Name: inducing meningococcal meningitis serogroup c in mice via intracisternal delivery
Uploaded: 2019-11-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inducing Meningococcal Meningitis Serogroup C in Mice via Intracisternal Delivery at JoVE.com

تم دعم الدراسات جزئيا بواسطة PRIN 2012 [منح عدد 2012WJSX8K]: "نماذج التفاعل المضيف microbe في التهابات المخاطية: تطوير استراتيجيات علاجيه جديده" وبواسطة PRIN 2017 [2017SFBFER]: "نهج متكامل لمعالجه التفاعل بين التكيف ، والظروف المجهدة ومقاومه مضادات الميكروبات من مسببات الامراض الصعبة ".

وقد اجري هذا البروتوكول للتقليل من المعاناة الحيوانية وتقليل عدد الفئران وفقا للتوجيه الصادر عن مجلس الجماعات الاوروبيه في 24 تشرين الثاني/نوفمبر 1986 (86/609/EEC). في المجري التجارب المذكورة في هذه الدراسة تمت الموافقة عليها من قبل اللجنة الاخلاقيه لرعاية الحيوانية والاستخدام (Prot. عدد 2, 14 ديسمب?...

<ol>
	<li>van Deuren, M., Brandtzaeg, P., van der Meer, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+meningococcal+disease+with+emphasis+on+pathogenesis+and+clinical+management.">Update on meningococcal disease with emphasis on pathogenesis and clinical management.</a> Clinical Microbiology Reviews. 13, 144-166 (2000).</li><li>Colicchio, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fitness+Cost+of+Rifampin+Resistance+in+Neisseria+meningitidis:+In+vitro+Study+of+Mechanisms+Associated+with+rpoB+H553Y+Mutation.">Fitness Cost of Rifampin Resistance in Neisseria meningitidis: In vitro Study of Mechanisms Associated with rpoB H553Y Mutation.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (12), 7637-7649 (2015).</li><li>Tal&#224;, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serogroup-specific+interaction+of+Neisseria+meningitidis+capsular+polysaccharide+with+host+cell+microtubules+and+effects+on+tubulin+polymerization.">Serogroup-specific interaction of Neisseria meningitidis capsular polysaccharide with host cell microtubules and effects on tubulin polymerization.</a> Infection and Immunity. 82, 265-274 (2014).</li><li>Pagliarulo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+and+differential+expression+of+gdhA+encoding+NADP-specific+glutamate+dehydrogenase+in+Neisseria+meningitidis+clinical+isolates.">Regulation and differential expression of gdhA encoding NADP-specific glutamate dehydrogenase in Neisseria meningitidis clinical isolates.</a> Molecular Microbiology. 51, 1757-1772 (2004).</li><li>Plant, L., Jonsson, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contacting+the+host:+insights+and+implications+of+pathogenic+Neisseria+cell+interactions.">Contacting the host: insights and implications of pathogenic Neisseria cell interactions.</a> Scandinavian Journal of Infectious Diseases. 35, 608-613 (2003).</li><li>Schryvers, A. B., Stojiljkovic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+acquisition+systems+in+the+pathogenic+Neisseria.">Iron acquisition systems in the pathogenic Neisseria.</a> Molecular Microbiology. 32, 1117-1123 (1999).</li><li>Virji, M., Makepeace, K., Ferguson, D. J., Watt, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinoembryonic+antigens+(CD66)+on+epithelial+cells+and+neutrophils+are+receptors+for+Opa+proteins+of+pathogenic+neisseriae.">Carcinoembryonic antigens (CD66) on epithelial cells and neutrophils are receptors for Opa proteins of pathogenic neisseriae.</a> Molecular Microbiology. 22, 941-950 (1996).</li><li>de Vries, F. P., van Der Ende, A., van Putten, J. P., Dankert, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+of+primary+nasopharyngeal+epithelial+cells+by+Neisseria+meningitidis+is+controlled+by+phase+variation+of+multiple+surface+antigens.">Invasion of primary nasopharyngeal epithelial cells by Neisseria meningitidis is controlled by phase variation of multiple surface antigens.</a> Infection and Immunity. 64, 2998-3006 (1996).</li><li>Tinsley, C. R., Heckels, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+the+expression+of+pili+and+outer+membrane+protein+by+Neisseria+meningitidis+during+the+course+of+the+meningococcal+infection.">Variation in the expression of pili and outer membrane protein by Neisseria meningitidis during the course of the meningococcal infection.</a> Journal of General Microbiology. 132, 2483-2490 (1986).</li><li>Gorringe, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+disease+models+for+the+assessment+of+meningococcal+vaccines.">Experimental disease models for the assessment of meningococcal vaccines.</a> Vaccine. 23, 2214-2217 (2005).</li><li>Newcombe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+with+an+avirulent+phoP+mutant+of+Neisseria+meningitidis+confers+broad+cross-reactive+immunity.">Infection with an avirulent phoP mutant of Neisseria meningitidis confers broad cross-reactive immunity.</a> Infection and Immunity. 72, 338-344 (2004).</li><li>Oftung, F., Lovik, M., Andersen, S. R., Froholm, L. O., Bjune, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+utilising+human+transferrin+to+study+protection+against+Neisseria+meningitidis+serogroup+B+induced+by+outer+membrane+vesicle+vaccination.">A mouse model utilising human transferrin to study protection against Neisseria meningitidis serogroup B induced by outer membrane vesicle vaccination.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 26, 75-82 (1999).</li><li>Salit, I. E., Tomalty, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+meningococcal+infection+in+neonatal+mice:+differences+in+virulence+between+strains+isolated+from+human+cases+and+carriers.">Experimental meningococcal infection in neonatal mice: differences in virulence between strains isolated from human cases and carriers.</a> Canadian Journal of Microbiology. 30, 1042-1045 (1984).</li><li>Salit, I. E., Tomalty, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neonatal+mouse+model+of+meningococcal+disease.">A neonatal mouse model of meningococcal disease.</a> Clinical and Investigative Medicine. 9, 119-123 (1986).</li><li>Mackinnon, F. G., Gorringe, A. R., Funnell, S. G., Robinson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+infection+of+infant+mice+with+Neisseria+meningitidis.">Intranasal infection of infant mice with Neisseria meningitidis.</a> Microbial Pathogenesis. 12, 415-420 (1992).</li><li>Mackinnon, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+lipooligosaccharide+immunotype+and+cap-+sule+as+virulence+factors+for+Neisseria+meningitidis+using+an+infant+mouse+intranasal+infection+model.">Demonstration of lipooligosaccharide immunotype and cap- sule as virulence factors for Neisseria meningitidis using an infant mouse intranasal infection model.</a> Microbial Pathogenesis. 15, 359-366 (1993).</li><li>Yi, K., Stephens, D. S., Stojiljkovic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+an+improved+mouse+model+of+meningococcal+colonization.">Development and evaluation of an improved mouse model of meningococcal colonization.</a> Infection and Immunity. 71 (4), 1849-1855 (2003).</li><li>Holbein, B. E., Jericho, K. W. F., Likes, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+infection+in+mice:+influence+of+iron,+variations+in+virulence+among+strains,+and+pathology.">Neisseria meningitidis infection in mice: influence of iron, variations in virulence among strains, and pathology.</a> Infection and Immunity. 24, 545-551 (1979).</li><li>Saukkonen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+meningococcal+meningitis+in+the+infant+rat.">Experimental meningococcal meningitis in the infant rat.</a> Microbial Pathogenesis. 4, 203-211 (1988).</li><li>Johansson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD46+in+meningococcal+disease.">CD46 in meningococcal disease.</a> Science. 301, 373-375 (2003).</li><li>Zarantonelli, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+human+transferrin+as+a+model+for+meningococcal+infection.">Transgenic mice expressing human transferrin as a model for meningococcal infection.</a> Infection and Immunity. 75, 5609-5614 (2007).</li><li>Join-Lambert, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningococcal+interaction+to+microvasculature+triggers+the+tissular+lesions+of+purpura+fulminans.">Meningococcal interaction to microvasculature triggers the tissular lesions of purpura fulminans.</a> Journal of Infection Disease. 208, 1590-1597 (2013).</li><li>Melican, K., Michea Veloso, P., Martin, T., Bruneval, P., Dum&#233;nil, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+dermal+vessels+leads+to+local+vascular+damage+and+purpura+in+a+humanized+mouse+model.">Adhesion of Neisseria meningitidis to dermal vessels leads to local vascular damage and purpura in a humanized mouse model.</a> PLoS Pathogen. 9, 1003139 (2013).</li><li>Colicchio, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+meningococcal+ABC-Type+L-glutamate+transporter+GltT+is+necessary+for+the+development+of+experimental+meningitis+in+mice.">The meningococcal ABC-Type L-glutamate transporter GltT is necessary for the development of experimental meningitis in mice.</a> Infection and Immunity. 77, 3578-3587 (2009).</li><li>Colicchio, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+traits+of+serogroup+C+meningococcus+and+isogenic+cssA+mutant,+defective+in+surface-exposed+sialic+acid,+in+a+murine+model+of+meningitis.">Virulence traits of serogroup C meningococcus and isogenic cssA mutant, defective in surface-exposed sialic acid, in a murine model of meningitis.</a> Infection and Immunity. , 00688-00718 (2019).</li><li>Ricci, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+matrix+metalloproteinases+attenuates+brain+damage+in+experimental+meningococcal+meningitis.">Inhibition of matrix metalloproteinases attenuates brain damage in experimental meningococcal meningitis.</a> BMC Infectious Diseases. 14, 726 (2014).</li><li>Schryvers, A. B., Gonzalez, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+abilities+of+different+protein+sources+of+iron+to+enhance+Neisseria+meningitidis+infection+in+mice.">Comparison of the abilities of different protein sources of iron to enhance Neisseria meningitidis infection in mice.</a> Infection and Immunity. 57, 2425-2429 (1989).</li><li>Beverly, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+105+-+Cerebrospinal+Fluid+Sampling+Small+Animal.">Chapter 105 - Cerebrospinal Fluid Sampling Small Animal.</a> Critical Care Medicine. , 448-452 (2009).</li><li>Liechti, F. D., Grandgirard, D., Leppert, D., Leib, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+metalloproteinase+inhibition+lowers+mortality+and+brain+injury+in+experimental+pneumococcal+meningitis.">Matrix metalloproteinase inhibition lowers mortality and brain injury in experimental pneumococcal meningitis.</a> Infection and Immunity. 82, 1710-1718 (2014).</li><li>Pagliuca, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Approach+for+Evaluation+of+Bacteroides+fragilis+Protective+Role+against+Bartonella+henselae+Liver+Damage+in+Immunocompromised+Murine+Model.">Novel Approach for Evaluation of Bacteroides fragilis Protective Role against Bartonella henselae Liver Damage in Immunocompromised Murine Model.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1750 (2016).</li><li>Trampuz, A., Steinhuber, A., Wittwer, M., Leib, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+diagnosis+of+experimental+meningitis+by+bacterial+heat+production+in+cerebrospi-+nal+fluid.">Rapid diagnosis of experimental meningitis by bacterial heat production in cerebrospi- nal fluid.</a> BMC Infectious Diseases. 7, 116 (2007).</li><li>Tuomanen, E. I., Saukkonen, K., Sande, S., Cioffe, C., Wright, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+inflammation,+tissue+damage,+and+mortality+in+bacterial+meningitis+in+rabbits+treated+with+monoclonal+antibodies+against+adhesion-promoting+receptors+of+leukocytes.">Reduction of inflammation, tissue damage, and mortality in bacterial meningitis in rabbits treated with monoclonal antibodies against adhesion-promoting receptors of leukocytes.</a> Journal of Experimental Medicine. 170, 959-969 (1989).</li><li>Goldschneider, I., Gotschlich, E. C., Artenstein, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunity+to+the+meningococcus.+I.+The+role+of+humoral+antibodies.">Human immunity to the meningococcus. I. The role of humoral antibodies.</a> Journal of Experimental Medicine. 129, 1307-1326 (1969).</li><li>Goldschneider, I., Gotschlich, E. C., Artenstein, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunity+to+the+meningococcus.+II.+Development+of+natural+immunity.">Human immunity to the meningococcus. II. Development of natural immunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 129, 1327-1348 (1969).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+methods+for+the+diagnosis+of+meningitis+caused+by+Neisseria+meningitidis,+Streptococcus+pneumoniae,+and+Haemophilus+influenzae:+WHO+manual,+2nd+Edition.">Laboratory methods for the diagnosis of meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae: WHO manual, 2nd Edition.</a> World Health Organization. , (2011).</li><li>Chiavolini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+inducing+experimental+pneumococcal+meningitis+in+outbred+mice.">Method for inducing experimental pneumococcal meningitis in outbred mice.</a> BMC Microbiolology. 4, 36 (2004).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+Subarachnoidal+Route+of+Infection+for+Investigating+Roles+of+Streptococcus+suis+Biofilms+in+Meningitis+in+a+Mouse+Infection+Model.">Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model.</a> Journal of Visualized Experiments. (1), e137 (2018).</li><li>Pagliuca, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+Bacteroides+fragilis+protection+from+Bartonella+henselae-induced+damage.">Evidence of Bacteroides fragilis protection from Bartonella henselae-induced damage.</a> PLoS One. 7, 49653 (2012).</li><li>Larson, J. A., Howie, H. L., So, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+accelerates+ferritin+degradation+in+host+epithelial+cells+to+yield+an+essential+iron+source.">Neisseria meningitidis accelerates ferritin degradation in host epithelial cells to yield an essential iron source.</a> Molecular Microbiology. 53, 807-820 (2004).</li><li>Festing, M. F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+variability+of+inbred+and+outbred+mice.">Phenotypic variability of inbred and outbred mice.</a> Nature. 263, 230-232 (1976).</li><li>Festing, M. F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Warning:+the+use+of+heterogeneous+mice+may+seriously+damage+your+research.">Warning: the use of heterogeneous mice may seriously damage your research.</a> Neurobiology of Aging. 20, 237-244 (1999).</li></ol>

في هذه الدراسة ، ونحن وصف بروتوكول تجريبي للحث علي التهاب السحايا المكورات السحائية في الفئران الكبار من قبل i. cist. تلقيح بكتيريا المكورات السحائية. علي حد علمنا ، لم يتم تطوير اي نموذج آخر من التهاب السحايا المكورات السحائية في الفئران المختبرات المصابة بواسطة i. cist. طريق في الماضي ، وقد تم ...

Neisseria النيسريه هو غرام السلبية β-بروتينيه تقتصر علي الإنسان المضيف ، والمعروف جيدا لكونها واحده من الأسباب الأكثر شيوعا للتهاب السحايا والانتان في السكان البشرية في جميع انحاء العالم. فانه استعمار الجهاز التنفسي العلوي (الأنف والحنجرة) من ناقلات صحية وغير متناظرة (2-30 ٪ من السكان) ، ولكن البكتيريا في بعض الأحيان يفادس الدفاعات المناعية المضيف المختلفة وينتشر من مجري الدم إلى الدماغ مما تسبب في المحلية غير المنضبط التهاب ، والمعروفة باسم السحايا المكورات السحائية. مزيج من العوامل المضيفة والبكتيرية يبدو ان المساهمة في الانتقال من المعلق إلى السلوك الغازي1.
النيسريه متخصصة حصرا في الاستعمار البشري والعدوى. لديها مجموعه ضيقه المضيف ، التالي ، قد محدوده في الدراسات التي تولد الجسم البشري بسبب عدم وجود نماذج الحيوانية المناسبة التي تتكاثر مرض المكورات السحائية الإنسان. ونتيجة لذلك ، ادي ذلك إلى ثغرات أساسيه في الفهم فيما يتعلق بالتسبب في تسمم الدم والتهاب السحايا الناجم عن المكورات السحائية. وفي العقود الاخيره ، سمح تطوير العديد من النظم المختبرية بتحديد العديد من عوامل المكورات السحائية2،3،4. علي الرغم من ان هذه الدراسات القيمة قدمت رؤى هامه لفهم دور هذه العوامل لعدوي المكورات السحائية ناجحه ، وهذه النماذج لا تسمح بتقييم عواقب التفاعلات البكتيرية مع الخلطيه والخلوية الجهاز المناعي وحتى اقل مع الانسجه كلها. في الكائنات الحيوانية نماذج العدوى هي ذات اهميه كبيره ، وكذلك لتقييم درجه الحماية التي تمنحها تركيبات اللقاح. وبوصفها من العوامل المسببة للمرض البشري ، فان المكورات السحائية تمتلك محددات مناسبه ضرورية للعدوى الناجحة مثل الهياكل السطحية (اي النوع الرابع وبروتينات التعتيم) وأنظمه امتصاص الحديد للمستقبلات البشرية وبروتينات النقل (اي ترانسفيرين و lactoferrin)5،6،7 للتقيد بشكل صحيح ، والبقاء علي قيد الحياة وغزو المضيف البشري. وأخيرا ، فان قدرات التباين الجيني للمرض للتهرب و/أو منع الاستجابة المناعية البشرية تساهم بشكل أكبر في الأنواع العالية من تروسم8،9. ولذلك ، فان عدم وجود عوامل مضيفه محدده ، تشارك في التفاعل ، يمكن ان يعرقل خطوات دوره حياه الممرض ، مما ينشئ صعوبات كبيره في تطوير نماذج حيوانيه صغيره تلخص دوره حياه المكورات السحائية.
علي مدي العقود الماضية ، تم تطوير العديد من النهج لتحسين فهمنا للدورة المعدية المكورات السحائية. وقد وضعت التهابات نموذجين الحيوانية والماوس والفئران ، اما داخل الصفاق (i.p.) أو الإنترانت (ا) ، لإنتاج مرض المكورات السحائية10،11،12،13،14 ،15،16،17. الماوس المختبر هو علي الأرجح واحده من أكثر تنوعا الحيوانية للحث علي العدوى المكورة السحائية التجريبية.
ومع ذلك ، فان الطريقة الi.p.ه للعدوى تؤدي إلى تطور الانتان الحاد علي الرغم من انه لا يحاكي الطريق الطبيعي للعدوى ، في حين ان الطريق الا للعدوى كان مفيدا لتقييم الاصابه بالتهاب المكورات السحائية ، علي الرغم من انه قد يسبب عدوي الرئة قبل الانتان10،11،12،13،14،15،16،17.
وكان نموذج الماوس i.p. مفيده لتقييم الحماية من المكورات السحائية التحدي10،11،12. وقد تم تطوير نموذج الماوس للاستعمار المكورات السحائية علي أساس المسار الا للعدوى مع الفئران الرضع ، لأنها أكثر عرضه للاصابه بالمكورات السحائية ، لأعاده إنتاج عدوي الغازية محاكاة مسار مرض المكورات السحائية في البشر 13،14،15،16،17. وعلاوة علي ذلك ، لتعزيز تكرار المكورات السحائية في المضيف murine ، تم أيضا تطبيق عدد متزايد من الاستراتيجيات التقنية بما في ذلك أداره الحديد للحيوانات لتحسين العدوى ، واستخدام البكتيريا البكتيرية عاليه ، الماوس-المرور البكتيرية سلاله وكذلك توظيف الرضع أو المناعية الحيوانية يستضيف10،13،15،18،19. التعبير عن العوامل البشرية المحددة مثل CD4620 أو ترانسفيرين21 قد زاد من قابليه الفئران لهذه البكتيريا البشرية المدارية ؛ وقد كان العمل من نموذج الجلد الإنسان طعم الغيروي العدوى مفيده أيضا لتقييم قدره التصاق المكورات السحائية إلى الإنسان بطانة22,23. وبشكل جماعي ، ادي التطور الأخير في الفئران المحورة وراثيا إلى تحسين فهم تولد التهاب السحائي وتفاعلاته المضيفة.
في السابق ، وضعنا نموذج murine من التهاب السحايا المكورات السحائية حيث تم اجراء تلقيح البكتيريا في ماجنا السينية من الفئران الكبار مع الماوس-البكتيريا التي تمر بالفار24. المعلمات السريرية ومعدل البقاء علي قيد الحياة من الفئران المصابة أظهرت إنشاء التهاب السحايا مع خصائص مماثله لتلك التي ينظر اليها في المضيف البشري ، فضلا عن التحليلات الميكروبيولوجية والنسيجية للدماغ. من هذه الفئران المصابة, وكانت البكتيريا, أيضا, تعافي من الدم, الكبد, والطحال, والأحمال البكتيرية من الاجهزه الطرفية ترتبط مع الجرعة المعدية. وعلي وجه الخصوص ، استخدم هذا النموذج لتقييم ضراوة سلاله متحولة ايزوتون معيبه في الناقل L-الغلوتامات GltT24. في الاونه الاخيره ، وذلك باستخدام نموذج الماوس لدينا من التهاب السحايا المكورات السحائية علي أساس ط. cist. الطريق مع زمره C سلاله 93/42862،24 ومتحولة ايزوتون معيبه في ترميز الجينات شامل في اطار ل UDP-N-اسيتيل 2-epimerase25، لقد حللنا دور حمض السياليك المكشوفة في إنشاء من المرض في الفئران.
في هذا البروتوكول ، ونحن وصف طريقه واضحة للحث علي التهاب السحايا المكورة السحائية التجريبية علي أساس i. cist. طريق العدوى في الفئران الكبار Balb/c. هذا الأسلوب مفيد بشكل خاص لتوصيف عدوي المكورات السحائية في المضيف murine ، وكذلك لتقييم ضراوة بين سلالات النوع البرية المرجعية والمسوخ المتحولة. ويضمن المسار الداخلي للعدوى الولادة الكاملة لمكورات السحايا مباشره في ماجنا ، والتي بدورها تسهل النسخ البكتيري في السائل النخاعي (الدماغي الشوكي) ويحفز التهاب السحايا مع الميزات التي تحاكي تلك حاضره في أناس2,24,25,26.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,8 Skirted Cryovial With external thread</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>E3090-6222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml Polypropylene Conical Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352070</td>
			<td>30 x 115mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11006-12</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alarm-Thermometer</td>
			<td>TESTO</td>
			<td>9000530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BactoTM Proteose Peptone</td>
			<td>BD</td>
			<td>211693</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Micro Fine syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>320837</td>
			<td>U-100 Insulin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak syringe 1ml 25GA 5/8in</td>
			<td>BD</td>
			<td>300014</td>
			<td>05x16mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak syringe 5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>308062</td>
			<td>07 x 30mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BIOHAZARD AURA B VERTICAL LAMINAR FLOW CABINET</td>
			<td>Bio Air s.c.r.l.</td>
			<td>Aura B3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioPhotometer</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Model #6131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle D</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>D</td>
			<td>Graduated up to:400ml, Total Volume 450ml, 72x72x122mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C150 CO2 Incubator</td>
			<td>Binder</td>
			<td>9040-0078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cage Body Eurostandard Type II</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C</td>
			<td>267x207x140mm, Floor area 370cm2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Petri Dish With Lid</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>150288</td>
			<td>Working Volume: 5mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Microcentrifuge 5415R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cuvetta semi-micro L. Form</td>
			<td>Kartell S.p.A.</td>
			<td>01938-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>di-Potassium hydrogen phosphate trihydrate</td>
			<td>Carlo erba</td>
			<td>471767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>di-Sodium hydrogen phosphate anhydrous ACS-for analysis</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>480141</td>
			<td>g1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diete Standard Certificate</td>
			<td>Mucedola s.r.l.</td>
			<td>4RF21</td>
			<td>Food pellet for animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Hp Tweezers 5 Stainless Steel</td>
			<td>F.S.T. by DUMONT</td>
			<td>AGT5034</td>
			<td>0,10 x 0,06 mm tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Balance</td>
			<td>Gibertini</td>
			<td>EU-C1200</td>
			<td>Max 1200g, d=0,01g, T=-1200g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Microcentrifuge tube safe-lock</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>T3545-1000EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythromycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E-6376</td>
			<td>25g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14084-08</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Top (mini- Isolator), H-Temp with lock clamps</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C400SUC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC agar base</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>CM0367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gillies Forceps 1 x2 teeth</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11028-15</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glicerin RPE</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>453752</td>
			<td>1L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11052-10</td>
			<td>Serrated Tip Width: 0.8mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inner lid</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron dextran solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8517-25ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Intervet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microbiological Safety Cabinet BH-EN and BHG Class II</td>
			<td>Faster</td>
			<td>BH-EN 2004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 1.5ml&#160;</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>PP780751</td>
			<td>screw cap PP, grad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Handling Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11035-20</td>
			<td>Serrated rubber; Gripping surface:15 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucotit-F2000</td>
			<td>MERZ</td>
			<td>61846</td>
			<td>2000ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Natural Latex Gloves</td>
			<td>Medica</td>
			<td>M101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New Brunswick Classic C24 Incubator Shaker</td>
			<td>PBI international</td>
			<td>C-24 Classic Benchtop Incubator Shaker</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri PS Dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>391-0453</td>
			<td>90X14.2MM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman Classic P20</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123600</td>
			<td>2-20microL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman Classic P200</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>20-200microL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman Classim P1000</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123602</td>
			<td>200-1000microL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvitox</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>SR0090A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>J.T. Baker Chemicals B.V.</td>
			<td>0208</td>
			<td>250g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Dihydrogen Phosphate</td>
			<td>J.T. Baker Chemicals B.V.</td>
			<td>0240</td>
			<td>1Kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PS Disposible forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>232-0191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Removable Divider</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C812</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-Bottom Polypropylene Tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352063</td>
			<td>5ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>MOLEKULA</td>
			<td>41272436</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SS retainer and Polyester FilterSheet</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Pattern Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11000-12</td>
			<td>Stainless</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens Tenotomy Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14066-11</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissor - ToughCut</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14130-17</td>
			<td>Stainless</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Touch N Tuff disposible nitrile gloves</td>
			<td>Ansell</td>
			<td>92-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Low Temperature (ULT) Freezer</td>
			<td>Haier</td>
			<td>DW-86L288</td>
			<td>Volume= 288L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wagner Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14070-12</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Intervet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inducing meningococcal meningitis serogroup c in mice via intracisternal delivery

Neisseria النيسريه (المكورات السحائية) هي كائنات مجهريه ضيقه النطاق ، معترف بها عالميا باعتبارها السبب الرئيسي للتهاب السحايا البكتيري. المكورات السحائية هو مستعمر عابر من البلعوم الأنفي البشري من حوالي 10 ٪ من المادة الصحية. في الظروف الخاصة ، فانه يكتسب قدره الغازية لاختراق الحاجز المخاطي ويغزو مجري الدم المسببة لمرض التسمم الدموي. في الحالة الاخيره ، يمكن ان ينشا تعفن الانتان حتى بدون التطور الناتج عن التهاب السحايا. وعلي العكس من ذلك ، يمكن ان تتكاثر البكتيريا بشكل سيئ في مجري الدم ، وعبور حاجز الدماغ الدموي ، والوصول إلى الجهاز العصبي المركزي ، مما يؤدي إلى التهاب السحايا الجرثومي. نماذج murine من التهاب السحايا البكتيري تمثل أداه مفيده للتحقيق في التفاعلات بين المضيف والممرض وتحليل أليات المرضية المسؤولة عن هذا المرض المميت. علي الرغم من انه تم تقييم عده أنظمه نموذجيه تجريبية علي مدي العقود الماضية ، لم يتمكن اي منها من أعاده إنتاج الاحداث المرضية المميزة لمرض المكورات السحائية. في هذا البروتوكول التجريبي ، ونحن وصف اجراء مفصل لتحريض التهاب السحايا المكورة السحائية في نموذج الماوس علي أساس التلقيح إينتراسيستيرنال من البكتيريا. وسجلت علامات غريبه من التهاب السحايا البشري في المضيف murine من خلال تقييم المعلمات السريرية (مثل درجه الحرارة ، ووزن الجسم) ، وتقييم معدل البقاء علي قيد الحياة ، والتحليل الميكروبيولوجي والفحص النسيجي للاصابه بالمخ. عند استخدام إينتراسيستيرنال (ط. cist.) المكورات السحائية ، وتسليم كامله مباشره فيماجنا سينسينا ، مما يؤدي إلى النسخ المتماثل المكورات السحائية فعاله جدا في انسجه المخ. لوحظت زيادة 1,000 اضعاف العد القابل للحياة من البكتيريا في حوالي 18 ح. وعلاوة علي ذلك ، توجد أيضا المكورات السحائية في الطحال ، والكبد من الفئران المصابة ، مما يوحي بان الكبد قد تمثل الجهاز المستهدف للنسخ المتماثل المكورات السحائية.

بقاء الفئران المصابة النيسريه نوع البرية وسلالات متحولة ايزوتون. و neisseria النيسريه سلالات المستخدمة في هذه النتائج التمثيلية هي زمره C مرجع سلاله 93/4286 (ET-37) ومتحولة ايزوتون 93/4286ωشامل في اطار التي تم الحصول عليها عن طريق التنشيط التنظيمي لجين شامل في اطار ، والت?...

Watch this Scientific Journal Video about Inducing Meningococcal Meningitis Serogroup C in Mice via Intracisternal Delivery at JoVE.com

Inducing Meningococcal Meningitis Serogroup C in Mice via Intracisternal Delivery

هنا ، ونحن وصف طريقه للحث علي التهاب السحايا المكورات السحائية من خلال طريق إينتراسيستيرنال من العدوى في الفئران الكبار. نقدم بروتوكول خطوه بخطوه للعدوى بالمكورات السحائية من اعداد الاصابه بالعدوى الإينتراسيستيرناله. ثم تسجيل البقاء علي قيد الحياة الحيوانية وتقييم الأحمال البكتيرية في الانسجه murine.

حمل التهاب السحايا السحائي Serogroup C في الفئران عن طريق تسليم إينتراسيستيرنال

Neisseria meningitidis (meningococcus) is a narrow-host-range microorganism, globally recognized as the leading cause of bacterial meningitis. ...

التهاب السحايا النيسيرية هو واحد من الأسباب الأكثر شيوعا للتعفن والتهاب السحايا بين السكان في جميع أنحاء العالم، والبكتيريا تقتصر على المضيف البشري. في هذا البروتوكول التجريبي ، سنصف الإجراء المصمم خصيصًا لاستقراء التهاب السحايا السحائي في نموذج فأر قائم على تلقيح البكتيريا. هذا النموذج murine استنساخ الأحداث المرضية المميزة لالتهاب السحايا المكورات السحائية باعتبارها مرضاً بشرياً شديداً.لذلك، فإنه يمثل أداة مفيدة لتقييم التفاعل المضيف الممرض وتحليل آلية الإمراض المسؤولة عن هذا المرض القاتل. يمكن أن يكون نموذج العدوى مفيدًا ليس فقط لتقييم الاستراتيجية العلاجية المبتكرة لمنع تكرار البكتيريا مباشرة في CSF ، ولكن أيضًا لتحليل فعالية العلاج المناعي السلبي المحتمل ضد مسببات الأمراض البشرية. تتطلب هذه التقنية مرحلة التدريب لضمان نجاح ليس فقط من inoculum inocisternal، ولكن بشكل عام أكثر تحريض المرض.وسوف يكون إثبات الإجراءات روبرتا كوليتشيو وChiara Pagliuca والباحثين، وايلينا Scaglione كطالب دكتوراه، وكلها من قبل مختبري. للبدء، واختيار مستعمرة واحدة من ثقافة التهاب السحايا Neisseria جديدة على لوحة agar gonococcal تكملها مع ملحق بوليبيتوكسي 1٪والتطعيم في 10 ملليلتر GC مرق. يجب أن يتم جميع الإجراءات التي تنطوي على استخدام المكورات السحائية تحت تدفق مفارز السلامة البيولوجية مكعب مجلس الوزراء.زراعة البكتيريا في 37 درجة مئوية في حاضنة اهتزاز المداري في 220 دورة في الدقيقة والحفاظ على التحقق من الكثافة البصرية للثقافة في نقاط زمنية مختلفة مع مقياس الطيفي. تنمو الثقافة حتى تصل إلى OD600 من 0.7 المقابلة للمرحلة الأسية في وقت مبكر. مرة واحدة يتم الحصول على هذه الكثافة البصرية، وجعل الأسهم المجمدة بإضافة 10٪ الجلسرين والاستغناء عن ملليلتر واحد من الثقافة في قارورة التبريد.تخزين قارورة في 80 درجة مئوية حتى الاستخدام. قبل العدوى، ذوبان البكتيريا المجمدة في درجة حرارة الغرفة، ثم نقلها إلى أنبوب الطرد المركزي في الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة في 1500xG إزالة فائقة وإعادة تعليق في ملليلتر واحد من مرق GC الطازجة التي تحتوي على خمسة ملليغرام لكل كيلوغرام الحديد دستران. قبل البدء في التجربة، وزن الحيوانات وتقييم درجة حرارة الجسم.يُجرّق الحيوان من الرقبة إلى الأسفل ويطهر البطن بـ 70٪ من الإيثانول. ما يقرب من 2 ساعة قبل العدوى، وذلك باستخدام إبرة قياس 25، وحقن الحديد dextran intraperitoneally في الربع الأيمن السفلي من البطن. بعد تخدير الحيوان ، تحقق من عمق التخدير عن طريق تأكيد عدم وجود استجابة للألم عند قرص إصبع قدمه.بعد وضع الماوس على موقف مجلس الوزراء تدفق لارينار في ديسوبتوس صارمة وتمتد بعناية الأطراف والعمود الفقري العنقي للحفاظ على العمود الفقري في وضع مستقيم. للحفاظ على تعليق بكتيري ثابت ، اخلطه بلطف قبل تحميله في حقنة مع إبرة قياس 30 ملليمترًا عيارًا ثمانية ملليمترات. تطهير الرأس مع الإيثانول 70٪.وضع الحيوان في إعادة شغل الرأس الجانبي، وسحب الأذنين للخروج من الطريق، وثني الرقبة باعتدال. تأكد من أن خط الوسط في الرقبة والرأس في وضعية متوازية تماما إلى أعلى الجدول. ثم المس أجنحة الأطلس، والتأكد من تداخلها، والشعور بالمسافات البادئة الطبيعية على خط الوسط حيث من المرجح أن تدخل الإبرة الثقب القذالي.ملء حقنة مع إبرة قياس 8 ملليمتر 30 مع الجرعة البكتيرية شبه القاتلة المنشأة من المكورات السحائية أو dextran الحديد تكمل GC مرق كتحكم في حجم إجمالي قدره 10 ميكرولترات. استخدام الإبرة لتحديد نقطة الحقن ومن ثم حقن محتوى الحقنة إلى ماغنا cisterna الفئران من خلال ثقب دبر القذالي. تخلص من الحقنة والإبرة بأمان بعد الحقن.وضع الحيوان في القفص تحت خزانة تدفق لارينار. انتظر الصحوة والانتعاش الكامل للحركة والمضي قدما لبقاء الحيوان على الحيوانات المصابة ، كما هو موضح في البروتوكول. بعد تخدير الماوس، وتطهير الصدر مع الإيثانول 70٪.باستخدام إبرة قياس 25 سحب 600 إلى 700 ميكرولترات من الدم عن طريق ثقب القلب من تجويف الصدر. جمع الدم في أنبوب يحتوي على 3.8٪ سيترات الصوديوم وتخزينها في 80 درجة مئوية لتقييم تعداد الخلايا البكتيرية القابلة للحياة في وقت لاحق. وضع الفأر القتل الرحيم في موقف سوبين.باستخدام مقص ملقط قطع الفراء على طول الطائرة القوس من الجسم. مع دبابيس، وإصلاح الجلد مع الفراء على جانبي الجسم. استخدام مقص حاد لقطع الغشاء البريتوني.ثم مع مقص ملقط المتاح، مكوس الأجهزة، مثل الطحال والكبد، ووضع كل في طبق بيتري معقمة منفصلة مع ملليلتر واحد من مرق GC تكملها مع 10٪ غليسيرول. باستخدام المكبس من حقنة خمسة ملليمترات، التجانس الأجهزة ميكانيكيا في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق حتى يتم تشكيل تعليق خلية واحدة ونقلها إلى قارورة التبريد المسير. ضع الأنبوب على الفور على الجليد الجاف.جعل GC لوحات أجار مع المضادات الحيوية وتجفيفها قبل استخدامها في 37 درجة مئوية لمدة ساعتين إلى ثلاث ساعات. إعداد 10 تخفيفات المسلسل الكامل للعينات في مرق GC من كل أنسجة متجانسة. لوحة لهم على لوحات GC أجار واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون.مع 70٪ الإيثانول، وتطهير رأس الماوس القتل الرحيم. باستخدام مقص جراحي صغير وملقط فولاذي ذو رؤوس دقيقة ، قم باستئصال الفراء وجلد الرأس الذي تمت إزالته ، ثم انتقل نحو أعلى الجمجمة من أجل رؤية الخيوط بوضوح وتوجيه فتح الجمجمة. لفتح الجمجمة، أدخل طرف مقص صغير من خلال ماغنوم الهضان.قطع نحو مركز الجمجمة وعبر خط الوسط من العظام الجدارية إلى الجانب الآخر من الجمجمة وقطع بلطف على طول الطرف الجانبي من خياطة لامدويد. باستخدام ملقط ذات رؤوس دقيقة ، بدءًا من الزاوية الجدارية الخلفية ، ارفع الجمجمة واسحبه إلى الأعلى بشكل قطري لاكتشاف الدماغ ، مع التأكد من عدم ربط أنسجة الدماغ بأي عظمة في الرأس عند رفع الجمجمة. استخدام ملقط المتاح لإزالة أي نسيج الضام بين الجمجمة والدماغ ولا تسمح أنسجة الدماغ لتجف.استخدام ملقط المتاح لوضع الدماغ على الفور في طبق بيتري مع ملليلتر واحد من مرق GC تكملة مع 10٪ الجلسرين. استخدام المكبس من حقنة خمسة ملليلتر لتجانس الدماغ ميكانيكيا في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق حتى يتم تشكيل تعليق خلية واحدة. نقل التعليق إلى أنبوب معقمة 2 ملليلتر وتخزينها في 80 درجة مئوية لتقييم تعداد الخلايا البكتيرية القابلة للحياة في وقت لاحق.تم تقييم بقاء الفئران المصابة بـ 93/4286 من النوع البري أو cssA المصابة بسلالات التهاب السحايا Neisseria المعيبة. الجرعة القاتلة المتوسطة للسلالات البرية من نوع تتوافق مع تحدي المكورات السحائية من 10 إلى CFU 4. في حين أن معدل الوفيات 10 إلى 5 CFU كان يساوي 83.4٪ و 100٪ مع 10 إلى الجرعة CFU 5.من أجل الحصول على الجرعة القاتلة المتوسطة لسلالات متحولة معيبة cssA ، كان من الضروري جرعة من 10 إلى 8 CFU وكمية 1000 أضعاف أعلى من سلالة من النوع البري. بعد الحقن، كانت هناك زيادة سريعة من البكتيريا من النوع البري في أنسجة الدماغ تصل إلى ذروتها في حوالي 24 ساعة بعد العدوى. في دماغ الفئران المصابة سلالة متحولة، انخفض عدد قابلة للحياة تدريجيا مع مرور الوقت.أيضا، أظهرت 33.3٪ من الفئران المصابة المتحولة إزالة البكتيريا من موقع العدوى، على عكس الحيوانات المصابة من النوع البري. بعد 48 ساعة من العدوى ، تم مسح المتحولة المعيبة cssA تمامًا في الطحال والكبد ، في حين أن الحيوانات المصابة بالإجهاد البري أظهرت عدوى مستمرة. يمكن أن تكون الطريقة التجريبية الموصوفة مفيدة لتحليل تلف الدماغ المرتبط بهذا المرض القاتل ، من خلال تقييمها المرضي ، مثل الكيمياء المناعية ، والفلوروس المناعي ، وتحليل النزيف الدماغي.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear الفئران مع الخصوصيات المحددة مسبقا ضد مستقبلات الخلايا T المقوسة الغوندية الحصول عليها عن طريق SCNT

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

الاستدلال الوراثي من HIV - 1 Tropism باستخدام السكان على أساس تسلسل V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

A طريقة لوصفها الأوعية الدموية في الفئران الجنينية

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

النقل الشفوي لل<em&gt; المستوحدة الليستيريا</em&gt; في الفئران عن طريق ابتلاع الطعام الملوث

L. monocytogenes are facultative intracellular bacterial pathogens that cause food borne infections in humans. Very little is known about the ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

الخلايا الدبقية الصغيرة زراعة من الجهاز العصبي المركزي حديثي الولادة والكبار

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

تحريض الفئران المعوية التهاب عن طريق نقل بالتبني من المستجيب CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; عالية</sup&gt; خلايا T في الفئران العوز المناعي

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

ل<em&gt; في المختبر</em&gt; كاسيم ملزمة الفحص الذي يتنبأ اختراق المخدرات في الآفات السل

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

داخل الجمجمة سوباراتشنويدال الطريق للعدوى "أدوار التحقيق" للأغشية الحيوية العقدية الخنزيرية في التهاب السحايا في "نموذج العدوى الماوس"

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

Quantitative PCR of T7 Bacteriophage from Biopanning

PCR الكمي من عاثية T7 من بيوبانينج

This protocol describes the use of quantitative PCR (qPCR) to enumerate T7 phages from phage selection experiments (i.e., &#34;biopanning&#34;). qPCR is a ...

Probiotic Studies in Neonatal Mice Using Gavage

دراسات الكائنات الحية المجهرية في الفئران حديثي الولادة باستخدام تزقيمية

Adult mouse models have been widely used to understand the mechanism behind disease progression in humans. The applicability of studies done in adult ...