选择性支气管内方法意义重大,因为它为研究人员提供了一个可重复的、非致命的模型,用于研究急性肺损伤,急性呼吸窘迫综合征的一个主要原因。选择性支气管内技术的优点是左肺的炎症反应定位,提供右肺作为一种未受伤的控制,并最大限度地减少动物的苦恼。演示这个程序将是亚历山大塔瓦雷斯,一个技术员和研究生在我们的实验室。
要准备0.1个普通盐酸,在琥珀色玻璃瓶中加入11毫升双蒸馏水,然后缓慢加入1毫升37%12正常酸。接下来,在50毫升锥形管中,缓慢地将4毫升的一个正常酸工作存量加入35毫升双蒸馏水中。然后使用电子 pH 探头测量 0.1 正常库存溶液的 pH 值,根据需要使用氢氧化钠或酸库存溶液将 pH 滴答到 1.1,最终体积为 40 毫升。
在开始手术之前,通过无菌0.22微升过滤器将酸溶液的一到两毫升过滤到无菌微离心管中,并确认麻醉小鼠对疼痛反射缺乏反应。使用电动剪子缓慢向下冲程轻轻地剃光小鼠腹部表面的手术区域,在咽喉的颈椎区域下。去除任何松动的头发,用三个连续的10%波维酮碘溶液和70%异丙醇拭子拭子擦拭裸露的皮肤。
当皮肤已准备后,将鼠标放在干净的手术板上,用无菌手术窗帘盖住动物。在气管和唾液腺上方的皮肤上做一个0.5厘米的纵向开口,并使用稍微弯曲的锯齿状钳子小心地缩回皮肤。轻轻地分离唾液腺,露出气管肌肉,并使用稍微弯曲的锯齿状钳子轻轻推开副切肌肉。
将气管周围的筋膜调开,直到气管的软骨环完全暴露,并使用完全弯曲的锯齿状钳子来消除气管和逆转管之间的结缔组织。滑动气管后面的完全弯曲锯齿钳,并提起气管。一旦钳子的尖端在气管后面,抓住一块10至15厘米的4-0编织丝缝合线与钳子的尖端,拉紧到气管后面的缝合线,使两侧有一个均匀的长度。
手术板可以转动,使手术区域更接近主导手的下一步。然后轻轻地将缝合线末端拉向鼠标前部,并按住末端。对于左主管支气管的可调,通过 3/4 英寸血管导管将 24 量表的针头露出来,并将针斜面插入第一和第二气管环之间的气管内侧区域。
当针尖可以在气管流明中可视化时,松开缝合线,将针尖上的针尖推进到气管中,朝鼠标的左后侧倾斜。遇到阻力时,取针。一旦导管就位,牢牢抓住喷射口,防止导管移动,并在端口内固定 P-200 微管尖端。
然后将过滤的 0.1 法线酸溶液的 50 微升注入导管,然后注入同等体积的空气。此步骤需要精确操作气管,同时气道阻塞,应快速、顺利地完成,以恢复适当的气流并最大限度地减少气道损坏。快速提取导管,以 60 度角倾斜手术板。
30 秒后,将手术板平放,然后从气管后面取出缝合线。然后用4-0蜡涂层编织的真丝缝合线用两到三针关闭皮肤切口。支气管内注射引起的急性肺损伤涉及整个左肺。
事实上,在静脉注射埃文斯蓝色染料和肺灌注后,只有在左肺内检测到这种染料。与假选择性灌输相比,染料外创到左肺的定量显著增加。与右肺相比,在酸性注入24小时后,左肺中积液中性粒细胞会累积,而右肺中很少观察到间质嗜中性粒细胞。
肺组织学揭示了器官和细胞水平的组织损伤和炎症,受伤后24小时有渗出炎症,其特征是左肺内明显的肺活体水肿和嗜中性粒细胞渗透。请注意,缺乏严重伤害或白细胞流入未受伤的控制右肺。受伤后72小时,水肿和细胞渗透量大幅减少,表示分词性排泄阶段。
根据流式细胞学评估,左肺中性粒细胞在初始损伤后24小时内增加,在48和72小时时显著减少。在推进之前,在气管中可视化导管非常重要。在插入过程中将管杆菌对角朝左主茎,然后用 50 微升空气进行酸注入。
可以进行支气道熔岩液分析、肺组织学、流式细胞表型、活鼠成像和肺功能测试,以评估炎症和分辨率。这种自我限制的急性肺损伤模型的发展,使研究人员对分辨率生物学领域做出了重大贡献。请记住,浓缩盐酸是危险的,应穿着适当的个人防护装备在化学罩中处理。