चयनात्मक अंतर-ब्रोंकियल विधि महत्वपूर्ण है क्योंकि यह जांचकर्ताओं को तीव्र फेफड़ों की चोट का अध्ययन करने के लिए एक प्रजनन योग्य और गैर-घातीय मॉडल प्रदान करता है, जो मनुष्यों में तीव्र श्वसन संकट सिंड्रोम का एक प्रमुख कारण है। चयनात्मक इंट्रा-ब्रोंकियल तकनीक का लाभ बाएं फेफड़ों के लिए भड़काऊ प्रतिक्रिया का स्थानीयकरण है जो दाएं फेफड़ों को एक अघायल नियंत्रण के रूप में पेश करता है और पशु संकट को कम करता है। इस प्रक्रिया का प्रदर्शन अलेक्जेंडर Tavares, एक तकनीशियन और हमारी प्रयोगशाला में पूर्व स्नातक छात्र होगा ।
0.1 सामान्य हाइड्रोक्लोरिक एसिड तैयार करने के लिए, एक एम्बर ग्लास की बोतल में 11 मिलीलीटर डबल आसुत पानी जोड़ें, इसके बाद 37% 12 सामान्य एसिड के एक मिलीलीटर का धीमा जोड़ दिया गया। इसके बाद, धीरे-धीरे एक सामान्य एसिड काम करने वाले स्टॉक के चार मिलीलीटर को 50 मिलीलीटर शंकु नली में 35 मिलीलीटर डबल आसुत पानी में जोड़ें। फिर 0.1 सामान्य स्टॉक समाधान के पीएच को मापने के लिए एक इलेक्ट्रॉनिक पीएच जांच का उपयोग करें, 40 मिलीलीटर की अंतिम मात्रा के लिए आवश्यक सोडियम हाइड्रोक्साइड या एसिड स्टॉक समाधान का उपयोग करके 1.1 के पीएच पर टिरेटिंग करें।
प्रक्रिया शुरू करने से पहले, एक बाँझ माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में एक बाँझ 0.22 माइक्रोलीटर फिल्टर के माध्यम से एसिड समाधान के एक से दो मिलीलीटर फ़िल्टर करें और एक एनेस्थेटाइज्ड माउस में दर्द पलटा के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करें। धीमी गति से नीचे स्ट्रोक में बिजली के कतरनी का उपयोग धीरे गले के गर्भाशय ग्रीवा क्षेत्र में ठोड़ी के नीचे माउस के वेंट्रल सतह पर सर्जिकल क्षेत्र दाढ़ी । किसी भी ढीले बालों को हटा दें, और लगातार तीन 10% povidone-आयोडीन समाधान और ७०% आइसोप्रोपिल अल्कोहल झाड़ू के साथ उजागर त्वचा झाड़ू ।
जब त्वचा को प्रीप्ड किया गया हो, तो माउस को एक साफ सर्जिकल बोर्ड पर रीढ़ की स्थिति में रखें, और जानवर को बाँझ सर्जिकल ड्रेप से कवर करें। श्वासनली और लार ग्रंथियों के ऊपर त्वचा में एक देशांतर 0.5 सेंटीमीटर खोलने बनाओ, और ध्यान से त्वचा को वापस लेने के लिए थोड़ा घुमावदार दांतेदार संदंश का उपयोग करें। श्वासनली मांसपेशियों को बेनकाब करने के लिए लार ग्रंथियों को धीरे से अलग करें और पैराट्राचेल मांसपेशियों को धीरे से पुश करने के लिए थोड़ा घुमावदार दांतेदार संदंश का उपयोग करें।
श्वासनली के आसपास के प्रावरणी को तब तक चिढ़ाएं जब तक कि श्वासनली के कार्टिलाजिनस छल्ले पूरी तरह से उजागर न हो जाएं, और रेट्रोट्राचिया और रेट्रोफास्सिया के बीच कनेक्टिव ऊतक को दूर करने के लिए पूरी तरह से घुमावदार दांतेदार संदंश का उपयोग करें। श्वासनली के पीछे पूरी तरह से घुमावदार दांतेदार संदंश स्लाइड करें और श्वासनली को उठाएं। एक बार संदंश की नोक श्वासनली के पीछे है, संदंश के सुझावों के साथ 4-0 लट रेशम सीवन के एक 10 से 15 सेंटीमीटर टुकड़ा समझ और श्वासनली के पीछे सीवन खींच इतना है कि वहां दोनों तरफ एक भी लंबाई है ।
सर्जिकल बोर्ड को अगले चरणों के लिए सर्जिकल क्षेत्र को प्रमुख हाथ के करीब लाने के लिए बदल दिया जा सकता है। फिर धीरे से माउस के पूर्वकाल की ओर सीवन के सिरों को खींचें, और सिरों को जगह में पकड़ें। बाएं मेनस्टेम ब्रोंचस के कैनुलेशन के लिए, 3/4 इंच एंजियोकैथटर द्वारा 24-गेज की सुई का पर्दाफाश करें और सुई बेवेल को पहले और दूसरे श्वासनली छल्ले के बीच श्वासनली के आंतरिक क्षेत्र में डालें।
जब सुई टिप को श्वासनली ल्यूमेन के भीतर कल्पना की जा सकती है, तो सीवन को छोड़ दें और माउस के बाएं पीछे की ओर श्वासनली एंगलिंग में सुई पर कैनुला को आगे बढ़ाएं। जब प्रतिरोध का सामना करना पड़ा, सुई वापस ले लें। एक बार कैनुला जगह में है, दृढ़ता से इंजेक्शन बंदरगाह समझ स्थानांतरण और बंदरगाह के भीतर एक पी-२०० माइक्रोपिपेट टिप सुरक्षित से कैथेटर को रोकने के लिए ।
फिर कैथेटर में फ़िल्टर किए गए 0.1 सामान्य एसिड समाधान के 50 माइक्रोलीटर पैदा करें, इसके बाद हवा की बराबर मात्रा हो। इस कदम के लिए कैनुला के सटीक हेरफेर की आवश्यकता होती है, जबकि वायुमार्ग बाधित होता है, और उचित एयरफ्लो को बहाल करने और वायुमार्ग क्षति को कम करने के लिए जल्दी और सुचारू रूप से पूरा किया जाना चाहिए। कैथेटर को तेजी से वापस लें और सर्जिकल बोर्ड को 60 डिग्री कोण पर झुकाएं।
30 सेकंड के बाद, सर्जिकल बोर्ड फ्लैट बिछाएं, और सीवन को श्वासनली के पीछे से हटा दें। इसके बाद दो से तीन टांके के साथ त्वचा के चीरा को बंद करने के लिए 4-0 वैक्स-लेपित लट रेशम सीवन का इस्तेमाल करें। इंट्रा-ब्रोंकियल एसिड इन्स्टिलेशन के परिणामस्वरूप तीव्र फेफड़ों की चोट में पूरे बाएं फेफड़े शामिल होते हैं।
दरअसल, इवांस ब्लू डाई और फेफड़ों के परफ्यूजन के नसों में प्रशासन के बाद, डाई केवल बाएं फेफड़ों के भीतर पता चला है । बाएं फेफड़े में डाई अपव्यय का मात्राकरण नकली चयनात्मक पैदाल के सापेक्ष काफी बढ़ जाता है। मध्यवर्ती न्यूट्रोफिल दाएं फेफड़ों के विपरीत एसिड पैदा करने के 24 घंटे बाद बाएं फेफड़ों में जमा होते हैं जिसमें कुछ इंटरस्टिशियल न्यूट्रोफिल देखे जाते हैं।
फेफड़ों के हिस्टोलॉजी से पता चलता है कि अंग और सेलुलर स्तर पर ऊतक की चोट और सेलुलर स्तर पर चोट के 24 घंटे बाद चोट के बाद बाएं फेफड़ों के भीतर चिह्नित अल्वेलर एडीमा और न्यूट्रोफिल घुसपैठ की विशेषता है। ध्यान दें कि अघायल नियंत्रण सही फेफड़ों में महत्वपूर्ण चोट या ल्यूकोसाइट आमद की कमी। चोट के 72 घंटे बाद एडीमा और सेलुलर घुसपैठों को एक समाधान प्रारंभिक चरण का प्रतिनिधित्व करने में काफी कमी आई है।
प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा मूल्यांकन के रूप में, प्रारंभिक चोट के 24 घंटे बाद बाएं फेफड़ों में अल्वेलर न्यूट्रोफिल में वृद्धि होती है, और 48 और 72 घंटे में काफी कम हो जाती है। आगे बढ़ने से पहले श्वासनली में कैथेटर की कल्पना करना महत्वपूर्ण है। प्रविष्टि के दौरान बाएं मेनस्टेम ब्रोंचस की ओर कैनुला को कोण करें और हवा के 50 माइक्रोलीटर के साथ एसिड इन्सेलेशन का पालन करें।
ब्रोंकोअल्वोलार लावेज फ्लूइड विश्लेषण, फेफड़ों के हिस्टोलॉजी, इम्यून सेल फेनोटाइपिंग द्वारा फ्लो साइटोमेट्री, लाइव माउस इमेजिंग, और पल्मोनरी फंक्शन टेस्टिंग सभी सूजन और संकल्प का आकलन करने के लिए किया जा सकता है। तीव्र फेफड़ों की चोट के इस आत्म सीमित मॉडल के विकास ने शोधकर्ताओं को संकल्प जीव विज्ञान के क्षेत्र में महत्वपूर्ण योगदान करने की अनुमति दी है । याद रखें कि केंद्रित हाइड्रोक्लोरिक एसिड खतरनाक है और इसे उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण पहने हुए रासायनिक हुड में संभाला जाना चाहिए।