Name: stem cell-derived viral ag-specific t lymphocytes suppress hbv replication in mice
Uploaded: 2019-09-25T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stem Cell-Derived Viral Ag-Specific T Lymphocytes Suppress HBV Replication in Mice at JoVE.com

लेखकों HBs183-91 (s183) (FLLTRILTI) के लिए cDNA प्रदान करने के लिए टोरंटो जनरल अस्पताल अनुसंधान संस्थान से डॉ एडम जे Gehring धन्यवाद - विशिष्ट A2-प्रतिबंधित मानव-मौर संकर TCR जीन, और डॉ Pei-जेर चेन राष्ट्रीय ताइवान विश्वविद्यालय से प्रदान करने के लिए pAAV/HBV 1.2 निर्माण. यह काम राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुदान संस्थान R01AI121180, R01CA2221867 और R21AI109239 जे एस के लिए समर्थित है

सभी पशु प्रयोगों टेक्सास ए एंड एम विश्वविद्यालय पशु देखभाल समिति (IACUC और #2018-0006) द्वारा अनुमोदित कर रहे हैं और मूल्यांकन और प्रयोगशाला पशु देखभाल के प्रत्यायन के लिए एसोसिएशन के दिशा निर्देशों के अनुपालन ...

<ol>
	<li>Scaglione, S. J., Lok, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+hepatitis+B+treatment+in+clinical+practice.">Effectiveness of hepatitis B treatment in clinical practice.</a> Gastroenterology. 142 (6), 1360-1368 (2012).</li><li>Osiowy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+infancy+and+beyond...+ensuring+a+lifetime+of+hepatitis+B+virus+(HBV)+vaccine-induced+immunity.">From infancy and beyond... ensuring a lifetime of hepatitis B virus (HBV) vaccine-induced immunity.</a> Human Vaccines &amp; Immunotherapeutics. 14 (8), 2093-2097 (2018).</li><li>Gish, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+HBsAg+antigen+during+treatment+with+entecavir+or+lamivudine+in+nucleoside-naive+HBeAg-positive+patients+with+chronic+hepatitis+B.">Loss of HBsAg antigen during treatment with entecavir or lamivudine in nucleoside-naive HBeAg-positive patients with chronic hepatitis B.</a> Journal of Viral Hepatitis. 17 (1), 16-22 (2010).</li><li>Kurktschiev, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfunctional+CD8++T+cells+in+hepatitis+B+and+C+are+characterized+by+a+lack+of+antigen-specific+T-bet+induction.">Dysfunctional CD8+ T cells in hepatitis B and C are characterized by a lack of antigen-specific T-bet induction.</a> Journal of Experimental Medicine. 211 (10), 2047-2059 (2014).</li><li>Fisicaro, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiviral+intrahepatic+T-cell+responses+can+be+restored+by+blocking+programmed+death-1+pathway+in+chronic+hepatitis+B.">Antiviral intrahepatic T-cell responses can be restored by blocking programmed death-1 pathway in chronic hepatitis B.</a> Gastroenterology. 138 (2), 682-693 (2010).</li><li>Schurich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+third+signal+cytokine+IL-12+rescues+the+anti-viral+function+of+exhausted+HBV-specific+CD8+T+cells.">The third signal cytokine IL-12 rescues the anti-viral function of exhausted HBV-specific CD8 T cells.</a> PLoS Pathogens. 9 (3), 1003208 (2013).</li><li>Gehring, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+virus-specific+T+cells+that+target+HBV+infected+hepatocytes+and+hepatocellular+carcinoma+cell+lines.">Engineering virus-specific T cells that target HBV infected hepatocytes and hepatocellular carcinoma cell lines.</a> Journal of Hepatology. 55 (1), 103-110 (2011).</li><li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+and+Tumor+Necrosis+Factor-alpha+Produced+by+T+Cells+Reduce+the+HBV+Persistence+Form,+cccDNA,+Without+Cytolysis.">Interferon-gamma and Tumor Necrosis Factor-alpha Produced by T Cells Reduce the HBV Persistence Form, cccDNA, Without Cytolysis.</a> Gastroenterology. 150 (1), 194-205 (2016).</li><li>Huang, L. R., Wu, H. L., Chen, P. J., Chen, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunocompetent+mouse+model+for+the+tolerance+of+human+chronic+hepatitis+B+virus+infection.">An immunocompetent mouse model for the tolerance of human chronic hepatitis B virus infection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U.S.A. 103 (47), 17862-17867 (2006).</li><li>Wong, P., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8+T+cell+responses+to+infectious+pathogens.">CD8 T cell responses to infectious pathogens.</a> Annual Review of Immunology. 21, 29-70 (2003).</li><li>Murray, J. M., Wieland, S. F., Purcell, R. H., Chisari, F. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+hepatitis+B+virus+clearance+in+chimpanzees.">Dynamics of hepatitis B virus clearance in chimpanzees.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 102 (49), 17780-17785 (2005).</li><li>Hinrichs, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptively+transferred+effector+cells+derived+from+naive+rather+than+central+memory+CD8++T+cells+mediate+superior+antitumor+immunity.">Adoptively transferred effector cells derived from naive rather than central memory CD8+ T cells mediate superior antitumor immunity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U.S.A. 106 (41), 17469-17474 (2009).</li><li>Hinrichs, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+effector+CD8++T+cells+derived+from+naive+rather+than+memory+subsets+possess+superior+traits+for+adoptive+immunotherapy.">Human effector CD8+ T cells derived from naive rather than memory subsets possess superior traits for adoptive immunotherapy.</a> Blood. 117 (3), 808-814 (2011).</li><li>Kerkar, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+engineering+of+murine+CD8++and+CD4++T+cells+for+preclinical+adoptive+immunotherapy+studies.">Genetic engineering of murine CD8+ and CD4+ T cells for preclinical adoptive immunotherapy studies.</a> Journal of Immunotherapy. 34 (4), 343-352 (2011).</li><li>Kuball, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facilitating+matched+pairing+and+expression+of+TCR+chains+introduced+into+human+T+cells.">Facilitating matched pairing and expression of TCR chains introduced into human T cells.</a> Blood. 109 (6), 2331-2338 (2007).</li><li>van Loenen, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mixed+T+cell+receptor+dimers+harbor+potentially+harmful+neoreactivity.">Mixed T cell receptor dimers harbor potentially harmful neoreactivity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 107 (24), 10972-10977 (2010).</li><li>Cameron, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+Titin-derived+HLA-A1-presented+peptide+as+a+cross-reactive+target+for+engineered+MAGE+A3-directed+T+cells.">Identification of a Titin-derived HLA-A1-presented peptide as a cross-reactive target for engineered MAGE A3-directed T cells.</a> Science Translational Medicine. 5 (197), (2013).</li><li>Fedorov, V. D., Themeli, M., Sadelain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1-+and+CTLA-4-based+inhibitory+chimeric+antigen+receptors+(iCARs)+divert+off-target+immunotherapy+responses.">PD-1- and CTLA-4-based inhibitory chimeric antigen receptors (iCARs) divert off-target immunotherapy responses.</a> Science Translational Medicine. 5 (215), (2013).</li><li>Maus, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+expressing+chimeric+antigen+receptors+can+cause+anaphylaxis+in+humans.">T cells expressing chimeric antigen receptors can cause anaphylaxis in humans.</a> Cancer Immunolology Research. 1 (1), 26-31 (2013).</li><li>Haque, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programming+of+regulatory+T+cells+from+pluripotent+stem+cells+and+prevention+of+autoimmunity.">Programming of regulatory T cells from pluripotent stem cells and prevention of autoimmunity.</a> Journal of Immunology. 189 (3), 1228-1236 (2012).</li><li>Vizcardo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+human+tumor+antigen-specific+T+cells+from+iPSCs+derived+from+mature+CD8(+)+T+cells.">Regeneration of human tumor antigen-specific T cells from iPSCs derived from mature CD8(+) T cells.</a> Cell Stem Cell. 12 (1), 31-36 (2013).</li><li>Nishimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+rejuvenated+antigen-specific+T+cells+by+reprogramming+to+pluripotency+and+redifferentiation.">Generation of rejuvenated antigen-specific T cells by reprogramming to pluripotency and redifferentiation.</a> Cell Stem Cell. 12 (1), 114-126 (2013).</li><li>Lei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+programming+of+tumor+antigen-specific+T+lymphocytes+from+pluripotent+stem+cells+to+promote+cancer+immunosurveillance.">In vivo programming of tumor antigen-specific T lymphocytes from pluripotent stem cells to promote cancer immunosurveillance.</a> Cancer Research. 71 (14), 4742-4747 (2011).</li><li>Kim, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oct4-induced+pluripotency+in+adult+neural+stem+cells.">Oct4-induced pluripotency in adult neural stem cells.</a> Cell. 136 (3), 411-419 (2009).</li><li>Lei, F., Haque, R., Xiong, X., Song, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+of+induced+pluripotent+stem+cells+towards+T+lymphocytes.">Directed differentiation of induced pluripotent stem cells towards T lymphocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (63), e3986 (2012).</li><li>Lei, F., Haque, M., Sandhu, P., Ravi, S., Ni, Y., Zheng, S., Fang, D., Jia, H., Yang, J. M., Song, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+naive+single-type+tumor+antigen-specific+CD8++T+lymphocytes+from+murine+pluripotent+stem+cells.">Development and characterization of naive single-type tumor antigen-specific CD8+ T lymphocytes from murine pluripotent stem cells.</a> OncoImmunology. 6, (2017).</li><li>Haque, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanoma+Immunotherapy+in+Mice+Using+Genetically+Engineered+Pluripotent+Stem+Cells.">Melanoma Immunotherapy in Mice Using Genetically Engineered Pluripotent Stem Cells.</a> Cell Transplantation. 25 (5), 811-827 (2016).</li><li>Tan, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Expression+Profiles+of+HBV+DNA+Integrated+Into+Genomes+of+Hepatocellular+Carcinoma+Cells+to+Select+T+Cells+for+Immunotherapy.">Use of Expression Profiles of HBV DNA Integrated Into Genomes of Hepatocellular Carcinoma Cells to Select T Cells for Immunotherapy.</a> Gastroenterology. , (2019).</li><li>Wu, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ly6C(+)+Monocytes+and+Kupffer+Cells+Orchestrate+Liver+Immune+Responses+Against+Hepatitis+B+Virus+in+Mice.">Ly6C(+) Monocytes and Kupffer Cells Orchestrate Liver Immune Responses Against Hepatitis B Virus in Mice.</a> Hepatology. , (2019).</li><li>Haque, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-derived+tissue-associated+regulatory+T+cells+suppress+the+activity+of+pathogenic+cells+in+autoimmune+diabetes.">Stem cell-derived tissue-associated regulatory T cells suppress the activity of pathogenic cells in autoimmune diabetes.</a> Journal of Clinical Investigation Insights. , (2019).</li><li>Chisari, F. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+pathological+effects+of+synthesis+of+hepatitis+B+virus+large+envelope+polypeptide+in+transgenic+mice.">Structural and pathological effects of synthesis of hepatitis B virus large envelope polypeptide in transgenic mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 84 (19), 6909-6913 (1987).</li><li>Wirth, S., Guidotti, L. G., Ando, K., Schlicht, H. J., Chisari, F. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+tolerance+leads+to+autoantibody+production+but+not+autoimmune+liver+disease+in+hepatitis+B+virus+envelope+transgenic+mice.">Breaking tolerance leads to autoantibody production but not autoimmune liver disease in hepatitis B virus envelope transgenic mice.</a> Journal of Immunology. 154 (5), 2504-2515 (1995).</li></ol>

यह प्रोटोकॉल एक murine मॉडल में HBV प्रतिकृति को रोकें ACT के रूप में उपयोग के लिए वायरल Ag-विशिष्ट iPSC-CTLs जनरेट करने के लिए एक विधि प्रस्तुत करता है। पुरानी एचबीवी संक्रमण में, वायरल जीनोम एक स्थिर मिनी गुणसूत्र बन...

तीव्र संक्रमण के बाद, अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली (यानी, हास्य और सेलुलर प्रतिरक्षा) तीव्र एचबीवी से संबंधित हेपेटाइटिस के थोक को नियंत्रित करती है। फिर भी, एचबीवी-एंटोइनल क्षेत्रों में कई लोग वायरस को खत्म नहीं कर सकते हैं और बाद में पुराने व्यक्तियों के रूप में परिवर्तित नहीं कर सकते हैं। दुनिया भर में 25% से अधिक पुराने रोगियों (gt; 250 मिलियन लोग) प्रगतिशील यकृत रोग विकसित करते हैं, जिसके परिणामस्वरूप लीवर सिरोसिस और/या हेपेटोकोशिकीय कार्सिनोमा (एचसीसी)1होता है। नतीजतन, आग्रहपूर्ण रूप से संक्रमित कोशिकाओं का उन्मूलन एक सामान्य स्वास्थ्य समस्या बनी हुई है, भले ही वहाँ एक उपलब्ध टीका2 और कई एंटीवायरल दवाएं विकास के अधीन हैं। एचबीवी संक्रमण के लिए मानक उपचार में आईएफएन-जेड, न्यूक्लिओसाइड और न्यूक्लिओटाइड एनालॉग शामिल हैं। इन एजेंटों प्रत्यक्ष एंटीवायरल गतिविधि और प्रतिरक्षा आमध्यस्थ क्षमता है. फिर भी, एचबी एंटीजन (एजी)+ विरोधी एचबीएंटी (एबी) के साथ वाहक और सीरम एचबीवी deoxyribonucleic एसिड (डीएनए) की हानि इलाज रोगियों के लगभग 20% में व्यक्तिगत रूप से दिखाई देते हैं, और वायरस के पूरे प्रतिरक्षा नियंत्रण HBsAg के अभाव से सत्यापित 5%3से अधिक नहीं है . इसके अलावा, उपचार के लिए प्रतिक्रिया अक्सर टिकाऊ नहीं है. रिकॉमबिनेंट HBs एजी के साथ रोगनिरोधी टीकाकरण संक्रमण को रोकने में अत्यधिक प्रभावी है, लेकिन चिकित्सीय HBs एजी टीकाकरण प्रभावी नहीं है। जाहिर है, टी सेल मध्यस्थता प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं एचबीवी संक्रमण और जिगर हानि को नियंत्रित करने में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं; हालांकि, क्रोनिक हेपेटाइटिस रोगियों में, एचबीवी-रिएक्टिव टी कोशिकाओं को अक्सर नष्ट कर दिया जाता है, बेकार, या समाप्त4,5,6 परिवर्तित कर दिया जाताहै। नतीजतन, लगातार एचबीवी संक्रमण वाले व्यक्तियों में, एंटी-वायरल उपचार, इम्यूनो-मॉडुलन साइटोकिन्स, या उपचारात्मक प्रतिरक्षण के माध्यम से एचबीवी-विशिष्ट प्रतिरक्षा (यानी, टी सेल-आधारित प्रतिरक्षा) को बहाल करने का कोई प्रयास नहीं है।
एचबीवी एजी-विशिष्ट टी कोशिकाओं के दत्तक कोशिका स्थानांतरण (ACT) एक कुशल उपचार अंततः शेष hepatocytes wih HBV7,8उन्मूलन करने के लिए निर्देशित है। एचबीवी-संक्रमित चूहों में एचबीवी-विशिष्ट सीटीएल के अधिनियम को क्षणिक, हल्के हेपेटाइटिस, और हेपाटोसाइट्स में एचबीवी राइबोनुक्लिइक एसिड (आरएनए) ट्रांसक्रिप्ट्स में नाटकीय गिरावट का कारण दिखाया गया है। इन अध्ययनों में, सीटीएल ने एचबीवी जीनों के प्रतिलेखन को बाधित नहीं किया बल्कि एचबीवी लिपियों9की गिरावट को बढ़ाया। वायरल संक्रमण को रोकने और एचबीवी10,11की निकासी में मध्यस्थता करने के लिए एचबीवी-विशिष्ट सीटीएल महत्वपूर्ण हैं। अधिनियम-आधारित उपचारों के लिए, विवो पुनर्वास में उच्च अभिक्रियाशीलता वाले एचबीवी-विशिष्ट टी कोशिकाओं के विट्रो विस्तार में एक आदर्श विधि12,13,14होने का सुझाव दिया गया है; फिर भी, वर्तमान दृष्टिकोण उत्पन्न करने के लिए अपनी क्षमताओं के बारे में प्रतिबंधित कर रहे हैं, अलग, और संभावित चिकित्सा के लिए रोगियों से एचबीवी-विशिष्ट टी कोशिकाओं के उचित मात्रा और गुणों को विकसित.
हालांकि नैदानिक परीक्षण वर्तमान सुरक्षा, व्यावहारिकता, और इंजीनियर टी कोशिकाओं है कि एचबीवी वायरस संक्रमित hepatocytes के लिए विशिष्ट हैं के माध्यम से सेल आधारित उपचार के संभावित चिकित्सीय गतिविधि, वहाँ प्रतिकूल प्रभाव के बारे में चिंता कर रहे हैं mispairing टी सेल रिसेप्टर से पार प्रतिक्रिया की वजह से autoimmune प्रतिक्रियाओं से होने वाली (TCR)15,16,गैर-विशिष्ट TCR द्वारा बंद लक्ष्य एजी मान्यता17 और पर लक्ष्य बंद विषाक्तता द्वारा एक झंकार एजी रिसेप्टर (सीएआर) 18 , 19 स्वस्थ ऊतकों के साथ. वर्तमान में, आनुवंशिक रूप से संशोधित टी कोशिकाओं, जो केवल विवो में अल्पकालिक हठ है, आमतौर पर मध्यवर्ती या बाद में प्रभावक टी कोशिकाओं रहे हैं. तारीख करने के लिए, pluripotent स्टेम सेल (PSCs) केवल भोले एकल प्रकार एजी विशिष्ट टी कोशिकाओं20,21,22,23की उच्च संख्या उत्पन्न करने के लिए उपलब्ध स्रोत हैं. प्रेरित पीएससी (iPSCs) बस कई प्रतिलेखन कारकों के जीन transduction के उपयोग के माध्यम से एक रोगी की दैहिक कोशिकाओं से बदल रहे हैं. परिणामस्वरूप, आई पी एस सी की लक्षणात् वरीय लक्षणे भ्रूणीय स्टेम कोशिकाओं (ईएससी) 24 के समान होतीहैं। लचीलापन और स्वयं को नवीनीकृत करने के लिए अनंत क्षमता के लिए संभावना के कारण, ऊतक प्रतिस्थापन के अलावा, iPSC आधारित उपचार व्यापक रूप से पुनर्योजी चिकित्सा में लागू किया जा सकता है. इसके अलावा, iPSCs अंतर्निहित रेजिमेंटों काफी वर्तमान सेल आधारित उपचार में सुधार हो सकता है.
इस विधि का समग्र लक्ष्य ACT-आधारित इम्यूनोथेरेपी के लिए आईपीएससी (यानी, आईपीएससी-सीटीएल) से एचबीवी-विशिष्ट सीटीएल की एक बड़ी राशि उत्पन्न करना है। वैकल्पिक तकनीकों पर लाभ यह है कि एचबीवी-विशिष्ट iPSC-CTLs एक एकल प्रकार TCR और भोले phenotype है, जो अधिनियम के बाद और अधिक स्मृति टी सेल विकास में परिणाम है. यह दिखा दिया है कि एचबीवी-विशिष्ट iPSC-CTLs के अधिनियम जिगर में कार्यात्मक CD8+ टी कोशिकाओं के प्रवास बढ़ जाती है और दोनों जिगर और प्रशासित चूहों के रक्त में एचबीवी प्रतिकृति कम कर देता है। इस विधि से एचबीवी इम्यूनोथेरेपी के लिए वायरल एजी-विशिष्ट आईपीएससी-सीटीएल के संभावित उपयोग का पता चलता है और वायरल इम्यूनोथेरेपी के लिए अन्य वायरल एजी-विशिष्ट आईपीएससी-टी कोशिकाओं को उत्पन्न करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>HHD mice</td>
			<td>Institut Pasteur, Paris, France</td>
			<td></td>
			<td>H-2 class I knockout, HLA-A2.1-transgenic (HHD) mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iPS-MEF-Ng-20D-17</td>
			<td>RIKEN Cell Bank</td>
			<td>APS0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SNL76/7</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>SCRC-1049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OP9</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2749</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAAV/HBV1.2 plasmid</td>
			<td>Dr. Dr. Pei-Jer Chen (National Taiwan University Hospital, Taiwan)</td>
			<td></td>
			<td>HBV DNA construct</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBs183-91(s183) (FLLTRILTI)-specific TCR genes</td>
			<td>Dr. Adam J Gehring (Toronto General Hospital Research Institute, Toronto, Canada)</td>
			<td></td>
			<td>FLLTRILTI-specific A2-restricted human-murine hybrid TCR genes (V&#945;34 and V&#946;28)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OVA257&#8211;264-specific TCR genes</td>
			<td>Dr. Dario A. Vignali (University of Pittsburgh, PA)</td>
			<td></td>
			<td>SIINFEKL-specific H-2Kb-restricted TCR genes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD3 (17A2) antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD44 (IM7) antibody</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>103012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD4 (GK1.5) antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD8 (53-6.7) antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-IFN-&#947; (XMG1.2) antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>505810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-TNF-a (MP6-XT22) antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>506306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10490-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-HBs antibody</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>MA5-13059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis buffer</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>10-548E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brefeldin A</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B7651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>ABCD1234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH3007.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSAria Fusion cell sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td>656700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>G9391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneJammer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>204130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HLA-A201-HBs183-91-PE pentamer</td>
			<td>Proimmune</td>
			<td>F027-4A - 27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP Anti-Mouse Secondary Antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A27025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mFlt-3L</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>250-31L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mIL-7</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>217-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease S7</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10107921001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>P6148-500G</td>
			<td>Caution: Allergenic, Carcenogenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permeabilization buffer</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>421002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>107689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong&#8482; Gold Antifade Mountant with DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp MinElute Virus Spin Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>57704</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stem cell-derived viral ag-specific t lymphocytes suppress hbv replication in mice

हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी) संक्रमण एक वैश्विक स्वास्थ्य मुद्दा है। दुनिया भर में 350 मिलियन से अधिक लोगों को प्रभावित करने के साथ, एचबीवी संक्रमण यकृत कैंसर का प्रमुख कारण बना हुआ है। यह विशेष रूप से विकासशील देशों में एक प्रमुख चिंता का विषय है। एचबीवी के खिलाफ एक प्रभावी प्रतिक्रिया माउंट करने के लिए प्रतिरक्षा प्रणाली की विफलता पुरानी संक्रमण की ओर जाता है। यद्यपि एचबीवी टीका मौजूद है और नवीन एंटीवायरल दवाएं बनाई जा रही हैं, फिर भी वायरस-आरक्षण कोशिकाओं का उन्मूलन एक प्रमुख स्वास्थ्य विषय बना हुआ है। यहाँ वर्णित वायरल प्रतिजन (एजी) की पीढ़ी के लिए एक विधि है -विशिष्ट CD8+ cytotoxic टी लिम्फोसाइटों (CTLs) प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (iPSCs) (यानी, iPSC-CTLs) से व्युत्पन्न, जो एचबीवी प्रतिकृति को दबाने की क्षमता है. एचबीवी प्रतिकृति कुशलतापूर्वक जिगर में एक एचबीवी अभिव्यक्ति प्लाज्मिड, पावएवी/एचबीवी1.2 के हाइड्रोडायनामिक इंजेक्शन के माध्यम से चूहों में प्रेरित किया जाता है। फिर, एचबीवी सतह एजी-विशिष्ट माउस आईपीएससी-सीटीएल को दत्तक रूप से स्थानांतरित किया जाता है, जो यकृत और रक्त में एचबीवी प्रतिकृति को बहुत दबाता है और साथ ही हेप्टोसाइट्स में एचबीवी सतह एजी अभिव्यक्ति को रोकता है। यह विधि हाइड्रोडायनामिक इंजेक्शन के बाद चूहों में एचबीवी प्रतिकृति को प्रदर्शित करती है और स्टेम सेल व्युत्पन्न वायरल एजी-विशिष्ट CTLs एचबीवी प्रतिकृति को रोक सकते हैं। यह प्रोटोकॉल एचबीवी इम्यूनोथेरेपी के लिए एक उपयोगी तरीका प्रदान करता है।

जैसा कि यहाँ दिखाया गया है, एचबीवी वायरल एजी-विशिष्ट iPSC-CD8+ टी कोशिकाओं को इन विट्रो संस्कृति प्रणाली द्वारा उत्पन्न किया जाता है। इन वायरल एजी-विशिष्ट iPSC-CD8+ टी कोशिकाओं के अधिनियम के बाद काफी हद त?...

Watch this Scientific Journal Video about Stem Cell-Derived Viral Ag-Specific T Lymphocytes Suppress HBV Replication in Mice at JoVE.com

Stem Cell-Derived Viral Ag-Specific T Lymphocytes Suppress HBV Replication in Mice

यहाँ प्रस्तुत स्टेम सेल व्युत्पन्न वायरल प्रतिजन (एजी) विशेष टी लिम्फोसाइटों के दत्तक कोशिका हस्तांतरण (ACT) का उपयोग करके चूहों में हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी) प्रतिकृति के प्रभावी दमन के लिए एक प्रोटोकॉल है। इस प्रक्रिया को एचबीवी संक्रमण के संभावित अधिनियम-आधारित इम्यूनोथेरेपी के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।

स्टेम सेल व्युत्पन्न वायरल एजी-विशिष्ट टी लिम्फोसाइट्स चूहे में एचबीवी प्रतिकृति को दबा

Hepatitis B virus (HBV) infection is a global health issue. With over 350 million people affected worldwide, HBV infection remains the leading cause of ...

यह विधि चूहों में एचबीवी प्रतिकृति के प्रभावी दमन के लिए आईपीएससी-व्युत्पन्न वायरल एंटीजन-विशिष्ट टी सेल के दत्तक कोशिका हस्तांतरण में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद कर सकती है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि आईपीएससी-व्युत्पन्न वायरल एंटीजन-विशिष्ट टी कोशिकाओं में एक ही प्रकार का टी सेल रिसेप्टर और भोली फेनोटाइप होता है। एचबीवी-विशिष्ट आईपीएससी सीडी 8-पॉजिटिव टी कोशिकाओं के भेदभाव के लिए, प्लेट एस 183 टी सेल रिसेप्टर जीन-एक OP9-DL1/DL4 मोनोलेयर पर अल्फा-न्यूनतम मध्यम में 20% भ्रूण गोजातीय सीरम और मुरीन Flt3 ligand के साथ एक सेल संस्कृति इनक्यूबेटर में उनकी सह संस्कृति के लिए पूरक ।सेल आकृति विज्ञान का आकलन करने के लिए नियमित रूप से सह-संस्कृति की निगरानी करें। 28 दिन, सुपरनैंट और फ्लोटिंग कोशिकाओं को हटा दें, और 0.25% ट्राइपसिन के साथ अनुयायी कोशिकाओं को अलग करें। जब कोशिकाओं संस्कृति कंटेनर नीचे से उठा लिया है, आईपीएससी माध्यम के आठ मिलीलीटर के साथ एंजाइमैटिक प्रतिक्रिया बंद करो, और अपकेंद्रित्र द्वारा कोशिकाओं को इकट्ठा ।ताजा माध्यम के 10 मिलीलीटर में गोली को फिर से खर्च करें। कोशिका संस्कृति इनक्यूबेटर में 40 घंटे की इनक्यूबेशन के लिए चार s183 पेप्टाइड-स्पंदित स्पंदित स्प्लेनोसाइट अनुपात के लिए एक आईपीएससी-व्युत्पन्न सीडी 8-पॉजिटिव टी सेल के लिए कोशिकाओं को पतला करें। पिछले सात घंटों के दौरान, कोशिका सक्रियण के दौरान परिवहन प्रक्रियाओं को अवरुद्ध करने के लिए संस्कृति में पतला ब्रेफेल्डिन ए के चार माइक्रोलीटर जोड़ें।मानक प्रोटोकॉल के अनुसार ब्याज के इंट्रासेलुलर साइटोकिन्स के प्रवाह साइटोमेट्रिक विश्लेषण के लिए कोशिकाओं को दाग दें। पूंछ नस के माध्यम से हाइड्रोडायनामिक एचबीवी प्लाज्मिड डिलीवरी के लिए, पीबीएस के शरीर द्रव्यमान के 8% के बराबर में एचबीवी प्लाज्मिड के 10 माइक्रोग्राम को पतला करें। प्लाज्मिड को 26 गेज, 1/2 इंच सुई प्रति माउस से लैस १ ३-मिलीलीटर सिरिंज में लोड करें ।पूंछ की नसों को फैलाने के लिए पांच मिनट के लिए एक गर्मी दीपक के नीचे एचएचडी चूहों को गर्म करें, और ध्यान से एक प्लास्टिक निरोधक में माउस खींचें। पूंछ के मध्य तीसरे में एक फैला हुआ पार्श्व पूंछ नस का पता लगाएं, और तीन से पांच सेकंड की अवधि में पूंछ नस के माध्यम से प्लाज्मिड की पूरी मात्रा देने के लिए नस के समानांतर सुई डालें। वायरल एंटीजन-विशिष्ट आईपीएससी-व्युत्पन्न सीडी 8-पॉजिटिव टी सेल दत्तक कोशिका हस्तांतरण के लिए, प्रदर्शन के रूप में संस्कृति के 22 दिन पर आईपीएससी सीडी 8-सकारात्मक टी कोशिकाओं को इकट्ठा करें, और कोशिकाओं को एक नए 10-सेंटीमीटर सेल संस्कृति पकवान पर बीज दें।सेल कल्चर इनक्यूबेटर में 30 मिनट के बाद, फ्लोटिंग कोशिकाओं को 70 माइक्रोमीटर नायलॉन छन्नी के माध्यम से फ़िल्टर करें, और व्यवहार्य कोशिकाओं की गणना करें। कोशिकाओं को पीबीएस एकाग्रता के प्रति मिलीलीटर सात कोशिकाओं के लिए 1.5 गुना 10 तक पतला करें। कोशिकाओं के २०० माइक्रोलीटर को व्यक्तिगत चार से छह सप्ताह पुराने एचएचडी चूहों में इंजेक्ट करें, पूंछ नस में जैसा कि सिर्फ प्रदर्शन किया गया था ।सेल ट्रांसफर के बाद 14 दिन, प्रदर्शन के अनुसार हाइड्रोडायनामिक एचबीवी प्लाज्मिड डिलीवरी करें। संक्रमण के बाद उपयुक्त प्रयोगात्मक एंडपॉइंट्स पर, प्रत्येक संक्रमित जानवर से यकृत को फसल करें, और यकृत को 0.5-बाय-0.5-बाय-0.3-सेंटीमीटर ऊतक नमूनों में काट लें। नमूनों को चार से 24 घंटे के लिए 10% तटस्थ बफर फॉर्मेलिन में रखें, इसके बाद छह से 24 घंटे के लिए 2.5-मोलर फॉर्मिक एसिड में डिकलिफिकेशन करें।इसके बाद, तीन मिनट के लिए जाइलीन में नमूनों को कुल्ला, १००% इथेनॉल, ९५% इथेनॉल, और deionized पानी में दो दो मिनट कुल्ला के बाद । पिछले पानी धोने के बाद, एक मिलीमोलर EDTA में ऊतकों को ९० डिग्री सेल्सियस पर decalcify, कमरे के तापमान पर एक 30 मिनट की इनक्यूबेशन के बाद । जब ऊतक ठंडा हो जाता है, तो चार मिनट के लिए पीबीएस में नमूनों को कुल्ला करें, और नमूनों को डिपैराफिनाइज करने और फिर से हाइड्रेट करने के लिए जाइलीन और इथेनॉल का उपयोग करें।इम्यूनोफ्लोर्सेंट लेबलिंग के लिए, 75 से 100% आर्द्रीकृत कक्ष में कमरे के तापमान पर दो घंटे के लिए एचबीवी सतह एंटीजन-विशिष्ट एंटीबॉडी के 200 माइक्रोलीटर के साथ वर्गों को दाग दें। इनक्यूबेशन के अंत में, प्रत्येक धोने के लिए ताजा पीबीएस में पांच पांच मिनट के वॉश के साथ नमूनों को धोएं। फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी द्वारा इमेजिंग के लिए कवरस्लिप के साथ स्लाइड बढ़ते से पहले मानक प्रोटोकॉल के अनुसार DAPI के साथ कोशिकाओं को लेबल करें।इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण के लिए, मानक प्रोटोकॉल के अनुसार हेमेटॉक्सीलिन और इओसिन के साथ वर्गों को दाग दें, और हल्के माइक्रोस्कोपी द्वारा जिगर में भड़काऊ कोशिकाओं की घुसपैठ का मूल्यांकन करें। आईपीएससी-व्युत्पन्न सीडी 3-पॉजिटिव सीडी 8-पॉजिटिव आबादी के फ्लो साइटोमेट्रिक विश्लेषण से पता चलता है कि एचबीवी टी सेल रिसेप्टर ट्रांसडक्शन नाटकीय रूप से वायरल एस 183-विशिष्ट सीडी 8-पॉजिटिव टी कोशिकाओं की पीढ़ी को बढ़ाता है। S183 पेप्टाइड के साथ स्पंदित टी-समाप्त स्प्लीनोसाइट्स के साथ उत्तेजना के बाद, सीडी 4-नकारात्मक सीडी 8 एकल-सकारात्मक आईपीएससी-व्युत्पन्न टी कोशिकाएं इंटरफेरॉन गामा की बड़ी मात्रा का उत्पादन करती हैं, जैसा कि इंट्रासेलुलर प्रवाह साइटोमेट्रिक विश्लेषण और एलिसा द्वारा पता लगाया गया है।हाइड्रोडायनामिक इंजेक्शन द्वारा एचबीवी संक्रमण के बाद, डीएनए प्रतिकृति छह दिन पर चोटियों और धीरे से कम कर देता है, के रूप में वास्तविक समय पीसीआर विश्लेषण द्वारा मनाया । इसके अलावा, वायरल प्रतिकृति चूहों में सभी समय बिंदुओं पर काफी कम हो जाती है जो नियंत्रण कोशिकाओं को प्राप्त करने वाले चूहों की तुलना में एचबीवी वायरल एंटीजेनिक-विशिष्ट टी कोशिकाओं को प्राप्त करते हैं। एचबीवी सतह प्रोटीन भी काफी चूहों में कमी आई है जो नियंत्रण कोशिकाओं के साथ इलाज चूहों की तुलना में एचबीवी वायरल एंटीजन-विशिष्ट प्री-आईपीएससी साइटोटॉक्सिक लिम्फोसाइट्स प्राप्त करते हैं, स्पष्ट रूप से प्रदर्शित करते हैं कि वायरल एंटीजन-विशिष्ट आईपीएससी सीडी 8-पॉजिटिव टी कोशिकाओं में एक मुरीन मॉडल में एचबीवी प्रतिकृति को कम करने की क्षमता होती है।अब आपको इस बात की अच्छी समझ होनी चाहिए कि दत्तक इम्यूनोथेरेपी के लिए आईपीएससी से वायरल एंटीजन-स्पेसिफिक टी सेल्स कैसे जेनरेट करें ।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

माउस टी कोशिकाओं में टी सेल रिसेप्टर्स की रेट्रोवायरल transduction

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Methods to Assess Beta Cell Death Mediated by Cytotoxic T Lymphocytes

साइटोटोक्सिक टी lymphocytes द्वारा बीटा सेल मौत मध्यस्थता का आकलन करने के तरीके

Type 1 diabetes (T1D) is a T cell mediated autoimmune disease.  During the pathogenesis, patients become progressively more insulinopenic as 
insulin ...

Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant

Multivirus विशेष टी कोशिकाओं की पीढ़ी को रोकें / allogeneic hematopoietic स्टेम सेल प्रत्यारोपण के बाद वायरल संक्रमण का इलाज

Viral infections cause morbidity and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. We and others have successfully ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

गर्भनाल रक्त से साइटोटोक्सिक टी लिम्फोसाइटों विस्तार कि लक्ष्य Cytomegalovirus, Epstein-बर्र वायरस, और adenovirus

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

टी lymphocytes की ओर प्रेरित pluripotent स्टेम सेल की निर्देशित भेदभाव

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of Na&#239;ve CD4 T Lymphocytes

अलगाव और अनुभवहीन सीडी 4 टी lymphocytes की Th17 भेदभाव

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

टी lymphocytes में Integrin से सक्रियण के अध्ययन के लिए स्टेटिक आसंजन परख

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

Isolation of Viral Replication Compartment-enriched Sub-nuclear Fractions from Adenovirus-infected Normal Human Cells

Adenovirus संक्रमित सामान्य मानव कोशिकाओं से वायरल प्रतिकृति कम्पार्टमेंट समृद्ध उप-परमाणु भागों का अलगाव

During infection of human cells by adenovirus (Ad), the host cell nucleus is dramatically reorganized, leading to formation of nuclear microenvironments ...

Efficient Isolation Protocol for B and T Lymphocytes from Human Palatine Tonsils

मानव तालु Tonsils से बी और टी lymphocytes के लिए कुशल अलगाव प्रोटोकॉल

Tonsils form a part of the immune system providing the first line of defense against inhaled pathogens. Usually the term &#8220;tonsils&#8221; refers to ...

Visualization of IL-22-expressing Lymphocytes Using Reporter Mice

आईएल -22 व्यक्त लिम्फोसाइटों रिपोर्टर चूहों का उपयोग कर के दृश्य

Reporter mice have been widely used to observe the localization of expression of targeted genes. This protocol focuses on a strategy to establish a new ...