Name: inducing meningococcal meningitis serogroup c in mice via intracisternal delivery
Uploaded: 2019-11-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inducing Meningococcal Meningitis Serogroup C in Mice via Intracisternal Delivery at JoVE.com

연구는 PRIN 2012 [부여 번호 2012WJSX8K]에 의해 부분적으로 지원되었다: "점막 감염에 있는 호스트 미생물 상호 작용 모형: 새로운 치료 전략의 발달" 및 PRIN 2017 [2017SFBFER]에 의해: "상호 작용을 해결하기 위한 통합된 접근법 적응, 스트레스 조건 및 도전 병원 체의 항균 저항".

이 프로토콜은 1986년 11월 24일(86/609/EEC)의 유럽 공동체 이사회 지침에 따라 동물의 고통을 최소화하고 마우스 수를 줄이기 위해 수행되었습니다. 이 연구에서 보고된 생체 내 실험은 윤리적 동물 관리 및 사용 위원회(Prot. Number. 2, 14 12월 2012)와 이탈리아 보건부(Prot. number 0000094-A-03/01/2013)에 의해 승인되었습니다. 모든 절차는 BSL2 룸의 생물 안전 캐비닛 2 (BSC2) 내부에서 수행되어야하며, 잠재적 인 감...

<ol>
	<li>van Deuren, M., Brandtzaeg, P., van der Meer, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+meningococcal+disease+with+emphasis+on+pathogenesis+and+clinical+management.">Update on meningococcal disease with emphasis on pathogenesis and clinical management.</a> Clinical Microbiology Reviews. 13, 144-166 (2000).</li><li>Colicchio, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fitness+Cost+of+Rifampin+Resistance+in+Neisseria+meningitidis:+In+vitro+Study+of+Mechanisms+Associated+with+rpoB+H553Y+Mutation.">Fitness Cost of Rifampin Resistance in Neisseria meningitidis: In vitro Study of Mechanisms Associated with rpoB H553Y Mutation.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (12), 7637-7649 (2015).</li><li>Tal&#224;, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serogroup-specific+interaction+of+Neisseria+meningitidis+capsular+polysaccharide+with+host+cell+microtubules+and+effects+on+tubulin+polymerization.">Serogroup-specific interaction of Neisseria meningitidis capsular polysaccharide with host cell microtubules and effects on tubulin polymerization.</a> Infection and Immunity. 82, 265-274 (2014).</li><li>Pagliarulo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+and+differential+expression+of+gdhA+encoding+NADP-specific+glutamate+dehydrogenase+in+Neisseria+meningitidis+clinical+isolates.">Regulation and differential expression of gdhA encoding NADP-specific glutamate dehydrogenase in Neisseria meningitidis clinical isolates.</a> Molecular Microbiology. 51, 1757-1772 (2004).</li><li>Plant, L., Jonsson, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contacting+the+host:+insights+and+implications+of+pathogenic+Neisseria+cell+interactions.">Contacting the host: insights and implications of pathogenic Neisseria cell interactions.</a> Scandinavian Journal of Infectious Diseases. 35, 608-613 (2003).</li><li>Schryvers, A. B., Stojiljkovic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+acquisition+systems+in+the+pathogenic+Neisseria.">Iron acquisition systems in the pathogenic Neisseria.</a> Molecular Microbiology. 32, 1117-1123 (1999).</li><li>Virji, M., Makepeace, K., Ferguson, D. J., Watt, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinoembryonic+antigens+(CD66)+on+epithelial+cells+and+neutrophils+are+receptors+for+Opa+proteins+of+pathogenic+neisseriae.">Carcinoembryonic antigens (CD66) on epithelial cells and neutrophils are receptors for Opa proteins of pathogenic neisseriae.</a> Molecular Microbiology. 22, 941-950 (1996).</li><li>de Vries, F. P., van Der Ende, A., van Putten, J. P., Dankert, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+of+primary+nasopharyngeal+epithelial+cells+by+Neisseria+meningitidis+is+controlled+by+phase+variation+of+multiple+surface+antigens.">Invasion of primary nasopharyngeal epithelial cells by Neisseria meningitidis is controlled by phase variation of multiple surface antigens.</a> Infection and Immunity. 64, 2998-3006 (1996).</li><li>Tinsley, C. R., Heckels, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+the+expression+of+pili+and+outer+membrane+protein+by+Neisseria+meningitidis+during+the+course+of+the+meningococcal+infection.">Variation in the expression of pili and outer membrane protein by Neisseria meningitidis during the course of the meningococcal infection.</a> Journal of General Microbiology. 132, 2483-2490 (1986).</li><li>Gorringe, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+disease+models+for+the+assessment+of+meningococcal+vaccines.">Experimental disease models for the assessment of meningococcal vaccines.</a> Vaccine. 23, 2214-2217 (2005).</li><li>Newcombe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+with+an+avirulent+phoP+mutant+of+Neisseria+meningitidis+confers+broad+cross-reactive+immunity.">Infection with an avirulent phoP mutant of Neisseria meningitidis confers broad cross-reactive immunity.</a> Infection and Immunity. 72, 338-344 (2004).</li><li>Oftung, F., Lovik, M., Andersen, S. R., Froholm, L. O., Bjune, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+utilising+human+transferrin+to+study+protection+against+Neisseria+meningitidis+serogroup+B+induced+by+outer+membrane+vesicle+vaccination.">A mouse model utilising human transferrin to study protection against Neisseria meningitidis serogroup B induced by outer membrane vesicle vaccination.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 26, 75-82 (1999).</li><li>Salit, I. E., Tomalty, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+meningococcal+infection+in+neonatal+mice:+differences+in+virulence+between+strains+isolated+from+human+cases+and+carriers.">Experimental meningococcal infection in neonatal mice: differences in virulence between strains isolated from human cases and carriers.</a> Canadian Journal of Microbiology. 30, 1042-1045 (1984).</li><li>Salit, I. E., Tomalty, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neonatal+mouse+model+of+meningococcal+disease.">A neonatal mouse model of meningococcal disease.</a> Clinical and Investigative Medicine. 9, 119-123 (1986).</li><li>Mackinnon, F. G., Gorringe, A. R., Funnell, S. G., Robinson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+infection+of+infant+mice+with+Neisseria+meningitidis.">Intranasal infection of infant mice with Neisseria meningitidis.</a> Microbial Pathogenesis. 12, 415-420 (1992).</li><li>Mackinnon, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+lipooligosaccharide+immunotype+and+cap-+sule+as+virulence+factors+for+Neisseria+meningitidis+using+an+infant+mouse+intranasal+infection+model.">Demonstration of lipooligosaccharide immunotype and cap- sule as virulence factors for Neisseria meningitidis using an infant mouse intranasal infection model.</a> Microbial Pathogenesis. 15, 359-366 (1993).</li><li>Yi, K., Stephens, D. S., Stojiljkovic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+an+improved+mouse+model+of+meningococcal+colonization.">Development and evaluation of an improved mouse model of meningococcal colonization.</a> Infection and Immunity. 71 (4), 1849-1855 (2003).</li><li>Holbein, B. E., Jericho, K. W. F., Likes, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+infection+in+mice:+influence+of+iron,+variations+in+virulence+among+strains,+and+pathology.">Neisseria meningitidis infection in mice: influence of iron, variations in virulence among strains, and pathology.</a> Infection and Immunity. 24, 545-551 (1979).</li><li>Saukkonen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+meningococcal+meningitis+in+the+infant+rat.">Experimental meningococcal meningitis in the infant rat.</a> Microbial Pathogenesis. 4, 203-211 (1988).</li><li>Johansson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD46+in+meningococcal+disease.">CD46 in meningococcal disease.</a> Science. 301, 373-375 (2003).</li><li>Zarantonelli, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+human+transferrin+as+a+model+for+meningococcal+infection.">Transgenic mice expressing human transferrin as a model for meningococcal infection.</a> Infection and Immunity. 75, 5609-5614 (2007).</li><li>Join-Lambert, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningococcal+interaction+to+microvasculature+triggers+the+tissular+lesions+of+purpura+fulminans.">Meningococcal interaction to microvasculature triggers the tissular lesions of purpura fulminans.</a> Journal of Infection Disease. 208, 1590-1597 (2013).</li><li>Melican, K., Michea Veloso, P., Martin, T., Bruneval, P., Dum&#233;nil, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+dermal+vessels+leads+to+local+vascular+damage+and+purpura+in+a+humanized+mouse+model.">Adhesion of Neisseria meningitidis to dermal vessels leads to local vascular damage and purpura in a humanized mouse model.</a> PLoS Pathogen. 9, 1003139 (2013).</li><li>Colicchio, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+meningococcal+ABC-Type+L-glutamate+transporter+GltT+is+necessary+for+the+development+of+experimental+meningitis+in+mice.">The meningococcal ABC-Type L-glutamate transporter GltT is necessary for the development of experimental meningitis in mice.</a> Infection and Immunity. 77, 3578-3587 (2009).</li><li>Colicchio, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+traits+of+serogroup+C+meningococcus+and+isogenic+cssA+mutant,+defective+in+surface-exposed+sialic+acid,+in+a+murine+model+of+meningitis.">Virulence traits of serogroup C meningococcus and isogenic cssA mutant, defective in surface-exposed sialic acid, in a murine model of meningitis.</a> Infection and Immunity. , 00688-00718 (2019).</li><li>Ricci, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+matrix+metalloproteinases+attenuates+brain+damage+in+experimental+meningococcal+meningitis.">Inhibition of matrix metalloproteinases attenuates brain damage in experimental meningococcal meningitis.</a> BMC Infectious Diseases. 14, 726 (2014).</li><li>Schryvers, A. B., Gonzalez, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+abilities+of+different+protein+sources+of+iron+to+enhance+Neisseria+meningitidis+infection+in+mice.">Comparison of the abilities of different protein sources of iron to enhance Neisseria meningitidis infection in mice.</a> Infection and Immunity. 57, 2425-2429 (1989).</li><li>Beverly, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+105+-+Cerebrospinal+Fluid+Sampling+Small+Animal.">Chapter 105 - Cerebrospinal Fluid Sampling Small Animal.</a> Critical Care Medicine. , 448-452 (2009).</li><li>Liechti, F. D., Grandgirard, D., Leppert, D., Leib, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+metalloproteinase+inhibition+lowers+mortality+and+brain+injury+in+experimental+pneumococcal+meningitis.">Matrix metalloproteinase inhibition lowers mortality and brain injury in experimental pneumococcal meningitis.</a> Infection and Immunity. 82, 1710-1718 (2014).</li><li>Pagliuca, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Approach+for+Evaluation+of+Bacteroides+fragilis+Protective+Role+against+Bartonella+henselae+Liver+Damage+in+Immunocompromised+Murine+Model.">Novel Approach for Evaluation of Bacteroides fragilis Protective Role against Bartonella henselae Liver Damage in Immunocompromised Murine Model.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1750 (2016).</li><li>Trampuz, A., Steinhuber, A., Wittwer, M., Leib, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+diagnosis+of+experimental+meningitis+by+bacterial+heat+production+in+cerebrospi-+nal+fluid.">Rapid diagnosis of experimental meningitis by bacterial heat production in cerebrospi- nal fluid.</a> BMC Infectious Diseases. 7, 116 (2007).</li><li>Tuomanen, E. I., Saukkonen, K., Sande, S., Cioffe, C., Wright, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+inflammation,+tissue+damage,+and+mortality+in+bacterial+meningitis+in+rabbits+treated+with+monoclonal+antibodies+against+adhesion-promoting+receptors+of+leukocytes.">Reduction of inflammation, tissue damage, and mortality in bacterial meningitis in rabbits treated with monoclonal antibodies against adhesion-promoting receptors of leukocytes.</a> Journal of Experimental Medicine. 170, 959-969 (1989).</li><li>Goldschneider, I., Gotschlich, E. C., Artenstein, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunity+to+the+meningococcus.+I.+The+role+of+humoral+antibodies.">Human immunity to the meningococcus. I. The role of humoral antibodies.</a> Journal of Experimental Medicine. 129, 1307-1326 (1969).</li><li>Goldschneider, I., Gotschlich, E. C., Artenstein, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunity+to+the+meningococcus.+II.+Development+of+natural+immunity.">Human immunity to the meningococcus. II. Development of natural immunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 129, 1327-1348 (1969).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+methods+for+the+diagnosis+of+meningitis+caused+by+Neisseria+meningitidis,+Streptococcus+pneumoniae,+and+Haemophilus+influenzae:+WHO+manual,+2nd+Edition.">Laboratory methods for the diagnosis of meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae: WHO manual, 2nd Edition.</a> World Health Organization. , (2011).</li><li>Chiavolini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+inducing+experimental+pneumococcal+meningitis+in+outbred+mice.">Method for inducing experimental pneumococcal meningitis in outbred mice.</a> BMC Microbiolology. 4, 36 (2004).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+Subarachnoidal+Route+of+Infection+for+Investigating+Roles+of+Streptococcus+suis+Biofilms+in+Meningitis+in+a+Mouse+Infection+Model.">Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model.</a> Journal of Visualized Experiments. (1), e137 (2018).</li><li>Pagliuca, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+Bacteroides+fragilis+protection+from+Bartonella+henselae-induced+damage.">Evidence of Bacteroides fragilis protection from Bartonella henselae-induced damage.</a> PLoS One. 7, 49653 (2012).</li><li>Larson, J. A., Howie, H. L., So, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+accelerates+ferritin+degradation+in+host+epithelial+cells+to+yield+an+essential+iron+source.">Neisseria meningitidis accelerates ferritin degradation in host epithelial cells to yield an essential iron source.</a> Molecular Microbiology. 53, 807-820 (2004).</li><li>Festing, M. F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+variability+of+inbred+and+outbred+mice.">Phenotypic variability of inbred and outbred mice.</a> Nature. 263, 230-232 (1976).</li><li>Festing, M. F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Warning:+the+use+of+heterogeneous+mice+may+seriously+damage+your+research.">Warning: the use of heterogeneous mice may seriously damage your research.</a> Neurobiology of Aging. 20, 237-244 (1999).</li></ol>

이 연구에서는, 우리는 i.cist에 의해 성인 마우스에 있는 수막구균 뇌막염을 유도하는 실험적인 프로토콜을 기술합니다. 수막 구균 박테리아의 접종. 우리의 지식에, 수막 구균 뇌막염의 다른 모델은 i.cist에 의해 감염된 실험실 마우스에서 개발되지 않았습니다. 경로; 과거에는, 이 쪽은 쥐(31)와 토끼(32)둘 다에 있는 수막구균 뇌막염의 모형을 제공하기 위하여 ?...

Neisseria 뇌막염은 인간 호스트에 국한된 그람 음성 β-proteobacterium, 잘 전 세계에 걸쳐 인간 인구에 있는 뇌막염 그리고 패혈증의 일반적인 원인의 한개인 것으로 잘 알려져 있습니다. 그것은 건강하고 무증상 운반대의 상부 호흡기 (코와 목)를 식민지화합니다 (인구의 2-30%), 그러나 박테리아는 때때로 각종 호스트 면역 방어를 회피하고 통제되지 않는 현지를 일으키는 원인이 되는 두뇌에 혈류량에서 퍼집니다 염증, 수막 구균 수막염으로 알려진. 숙주와 세균계수의 조합은 공생에서 침습적행동으로의전환에 기여하는 것으로 보인다 1 .
N. 뇌막염은 인간 식민지화 및 감염에 독점적으로 전문화됩니다. 그것은 좁은 숙주 범위를 가지고 있고, 따라서, 인간 수막구균 질병을 재생하는 적당한 동물 모형의 부족 때문에 생체 내 병인 성 연구에서 제한되었습니다. 그 결과, 수막구균에 의한 패혈증과 뇌막염의 병인에 관한 이해의 근본적인 간격으로 이어졌습니다. 지난 수십 년 동안, 많은 시험관 내 시스템의 발달은 여러 수막 구균 독성 인자2,3,4의식별을 허용했다. 이러한 귀중한 연구는 성공적인 수막 구균 감염을 위한 이 요인의 역할을 이해하기 위하여 중요한 통찰력을 제공했더라도, 이 모형은 체액성 및 세포와 세균성 상호 작용의 결과의 평가를 허용하지 않았습니다 면역 체계와 전체 조직도 적습니다. 감염의 생체 내 동물 모델은 백신 제형에 의해 부여된 보호 정도의 평가뿐만 아니라 큰 관련성을 가지고 있다. 인간 열대 병원체로서, 수막구균은 표면 구조 (즉, 타입 IV 필리 및 불투명도 단백질) 및 인간 수용체 및 수송 단백질을 위한 철 섭취 시스템 (즉, 및 수송 단백질)과 같은 성공적인 감염에 필요한 적절한 결정요인을 가지고 있습니다. transferrin 및 락토페린)5,6,7을 올바르게 부착하고 생존하고 인간 숙주에게 침입합니다. 마지막으로, 인간의 면역 반응을 회피 및/또는 차단하는 병원체의 유전적 변이 능력은 고종 트로피즘8,9에더욱 기여한다. 따라서, 상호 작용에 관여하는 특정 숙주 인자의 부재는 병원체의 수명 주기의 단계를 차단할 수 있으며, 수막 구균 수명 주기를 요약하는 작은 동물 모델의 개발에 상당한 어려움을 확립 할 수 있습니다.
지난 수십 년 동안, 수막구균 전염주기의 우리의 이해를 향상시키기 위하여 몇몇 접근은 개발되었습니다. 두 동물 모델, 마우스와 쥐의 감염, 복강 내 (i.p.) 또는 intranasally (i.n.), 수막 구균 질환을 재현하기 위해 개발되었다10,11,12,13,14 ,15,16,17. 실험실 마우스는 아마 실험적인 수막구균 감염을 유도하기 위한 더 다재다능한 동물의 한개입니다.
그러나, i.p. 감염의 방법은 감염의 자연적인 경로를 모방하지 않더라도 가혹한 패혈증의 발달로 이끌어 냅니다, 반면 감염의 i.n. 경로는 폐 감염을 유도할 수 있더라도 수막구균 병인증을 평가하기 위하여 유용했습니다 패혈증10,11,12, 13,14,15,16,17.
i.p. 마우스 모델은 수막구균 도전10,11,12로부터의보호를 평가하는 데 중요한 역할을 했다. 감염의 i.n. 경로에 기초한 수막구균 식민지화의 마우스 모형은 인간에 있는 수막구균 질병의 과정을 모방하는 침략적인 감염을 재생하기 위하여, 수막구균에 더 영향을 받기 쉽기 때문에, 유아 마우스로 개발되었습니다 13,14,15,16,17. 더욱이, 뮤린 숙주에서 수막구균 복제를 촉진하기 위해, 감염을 개선하기 위해 동물에게 철분 투여, 높은 세균접종의 사용, 마우스-통로 세균성 균주뿐만 아니라 유아 또는 면역 손상된 동물의고용은 10,13,15,18,19. CD4620 또는 트랜스퍼린21과 같은 특정 인간 요인의 발현은 이 인간-열대 박테리아에 대한 마우스의 감수성을 증가시켰습니다. 감염의 인간 피부 이종이식 모델의 고용은 또한 인간내피(22,23)에대한 수막구균의 부착 능력을 평가하는 데 유용하였다. 종합적으로, 인간화형 형질전환 마우스의 최근 발달은 수막구균 병인 및 숙주 상호작용의 이해를 향상시켰다.
이전에는 쥐계세균24를 이용한 성인마우스의 시스터나 마그나로 세균의 접종을 수행한 수막구균 수막염의뮤린 모델을 개발하였다. 임상 적 매개 변수 및 감염된 마우스의 생존율은 인간 숙주에서 볼 수있는 것과 유사한 특성을 가진 뇌막염의 확립뿐만 아니라 뇌의 미생물 및 조직학적 분석을 입증했습니다. 이 감염된 마우스로부터, 박테리아는 또한 혈액, 간 및 비장으로부터 회복되었고, 말초 장기로부터의 세균 부하가 감염성 투여량과 상관되었다. 특히, 이 모델은 L-글루타메이트 수송기GltT 24에서결함이 있는 이소제성 돌연변이균의 독성을 평가하기 위해 사용되었다. 최근, i.cist에 근거를 둔 수막구균 뇌막염의 우리의 마우스 모형을 이용하. 혈청군 C균93/42862,24 및 UDP-N-아세틸루코민 2-에피메라제2-에피메라아제2에 대한 cssA 유전자 인코딩에 결함이 있는 이소제돌연변이결함25를 가진 경로, 우리는 설립시 에피메라제(25)에 노출된 시알산의 역할을 분석하였다. 쥐의 질병.
이 프로토콜에서, 우리는 i.cist에 근거를 둔 실험적인 수막구균 뇌막염을 유도하는 간단한 방법을 기술합니다. Balb/c 성인 마우스에서 감염 경로. 이 방법은 특히 뮤린 숙주에서 수막구균 감염의 특성화뿐만 아니라 야생형 참조 균주 및 동인 성 돌연변이체 사이의 독성의 평가에 유용하다. 감염의 내부 -cisternal 경로는 차례로 뇌척수액 (CSF)에서 세균 복제를 용이하게하고 그 모방 기능을 가진 뇌막염을 유도 하는 시스터나 마그나에 직접 수막 구균의 완전한 전달을 보장 인간에 존재하는2,24,25,26.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,8 Skirted Cryovial With external thread</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>E3090-6222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml Polypropylene Conical Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352070</td>
			<td>30 x 115mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11006-12</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alarm-Thermometer</td>
			<td>TESTO</td>
			<td>9000530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BactoTM Proteose Peptone</td>
			<td>BD</td>
			<td>211693</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Micro Fine syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>320837</td>
			<td>U-100 Insulin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak syringe 1ml 25GA 5/8in</td>
			<td>BD</td>
			<td>300014</td>
			<td>05x16mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak syringe 5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>308062</td>
			<td>07 x 30mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BIOHAZARD AURA B VERTICAL LAMINAR FLOW CABINET</td>
			<td>Bio Air s.c.r.l.</td>
			<td>Aura B3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioPhotometer</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Model #6131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle D</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>D</td>
			<td>Graduated up to:400ml, Total Volume 450ml, 72x72x122mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C150 CO2 Incubator</td>
			<td>Binder</td>
			<td>9040-0078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cage Body Eurostandard Type II</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C</td>
			<td>267x207x140mm, Floor area 370cm2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Petri Dish With Lid</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>150288</td>
			<td>Working Volume: 5mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Microcentrifuge 5415R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cuvetta semi-micro L. Form</td>
			<td>Kartell S.p.A.</td>
			<td>01938-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>di-Potassium hydrogen phosphate trihydrate</td>
			<td>Carlo erba</td>
			<td>471767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>di-Sodium hydrogen phosphate anhydrous ACS-for analysis</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>480141</td>
			<td>g1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diete Standard Certificate</td>
			<td>Mucedola s.r.l.</td>
			<td>4RF21</td>
			<td>Food pellet for animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Hp Tweezers 5 Stainless Steel</td>
			<td>F.S.T. by DUMONT</td>
			<td>AGT5034</td>
			<td>0,10 x 0,06 mm tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Balance</td>
			<td>Gibertini</td>
			<td>EU-C1200</td>
			<td>Max 1200g, d=0,01g, T=-1200g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Microcentrifuge tube safe-lock</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>T3545-1000EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythromycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E-6376</td>
			<td>25g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14084-08</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Top (mini- Isolator), H-Temp with lock clamps</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C400SUC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC agar base</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>CM0367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gillies Forceps 1 x2 teeth</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11028-15</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glicerin RPE</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>453752</td>
			<td>1L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11052-10</td>
			<td>Serrated Tip Width: 0.8mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inner lid</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron dextran solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8517-25ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Intervet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microbiological Safety Cabinet BH-EN and BHG Class II</td>
			<td>Faster</td>
			<td>BH-EN 2004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 1.5ml&#160;</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>PP780751</td>
			<td>screw cap PP, grad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Handling Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11035-20</td>
			<td>Serrated rubber; Gripping surface:15 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucotit-F2000</td>
			<td>MERZ</td>
			<td>61846</td>
			<td>2000ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Natural Latex Gloves</td>
			<td>Medica</td>
			<td>M101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New Brunswick Classic C24 Incubator Shaker</td>
			<td>PBI international</td>
			<td>C-24 Classic Benchtop Incubator Shaker</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri PS Dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>391-0453</td>
			<td>90X14.2MM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman Classic P20</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123600</td>
			<td>2-20microL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman Classic P200</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>20-200microL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman Classim P1000</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123602</td>
			<td>200-1000microL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvitox</td>
			<td>OXOID</td>
			<td>SR0090A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>J.T. Baker Chemicals B.V.</td>
			<td>0208</td>
			<td>250g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Dihydrogen Phosphate</td>
			<td>J.T. Baker Chemicals B.V.</td>
			<td>0240</td>
			<td>1Kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PS Disposible forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>232-0191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Removable Divider</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C812</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-Bottom Polypropylene Tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352063</td>
			<td>5ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>MOLEKULA</td>
			<td>41272436</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SS retainer and Polyester FilterSheet</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>1264C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Pattern Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11000-12</td>
			<td>Stainless</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens Tenotomy Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14066-11</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissor - ToughCut</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14130-17</td>
			<td>Stainless</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Touch N Tuff disposible nitrile gloves</td>
			<td>Ansell</td>
			<td>92-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Low Temperature (ULT) Freezer</td>
			<td>Haier</td>
			<td>DW-86L288</td>
			<td>Volume= 288L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wagner Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14070-12</td>
			<td>Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Intervet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inducing meningococcal meningitis serogroup c in mice via intracisternal delivery

Neisseria 수막염 (meningococcus)는 세균성 뇌막염의 주요 원인으로 세계적으로 인식되는 좁은 호스트 범위 미생물입니다. 수막구균은 건강한 대상체의 약 10%의 인간 비인두의 일시적인 식민지입니다. 특히 상황에서, 그것은 점 막 장벽을 관통 하 고 패 혈 증을 일으키는 혈 류를 침공 하는 침략 능력을 취득. 최신 케이스에서는, 완충 패혈증은 뇌막염의 결과적인 발달 없이조차 생길 수 있었습니다. 반대로, 박테리아는 혈 류에서 제대로 증식 수 있습니다., 혈액 뇌 장벽을 교차, 중앙 신 경계에 도달, 충만 뇌 막염으로 이어지는. 세균성 뇌막염의 murine 모형은 호스트 병원체 상호 작용을 조사하고 이 치명적인 질병에 책임 있는 병원유전적 기계장치를 분석하기 위하여 유용한 공구를 나타냅니다. 비록, 몇몇 실험적인 모형 시스템은 지난 십년간 에 걸쳐 평가되었더라도, 이들 중 어느 것도 수막구균 질병의 특징적인 병리학 적인 사건을 재현할 수 없었습니다. 이 실험 프로토콜에서, 우리는 박테리아의 내성 계발성 접종에 근거를 둔 마우스 모형에 있는 수막구균 뇌막염의 유도를 위한 상세한 절차를 기술합니다. 인간 뇌막염의 특이한 징후는 임상 매개 변수 (예를 들어, 온도, 체중), 생존율 평가, 미생물 학적 분석 및 뇌 손상의 조직 학적 검사의 평가를 통해 뮤린 호스트에 기록되었다. intracisternal를 사용하는 경우 (i.cist.) 접종, 수막 구균은 시스터나마그나로 직접 전달, 뇌 조직에서 매우 효율적인 수막 구균 복제로 이어지는. 박테리아의 실행 가능한 수의 1,000 배 증가는 대략 18 시간에서 관찰됩니다. 더욱이, 수막구균은 또한 감염된 마우스의 비장, 및 간에서 발견되며, 이는 간이 수막구균 복제를 위한 표적 기관을 나타낼 수 있음을 시사한다.

N. 수막염 야생 유형 및 등소생성 돌연변이 균주에 감염된 마우스의 생존. 이러한 대표적인 결과에 사용되는 Neisseria 수막염 균주는 혈청 그룹 C 기준 균주 93/4286 (ET-37) 및 cssA 유전자의 삽입 불활성화에 의해 얻어진 동위 생성 돌연변이 체93/4286ΩcssA, 코딩 상기 UDP-N-아세틸루카민 2-에피메라아제라아제는 캡슐 합성 궤적25에지도한다. 본 뮤?...

Watch this Scientific Journal Video about Inducing Meningococcal Meningitis Serogroup C in Mice via Intracisternal Delivery at JoVE.com

Inducing Meningococcal Meningitis Serogroup C in Mice via Intracisternal Delivery

여기에서, 우리는 성인 마우스에 있는 감염의 내성인종 경로를 통해 수막구균 뇌막염을 유도하는 방법을 기술합니다. 우리는 접종의 준비에서 내질 감염에 수막 구균 감염의 단계 프로토콜에 의해 단계를 제시; 그런 다음 동물의 생존을 기록하고 뮤린 조직에서 세균 부하를 평가합니다.

인트스타스타스테어링 전달을 통해 마우스에서 수막구균 수막염 혈청계S C유도

Neisseria meningitidis (meningococcus) is a narrow-host-range microorganism, globally recognized as the leading cause of bacterial meningitis. ...

Neisseria 뇌막염은 전 세계 인간 인구 중 패혈증과 뇌막염의 일반적인 원인 중 하나이며 박테리아는 인간의 숙주로 제한됩니다. 이 실험 프로토콜에서, 우리는 박테리아의 인종 차별성 접종을 기반으로 마우스 모델에서 수막 구균 수막염의 유도를위한 맞춤형 절차를 설명합니다. 이 뮤린 모델은 심각한 인간 질환으로 수막 구균 수막염의 특징적인 병리학적 사건을 재현했습니다.따라서 숙주 병원체 상호 작용을 평가하고 이 치명적인 질병에 대한 병원체 메커니즘을 분석하는 유용한 도구를 나타냅니다. 감염 모형은 CSF로 박테리아 복제를 직접 방지하기 위하여 혁신적인 치료 전략을 평가하는 것 뿐만 아니라 인간 병원체에 대하여 가능한 수동 면역 요법의 효험을 분석하기 위하여 유용할 수 있었습니다. 이 기술은 인인종 차별성 무접종뿐만 아니라 일반적으로 질병 유도의 성공을 보장하기 위해 훈련 단계가 필요합니다.절차를 시연하는 것은 연구원으로 로버타 콜리치오와 키아라 Pagliuca, 그리고 엘레나 스카글리오네 박사 과정 학생으로, 모두 내 실험실에 의해 될 것입니다. 시작하려면, 신선한 Neisseria 수막염 문화에서 단일 식민지를 선택 고노코칼 한천 판에 1% 폴리비톡 스 보충 및 접종 10 밀리리터 GC 브로스. 수막구치의 사용을 포함하는 모든 절차는 라미나르 흐름 바이오 안전 큐브 캐비닛에서 수행해야합니다.220 RPM에서 궤도 쉐이크 인큐베이터에서 37도에서 박테리아를 성장시키고 분광계로 다른 시점에서 배양의 광학 밀도를 계속 검사합니다. 초기 지수 단계에 해당하는 0.7의 OD600에 도달할 때까지 배양을 성장시다. 이 광학 밀도가 얻어지면 10% 글리세롤을 추가하고 저온 바이알에 배양 1밀리리터를 분배하여 냉동 주식을 만듭니다.사용 전까지 바이알을 섭씨 80도에 보관하십시오. 감염 전에, 실온에서 냉동 박테리아를 해동한 다음 1500xG에서 15 분 동안 원심분리기의 원심분리기 튜브로 옮기고 1킬로그램 철 분당 5 밀리그램을 포함하는 신선한 GC 국물의 1 밀리리터에서 다시 중단하십시오. 실험을 시작하기 전에 동물의 무게를 측정하고 체온을 평가합니다.동물을 목 아래에서 긁어 내고 복부를 70%에탄올로 소독합니다. 감염 전 약 2시간 전에, 25 게이지 바늘을 사용하여 복부의 오른쪽 아래 사분면에 철 드레이펜을 내분비로 주입한다. 동물을 마취 한 후 발가락을 꼬집을 때 통증 반응의 부재를 확인하여 마취의 깊이를 확인하십시오.라미나르 플로우 캐비닛에 마우스를 배치한 후 흉골 디큐비투스에 마우스를 배치하고 팔다리와 자궁경부 척추를 조심스럽게 스트레칭하여 척추 컬럼을 직선 위치로 유지합니다. 일관된 세균 현탁액을 유지하려면 8밀리미터 30 게이지 바늘로 주사기에 적재하기 전에 부드럽게 섞습니다. 70%에탄올로 머리를 소독합니다.동물을 측면 의식으로 놓고 귀를 길에서 꺼내 목을 적당히 구부리면 됩니다. 목과 머리의 중간선이 테이블 상단과 완벽하게 평행한 위치에 있는지 확인합니다. 그런 다음 아틀라스 날개를 터치하여 겹치는지 확인하고 바늘이 후수 구멍에 들어갈 가능성이 가장 높은 미드라인의 자연스러운 들여쓰기를 느낍니다.수막구치 또는 철 제비 균의 확립 된 하위 치명적인 세균 복용량으로 8 밀리 미터 30 게이지 바늘주사사기를 채우는 총 부피로 GC 국물을 10 마이크로 리터로 조절하십시오. 바늘을 사용하여 주사 지점을 식별한 다음 후두 버 구멍을 통해 마우스의 시스테나 마그나에 주사기의 함량을 주입한다. 주사 후 주사기와 바늘을 안전하게 버리십시오.동물을 라미나르 플로우 캐비닛 아래에 케이지에 놓습니다. 프로토콜에 설명된 바와 같이 각성과 완전한 움직임 회복을 기다린 후 감염된 동물의 동물 생존을 진행한다. 마우스를 마취한 후 가슴을 70%에탄올로 소독합니다.25 게이지 바늘을 사용하여 가슴 구멍의 심장 구멍에 의해 혈액의 600 ~ 700 마이크로 리터를 철회합니다. 구연산나트륨 3.8%를 함유한 튜브에서 혈액을 수집하고 나중에 가능한 세균세포 수 평가를 위해 섭씨 80도에 보관한다. 안락사 된 마우스를 supine 위치에 놓습니다.가위와 집게를 사용하여 신체의 처진 평면을 따라 털을 자른다. 핀으로 바디의 측면에 털로 피부를 고정합니다. 날카로운 가위를 사용하여 수막을 차단합니다.그런 다음 가위와 일회용 집게를 사용하면 비장과 간과 같은 장기를 소비하고 각각 10 %의 글리세롤을 보충한 GC 국물의 1 밀리리터로 별도의 멸균 페트리 접시에 넣습니다. 5mm 주사기의 플런저를 사용하여 단일 세포 현탁액이 형성될 때까지 실온에서 약 2 ~3 분 동안 기계적으로 기관을 균질화하고 괴성 냉동 저온 바이알로 옮김합니다. 튜브를 드라이 아이스에 즉시 놓습니다.항생제로 GC 한천 접시를 만들고 2 ~ 3 시간 동안 섭씨 37도에서 사용하기 전에 건조하십시오. 각 균질화 조직에서 GC 국물에 있는 샘플의 10개의 전체 직렬 희석을 준비합니다. GC 한천 접시에 접시를 매고 5 %의 이산화탄소와 섭씨 37도에서 하룻밤 배양.70%에탄올로 안락사 마우스의 머리를 소독합니다. 작은 수술 가위와 미세 한 기울어진 강철 집게를 사용하여, 제거 된 머리의 모피와 피부를 절제한 다음 봉합사를 명확하게보고 두개골의 개구부를 안내하기 위해 두개골 의 상단으로 진행합니다. 두개골을 열려면 포라멘 매그넘을 통해 작은 가위의 끝을 삽입하십시오.두개골의 중심을 향해 정수리 뼈의 중간선을 가로질러 두개골의 반대편으로 자르고 람도이드 봉합사의 측면 사지를 따라 부드럽게 자릅니다. 후방 정수리 코너에서 시작하여 미세 한 포셉을 사용하여 두개골을 들어 올려 뇌를 발견하기 위해 대각선 위로 당겨 두개골이 들어 올릴 때 뇌 조직이 머리의 뼈에 부착되지 않도록합니다. 일회용 집게를 사용하여 두개골과 뇌 사이의 결합 조직을 제거하고 뇌 조직이 건조되는 것을 허용하지 않습니다.일회용 집게를 사용하여 10%의 글리세롤을 보충한 GC 국물의 1밀리리터로 페트리 접시에 뇌를 즉시 배치하십시오. 5 밀리리터 주사기의 플런저를 사용하여 단일 세포 현탁액이 형성될 때까지 실온에서 뇌를 기계적으로 균질화하십시오. 서스펜션을 2 밀리리터 멸균 튜브로 옮기고 나중에 가능한 세균세포 수 평가를 위해 섭씨 80도에 보관한다.93/4286 야생형 또는 cssA 결함이 있는 Neisseria 뇌막염 균주에 감염된 마우스의 생존을 평가하였다. 야생형 균주에 대한 중위 치명적인 투여량은 10-4CFU의 수막구균 챌린지에 해당하였다. 반면 사망률 10 대 5 CFU는 83.4%와 100%와 100%로 10대 5CFU 투여량에 해당하였다.cssA 결함이 있는 돌연변이 균주에 대한 중간 치명적인 용량을 얻기 위해, 10대 8CFU의 투여량이 필요하고 야생형 균주보다 1000배 더 높았다. 주사 후, 뇌 조직에서 야생 형 박테리아의 급속 한 증가 약에서 피크에 도달 24 감염 후 시간. 돌연변이 균주에 감염된 마우스의 뇌에서, 실행 가능한 수는 시간이 지남에 따라 점진적으로 떨어졌다.또한, 돌연변이 감염된 마우스의 33.3%는 야생형 감염된 동물과 달리 감염 부위로부터 세균성 클리어런스를 보였다. 감염 후 48시간 후, cssA 결함이 있는 돌연변이는 비장과 간에서 완전히 지워졌고, 야생형 균주에 감염된 동물은 지속적인 감염을 나타냈다. 설명된 실험 방법은 면역 조직화학, 면역형광, 대뇌 출혈 분석과 같은 병리학적 평가에 의해 이 치명적인 질병과 관련된 뇌 손상을 분석하는 데 유용할 수 있다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

반대 미리 정의된 T 세포 수용체 Specificities와 Transnuclear 쥐 Toxoplasma gondii SCNT 비아 획득

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

연구

면역학 및 감염병학

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

V3의 HIV - 1 Tropism의 Genotypic 추론 사용 인구를 기반 시퀀싱

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

배아 마우스에 Vasculature을 라벨링하는 방법

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

경구 전송<em&gt; 리스테리아</em&gt; 오염 된 음식의 섭취를 통해 마우스의

L. monocytogenes are facultative intracellular bacterial pathogens that cause food borne infections in humans. Very little is known about the ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

신생아와 성인 중추 신경계에서 배양 소교 세포

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; 높은</sup&gt; 면역 결핍 마우스에게 T 세포

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

안<em&gt; 체외에서</em&gt; 결핵 병변에서 약물 침투를 예측하는 Caseum Binding Assay

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

마우스 감염 모델에서 뇌 막 염에 구 이렇게 뵙 Biofilms의 조사 역할에 대 한 감염 intracranial Subarachnoidal 경로

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

Quantitative PCR of T7 Bacteriophage from Biopanning

Biopanning에서 t 7 살 균 소의 양이 많은 PCR

This protocol describes the use of quantitative PCR (qPCR) to enumerate T7 phages from phage selection experiments (i.e., &#34;biopanning&#34;). qPCR is a ...

Probiotic Studies in Neonatal Mice Using Gavage

Gavage를 사용 하 여 신생아 쥐에 있는 Probiotic 연구

Adult mouse models have been widely used to understand the mechanism behind disease progression in humans. The applicability of studies done in adult ...