Name: inducing meningococcal meningitis serogroup c in mice via intracisternal delivery
Uploaded: 2019-11-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inducing Meningococcal Meningitis Serogroup C in Mice via Intracisternal Delivery at JoVE.com

Die Studien wurden zum Teil von PRIN 2012 [Grant-Nummer 2012WJSX8K] unterstützt: "Host-Mikroben-Interaktionsmodelle bei Schleimhautinfektionen: Entwicklung neuartiger therapeutischer Strategien" und prIN 2017 [2017SFBFER]: "Ein integrierter Ansatz zur Bewältigung des Zusammenspiels zwischen Anpassung, stressbelastete Bedingungen und antimikrobielle Resistenz von anspruchsvollen Krankheitserregern".

Dieses Protokoll wurde gemäß der Richtlinie des Rates der Europäischen Gemeinschaften vom 24. November 1986 (86/609/EWG) durchgeführt, um das Leiden der Tiere zu minimieren und die Zahl der Mäuse zu verringern. In-vivo-Experimente, die in dieser Studie berichtet wurden, wurden vom Ethical Animal Care and Use Committee (Prot. Nummer 2, 14. Dezember 2012) und dem italienischen Gesundheitsministerium (Prot. Nummer 0000094-A-03/01/2013) genehmigt. Alle Verfahren sollten innerhalb des Biosafety Cabinet 2 (BSC2) in einem ...

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In dieser Studie beschreiben wir ein experimentelles Protokoll, um Meningokokken-Meningitis bei erwachsenen Mäusen durch i.cist zu induzieren. Impfung von Meningokokkenbakterien. Unserer Kenntnis nach wurde kein anderes Modell der Meningokokken-Meningitis bei Labormäusen entwickelt, die mit i.cist infiziert sind. Route; in der Vergangenheit wurde dieser Weg erforscht, um Modelle der Meningokokken-Meningitis bei Ratte31 und Kaninchen32zu liefern. Es ist bekannt, dass die h...

Neisseria meningitidis ist ein Gram-negatives -proteobacterium, das auf den menschlichen Wirt beschränkt ist und als eine der häufigsten Ursachen für Meningitis und Sepsis in der menschlichen Bevölkerung auf der ganzen Welt bekannt ist. Es kolonisiert die oberen Atemwege (Nase und Hals) von gesunden und asymptomatischen Trägern (2-30% der Bevölkerung), aber das Bakterium entzieht sich manchmal verschiedenen Wirtsabwehren und breitet sich von der Blutbahn auf das Gehirn aus, was zu einem unkontrollierten lokalen Entzündung, bekannt als Meningokokken-Meningitis. Eine Kombination von Wirts- und Bakterienfaktoren scheint zum Übergang vom Commensal zum invasiven Verhalten beizutragen1.
N. meningitidis ist ausschließlich auf menschliche Kolonisation und Infektion spezialisiert. Es hat einen engen Wirtsbereich und hat daher begrenzte In-vivo-Pathogenese-Studien aufgrund des Mangels an geeigneten Tiermodellen, die die menschliche Meningokokken-Krankheit reproduzieren. Infolgedessen hatte es zu grundlegenden Lücken im Verständnis bezüglich der Pathogenese von Septikämie und Meningitis durch Meningokokken geführt. In den letzten Jahrzehnten ermöglichte die Entwicklung vieler In-vitro-Systeme die Identifizierung mehrerer meningokokkener Virulenzfaktoren2,3,4. Obwohl diese wertvollen Studien wichtige Erkenntnisse lieferten, um die Rolle dieser Faktoren für eine erfolgreiche Meningokokken-Infektion zu verstehen, erlaubten diese Modelle keine Bewertung der Folgen bakterieller Wechselwirkungen mit dem humoralen und zellulären Immunsystem und noch weniger mit dem gesamten Gewebe. In vivo-Tiermodelle von Infektionen sind auch für die Bewertung des Schutzgrades durch Impfstoffformulierungen von großer Bedeutung. Als human-tropischer Erreger verfügen Meningokokken über geeignete Determinanten, die für eine erfolgreiche Infektion erforderlich sind, wie z. B. Oberflächenstrukturen (d. h. Pili typ IV und Opazitätsproteine) und Eisenaufnahmesysteme für menschliche Rezeptoren und Transportproteine (d. h. Transferrin und Lactoferrin)5,6,7 richtig haften, überleben und in den menschlichen Wirt eindringen. Schließlich tragen die genetischen Variationsfähigkeiten des Erregers, um die menschliche Immunantwort zu umgehen und/oder zu blockieren, weiter zum hohen Tropismus der Spezies8,9bei. Daher kann das Fehlen spezifischer Wirtsfaktoren, die an der Wechselwirkung beteiligt sind, Schritte des Lebenszyklus des Erregers blockieren und erhebliche Schwierigkeiten bei der Entwicklung von Kleintiermodellen verursachen, die den Meningokokken-Lebenszyklus zusammenfassen.
In den letzten Jahrzehnten wurden mehrere Ansätze entwickelt, um unser Verständnis des Meningokokken-Infektionszyklus zu verbessern. Infektionen von zwei Tiermodell, Maus und Ratte, entweder intraperitoneal (i.p.) oder intranasal (i.n.), wurden entwickelt, um Meningokokken-Krankheit zu reproduzieren10,11,12,13,14 ,15,16,17. Die Labormaus ist wahrscheinlich eines der vielseitigeren Tiere für die Induktion experimenteller Meningokokken-Infektionen.
Jedoch, die i.p. Art der Infektion führt zur Entwicklung einer schweren Sepsis, obwohl es nicht den natürlichen Weg der Infektion iimitiert, während der i.n. Infektionsweg war nützlich, um Meningokokken pathogenese zu bewerten, obwohl es Lungeninfektion enden kann vor Sepsis10,11,12,13,14,15,16,17.
Das i.p. Mausmodell war entscheidend, um den Schutz vor der meningokokken Herausforderung10,11,12zu beurteilen. Das Mausmodell der Meningokokken-Kolonisation auf der Grundlage des i.n. Infektionsweges wurde mit Säuglingsmäusen entwickelt, da sie anfälliger für Meningokokken sind, um eine invasive Infektion zu reproduzieren, die den Verlauf der Meningokokkenerkrankung beim Menschen imitiert. 13,14,15,16,17. Darüber hinaus, um die Meningokokken-Replikation im murinen Wirt zu fördern, wurden eine wachsende Anzahl von technischen Strategien auch angewendet, einschließlich der Verabreichung des Eisens an die Tiere, um die Infektion zu verbessern, die Verwendung von hochbakteriellem Inokulum, Maus-Passagen-Bakterienstamm sowie die Beschäftigung von Säuglingen oder immungeschwächten Tierwirten10,13,15,18,19. Die Expression spezifischer menschlicher Faktoren wie CD4620 oder Transferrin21 hat die Anfälligkeit von Mäusen für dieses human-tropische Bakterium erhöht; die Beschäftigung der menschlichen Haut Xenograft Modell der Infektion war auch nützlich, um die Adhäsionsfähigkeit von Meningokokken auf menschlicheen Endothel zu bewerten22,23. Insgesamt hat die jüngste Entwicklung von humanisierten transgenen Mäusen das Verständnis der Meningokokkenpathogenese und ihrer Wirtswechselwirkungen verbessert.
Zuvor haben wir ein murines Modell der meningokokken Meningitis entwickelt, bei dem die Inokulation von Bakterien in die Zisternenmagna von erwachsenen Mäusen mit mausdurchdreten Bakterien durchgeführt wurde24. Klinische Parameter und die Überlebensrate infizierter Mäuse zeigten die Etablierung einer Meningitis mit Merkmalen, die mit denen des menschlichen Wirts vergleichbar sind, sowie der mikrobiologischen und histologischen Analysen des Gehirns. Von diesen infizierten Mäusen wurden auch Bakterien aus Blut, Leber und Milz und bakteriellen Belastungen von peripheren Organen, die mit der infektiösen Dosis korrelierten, zurückgewonnen. Insbesondere wurde dieses Modell eingesetzt, um die Virulenz eines isogenen Mutantenstamms zu bewerten, der im L-Glutamat-Transporter GltT24defekt war. Kürzlich, mit unserer Maus Modell der Meningokokken-Meningitis auf i.cist basiert. Route mit Serogruppe C-Stamm 93/42862,24 und einem isogenen Mutant, der in der cssA-Gencodierung für UDP-N-Acetylglucosamin 2-Epimerase25defekt ist, haben wir die Rolle der exponierten Sialinsäure im Von Krankheit bei Mäusen.
In diesem Protokoll beschreiben wir eine einfache Methode, um experimentelle Meningokokken-Meningitis auf der Grundlage der i.cist zu induzieren. Infektionsweg bei erwachsenen Balb/c-Mäusen. Diese Methode ist besonders nützlich für die Charakterisierung von Meningokokken-Infektionen in einem murinen Wirt, sowie für die Beurteilung der Virulenz zwischen wildarten Referenzstämmen und isogenen Mutagenmutanten. Der intrazisternförmige Infektionsweg gewährleistet die vollständige Abgabe der Meningokokken direkt in die Zisterne magna, was wiederum die bakterielle Replikation in der zerebrospinalen Flüssigkeit (CSF) erleichtert und Meningitis mit Merkmalen induziert, die diese imitieren. vorhanden beim Menschen2,24,25,26.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,8 Skirted Cryovial With external thread</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>E3090-6222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml Polypropylene Conical Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352070</td>
			<td>30 x 115mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11006-12</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alarm-Thermometer</td>
			<td>TESTO</td>
			<td>9000530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BactoTM Proteose Peptone</td>
			<td>BD</td>
			<td>211693</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Micro Fine syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>320837</td>
			<td>U-100 Insulin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak syringe 1ml 25GA 5/8in</td>
			<td>BD</td>
			<td>300014</td>
			<td>05x16mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak syringe 5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>308062</td>
			<td>07 x 30mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BIOHAZARD AURA B VERTICAL LAMINAR FLOW CABINET</td>
			<td>Bio Air s.c.r.l.</td>
			<td>Aura B3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioPhotometer</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Model #6131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle D</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>D</td>
			<td>Graduated up to:400ml, Total Volume 450ml, 72x72x122mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C150 CO2 Incubator</td>
			<td>Binder</td>
			<td>9040-0078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cage Body Eurostandard Type II</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C</td>
			<td>267x207x140mm, Floor area 370cm2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Petri Dish With Lid</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>150288</td>
			<td>Working Volume: 5mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Microcentrifuge 5415R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cuvetta semi-micro L. Form</td>
			<td>Kartell S.p.A.</td>
			<td>01938-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>di-Potassium hydrogen phosphate trihydrate</td>
			<td>Carlo erba</td>
			<td>471767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>di-Sodium hydrogen phosphate anhydrous ACS-for analysis</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>480141</td>
			<td>g1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diete Standard Certificate</td>
			<td>Mucedola s.r.l.</td>
			<td>4RF21</td>
			<td>Food pellet for animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Hp Tweezers 5 Stainless Steel</td>
			<td>F.S.T. by DUMONT</td>
			<td>AGT5034</td>
			<td>0,10 x 0,06 mm tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Balance</td>
			<td>Gibertini</td>
			<td>EU-C1200</td>
			<td>Max 1200g, d=0,01g, T=-1200g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Microcentrifuge tube safe-lock</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>T3545-1000EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythromycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E-6376</td>
			<td>25g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14084-08</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Top (mini- Isolator), H-Temp with lock clamps</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C400SUC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC agar base</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>CM0367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gillies Forceps 1 x2 teeth</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11028-15</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glicerin RPE</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>453752</td>
			<td>1L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11052-10</td>
			<td>Serrated Tip Width: 0.8mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inner lid</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron dextran solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8517-25ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Intervet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microbiological Safety Cabinet BH-EN and BHG Class II</td>
			<td>Faster</td>
			<td>BH-EN 2004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 1.5ml&#160;</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>PP780751</td>
			<td>screw cap PP, grad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Handling Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11035-20</td>
			<td>Serrated rubber; Gripping surface:15 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucotit-F2000</td>
			<td>MERZ</td>
			<td>61846</td>
			<td>2000ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Natural Latex Gloves</td>
			<td>Medica</td>
			<td>M101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New Brunswick Classic C24 Incubator Shaker</td>
			<td>PBI international</td>
			<td>C-24 Classic Benchtop Incubator Shaker</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri PS Dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>391-0453</td>
			<td>90X14.2MM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman Classic P20</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123600</td>
			<td>2-20microL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman Classic P200</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>20-200microL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman Classim P1000</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123602</td>
			<td>200-1000microL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvitox</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>SR0090A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>J.T. Baker Chemicals B.V.</td>
			<td>0208</td>
			<td>250g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Dihydrogen Phosphate</td>
			<td>J.T. Baker Chemicals B.V.</td>
			<td>0240</td>
			<td>1Kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PS Disposible forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>232-0191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Removable Divider</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C812</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-Bottom Polypropylene Tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352063</td>
			<td>5ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>MOLEKULA</td>
			<td>41272436</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SS retainer and Polyester FilterSheet</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Pattern Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11000-12</td>
			<td>Stainless</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens Tenotomy Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14066-11</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissor - ToughCut</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14130-17</td>
			<td>Stainless</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Touch N Tuff disposible nitrile gloves</td>
			<td>Ansell</td>
			<td>92-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Low Temperature (ULT) Freezer</td>
			<td>Haier</td>
			<td>DW-86L288</td>
			<td>Volume= 288L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wagner Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14070-12</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Intervet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inducing meningococcal meningitis serogroup c in mice via intracisternal delivery

Neisseria meningitidis (Meningokokken) ist ein Mikroorganismus mit schmaler Host-Bereich, weltweit als die Hauptursache für bakterielle Meningitis anerkannt. Meningokokken ist ein vorübergehender Kolonisator des menschlichen Nasopharynx von etwa 10% des gesunden Subjekts. Unter bestimmten Umständen erwirbt es eine invasive Fähigkeit, die Schleimhautbarriere zu durchdringen und dringt in den Blutkreislauf ein, der Septikämie verursacht. Im jüngsten Fall könnte eine fulminanende Sepsis auch ohne die daraus resultierende Entwicklung der Meningitis entstehen. Umgekehrt könnten sich Bakterien im Blut arm vermehren, die Blut-Hirn-Schranke überqueren, das zentrale Nervensystem erreichen, was zu einer fulminanten Meningitis führt. Die murinen Modelle der bakteriellen Meningitis stellen ein nützliches Werkzeug dar, um die Wirts-Pathogen-Wechselwirkungen zu untersuchen und die pathogenetischen Mechanismen zu analysieren, die für diese tödliche Krankheit verantwortlich sind. Obwohl in den letzten Jahrzehnten mehrere experimentelle Modellsysteme evaluiert wurden, war keines von ihnen in der Lage, die charakteristischen pathologischen Ereignisse der Meningokokken-Krankheit zu reproduzieren. In diesem experimentellen Protokoll beschreiben wir ein detailliertes Verfahren zur Induktion von Meningokokken-Meningitis in einem Mausmodell, das auf der intrazisternalen Inokulation von Bakterien basiert. Die besonderen Anzeichen einer menschlichen Meningitis wurden im murinen Wirt durch die Beurteilung klinischer Parameter (z. B. Temperatur, Körpergewicht), die Beurteilung der Überlebensrate, die mikrobiologische Analyse und die histologische Untersuchung von Hirnverletzungen aufgezeichnet. Bei der Verwendung von intrazisternalen (i.cist.) Inokulum, Meningokokken vollständige Lieferung direkt in Cisterna magna, was zu einer sehr effizienten Meningokokken-Replikation im Gehirngewebe. Eine 1.000-fache Erhöhung der lebensfähigen Anzahl von Bakterien wird in etwa 18 h beobachtet. Darüber hinaus, Meningokokken sind auch in der Milz gefunden, und Leber von infizierten Mäusen, was darauf hindeutet, dass die Leber ein Zielorgan für Meningokokken-Replikation darstellen kann.

Überleben von Mäusen, die mit N. meningitidis Wildtyp und isogenen mutierten Stämmen infiziert sind. Die in diesen repräsentativen Ergebnissen verwendeten Neisseria meningitidis-Stämme sind der Serogruppe C-Referenzstamm 93/4286 (ET-37) und sein isogener Mutant 93/4286"cssA, der durch Insertionsinaktivierung des cssA-Gens die UDP-N-Acetylglucosamin 2-Epimerase, die in Kapselsynthese-Locus25abbildet. Um den Virulenzgrad des cssA-defek...

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Inducing Meningococcal Meningitis Serogroup C in Mice via Intracisternal Delivery

Hier beschreiben wir eine Methode, um Meningokokken-Meningitis durch einen intrazisternalen Infektionsweg bei erwachsenen Mäusen zu induzieren. Wir präsentieren ein Schritt-für-Schritt-Protokoll der Meningokokken-Infektion von der Vorbereitung von Inokulum bis zur intrazisternalen Infektion; dann erfassen Sie das Überleben des Tieres und bewerten Sie die bakteriellen Belastungen in murinen Geweben.

Induzieren von Meningokokken-Meningitis Serogroup C bei Mäusen über Intracisternal Delivery

Neisseria meningitidis (meningococcus) is a narrow-host-range microorganism, globally recognized as the leading cause of bacterial meningitis. ...

Neisseria meningitidis ist eine der häufigsten Ursachen für Sepsis und Meningitidis in der menschlichen Bevölkerung auf der ganzen Welt, und die Bakterien sind auf den menschlichen Wirt beschränkt. In diesem experimentellen Protokoll beschreiben wir das maßgeschneiderte Verfahren zur Induktion von Meningokokken-Meningitidis in einem Mausmodell, das auf der intrazisternalen Inokulation von Bakterien basiert. Dieses murine Modell reproduzierte die charakteristischen pathologischen Ereignisse der Meningokokken-Meningitis als schwere menschliche Krankheit.Es stellt also ein nützliches Werkzeug dar, um die Wirts-Pathogen-Wechselwirkung zu bewerten und den pathogenetischen Mechanismus zu analysieren, der für diese tödliche Krankheit verantwortlich ist. Das Infektionsmodell könnte nicht nur nützlich sein, um innovative therapeutische Strategien zu evaluieren, um die Bakterienreplikation direkt in CSF zu verhindern, sondern auch, um die Wirksamkeit einer möglichen passiven Immuntherapie gegen menschliche Krankheitserreger zu analysieren. Die Technik erfordert die Trainingsphase, um den Erfolg nicht nur des intrazisternalen Inokulums zu garantieren, sondern im Allgemeinen die Krankheitsinduktion.Die Verfahren werden Roberta Colicchio und Chiara Pagliuca als Forscher und Elena Scaglione als Doktorandin, alle von meinem Labor, demonstrieren. Um zu beginnen, wählen Sie eine einzelne Kolonie aus einer frischen Neisseria meningitidis Kultur auf Gonokokken Agar Platte ergänzt mit 1%Polybitox Ergänzung und impfen in 10 Milliliter GC Broth. Alle Verfahren, die die Verwendung von Meningokokken beinhalten, müssen unter einem laminaren Fluss Bio-Sicherheitswürfelschrank durchgeführt werden.Wachsen Sie die Bakterien bei 37 Grad Celsius in einem Orbital-Shake-Inkubator bei 220 RPM und überprüfen Sie die optische Dichte der Kultur zu verschiedenen Zeitpunkten mit einem Spektralphotometer. Wachsen Sie die Kultur, bis sie OD600 von 0,7 erreicht, was der frühen exponentiellen Phase entspricht. Sobald diese optische Dichte erreicht ist, machen Sie gefrorene Bestände, indem Sie 10% Glycerin hinzufügen und einen Milliliter der Kultur in den Kryo-Fläschchen abgeben.Bewahren Sie die Fläschchen bei 80 Grad Celsius auf, bis sie verwendet werden. Vor der Infektion, tauen gefrorene Bakterien bei Raumtemperatur, dann in ein Zentrifugenrohr in Zentrifuge für 15 Minuten bei 1500xG übertragen Entfernen Sie den Überstand und wieder aufhängen bei einem Milliliter frische GC-Brühe mit fünf Milligramm pro Kilogramm Eisendextran. Vor Beginn des Experiments wiegen Sie die Tiere und bewerten ihre Körpertemperatur.Das Tier aus dem Nacken abschüssen und den Bauch mit einem 70%Ethanol desinfizieren. Etwa 2 Stunden vor der Infektion, mit einer 25-Messgerät-Nadel, injizieren Eisen Dextran intraperitoneal in den unteren rechten Quadranten des Bauches. Nach der Anästhesisierung des Tieres, überprüfen Sie die Tiefe der Anästhesie, indem Sie das Fehlen von Schmerzreaktion beim Kneifen der Zehen bestätigen.Nachdem Sie die Maus auf den laminaren Strömungsschrank platziert haben, positionieren Sie sie in einem sternförmigen Dekubitus und dehnen Sie die Gliedmaßen und die Halswirbelsäule vorsichtig aus, um die Wirbelsäule in einer geraden Position zu halten. Um eine konsistente bakterielle Suspension zu erhalten, mischen Sie sie vorsichtig, bevor Sie sie in eine Spritze mit acht Millimeter 30-Spur-Nadel laden. Desinfizieren Sie den Kopf mit einem 70%ethanol.Legen Sie das Tier in seitliche Recumbency, ziehen Sie die Ohren aus dem Weg, und beugen Sie den Hals mäßig. Stellen Sie sicher, dass die Mittellinie des Halses und des Kopfes in perfekt paralleler Position zur Tischplatte ist. Berühren Sie dann die Atlasflügel, stellen Sie sicher, dass sie sich überlappen, und spüren Sie den natürlichen Einzug auf der Mittellinie, wo die Nadel am ehesten in das okzipitale Loch eintritt.Füllen Sie eine Spritze mit einer 8 Millimeter 30 Gauge Nadel mit der etablierten sub-tödlichen bakteriellen Dosis von Meningokokken oder Eisen dextran ergänzt GC Broth als Kontrolle in einem Gesamtvolumen von 10 Mikroliter. Verwenden Sie die Nadel, um den Injektionspunkt zu identifizieren und dann den Inhalt der Spritze durch ein okzipitales Gratloch in die Zisterne magna von Mäusen zu injizieren. Entsorgen Sie die Spritze und die Nadel nach der Injektion sicher.Legen Sie das Tier in den Käfig unter einem laminaren Strömungsschrank. Warten Sie auf das Erwachen und die vollständige Wiederherstellung der Bewegung und gehen Sie für das Überleben der Tiere auf den infizierten Tieren, wie im Protokoll beschrieben. Nach der Anästhesisierung der Maus, desinfizieren Sie die Brust mit einem 70%Ethanol.Mit einer 25-Meter-Nadel ziehen 600 bis 700 Mikroliter Blut durch Herzpunktion der Brusthöhle. Sammeln Sie das Blut in einer Röhre mit 3,8% Natriumcitrat und speichern Sie bei 80 Grad Celsius für die später lebensfähige Bakterielle Zellzahl Auswertung. Legen Sie die eingeschläferte Maus in die Supine-Position.Mit Schere und Zange schneiden Sie das Fell entlang der sagittalen Ebene des Körpers. Mit Stiften, fixieren Sie die Haut mit dem Fell an den Seiten des Körpers. Verwenden Sie scharfe Schere, um die Peritonealmembran abzuschneiden.Dann mit Schere und Einwegzange, verbrauchen Sie die Organe, wie Milz und Leber, und legen Sie jeweils in einer separaten sterilen Petrischale mit einem Milliliter GC Brühe mit 10% Glycerin ergänzt. Mit einem Kolben einer Fünf-Millimeter-Spritze die Organe bei Raumtemperatur etwa zwei bis drei Minuten mechanisch homogenisieren, bis eine einzellige Suspension gebildet wird, und in eine scurdent Kryo-Durchstechflasche übertragen. Legen Sie das Rohr sofort auf das Trockeneis.GC AgarPlatten mit Antibiotika herstellen und vor dem Einsatz bei 37 Grad Celsius für zwei bis drei Stunden trocknen. Bereiten Sie 10 vollständige serielle Verdünnungen der Proben in GC Broth aus jedem homogenisierten Gewebe vor. Platten Sie sie auf GC AgarPlatten platten und über Nacht bei 37 Grad Celsius mit 5% Kohlendioxid bebrüten.Mit 70% Ethanol, desinfizieren Sie den Kopf einer eingeschläferten Maus. Mit einer kleinen chirurgischen Schere und einer feingekippten Stahlzange, resektieren Sie das Fell und die Haut des entfernten Kopfes, dann gehen Sie in Richtung der Oberseite des Schädels, um deutlich die Nähte zu sehen und die Öffnung des Schädels zu führen. Um den Schädel zu öffnen, legen Sie die Spitze der winzigen Schere durch das Foramen magnum.In Richtung der Mitte des Schädels und über die Mittellinie des parietalen Knochens auf die gegenüberliegende Seite des Schädels schneiden und sanft entlang der seitlichen Gliedmaße der Lambdoid-Naht schneiden. Mit feinspitzen Zangen, beginnend von der hinteren parietalen Ecke, heben Sie den Schädel und ziehen Sie es diagonal nach oben, um das Gehirn zu entdecken, um sicherzustellen, dass das Gehirngewebe nicht an einem Knochen des Kopfes befestigt ist, wenn der Schädel angehoben wird. Verwenden Sie Einwegzange, um jegliches Bindegewebe zwischen Schädel und Gehirn zu entfernen und das Gehirngewebe nicht austrocknen zu lassen.Verwenden Sie Einwegzange, um das Gehirn sofort in eine Petrischale mit einem Milliliter GC-Brühe mit 10% Glycerin ergänzt. Verwenden Sie den Kolben einer Fünf-Milliliter-Spritze, um das Gehirn bei Raumtemperatur etwa zwei bis drei Minuten mechanisch zu homogenisieren, bis eine einzellige Suspension gebildet wird. Übertragen Sie die Suspension in eine 2 Milliliter sterile Röhre und speichern Sie bei 80 Grad Celsius für die später lebensfähige bakterielle Zellzahl Bewertung.Das Überleben von Mäusen, die mit 93/4286 Wildtyp- oder cssA-defekten Neisseria meningitidis-Stämmen infiziert waren, wurde untersucht. Die mittlere tödliche Dosis für den Wildstamm entsprach der Meningokokken-Herausforderung von 10 bis zur 4. KBE. Während die Sterblichkeitsrate von 10 bis zur 5. KBE 83,4% und 100% mit 10 bis zur 5. KBE-Dosis betrug.Um die mittlere tödliche Dosis für den defekten mutierten Stamm cssA zu erhalten, war eine Dosis von 10 bis zur 8. KBE erforderlich und eine Menge von 1000 Falten höher als der Wildstamm. Nach der Injektion, Es gab eine schnelle Zunahme von Wild-Typ-Bakterien im Gehirngewebe erreichen den Höhepunkt bei etwa 24 Stunden nach der Infektion. Im Gehirn von Mäusen, die mit dem mutierten Stamm infiziert waren, sanken die lebensfähigen Zählungen im Laufe der Zeit schrittweise.Außerdem zeigten 33,3 % der mutierten infizierten Mäuse eine bakterielle Clearance von der Infektionsstelle, im Gegensatz zu wildtypinfizierten Tieren. 48 Stunden nach der Infektion wurde die cssA defekte Mutante vollständig in Milz und Leber gelöscht, während die mit dem Wildstamm infizierten Tiere eine anhaltende Infektion aufwiesen. Die beschriebene experimentelle Methode könnte nützlich sein, um Hirnschäden im Zusammenhang mit dieser tödlichen Krankheit zu analysieren, durch ihre pathologische Bewertung, wie Immunhistochemie, Immunfluoreszenz, und Hirnblutungsanalyse.

inducing-meningococcal-meningitis-serogroup-c-mice-via-intracisternal

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged antigen-specific T cell receptor (TCR) have been an indispensable tool to study T cell development and function. However, such TCRs are usually isolated from the relevant T cells after long-term culture often following repeated antigen stimulation, which unavoidably selects for T cells with high affinity. Random genomic integration of the TCR &alpha;- and &beta;-chain and expression from non-endogenous promoters can lead to variations in expression level and kinetics.
Epigenetic reprogramming via somatic cell nuclear transfer provides a tool to generate embryonic stem cells and mice from any cell of interest. Consequently, when SCNT is applied to T cells of known specificity, these genetic V(D)J rearrangements are transferred to the SCNT-embryonic stem cells (ESCs) and the mice derived from them, while epigenetic marks are reset. We have demonstrated that T cells with pre-defined specificities against Toxoplasma gondii can be used to generate mouse models that express the specific TCR from their endogenous loci, without experimentally introduced genetic modification. The relative ease and speed with which such transnuclear models can be obtained holds promise for the construction of other disease models.

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

We demonstrate here that epigenetic reprogramming via Somatic Cell Nuclear Transfer (SCNT) can be used as a tool to generate mouse models with pre-defined T cell receptor (TCR) specificities. These transnuclear mice express the corresponding TCR from their endogenous locus under the control of the endogenous promoter.

Transnuclear Mäuse mit vordefinierten T-Zell-Rezeptor Spezifitäten gegen Toxoplasma gondii Via SCNT Erhalten

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her viral population uses the CCR5 coreceptor for cellular entry, and not an alternative coreceptor. One approach to tropism testing is to examine the sequence of the V3 region of the HIV envelope, which interacts with the coreceptor.
Methods: Viral RNA is extracted from blood plasma. The V3 region is amplified in triplicate with nested reverse transcriptase-PCR. The amplifications are then sequenced and analyzed using the software, RE_Call. Sequences are then submitted to a bioinformatic algorithm such as geno2pheno to infer viral tropism from the V3 region. Sequences are inferred to be non-R5 if their geno2pheno false positive rate falls below 5.75%. If any one of the three sequences from a sample is inferred to be non-R5, the patient is unlikely to respond to a CCR5-antagonist.

HIV tropism can be inferred from the V3 region of the viral envelope. V3 is PCR amplified in triplicate using nested RT-PCR, sequenced, and interpreted using bioinformatic software. Samples with with 1 or more sequence(s) with low g2P scores are classified as non-R5 virus.

Genotypische Inference von HIV-1 Tropismus mit Populations-basierte Sequenzierung von V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in the thymus proper vasculature formation and patterning is essential for thymocyte entry into the organ and mature T-cell exit to the periphery. The spatial arrangement of blood vessels in the thymus is dependent upon signals from the local microenvironment, namely thymic epithelial cells (TEC). Several recent reports suggest that disruption of these signals results in thymus blood vessel defects 1,2. Previous studies have described techniques used to label the neonatal and adult thymus vasculature 1,2. We demonstrate here a technique for labeling blood vessels in the embryonic thymus. This method combines the use of FITC-dextran or Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I (GSL 1 - isolectin B4) facial vein injections and CD31 antibody staining to identify thymus vascular structures and PDGFR-&beta; to label thymic perivascular mesenchyme 3-5. The option of using cryosections or vibratome sections is also provided. This protocol can be used to identify thymus vascular defects, which is critical for defining the roles of TEC-derived molecules in thymus blood vessel formation. As the method labels the entire vasculature, it can also be used to analyze the vascular networks in multiple organs and tissues throughout the embryo including skin and heart 6-10.

This article describes a method for labeling embryonic skin and thymus blood vessels.

Ein Verfahren zur Markierung Gefäßsystem in embryonalen Mäuse

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

L. monocytogenes are facultative intracellular bacterial pathogens that cause food borne infections in humans. Very little is known about the gastrointestinal phase of listeriosis due to the lack of a small animal model that closely mimics human disease. This paper describes a novel mouse model for oral transmission of L. monocytogenes. Using this model, mice fed L. monocytogenes-contaminated bread have a discrete phase of gastrointestinal infection, followed by varying degrees of systemic spread in susceptible (BALB/c/By/J) or resistant (C57BL/6) mouse strains. During the later stages of the infection, dissemination to the gall bladder and brain is observed. The food borne model of listeriosis is highly reproducible, does not require specialized skills, and can be used with a wide variety of bacterial isolates and laboratory mouse strains. As such, it is the ideal model to study both virulence strategies used by L. monocytogenes to promote intestinal colonization, as well as the host response to invasive food borne bacterial infection.

Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

This paper describes a novel method for oral infection of mice using Listeria monocytogenes-contaminated food. The protocol can readily be adapted for use with other food borne bacterial pathogens.

Mündliche Übertragung von<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; In Mäusen über die Aufnahme von kontaminierten Speisen

L. monocytogenes are facultative intracellular bacterial pathogens that cause food borne infections in humans. Very little is known about the ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and pathological processes such as CNS maturation in development, multiple sclerosis, and spinal cord injury. Microglia can be activated and recruited to action by neuronal injury or stimulation, such as axonal damage seen in MS or ischemic brain trauma resulting from stroke. These immunocompetent members of the CNS are also thought to have roles in synaptic plasticity under non-pathological conditions. We employ protocols for culturing microglia from the neonatal and adult tissues that are aimed to maximize the viable cell numbers while minimizing confounding variables, such as the presence of other CNS cell types and cell culture debris. We utilize large and easily discernable CNS components (e.g. cortex, spinal cord segments), which makes the entire process feasible and reproducible. The use of adult cells is a suitable alternative to the use of neonatal brain microglia, as many pathologies studied mainly affect the postnatal spinal cord. These culture systems are also useful for directly testing the effect of compounds that may either inhibit or promote microglial activation. Since microglial activation can shape the outcomes of disease in the adult CNS, there is a need for in vitro systems in which neonatal and adult microglia can be cultured and studied.

We outline methods for the efficient and quick isolation/culture of viable microglia from the neonatal cerebral cortex and adult spinal cord. The dissection and plating of cortical microglia can be accomplished within 90 minutes, with the subsequent microglial harvest taking place ~ 10 days following the initial dissection.

Kultivierung Mikroglia aus dem Neugeborenen und Erwachsenen Central Nervous System

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

Die Induktion von Murine Darmentzündungen durch adoptiven Transfer von Effektor CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hoch</sup&gt; T-Zellen in immundefizienten Mäusen

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in the caseous cores of cavities and lesions is especially crucial because they harbor subpopulations of drug-tolerant bacteria also commonly referred to as persisters. Existing methods for the measurement of drug penetration in tuberculosis lesions involve costly and time-consuming in vivo pharmacokinetic studies coupled to bioanalytical or imaging techniques. The in vitro measurement of drug binding to caseum macromolecules was proposed as an alternative to such techniques since this binding hinders the passive diffusion of drug molecules through caseum. Rapid equilibrium dialysis is a fast and reliable system for performing plasma protein and tissue binding studies. In this protocol, we used a rapid equilibrium dialysis (RED) device to measure drug binding to homogenates of caseum that is excised from the lesions and cavities of tuberculosis-infected rabbits. The protocol also describes how to generate a surrogate matrix from lipid loaded THP-1 macrophages to use in place of caseum. This caseum/surrogate binding assay is an important tool in tuberculosis drug discovery and can be adapted to help study drug distribution in lesions or abscesses caused by other diseases.

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

Here we describe a rapid equilibrium dialysis (RED) method to measure drug binding to caseum from pulmonary tuberculosis lesions and cavities. The protocol is also used with a foamy macrophage-derived matrix that is an effective surrogate to caseum.

Ein<em&gt; In Vitro</em&gt; Caseum-Bindungsassay, der die Drug Penetration in Tuberkulose-Läsionen vorhersagt

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major manifestation of S. suis infections. A suitable infection model is an essential tool to understand the mechanisms of diseases caused by pathogens. Several routes of infection in mice have been developed to study the pathogenesis of S. suis infection. However, the intraperitoneal, intranasal, and intravenous routes of infection are not suitable for studying the roles of S. suis surface components in meningitis directly in the brain, such as the extracellular matrix from biofilms. Although intracisternal inoculation has been used for S. suis infection, the precise injection site has not been described. Here, the intracranial subarachnoidal route of infection was described in a mouse model to investigate the roles of biofilms in S. suis meningitis. S. suis planktonic cells or biofilm state cells were directly injected into the subarachnoid space of mice through the injection site located 3.5 mm rostral from the bregma. Histopathological analysis and increased mRNA expression of TLR2 and cytokines of the brain tissue from mice injected with biofilm state cells clearly indicated that S. suis biofilm plays definitive roles in S. suis meningitis. This route of infection has obvious advantages over other routes of infection, allowing the study of the host-bacterium interaction. Furthermore, it permits the effect of bacterial components on host immune responses directly in the brain to be assessed, and mimics bacterial entrance into the central nervous system. This route of infection can be extended for investigating the mechanisms of meningitis caused by other bacteria. In addition, it can also be used to test the efficacy of drugs against bacterial meningitis.

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Here, we describe the intracranial subarachnoidal route of infection in mice to study roles of biofilms in Streptococcus suis meningitis. This infection model is also suitable for studying the pathogenesis of other bacterial meningitis and the efficacy of new drugs against bacterial meningitis.

Intrakranielle Subarachnoidal Route der Infektion für die Untersuchung Rollen von Streptococcus Suis Biofilmen in Meningitis in einem Mausmodell der Infektion

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

Quantitative PCR of T7 Bacteriophage from Biopanning

This protocol describes the use of quantitative PCR (qPCR) to enumerate T7 phages from phage selection experiments (i.e., &#34;biopanning&#34;). qPCR is a fluorescence-based approach to quantify DNA, and here, it is adapted to quantify phage genomes as a proxy for phage particles. In this protocol, a facile phage DNA preparation method is described using high-temperature heating without additional DNA purification. The method only needs small volumes of heat-treated phages and small volumes of the qPCR reaction. qPCR is high-throughput and fast, able to process and obtain data from a 96-well plate of reactions in 2&#8211;4 h. Compared to other phage enumeration approaches, qPCR is more time-efficient. Here, qPCR is used to enumerate T7 phages identified from biopanning against in vitro cystic fibrosis-like mucus model. The qPCR method can be extended to quantify T7 phages from other experiments, including other types of biopanning (e.g.,&#160;immobilized protein binding, in vivo phage screening) and other sources (e.g., water systems or body fluids). In summary, this protocol can be modified to quantify any DNA-encapsulated viruses.

A reproducible, accurate, and time efficient quantitative PCR (qPCR) method to enumerate T7 bacteriophage is described here. The protocol clearly describes phage genomic DNA preparation, PCR reaction preparation, qPCR cycling conditions, and qPCR data analysis.

Quantitative PCR von Bakteriophagen T7 aus Biopanning

This protocol describes the use of quantitative PCR (qPCR) to enumerate T7 phages from phage selection experiments (i.e., &#34;biopanning&#34;). qPCR is a ...

Probiotic Studies in Neonatal Mice Using Gavage

Adult mouse models have been widely used to understand the mechanism behind disease progression in humans. The applicability of studies done in adult mouse models to neonatal diseases is limited. To better understand disease progression, host responses and long-term impact of interventions in neonates, a neonatal mouse model likely is a better fit. The sparse use of neonatal mouse models can in part be attributed to the technical difficulties of working with these small animals. A neonatal mouse model was developed to determine the effects of probiotic administration in early life and to specifically assess the ability to establish colonization in the newborn mouse intestinal tract. Specifically, to assess probiotic colonization in the neonatal mouse, Lactobacillus plantarum (LP) was delivered directly into the neonatal mouse gastrointestinal tract. To this end, LP was administered to mice by feeding through intra-esophageal (IE) gavage. A highly reproducible method was developed to standardize the process of IE gavage that allows an accurate administration of probiotic dosages while minimizing trauma, an aspect particularly important given the fragility of newborn mice. Limitations of this process include possibilities of esophageal irritation or damage and aspiration if gavaged incorrectly. This approach represents an improvement on current practices because IE gavage into the distal esophagus reduces the chances of aspiration. Following gavage, the colonization profile of the probiotic was traced using quantitative polymerase chain reaction (qPCR) of the extracted intestinal DNA with LP specific primers. Different litter settings and cage management techniques were used to assess the potential for colonization-spread. The protocol details the intricacies of IE neonatal mouse gavage and subsequent colonization quantification with LP.

This study details the process of gavaging precise amounts of probiotics to neonatal mice. The experimental set-up was optimized to include but is not limited to probiotic dosing, methods of administration, and quantification of bacteria in the intestines.

Probiotische Studien an neugeborenen Mäusen mit Magensonde

Adult mouse models have been widely used to understand the mechanism behind disease progression in humans. The applicability of studies done in adult ...