Het voedingssysteem van Aplysia is al lang gebruikt als een modelsysteem voor de studie van motorische controle en zachte lichaamsbiomechanica. Echter, de spieren diep in de voeding grijper zijn ontoegankelijk voor in vivo manipulatie. Deze operatie stelt ons in staat om toegang te krijgen tot deze spieren in anders intact gedragende dieren.
Dit biedt ons niet alleen voor het eerst toegang, maar de techniek omvat een enkele incisie tot één enkel deel van een slak, wat betekent dat de schade aan de andere regio's relatief klein is. De beste voorbereiding is om zorgvuldige dissecties van de buccale massa te doen en zich grondig vertrouwd te maken met de anatomie. Selecteer een actief dier door het zeewier aan te bieden en te bevestigen dat de beetintervallen niet langer zijn dan vijf seconden.
10 minuten na de verdoving, probeer voorzichtig om een speld in de kieuw en rhinophore te steken, controlerend of deze niet terugtrekken om voldoende anesthesie te verzekeren. Zorg ervoor dat de lippen van de slak glad zijn, wat aangeeft dat de kaken volledig ontspannen zijn. Op deze manier wordt odontophore blootgesteld.
In het geval dat kreuken op de lippen verschijnt, zijn de lippen en kaak van het dier niet voldoende ontspannen voor de chirurgische ingreep. Raadpleeg het manuscript voor tips over het opwekken van lipontspanning. Plaats de slak zo dat het hoofd naar beneden hangt, waardoor de buccale massa zich tegen de kaken kan nestelen.
Druk uitoefenen met de duim en wijsvinger om de buccale massa naar de kaken te duwen, waarbij de buccale massa op zijn plaats blijft. Draai de kaak zo dat ze zichtbaar zijn. Tegelijkertijd moet u de druk op de buccale massa handhaven, zodat de boeg van de buccale massa zichtbaar is door de kaken.
Werk voorzichtig de uiteinden van de stompe tangen in de spleet van de odontophore en gebruik ze om het radulaire oppervlak door de kaken te gebruiken. Als de kaken niet voldoende ontspannen zijn, gebruik dan de tangen om de rand van de kloof voorzichtig te grijpen om dit proces te ondersteunen. Zodra het oppervlak is blootgesteld, werk de kaken duidelijk van het voorste gedeelte van het radulaire oppervlak helemaal rond de omtrek.
Dit maakt de odontophore minder kans om in te trekken. Zorg ervoor dat niet meer dan de helft van de wanden van de odontophore wordt blootgesteld. Zodra het radulaire oppervlak volledig is blootgesteld, schik de slak onder een dissectiemicroscoop voor de operatie.
Voor wetenschappers met minder ervaring, gebruik maken van een brede rubberen band en een derde hand om de kaken en radulaire oppervlak te stabiliseren voor de operatie. Plaats het radulaire oppervlak zodat de gespleten kant tegenover de onderzoeker staat. Pak het radulaire oppervlak in de buurt van de radulaire basis, zodat een horizontale vouw loodrecht op de anatomische vouw wordt gecreëerd.
Gebruik fijne schaar om door deze vouw te snijden, waardoor een incisie langs de anatomische vouw. Breid deze initiële incisie uit tot drie tot vijf centimeter om toegang te krijgen tot het interieur van de buccale massa. Pas het licht zo aan dat het direct terug wijst door deze incisie.
Deel de randen van de incisie zodat de achterkant van het lumen van de odontophore en de dunne verticale strengen van de I7-spier zichtbaar zijn. Reik in de incisie. Pak beide strengen van I7 en trek ze omhoog door de incisie, waar zo veel van de spier kan worden weggesneden als praktisch is.
Nadat laesies zijn uitgevoerd, pak de voorste tentakels en duw ze naar beneden op het radulaire oppervlak om de slak terug te keren naar de oorspronkelijke configuratie. Plaats postchirurgische dieren in een beschermde omgeving met een goede waterstroom. Zorg ervoor dat de dieren alert en responsief zijn op de dag na de operatie.
Op de eerste of tweede dag na de operatie beginnen de dieren zich te voeden. Om subradulaire vezellaesie uit te voeren na chirurgische incisie, steek het puntje van een klein, recht scalpelblad door de incisie met de scherpe rand naar boven schuin. Schraap voorzichtig de fijne spiervezels van de onderkant van het radulaire oppervlak.
Voer vervolgens postoperatieve zorg uit zoals voorheen. In deze anatomische studie hadden schijnlaesies geen significant effect op de breedte van de opening op het hoogtepunt van het bijten. Terwijl zowel I7 als subd radulaire vezelletsels de beetbreedte aanzienlijk verminderden.
Het belangrijkste om te onthouden is dat de lippen en kaken van het dier volledig ontspannen zijn voordat u probeert om de grijper door de kaken te duwen. Waarschijnlijk zijn zowel I7 als de subradulaire vezels multifunctionele spieren en we hebben alleen bepaalde aspecten van het gedrag geïdentificeerd waaraan ze bijdragen. Bovendien geeft deze techniek van het uittrekken van de odontophore toegang tot hele delen van de anatomie die voorheen ontoegankelijk waren.
Naast het openen van anatomische regio's en zachte lichaamsbiomechanica, hopen we dat dit kan dienen als basis voor andere onderzoekers die werken met zachte structuren die anders moeilijk te onderzoeken zouden kunnen zijn.