi dorsal mitikülbozun. Bozulmadan sonra kene gövdesinin anterial kısmına hafif basınç uygulayın. Neredeyse saydam bir sıvının bozulma alanından çıktığını gözlemleyin.Kanatlı infüzyon seti ve 0.3 milimetre kılcal tüp bir lastik parçası ile birleştiğinde filtre ucu ile sıvı emerek hemolenf toplamak. Bu midgut bozabilir ve hemolenf kontamine olabilir, çünkü immobilizasyon sırasında kene vücuduna zor basmayın. Hafif basınç kontaminasyon olmadan sıvı dışarı atabilirsiniz kadar bekleyin.Keneyi etkisiz hale getir. Ön bacaktan bir parça kes. Bir veya daha fazla bacak kesilebilir yanı sıra aynı bacak birden fazla kez kesilebilir.Kenenin arka vücut kısmına hafif basınç uygulayın. Şeffaf bir sıvı kabarcık kesilmiş tarafında göstermek gözlemlemek ve kılcal tüp ile toplamak. Bu midgut bozabilir ve hemolenf kontamine olabilir, çünkü seferberlik sırasında kene vücuduna zor basmayın.Hafif basınç kontaminasyon olmadan sıvı dışarı atabilirsiniz kadar bekleyin. Hemolenf toplama sonra, daha önce 30 mikrolitre proteaz kokteyl ve 82 mikrolitre tuzlu tampon ile doldurulmuş 1.5 mililitre mikrotüp yatırın. Mikrotüpleri hemolenf koleksiyonu boyunca buz üzerinde tutun.Hemolenf santrifüjünden sonra santrifüj örnekleri ve hemositlerin yumuşak peleti oluşacaktır. Hemolenf niceliği için, mikrotüp içindeki toplam hacmi sayarak ve proteaz kokteyl ve tuzlu tampon hacmini azaltarak elde edilen hemolenf hacmini ölçün. Dikkatle supernatant hücresiz hemolenf kaldırmak ve yavaşça hücreleri yeniden askıya.Neubauer odasına 10 mikrolitre yeniden asılı hemosit yerleştirerek hemositleri ölçün. Hücreler için yeniden askıya alma bir kültür ortamı kullanılmıştır. Kenenin ön bacağını kesin, kenenin arka vücut kısmına hafif basınç uygulayın, kesilen bölgede saydam bir sıvı kabarcığı gözlemleyin.Hemolenf damlalarını doğrudan temiz mikroskop slaytlarına uygulayın. Bundan sonra hücreleri lekelemek için uygun yöntemler kullanın. Bacak uyluk ve kene kadın vücudu arasında aşılama da midgut ve malpighian tübülleri gibi kene iç organlara zarar verebilir.Kene midgut dorsal hemolenf koleksiyonunda iğne tarafından bozulduğunda elde edilen sıvı kırmızı, şeffaf değil. Bu yanlış bir hemolenf toplama gösterir. Bu durumda, hemolenf kontamine olarak atılır.Kene doğal patojenlerin yüksek yükler ilerbulandığında ya da aşılanmış patojenlerin neden olduğu ölüm sürecinden sonraki son adımlarda hemolenf kontaminasyonu da görülebilir. Dorsal toplama dan sonra elde edilen hemolenf hacmi, bacak yoluyla toplama da elde edilen hacimden daha yüksektir. Kontaminasyon kolaylığına rağmen ilk toplama yönteminde daha yüksektir.Hemosit konsantrasyonu da dorsal koleksiyonda önemli ölçüde daha yüksekti. Doğru hemosit toplama yapıldığında iyi bir yayma elde edilebilir ve boyama sonra farklı hemositayırt etmek mümkündür. Bu video, patojenin, özellikle entomopatojenik mantarların keneler içine aşılama ve hemolenf toplamak için yöntemler hakkında bilgi sağladı.Burada sunulan teknikler kene fizyolojisi, kene patolojisi ve kene bağışıklık yanıtı ile ilgili çalışmalar için klasik adımlarımızda çok düşük teknolojik kaynaklar gerektirir. Eklembacaklı hücrelerin doğru hasat, ve hücresiz hemolenf sonraki çalışmalar için güvenilir bilgi göze çok önemlidir. Bu nedenle, bu tekniklerin uygulanmasında gözlenen en yaygın hataların farkında olmak da önemlidir.Ayrıca, bu çalışmanın önerileri, elde edilen hacim ve kontaminasyon olasılığı arasındaki fark göz önünde bulundurularak, bacakların deforme edilmesi veya kesilmesi yoluyla hemolenf toplama için daha uygun bir alan belirleyecektir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Disclosing Hemolymph Collection and Inoculation of Metarhizium Blastospores into Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Invertebrate Pathology Studies

RNA Interference in Ticks

Keneler de RNA Girişim

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites of wild and domestic animals and humans, and are considered to be second worldwide to mosquitoes as vectors ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito (Aedes aegypti) and Tick (Rhipicephalus microplus) G Protein-coupled Receptors

A Calcium Bioluminescence Assay for Functional Analysis of Mosquito Aedes aegypti and Tick Rhipicephalus microplus G Protein-coupled Receptors

Sivrisinek Fonksiyonel Analiz için Kalsiyum Biyoparlaklık Testi ( Aedes aegypti) Ve Tick ( Rhipicephalus Microplus) G Protein-çiftli Reseptörler

Arthropod hormone receptors are potential targets for novel pesticides as they regulate many essential physiological and behavioral processes.  The ...

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Deneysel Fare Modeli Vajinal Aşılama ve Örnek Toplama Protokolleri Candida Vajinit

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Ixodes scapularis Keneler gelen tükürük, Tükürük Bezi ve hemolimf Koleksiyonu

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

T Lenfositler doğru İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Yönetmen Farklılaşma

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

Lyme Hastalığı Araştırma İletim ve Xenodiagnosis için Hayvanlar Keneler besleme

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the  attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on ...

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

<em&gt; Ex Vivo</emAntimikrobiyal Konak savunma Çalışmaları&gt; Kolon Organ Kültür ve Kullanımı

The intestine displays an architecture of repetitive crypt structures consisting of different types of epithelial cells, lamina propia containing immune ...

Isolation and Characterization of Neutrophil-derived Microparticles for Functional Studies

Yalıtım ve nötrofil kaynaklı Microparticles karakterizasyonu için fonksiyonel çalışmalar

Polymorphonuclear neutrophil-derived microparticles (PMN)-MPs) are lipid bilayer, spherical microvesicles with sizes ranging from 50&#8211;1,000 nm in ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Mycobacterium tüberküloz kompleksinin incelenmesi Için bir enfeksiyon modeli olarak ınvertebrate Galleria mellonella kullanımı

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

Kronik Pseudomonas aeruginosa Yara Enfeksiyonu Gecikmiş Aşılama Modeli

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...