Name: rapid isolation of dorsal root ganglion macrophages
Uploaded: 2019-09-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages at JoVE.com

El estudio fue apoyado por: Foundation for Anesthesia Education and Research (XY); el Departamento de Anestesia y Cuidado Perioperatorio (XY) de la UCSF; y 1R01NS100801-01(GZ). Este estudio fue apoyado en parte por HDFCCC Laboratory for Cell Analysis Shared Resources Facility a través de una subvención del NIH (P30CA082103).

Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de California en San Francisco y se llevaron a cabo de acuerdo con la Guía NIH para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio.
1. Recoger DRG lumbar de ratones experimentales
<ol><li>Antes de iniciar el experimento, prepare la solución de trabajo del medio de gradiente de densidad (por ejemplo, Percoll) mezclando 9 volúmenes del medio con 1 volumen de Ca+...

<ol>
	<li>Ji, R. R., Chamessian, A., Zhang, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pain+regulation+by+non-neuronal+cells+and+inflammation.">Pain regulation by non-neuronal cells and inflammation.</a> Science. 354 (6312), 572-577 (2016).</li><li>Inoue, K., Tsuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+in+neuropathic+pain:+cellular+and+molecular+mechanisms+and+therapeutic+potential.">Microglia in neuropathic pain: cellular and molecular mechanisms and therapeutic potential.</a> Nature Reviews Neurosciences. 19 (3), 138-152 (2018).</li><li>Hu, P., McLachlan, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+functional+types+of+macrophage+in+dorsal+root+ganglia+and+spinal+nerves+proximal+to+sciatic+and+spinal+nerve+transections+in+the+rat.">Distinct functional types of macrophage in dorsal root ganglia and spinal nerves proximal to sciatic and spinal nerve transections in the rat.</a> Experimental Neurology. 184 (2), 590-605 (2003).</li><li>Simeoli, R., Montague, K., Jones, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomal+cargo+including+microRNA+regulates+sensory+neuron+to+macrophage+communication+after+nerve+trauma.">Exosomal cargo including microRNA regulates sensory neuron to macrophage communication after nerve trauma.</a> Nature Communication. 8 (1), 1778 (2017).</li><li>Cobos, E. J., Nickerson, C. A., Gao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+differences+in+neuropathic+pain+modalities+revealed+by+correlating+behavior+with+global+expression+profiling.">Mechanistic differences in neuropathic pain modalities revealed by correlating behavior with global expression profiling.</a> Cell Reports. 22 (5), 1301-1312 (2018).</li><li>Zhang, H., Li, Y., de Carvalho-Barbosa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+Root+Ganglion+Infiltration+by+Macrophages+Contributes+to+Paclitaxel+Chemotherapy-Induced+Peripheral+Neuropathy.">Dorsal Root Ganglion Infiltration by Macrophages Contributes to Paclitaxel Chemotherapy-Induced Peripheral Neuropathy.</a> The Journal of Pain. 17 (7), 775-786 (2016).</li><li>Liu, T., van Rooijen, N., Tracey, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+macrophages+reduces+axonal+degeneration+and+hyperalgesia+following+nerve+injury.">Depletion of macrophages reduces axonal degeneration and hyperalgesia following nerve injury.</a> Pain. 86 (1-2), 25-32 (2000).</li><li>Peng, J., Gu, N., Zhou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+and+monocytes+synergistically+promote+the+transition+from+acute+to+chronic+pain+after+nerve+injury.">Microglia and monocytes synergistically promote the transition from acute to chronic pain after nerve injury.</a> Nature Communication. 7, 12029 (2016).</li><li>Barclay, J., Clark, A. K., Ganju, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+cysteine+protease+cathepsin+S+in+neuropathic+hyperalgesia.">Role of the cysteine protease cathepsin S in neuropathic hyperalgesia.</a> Pain. 130 (3), 225-234 (2007).</li><li>Lim, H., Lee, H., Noh, K., Lee, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IKK/NF-kappaB-dependent+satellite+glia+activation+induces+spinal+cord+microglia+activation+and+neuropathic+pain+after+nerve+injury.">IKK/NF-kappaB-dependent satellite glia activation induces spinal cord microglia activation and neuropathic pain after nerve injury.</a> Pain. 158 (9), 1666-1677 (2017).</li><li>Rutkowski, M. D., Pahl, J. L., Sweitzer, S., van Rooijen, N., DeLeo, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limited+role+of+macrophages+in+generation+of+nerve+injury-induced+mechanical+allodynia.">Limited role of macrophages in generation of nerve injury-induced mechanical allodynia.</a> Physiology and Behavior. (3-4), 225-235 (2000).</li><li>Kwon, M. J., Shin, H. Y., Cui, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CCL2+Mediates+Neuron-Macrophage+Interactions+to+Drive+Proregenerative+Macrophage+Activation+Following+Preconditioning+Injury.">CCL2 Mediates Neuron-Macrophage Interactions to Drive Proregenerative Macrophage Activation Following Preconditioning Injury.</a> Journal of Neuroscience. 35 (48), 15934-15947 (2015).</li><li>Zigmond, R. E., Echevarria, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+biology+in+the+peripheral+nervous+system+after+injury.">Macrophage biology in the peripheral nervous system after injury.</a> Progress in Neurobiology. 173, 102-121 (2019).</li><li>Ghasemlou, N., Chiu, I. M., Julien, J. P., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD11b+Ly6G-+myeloid+cells+mediate+mechanical+inflammatory+pain+hypersensitivity.">CD11b+Ly6G- myeloid cells mediate mechanical inflammatory pain hypersensitivity.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 112 (49), E6808-E6817 (2015).</li><li>Malin, S. A., Davis, B. M., Molliver, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+dissociated+sensory+neuron+cultures+and+considerations+for+their+use+in+studying+neuronal+function+and+plasticity.">Production of dissociated sensory neuron cultures and considerations for their use in studying neuronal function and plasticity.</a> Nature Protocols. 2 (1), 152-160 (2007).</li><li>Lin, Y. T., Chen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+Root+Ganglia+Isolation+and+Primary+Culture+to+Study+Neurotransmitter+Release.">Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release.</a> Journal of Visualized Experiment. (140), (2018).</li><li>Burnett, S. H., Kershen, E. J., Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+macrophage+ablation+in+transgenic+mice+expressing+a+Fas-based+suicide+gene.">Conditional macrophage ablation in transgenic mice expressing a Fas-based suicide gene.</a> J Leukoc Biol. 75 (4), 612-623 (2004).</li><li>Lopes, D. M., Malek, N., Edye, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+peripheral+not+central+immune+responses+to+pain-inducing+injury.">Sex differences in peripheral not central immune responses to pain-inducing injury.</a> Science Reports. 7 (1), 16460 (2017).</li><li>Kim, Y. S., Anderson, M., Park, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coupled+Activation+of+Primary+Sensory+Neurons+Contributes+to+Chronic+Pain.">Coupled Activation of Primary Sensory Neurons Contributes to Chronic Pain.</a> Neuron. 91 (5), 1085-1096 (2016).</li><li>Vicuna, L., Strochlic, D. E., Latremoliere, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+serine+protease+inhibitor+SerpinA3N+attenuates+neuropathic+pain+by+inhibiting+T+cell-derived+leukocyte+elastase.">The serine protease inhibitor SerpinA3N attenuates neuropathic pain by inhibiting T cell-derived leukocyte elastase.</a> Nature Medicine. 21 (5), 518-523 (2015).</li></ol>

Aquí introducimos un nuevo método para enriquecer eficazmente los macrófagos aislados del DRG de ratón. El enfoque convencional para aislar las células inmunitarias DRG requiere digestión enzimática15,18, que ahora se sustituye por la homogeneización mecánica en nuestro protocolo para limitar el daño celular no deseado y aumentar el rendimiento. Por lo tanto, el nuevo protocolo consume mucho menos tiempo. Más importante aún, la digestión enzimática ...

Ahora hay evidencia considerable de que las células inmunitarias contribuyen al dolor neuropático después de la lesión del nervio periférico1,2. Se sabe que las células monocíticas periféricas, incluidos los macrófagos maduros, responden a lesiones tisulares e infecciones sistémicas a través de la fagocitosis, la presentación de antígenos y la liberación de citoquinas. Paralelamente a la activación de microglia inducida por una lesión nerviosa en el cuerno dorsal espinal, los macrófagos en los ganglios de la raíz dorsal (DRG) también se expanden significativamente después de la lesión nerviosa3,4. En particular, hay intereses crecientes para determinar si los macrófagos contribuyen al desarrollo del dolor neuropático después de la lesión del nervio periférico interactuando con las neuronas sensoriales en el DRG5,6,7, 8 , 9 , 10 , 11. Además, estudios recientes también implican la contribución de los macrófagos DRG en la reparación axonal después de una lesión nerviosa12,13. Otro estudio sugiere además que las subpoblaciones de macrófagos (es decir, CD11b+Ly6Chi y CD11b+Ly6Ccélulas bajas/-) pueden desempeñar un papel diferente en la hipersensibilidad mecánica14. Por lo tanto, el fenotipado rápidamente de la respuesta de los macrófagos DRG en el contexto de una lesión nerviosa puede ayudarnos a identificar factores neuroinmunes que contribuyen al dolor neuropático.
Convencionalmente, el protocolo para aislar los macrófagos en el DRG implica múltiples pasos incluyendo la digestión enzimática15,16. La técnica a menudo consume mucho tiempo y puede ser costosa para experimentos a gran escala. Aunque se recomendópreviamentela digestión leve con colagenasa tipo II (4 mg/ml) y dispasa tipo II (4,7 mg/ml) durante 20 min, es concebible que las células después de la exposición a esta enzima sean propensas a daños celulares o a la muerte celular, lo que puede conducir a un bajo Rendimiento. Además, la diferencia en la calidad de las enzimas de lote a lote puede afectar aún más la eficiencia de este proceso. Lo que es más importante, los macrófagos expuestos a la digestión enzimática pueden estimularse indeseablemente y, por lo tanto, pueden ser muy diferentes del estado in vivo. Los cambios pueden complicar potencialmente el resultado del estudio funcional.
Aquí describimos un protocolo libre de enzimas para aislar rápidamente los macrófagos DRG a 4 oC utilizando la disociación mecánica. Las muestras se mantienen en hielo para limitar el estrés celular. Como resultado, nuestro enfoque proporciona una ventaja para mantener la consistencia del aislamiento, y las células aisladas son presumiblemente más saludables y menos estimuladas. Además, presentamos la evidencia para validar la calidad de las células aisladas con análisis de clasificación celular activada por fluorescencia (FACS).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AP20187</td>
			<td>Clontech</td>
			<td>635058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>a-mouse CX3CR1-APC antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>149007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avertin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T48402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer (70 mm nylon)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dounce tissue homogenizer</td>
			<td>Wheaton</td>
			<td>357538 (1ml)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes (5ml)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Friedman-Pearson Rongeur</td>
			<td>FST</td>
			<td>16121-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (10x, Ca++/Mg++-free)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14185-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noyes Spring Scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>15012-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4937-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4864-10ml</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rapid isolation of dorsal root ganglion macrophages

Hay intereses crecientes para estudiar las interacciones moleculares y celulares entre las células inmunitarias y las neuronas sensoriales en los ganglios de la raíz dorsal después de la lesión del nervio periférico. Se sabe que las células monocíticas periféricas, incluidos los macrófagos, responden a una lesión tisular a través de la fagocitosis, la presentación de antígenos y la liberación de citoquinas. La evidencia emergente ha implicado la contribución de los macrófagos de los ganglios de raíz dorsal al desarrollo del dolor neuropático y la reparación axonal en el contexto de la lesión nerviosa. Se desea fenoticante rápidamente (o "aislamiento rápido de") la respuesta de los macrófagos de ganglios de raíz dorsal en el contexto de una lesión nerviosa para identificar los factores neuroinmunes desconocidos. Aquí demostramos cómo nuestro laboratorio aísla rápida y eficazmente los macrófagos de los ganglios de la raíz dorsal utilizando un protocolo de disociación mecánica libre de enzimas. Las muestras se mantienen en hielo para limitar el estrés celular. Este protocolo consume mucho menos tiempo en comparación con el protocolo enzimático estándar y se ha utilizado rutinariamente para nuestro análisis de clasificación de células activado por fluorescencia.

Para validar las células aisladas, primero elegimos los ratones transgénicos Depoptosis Inducida por Macrófagos (MAFIA)17. Esta línea expresa un gen de fusión suicida FK506 inducible (FKBP)-Fas y proteína fluorescente verde (eGFP) bajo el control del promotor del receptor CSF1 (CSF1R), que se expresa específicamente tanto en macrófagos como en microglia. La inyección sistémica de dimerizador de proteínas de unión a FK, AP20187 (AP), induce la apoptosis de las células que expresan el t...

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages at JoVE.com

Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages

Aquí presentamos un protocolo de disociación mecánica para aislar rápidamente los macrófagos del ganglio de la raíz dorsal para el fenotipado y el análisis funcional.

Aislamiento rápido de macrófagos de ganando de raíz dorsal

There are growing interests to study the molecular and cellular interactions among immune cells and sensory neurons in the dorsal root ganglia after ...

La evidencia emergente ha implicado la contribución de los macrófagos ganglionares de raíz dorsal al desarrollo del dolor neuropático y la reparación axonal en el contexto de la lesión nerviosa. Se desea fenotipar rápidamente la respuesta de los macrófagos ganglionares de raíz dorsal para identificar los factores neuroinmunes desconocidos. Aquí demostramos cómo nuestro laboratorio aísla rápida y eficazmente los macrófagos de los ganglios de la raíz dorsal utilizando un protocolo de disociación mecánica libre de enzimas.Este protocolo consume mucho menos tiempo en comparación con los protocolos enzimáticos estándar, y lo hemos utilizado rutinariamente para nuestro análisis de clasificación de células activado por fluorescencia. Antes de iniciar el experimento, prepare la solución de trabajo del medio de gradiente de densidad mezclando nueve volúmenes del medio con un volumen de calcio y sin magnesio 10X HBSS y manténgalo en hielo. Confirme que el ratón está completamente anestesiado por la falta de respuesta al pellizco de la pata trasera.Comience colocando un ratón anestesiado dentro de una campana química en la posición supina con cuatro patas aseguradas con cinta adhesiva. Use fórceps para levantar la piel por debajo de la caja torácica. Y luego con tijeras quirúrgicas, hacer una pequeña incisión para exponer el hígado y el diafragma.Usando las mismas tijeras, corte el diafragma y la caja torácica. Y luego abre la cavidad pleural para exponer el corazón latiendo. A continuación, con tijeras de iris, corte rápidamente el apéndice auricular derecho.Una vez observado el sangrado, inserte una aguja del calibre 30 en el extremo posterior del ventrículo izquierdo e inyecte lentamente 10 mililitros de 1X PBS pre-refrigerado para perfunde al animal. Para realizar laminectomía dorsal, coloque el ratón en la posición propensa. Utilice un bisturí de tamaño 11 para realizar dos incisiones longitudinales de profundidad laterales desde la región torácica hasta la región sacra.Luego retire la piel exponiendo la capa muscular dorsal. Luego, con Friedman-Pearson rongeur, despegue los tejidos y músculos conectivos hasta que se expongan los procesos de la columna lumbosacral y los procesos transversales bilaterales. Primero, usa un rongeur Friedman-Pearson para abrir cuidadosamente la columna vertebral dorsal, luego cambia entre un rongeur de Friedman-Pearson y tijeras de resorte Noyes para eliminar los huesos vertebrales, exponiendo la médula espinal con los nervios espinales intactos unidos.Diseccionar cuidadosamente el DRG lumbar ipsilateral y contralateral. Colóquelo en un mililitro de calcio helado y HBSS 1X sin magnesio en un homogeneizador de tejido Dounce. Homogeneizar el tejido DRG en el homogeneizador Dounce con un pestle suelto durante 20 a 25 veces.Coloque un colador de células de nylon estéril de 70 micrómetros en un tubo cónico estéril de 50 mililitros. Utilice 800 microlitros de código de hielo 1X HBSS para mojar el colador celular. Utilice una pipeta para recoger la suspensión de tejido homogeneizado del homogeneizador en el colador de células húmedas, y recórtela en el tubo cónico de 50 mililitros.Enjuague el homogeneizador dos veces con 800 microlitros de hielo frío 1X HBSS, recogiendo el líquido en el mismo tubo cónico de 50 mililitros para aumentar el rendimiento. Agregue 1,5 mililitros de medio de gradiente de densidad isotónica con hielo equilibrado en un tubo de matraz de poliestireno estéril de cinco mililitros. Transfiera el homogenenato celular del tubo cónico de 50 mililitros a este tubo de matraz.Y pipetear arriba y abajo para mezclar bien. Agregue 500 microlitros adicionales de 1X HBSS para sellar la parte superior. Centrifugar las células a 800 veces G durante 20 minutos a cuatro grados centígrados.Aspirar cuidadosamente el sobrenadante que contiene mielina en el medio sin alterar el pellet celular en la parte inferior del tubo. Añadir 100 microlitros de PBS que contengan 5% de suero bovino fetal al pellet, y volver a suspender las células DRG. Luego agregue el anticuerpo alfa ratón CX3CR1 APC a las células e incubar en la oscuridad a cuatro grados Celsius durante una hora.Lavar las células una vez con cinco mililitros de PBS. Centrifugar las células a 360 veces G durante ocho minutos a cuatro grados centígrados. Aspirar el sobrenadante, y luego volver a suspender el pellet celular en 300 microlitros de PBS para el análisis de hechos.Después de las inyecciones intraperitoneales de dimerizador de proteína de unión a FK AP en ratones MaFIA para agotar los macrófagos, hubo una pérdida significativa de células positivas de GFP en las DRG de los ratones tratados con AP en comparación con ratones tratados con vehículos controlados. El análisis de hechos reveló un agotamiento exitoso de la alta población de GFP en ratones tratados con AP y demostró la alta calidad de las células aisladas. El 4% del total de células aisladas del DRG del animal tratado con vehículos eran macrófagos altos de la GFP.Por el contrario, sólo el 0,4% del total de células DRG eran macrófagos altos de GFP en el ratón tratado con AP. Las células DRG aisladas mecánicamente de ratones de tipo salvaje se tiñeron con anticuerpos CX3CR1-APC de ratón alfa. El 6% de las células DRG fueron macrófagos positivos CX3CR1.Cuando se evaluó la viabilidad celular con yoduro propidium, reveló que más del 80% de las células DRG recién aisladas eran viables. Si se observa el rendimiento celular insatisfactorio, se puede sospechar una homogeneización insuficiente o excesiva del tejido DRG. Además, la disección de DRG puede requerir prácticas repetidas para principiantes.Es probable que la aplicación de nuestro protocolo se pueda ampliar para estudiar otras células no neuronales como células satélite y células T. Pueden ser necesarios más estudios para confirmar la eficacia del aislamiento celular.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

Imágenes en vivo de los axones de la raíz dorsal después de rizotomía

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

Investigación

Neurociencias

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

Estudio genético de la regeneración axonal en neuronas cultivadas de Adultos ganglio de la raíz dorsal

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

En Vitro Modelado de canceroso Neural Invasion: Modelo del ganglio de la raíz dorsal

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These ...

An Approach to Enhance Alignment and Myelination of Dorsal Root Ganglion Neurons

Un Enfoque para Mejorar la alineación y la mielinización de las neuronas del ganglio de la raíz dorsal

Axon regeneration is a chaotic process due largely to unorganized axon alignment. Therefore, in order for a sufficient number of regenerated axons to ...

Hydraulic Extrusion of the Spinal Cord and Isolation of Dorsal Root Ganglia in Rodents

Extrusión hidráulica de la médula espinal y aislamiento de los ganglios de la raíz dorsal en roedores

Traditionally, the spinal cord is isolated by laminectomy, i.e. by breaking open the spinal vertebrae one at a time. This is both time consuming and may ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

Inyección de raíz dorsal ganglio de raíz dorsal y Lesión por aplastamiento como modelo para la regeneración del axón sensorial

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine

Laminotomía para acceso de ganglio de raíz Dorsal Lumbar y de la inyección en los cerdos

Dorsal root ganglia (DRG) are anatomically well defined structures that contain all primary sensory neurons below the head. This fact makes DRG attractive ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Análisis de las células inmunes en solo de los nervios ciático y de ganglio de raíz Dorsal de un ratón mediante citometría de flujo

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release

Aislamiento de los ganglios de raíz dorsal y en cultivo primario para el estudio de liberación de neurotransmisor

Dorsal root ganglia (DRG) contain cell bodies of sensory neurons. This type of neuron is pseudo-unipolar, with two axons that innervate peripheral ...

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Investigadora de axón mamífero de regeneración: En Vivo electroporación de ganglio de raíz Dorsal de ratón adulto

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the ...