Name: three-dimensional angiogenesis assay system using co-culture spheroids formed by endothelial colony forming cells and mesenchymal stem cells
Uploaded: 2019-09-18T12:30:00
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Cette recherche a été soutenue par une subvention (17172MFDS215) du Ministère de l'alimentation et de la sécurité des médicaments, la subvention de la National Research Foundation of Korea (NRF) financée par le gouvernement coréen (MSIP) (2017R1A2B4005463), et le Programme de recherche scientifique fondamentale par l'intermédiaire du National Research Foundation of Korea (NRF) financé par le Ministère de l'éducation (2016R1A6A1A03007648).

Les CeFC humains ont été isolés du sang périphérique humain tel que décrit dans un rapport précédent27. En bref, la couche de cellules mononucléaires a été séparée du sang entier à l'aide du Ficoll-Paque Plus, et cultivée dans le milieu approprié jusqu'à ce que les colonies endothéliales soient apparues. Des colonies ont été recueillies et les CeEC ont été isolés à l'aide de perles magnétiques enduites de CD31. Les MSC ont été isolés de la fraction de cellules mononucl?...

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M., Werb, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extracellular+matrix:+a+dynamic+niche+in+cancer+progression.">The extracellular matrix: a dynamic niche in cancer progression.</a> Journal of Cell Biology. 196 (4), 395-406 (2012).</li><li>Melero-Martin, J. M., Bischoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+13.+An+in+vivo+experimental+model+for+postnatal+vasculogenesis.">Chapter 13. An in vivo experimental model for postnatal vasculogenesis.</a> Methods in Enzymology. 445, 303-329 (2008).</li><li>Laib, A. 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T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-Cell+Spheroid+Angiogenesis+Assay+System+Using+Both+Endothelial+Colony+Forming+Cells+and+Mesenchymal+Stem+Cells.">Two-Cell Spheroid Angiogenesis Assay System Using Both Endothelial Colony Forming Cells and Mesenchymal Stem Cells.</a> Biomolecules &amp; Therapeutics (Seoul). 26 (5), 474-480 (2018).</li></ol>

La présente étude introduit un système d'analyse d'angiogenèse in vitro amélioré utilisant des sphéroïdes de co-culture formés par deux progéniteurs de cellules vasculaires humaines, les CCEC et les MSC. Le système sphéroïde de co-culture peut imiter la formation de germes vasculaires in vivo, qui est par interaction et incorporation entre les cellules endothéliales et les péritéytes. Comparé à d'autres essais in vitro d'angiogenèse qui reflètent seulement l'angiogenèse ECs-négociée, ce système d'...

Environ 500 millions de personnes dans le monde devraient bénéficier d'un traitement modulant de l'angiogenèse pour les maladies associées à la malformation vasculaire comme la polyarthrite rhumatoïde, l'oculopathie, les maladies cardiovasculaires et la métasose tumorale1. Ainsi, le développement de médicaments qui contrôlent l'angiogenèse est devenu un domaine de recherche important dans l'industrie pharmaceutique. Pendant le processus de développement de drogue, l'étude animale in vivo est nécessaire pour explorer les effets des candidats de drogue sur des fonctions physiologiques et des interactions systémiques entre les organes. Cependant, les questions d'éthique et de coût ont accru les préoccupations concernant les expériences animales2. Par conséquent, des systèmes d'analyse in vitro améliorés sont nécessaires pour obtenir des données plus précises et prévisibles menant à une meilleure prise de décision avant les expériences animales. Les essais actuels d'angiogenèse in vitro mesurent habituellement la prolifération, l'invasion, la migration ou la formation tubulaire de cellules endothéliales (EC) ensemoir dans des plaques de culture bidimensionnelles (2D)3. Ces essais d'angiogenèse 2D sont rapides, simples, quantitatifs et rentables, et ont contribué de manière significative à la découverte de médicaments modulation de l'angiogenèse. Cependant, plusieurs questions restent à améliorer.
Ces systèmes d'analyse in vitro 2D ne peuvent pas refléter des événements complexes en plusieurs étapes de l'angiogenèse qui se produit dans des conditions physiologiques in vivo, conduisant à des résultats inexacts qui causent des écarts entre les données d'essai in vitro et les résultats des essais cliniques4. Les conditions de culture 2D induisaient également le changement des phénotypes cellulaires. Par exemple, après la prolifération dans les plaques de culture 2D, les EC ont un phénotype cellulaire faible comme manifesté par l'expression réduite de CD34 et plusieurs signaux qui régissent les réponses cellulaires5,6. Pour surmonter les limites des systèmes d'analyse d'angiogenèse basés sur la culture 2D, des systèmes d'analyse sphéroïde tridimensionnaux (3D) ont été développés. Sprouting suivi par la formation de structure tubulaire à partir de sphéroïdes formés par ECs reflètent in vivo processus néo-vascularisation7,8. Ainsi, l'angiogenèse sphéroïde 3D a été considérée comme un système d'évaluation efficace pour le dépistage des médicaments potentiels pro ou anti-angiogenèse.
La plupart des analyses d'angiogenèse sphéroïde 3D n'utilisent que des EC, principalement des cellules endothéliales de veine ombilicale humaine (HUVECs) ou des cellules endothéliales microvasculaires cutanées humaines (HDMECs) pour se concentrer sur la réponse cellulaire des ECs pendant l'angiogenèse. Cependant, les capillaires sanguins sont composés de deux types de cellules : les CE et les péricytes. L'élaboration de l'interaction bidirectionnelle entre les EC et les péritéytes est essentielle pour une intégrité et une fonction vasculaires adéquates. Plusieurs maladies, telles que l'aVC héréditaire, la rétinopathie diabétique, et la malformation veineuse, sont associées à la densité altérée de périyte ou à l'attachement diminué de périyte à l'endothelium9. Les péricartes sont également connus comme un élément clé du processus angiogénique. Les péricartés sont recrutées pour stabiliser les structures nouvellement formées des navires par les EC. À cet égard, l'angiogenèse sphéroïde mono-culture n'incorpore pas de péridytes7,10. Par conséquent, les sphéroïdes de co-culture formés par des ECs et des péricartétes peuvent fournir une approche valable aux événements angiogéniques physiologiques plus étroitement imités.
La présente étude visait à mettre au point un analyse d'angiogenèse sphéroïde de co-culture 3D avec une combinaison de cellules de formation de colonies endothéliales humaines (CeFC) et de cellules souches mésenchymales (MSC) pour refléter plus étroitement l'angiogenèse in vivo. Le système sphéroïde de co-culture en tant qu'assemblage in vitro de représentation d'un vaisseau sanguin normal a été établi pour la première fois par Korff et autres en 200111. Ils ont combiné des HUVECs et des cellules lisses de muscle lissed d'artère ombilicale humaine (HUSMCs), et ont démontré que la co-culture de deux cellules vasculaires mûres a diminué le potentiel de germination. Les EC matures (HUVECs) sont connus pour perdre progressivement leur capacité à proliférer et différencier, ce qui affecte négativement leurs réponses d'angiogenèse12,13. Les cellules périvasculaires matures (HUSMCs) peuvent causer l'inactivation de cellules endothéliales par l'abrogation du facteur de croissance endothéliale vasculaire (VEGF) réactivité11. La principale différence entre Korff et notre système sphéroïde co-culture est les types de cellules utilisées. Nous avons appliqué deux précurseurs vasculaires, Des ECFC et des MSC, pour établir un système approprié d'angiogenèse pour examiner et étudier les agents pro-ou-anti-angiogéniques. Les CEC sont le précurseur des CE. Les CEC ont une capacité de prolifération robuste par rapport aux CE matures14, ce qui permet de surmonter la limitation des CE. Les ECFC contribuent à la formation de nouveaux vaisseaux dans de nombreuses affections pathophysiologiques postnatales15,16,17. Les MSC sont des cellules souches pluripotentes qui ont la capacité de se différencier en péricartés, contribuant ainsi à l'angiogenèse18,19.
Dans les rapports précédents, les ECFC et les MSC ont montré des effets synergiques sur la formation in vitro de tube20,la néo-vascularisation in vivo21,22, et la reperfusion améliorée des tissus ischémiques23,24. Dans la présente étude, les ECFC et les MSC ont été utilisés pour former des sphéroïdes de co-culture et incorporés dans le gel de collagène de type I pour refléter un environnement 3D in vivo. Le collagène est considéré comme un des principaux constituants de la matrice extracellulaire (ECM) entourant les EC25. L'ECM joue un rôle essentiel dans la régulation du comportement cellulaire26. Le protocole d'analyse proposé ici peut être effectué facilement et rapidement en deux jours en utilisant des techniques de laboratoire communes. Pour un suivi efficace des cellules pendant le processus de germination, chaque type de cellule peut être étiqueté et surveillé de façon fluorescente à l'aide d'un enregistreur cellulaire en temps réel. Le nouveau système d'analyse d'angiogenèse sphéroïde de co-culture 3D est conçu pour augmenter la sensibilité pour évaluer les modulateurs angiogéniques potentiels et pour fournir des informations prévisibles avant l'étude in vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:709px;" width="708">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">0.05 % Trypsin EDTA (1X)</td>
			<td style="width:123px;">Gibco</td>
			<td style="width:161px;">25300-054</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Bevacizumab</td>
			<td style="width:123px;">Roche</td>
			<td style="width:161px;">NA</td>
			<td>Commercial name: Avastin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Dulbecco Modified Eagle Medium</td>
			<td style="width:123px;">Gibco</td>
			<td style="width:161px;">11885-084</td>
			<td>DMEM</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:259px;">Dulbeco&#39;s Phosphate buffered saline (10X)</td>
			<td style="width:123px;">Gibco</td>
			<td style="width:161px;">21600-010</td>
			<td>PBS (10X)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:259px;">Dulbeco&#39;s Phosphate buffered saline (1X)</td>
			<td style="width:123px;">Corning</td>
			<td style="width:161px;">21-031-CVR</td>
			<td>PBS (1X)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:259px;">Endothelial cell Growth medium MV2 kit</td>
			<td style="width:123px;">Promocell</td>
			<td style="width:161px;">C-22121</td>
			<td>ECGM-MV2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:123px;">Atlas</td>
			<td style="width:161px;">FP-0500A</td>
			<td>FBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Gelatin</td>
			<td style="width:123px;">BD Sciences</td>
			<td style="width:161px;">214340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">L-Glutamine&#8211;Penicillin&#8211;Streptomycin</td>
			<td style="width:123px;">Gibco</td>
			<td style="width:161px;">10378-016</td>
			<td>GPS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:259px;">Mesenchymal stem cell growth medium-2</td>
			<td style="width:123px;">Promocell</td>
			<td style="width:161px;">C-28009</td>
			<td>MSCGM-2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Methyl cellulose</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:161px;">M0512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">PKH26 Fluorescent Cell Linker Kits</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:161px;">MINI26</td>
			<td>PKH26</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">PKH67 Fluorescent Cell Linker Kits</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:161px;">MINI67</td>
			<td>PKH67</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Sodium Hydroxide</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:161px;">S5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Type I collagen gel</td>
			<td style="width:123px;">Corning</td>
			<td style="width:161px;">354236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Vascular endothelial growth factor A</td>
			<td style="width:123px;">R&#38;D</td>
			<td style="width:161px;">293-VE-010</td>
			<td>VEGF</td>
		</tr>
	</tbody>
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three-dimensional angiogenesis assay system using co-culture spheroids formed by endothelial colony forming cells and mesenchymal stem cells

Les études dans le domaine de l'angiogenèse ont été agressivement en croissance au cours des dernières décennies avec la reconnaissance que l'angiogenèse est une caractéristique de plus de 50 conditions pathologiques différentes, telles que la polyarthrite rhumatoïde, l'oculopathie, les maladies cardiovasculaires , et métasses tumorales. Pendant le développement de médicament d'angiogenèse, il est crucial d'employer des systèmes in vitro d'essai avec les types appropriés de cellules et les conditions appropriées pour refléter le processus physiologique d'angiogenèse. Pour surmonter les limites des systèmes actuels d'analyse d'angiogenèse in vitro utilisant principalement des cellules endothéliales, nous avons développé un système d'analyse de la co-culture en 3dimensions (3D) de co-culture. Les sphéroïdes de co-culture ont été produits par deux précurseurs de cellules vasculaires humaines, les cellules de formation de colonie séliale endothéliale (ECFC) et les cellules souches mésenchymales (MSCs) avec un rapport de 5 à 1. Les sphéroïdes eCFC-MSCs ont été incorporés dans la matrice de collagène de type I pour imiter l'environnement extracellulaire in vivo. Un enregistreur cellulaire en temps réel a été utilisé pour observer continuellement la progression de la germination angiogénique à partir de sphéroïdes pendant 24 h. La technique d'étiquetage fluorescent des cellules vivantes a également été appliquée pour observer la localisation de chaque type de cellule pendant la formation des germes. Le potentiel angiogénique a été quantifié en comptant le nombre de germes et en mesurant la longueur cumulative des germes générés par les sphéroïdes individuels. Cinq sphéroïdes choisis au hasard ont été analysés par groupe expérimental. Des expériences de comparaison ont démontré que les sphéroïdes ECFCs-MSCs ont montré un plus grand nombre de germes et une longueur cumulative de germes par rapport aux sphéroïdes eCFC seulement. Le bévacizumab, un inhibiteur de l'angiogenèse approuvé par la FDA, a été testé avec le système d'analyse sphéroïde de co-culture nouvellement développé pour vérifier son potentiel pour dépister les médicaments anti-angiogéniques. La valeur IC50 pour les sphéroïdes ECFCs-MSCs par rapport aux sphéroïdes ECFCs-seulement était plus proche de la concentration plasmatique efficace de bevacizumab obtenue à partir du modèle de souris de tumeur de xénogreffe. La présente étude suggère que le système d'analyse de l'angiogenèse sphéroïde 3D ECFs-MSCs est pertinent pour l'angiogenèse physiologique, et peut prédire une concentration efficace de plasma avant des expériences animales.

Des expériences comparatives ont été réalisées à l'aide de sphéroïdes monoculturels (ECFC seulement) et de sphéroïdes de co-culture (ECFC-MSC) pour examiner si les MSC jouent un rôle considérable dans l'angiogenèse médiée par les CCEC. La formation de germination de chaque sphéroïde a été surveillée pendant 24 h par un enregistreur cellulaire en temps réel qui pourrait capturer la progression de la germination angiogénique des sphéroïdes. Le potentiel angiogénique a été quantifié en comptant l...

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Three-dimensional Angiogenesis Assay System using Co-culture Spheroids Formed by Endothelial Colony Forming Cells and Mesenchymal Stem Cells

Le système d'analyse sphéroïque de co-culture tridimensionnaux est conçu pour imiter l'angiogenèse physiologique. Les sphéroïdes de co-culture sont formés par deux précurseurs de cellules vasculaires humaines, Les ECFC et les MSC, et incorporés dans le gel de collagène. Le nouveau système est efficace pour évaluer les modulateurs angiogéniques, et fournit des informations plus pertinentes à l'étude in vivo.

Système d'analyse d'angiogenèse tridimensionnel utilisant des sphéroïdes de co-culture formés par des cellules de formation de colonies endothéliales et des cellules souches mésenchymales

Studies in the field of angiogenesis have been aggressively growing in the last few decades with the recognition that angiogenesis is a hallmark of more ...

Ce système sphéroïde de co-culture 3D est conçu pour imiter l’angiogenèse physiologique. Il sera efficace pour évaluer les modulateurs angiogéniques potentiels et fournit des informations prévisibles avant les études in vivo. Ce système utilise des sphéroïdes de co-culture formés par deux cellules progénitrices vasculaires et peut être utilisé pour étudier les interactions cellulaires, la germination et la maturation tubulaire de l’angiogenèse physiologique.Si nous pouvons utiliser des cellules patientes pour former des sphéroïdes de co-culture, nous pouvons utiliser ce système pour développer des traitements personnalisés pour les maladies anormales liées à l’angiogenèse, comme le cancer. Ce système d’analyse peut augmenter la sensibilité et l’efficacité des études sur l’angiogenèse et le développement de médicaments. Commencez par utiliser 05% trypsine-EDTA pour détacher les ECFC et les CSM de 80 à 90% cultures cellulaires confluentes pendant trois ou cinq minutes dans un incubateur de culture cellulaire, respectivement.Inactivez la trypsine avec un milieu DMEM complet frais, et pipette les cellules à quelques reprises pour générer une suspension à cellule unique. Recueillir les cellules par centrifugation, suivie de deux lavages avec un milieu sans sérum. Après le deuxième lavage, diluer les ECFC à trois fois 10 à six cellules par millilitre de concentration moyenne et les CSM à deux fois 10 à six cellules par millimètre de concentration moyenne dans les tubes de microcentrifugeuse individuels de deux millilitres.Pelleter les cellules par centrifugation, et aspirer soigneusement tous sauf les 15 à 25 derniers microlitres de supernatant de chaque échantillon cellulaire. Ensuite, resuspendez chaque granulé dans 250 microlitres de Diluant C à partir d’un kit de teinture fluorescente, et pipette doucement les suspensions cellulaires pour assurer une dispersion complète. Ajouter 250 microlitres de PKH67 20 micromolaires fraîchement préparés au tube des CEFC.Ajouter 250 microlitres de PKH26 de 12 micromolaires au tube des CSM. Mélanger immédiatement les deux suspensions cellulaires. Après cinq minutes à température ambiante avec secousses, à l’abri de la lumière, arrêter le processus de coloration avec une incubation d’une minute en 0,5 millilitres de FBS par tube.À la fin de l’incubation, recueillir les cellules par centrifugation, et retirer soigneusement le supernatant, suivie de deux lavages en deux millilitres de milieu complet frais par lavage. Puis suspendre les cellules dans un milieu respectif dans des tubes de 15 millilitres. Pour la génération sphéroïde, après le deuxième lavage, diluer d’abord les suspensions cellulaires dans la concentration appropriée du milieu de croissance des cellules endothéliales MV2 complété par une solution de cellulose méthyle à 20 % et une concentration de sérum bovin fœtal de 5 %.Ensuite, ajoutez chaque suspension cellulaire dans un réservoir rectangulaire en polystyrène stérilisé. Utilisez une pipette multicanal pour ajouter environ 125 gouttelettes de cellules microlitres sur le couvercle d’une plaque de culture de 150 millimètres. Lorsque toutes les cellules ont été ajoutées, inverser le couvercle sur le fond d’un plat contenant 15 millilitres de PBS, et placer les plaques dans l’incubateur de culture cellulaire pendant 24 heures.Le lendemain, rincer les couvercles du plat avec cinq millilitres de PBS dans un tube de 50 millilitres par plat. Rincer les couvercles avec cinq millilitres supplémentaires de PBS pour recueillir les sphéroïdes restants, et pelleter les sphéroïdes par centrifugation. Jetez soigneusement tous sauf les 100 à 200 derniers microlitres de supernatant, et appuyez doucement sur la paroi du tube afin que les sphéroïdes soient librement suspendus dans le supernatant restant.Ajouter le volume approprié de MV2 moyen de croissance cellulaire endothéliale complété par 5% de sérum bovin fœtal et 40% de solution de cellulose méthyle à chaque tube pour résuspendre les sphéroïdes à un 100 sphéroïdes par millilitre de concentration moyenne. Utilisez une pointe de pipette d’un millilitre coupée à un diamètre de trois à cinq millimètres pour mélanger délicatement les suspensions sphéroïdes. Utilisez une nouvelle pipette large d’un millilitre pour mélanger la solution de suspension sphéroïde avec un gel de collagène neutralisé de type I à un rapport un pour un sur la glace.Ajouter 900 microlitres de chaque solution de gel de collagène sphéroïde-suspension dans les puits d’une plaque préchauffée de 24 puits. Laissez les suspensions polymériser pendant 30 minutes dans l’incubateur de culture cellulaire, avant de couvrir les sphéroïdes de 100 microlitres de MV2 moyen de croissance cellulaire endothéliale complétés par 2,5 % FBS et 50 nanogrammes par millilitre de VEGF aux sphéroïdes ECFC seulement et moyennement complétés par FBS uniquement pour les cultures sphéroïdes MSC et ECFC-plus-MSC. Placez ensuite chaque plaque dans un enregistreur cellulaire en temps réel installé dans un incubateur de culture cellulaire, et concentrez-vous au hasard sur cinq à dix sphéroïdes à un grossissement de 10 x pour surveiller la formation de germination de chaque sphéroïde étiqueté fluorescence toutes les heures pendant 24 heures.Pour quantifier la germination des sphéroïdes, importez les fichiers d’image à ImageJ et mesurez le nombre et la longueur des germes exprimant le signal fluorescent approprié à partir de cinq sphéroïdes choisis au hasard par groupe expérimental. Pour les sphéroïdes ECFC-plus-MSC, le nombre de germes et la longueur cumulative des pousses sont significativement plus élevés que ceux des sphéroïdes ECFC seulement à tous les points de temps. Les sphéroïdes mscs seulement ne forment pas de germes, mais démontrent une migration individuelle du MSC en dehors des sphéroïdes.L’étiquetage de l’ECFC avec colorant vert-fluorescent et MSC avec colorant rouge-fluorescent avant de combiner pour générer ecfc-plus-MSC sphéroïdes démontre que les structures de germes ECFC- médiatisées sont couvertes de MSCs, suggérant que les MSCs combinés fonctionnent comme cellules périvasculaires pendant la formation de germes, améliorant la stabilité et la durabilité des germes par l’association étroite entre deux cellules vasculaires. Les sphéroïdes ECFC-plus-MSC prétraités avec un inhibiteur de l’angiogenèse montrent une diminution du nombre de germes et une longueur cumulative des germes d’une manière dépendante de la dose par rapport aux sphéroïdes ECFC-plus-MSC. Dans des expériences parallèles, les sphéroïdes ecfc-seulement prétraités avec l’inhibiteur suivi de la stimulation avec VEGF démontrent également un nombre diminué de pousse induite par facteur de croissance et la longueur cumulative de pousse d’une manière dose-dépendante.Il convient de noter qu’une concentration plus élevée d’inhibiteur de l’angiogenèse est nécessaire pour inhiber les sphéroïdes ECFC-plus-MSC par rapport aux sphéroïdes ECFC seulement. La croissance de tumeur est sensiblement inhibée dans les animaux inhibiteurs-traités d’angiogenèse de haut dose comparés aux animaux témoins-traités et aux animaux inhibiteurs-traités d’angiogenèse de bas dose dans un modèle humain de souris de tumeur de xénogreffe. La concentration plasmatique de bévacizumab chez les souris traitées à haute dose était de 568 plus ou moins 40,62 microgrammes par millilitre, ce qui était plus proche de la valeur IC50 du bévacizumab pour inhiber la longueur cumulative des pousses chez les sphéroïdes ECFC-plus-MSC plutôt que les sphéroïdes ECFC seulement.Ceci suggère que le système de sphéroïde de co-culture d’ECFC-plus-MSC est approprié pour prévoir des concentrations efficaces de plasma avant une étude animale. L’utilisation d’une pipette large d’un mL pour mélanger doucement les sphéroïdes pendant qu’ils sont dans le gel de collagène sur la glace est important pour protéger l’intégrité des sphéroïdes. Nous pouvons modifier ce système pour introduire d’autres types de cellules telles que les cellules immunitaires et d’autres matrices extracellulaires pour étudier la tige croisée cellule-matrice pendant l’angiogenèse.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Three-dimensional Quantification of Dendritic Spines from Pyramidal Neurons Derived from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Quantification tridimensionnelle d&#39;épines dendritiques de Pyramidal neurones humains induits Dérivé de cellules souches pluripotentes

Dendritic spines are small protrusions that correspond to the post-synaptic compartments of excitatory synapses in the central nervous system. They are ...

Recherche

Biologie du développement

The Production of Pluripotent Stem Cells from Mouse Amniotic Fluid Cells Using a Transposon System

La production de cellules souches pluripotentes de souris amniotique Cellules Fluid Utilisation d&#39;un système de transposon

Induced pluripotent stem (iPS) cells are generated from mouse and human somatic cells by forced expression of defined transcription factors using ...

Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

Isolement et caractérisation de cellules mésenchymateuses stromales du cordon ombilical humain et fœtale Placenta

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly ...

Transfer of Mammary Gland-forming Ability Between Mammary Basal Epithelial Cells and Mammary Luminal Cells via Extracellular Vesicles/Exosomes

Transfert de la capacité de formation des glandes mammaires entre les cellules épithéliales basales mammaires et les cellules luminesnelles mammaires par des vésicules extracellulaires / des exosomes

Cells can communicate via exosomes, ~100-nm extracellular vesicles (EVs) that contain proteins, lipids, and nucleic acids. Non-adherent/mesenchymal ...

The Aortic Ring Co-culture Assay: A Convenient Tool to Assess the Angiogenic Potential of Mesenchymal Stromal Cells In Vitro

The Aortic Ring Co-culture Assay: A Convenient Tool to Assess the Angiogenic Potential of Mesenchymal Stromal Cells In Vitro

Le dosage de co-culture anneau aortique : Un outil pratique pour évaluer le potentiel angiogénique de cellules stromales mésenchymateuses In Vitro

Angiogenesis is a complex, highly regulated process responsible for providing and maintaining adequate tissue perfusion. Insufficient vasculature ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Horizontal Whole Mount: un protocole de traitement et d&#39;imagerie géniaux pour les sections transversales épaisses en tissu tridimensionnel

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Photoconversion cellule unique chez le poisson zèbre Intact de la vie

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Identification des cellules satellites musculaires squelettiques par Immunofluorescence avec des anticorps de laminine et Pax7

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Analyse de calcul de la lignée germinale de Caenorhabditis elegans pour étudier la Distribution des noyaux, les protéines et le cytosquelette

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

Dérivation et différenciation des canines ovarienne des cellules souches mésenchymateuses

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...