Name: adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice
Uploaded: 2020-01-31T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice at JoVE.com

Notre étude a été soutenue par la National Natural Science Foundation of China (NSFC) (81771755), les collèges et le projet de recherche scientifique et technologique de la province du Hebei (ZD2017009) et le Animal Lab of Medical Experiment Center de l'Université Hebei. Nous leur sommes reconnaissants de leur soutien.

Toutes les souris expérimentales (150 au total) étaient des souris mâles en bonne santé DBA/1, âgées de 6 à 8 semaines (20,0 à 1,5 g), dans un environnement spécifique exempt d'agents pathogènes (FPS). Il n'y a pas de traitement spécial avant la modélisation. L'expérience a été divisée en un groupe témoin sain (15 souris), un groupe témoin modèle (15 souris) et un groupe de thérapie cellulaire (55 souris). Cette étude a été approuvée par le Comité du bien-être animal et de l'éthique de l'Univer...

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	<li>Tob&#243;n, G. J., Youinou, P., Saraux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+environment,+geo-epidemiology,+and+autoimmune+disease:+Rheumatoid+arthritis.">The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis.</a> Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0 (2010).</li><li>Cross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+rheumatoid+arthritis:+estimates+from+the+Global+Burden+of+Disease+2010+study.">The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).</li><li>Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queir&#243;z Cunha, F. D., Ulloa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+neuroimunomodulation+to+bioelectronic+treatment+of+rheumatoid+arthritis.">From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis.</a> Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).</li><li>Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cells:+an+innate+activation+scheme+linked+to+diverse+effector+functions.">Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).</li><li>Bianca, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+Natural+Killer+T-Cells+Development.">Unraveling Natural Killer T-Cells Development.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1950 (2018).</li><li>Mitsuo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+CD161+CD8++T+cells+in+the+peripheral+blood+of+patients+suffering+from+rheumatic+diseases.">Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases.</a> Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).</li><li>Miellot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+invariant+NK+T+cells+protects+against+experimental+rheumatoid+arthritis+by+an+IL-10-dependent+pathway.">Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway.</a> European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).</li><li>Miellot-Gafsou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+activation+of+invariant+natural+killer+T+cells+in+a+rheumatoid+arthritis+model+and+application+to+disease+treatment.">Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment.</a> Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+on+immunoregulation+of+iNKT+cells+in+RA+by+novel+synthetic+immunostimulator+CH1b.">Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b.</a> Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+correlation+between+the+percentage+of+iNKT+cells+and+the+ratio+of+IFN-&#947;/IL-4+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-&#947;/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis.</a> Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).</li><li>Sharif, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+natural+killer+T+cells+by+&#945;-galactosylceramide+treatment+prevents+the+onset+and+recurrence+of+autoimmune+Type+1+diabetes.">Activation of natural killer T cells by &#945;-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes.</a> Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).</li><li>Gapin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+invariant+natural+killer+T+cells.">Development of invariant natural killer T cells.</a> Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).</li><li>Kwon, D. I., Lee, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Differentiation+Program+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells.">Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells.</a> Immune Network. 17 (6), (2017).</li><li>Thapa, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+differentiation+of+ROR-&#947;t+expressing+iNKT17+cells+is+orchestrated+by+Runx1.">The differentiation of ROR-&#947;t expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7018 (2017).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focuson+interferon-&#947;.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-&#947;.</a> Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).</li><li>Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+cost-effectiveness+A+systematic+review+and+stepwise+approach+for+selecting+a+transferable+health+economic+evaluation+rheumatoid+arthritis.">How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis.</a> Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).</li><li>Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+T+cell-dependent+peripheral+polyarthritis+in+genetically+unaltered+mice.">Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice.</a> Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).</li><li>Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+B-cell-dependent+chronic+arthritis+with+glucose-6-phosphate+isomerase.">Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).</li><li>Kamradt, T., Schubert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+and+clinical+implications+of+G6PI+in+experimental+models+of+rheumatoid+arthritis.">The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).</li><li>Horikoshi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Invariant+NKT+Cells+with+Glycolipid+Ligand+&#945;-Galactosylceramide+Ameliorates+Glucose-6-Phosphate+Isomerase+Peptide-Induced+Arthritis.">Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand &#945;-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis.</a> PlosOne. 7 (12), 51215 (2012).</li><li>Zhang, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+mixed+peptides+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+rheumatoid+arthritis+in+DBA+/1+mice.">Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice.</a> Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).</li><li>Motohashi, S., Nakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cell-based+immunotherapy+for+cancer.">Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer.</a> Immunotherapy. 1 (1), 73 (2017).</li><li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+requirement+of+natural+killer+T-cells+in+tolerogenic+APCs-mediated+suppression+of+collagen-induced+arthritis.">The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis.</a> Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).</li><li>Luc, V. K., Lan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+Potential+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells+in+Autoimmunity.">Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity.</a> Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).</li><li>Chiba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+collagen-induced+arthritis+by+natural+killer+T+cell+activation+with+OCH,+a+sphingosine-truncated+analog+of+&#945;-galactosylceramide.">Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of &#945;-galactosylceramide.</a> Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Bruns, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+an+immunodominant+self-peptide+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+arthritis+in+DBA/1+mice.">Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice.</a> Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).</li><li>Parietti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rituximab+treatment+overcomes+reduction+of+regulatory+iNKT+cells+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis.</a> Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).</li><li>Yoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+mechanism(s)+of+the+inhibition+of+disease+progression+by+combination+treatment+with+fingolimod+plus+pathogenic+antigen+in+a+glucose-6-phosphate+isomerase+peptide-induced+arthritis+mouse+model.">Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model.</a> Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+adoptive+immunotherapy+on+rheumatoid+arthritis+with+Thymus-derived+invariant+natural+killer+T+cells.">Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells.</a> International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).</li></ol>

Les cellules iNKT sont des lymphocytes T spéciaux qui comblent l'immunité innée et adaptative et sont principalement développés à partir de CD4etde thymocytes CD8. Les cellules iNKT ont diverses fonctions immunorégulatrices et interagissent avec d'autres cellules immunitaires par contact direct et sécrétion de différentes cytokines23, affectant les cellules dendritiques (DC), les macrophages, les neutrophiles, les cellules B, les lymphocytes ...

La polyarthrite rhumatoïde (PR) est une maladie auto-immune caractérisée par une invasivité chronique et progressive avec une incidence de 0,5 à 1 %1,2. La pathogénie sous-jacente est attribuée à la prolifération anormale des cellules CD4 et CD8 et T autoréactives, qui se manifeste par une augmentation de la proportion de CD4, IFNet CD4, IL-17A, et par la réduction du nombre de cD4, il il-4 et CD4, CD25, FoxP3et T. Par conséquent, la sécrétion des cytokines inflammatoires est augmentée, et une réaction inflammatoire excessive détruit l'équilibre indigène et la fonction de tolérance du système immunitaire du corps. En outre, le lymphocyte T aide (Th) 1 cellules qui pénètrent dans l'articulation aggravent la réponse inflammatoire et les dommages articulaires. Par conséquent, l'inhibition de la réponse inflammatoire excessive et le rétablissement de la tolérance immunitaire et l'équilibre immunitaire sont essentiels au traitement de la RA3,4.
Les cellules iNKT ont à la fois des fonctions et des caractéristiques des cellules NK et des lymphocytes T. Les cellules iNKT abritent un récepteur de cellules T (TCR) distinct et invariant avec des répertoires limités de chaîne TCR5 et reconnaissent l'antigène glycolipidique présenté par la molécule majeure de classe I du complexe d'histocompatibilité (MHC) CD1d à la surface des cellules présentant des antigènes. Mitsuo et coll.6 ont détecté un grand nombre de cellules iNKT et de défauts fonctionnels dans de nombreuses maladies auto-immunes, y compris la polyarthrite rhumatoïde. Aurore et coll.7 ont démontré que les cellules iNKT ont un effet positif sur le maintien de la tolérance auto-immune et que lorsque le nombre et la fonction des cellules iNKT sont restaurés, la maladie est atténuée. En outre, Miellot-Gafsou et coll.8 ont constaté que les cellules iNKT non seulement abrogé la maladie, mais aussi augmenté la progression de la maladie. Ces résultats contradictoires suggèrent que les cellules iNKT sont des lymphocytes T hétérogènes, et la fonction de différents sous-ensembles peut être inversée. Dans une étude clinique de la POLY, la fréquence des cellules iNKT corrélée avec le score de l'activité de la maladie9. Les résultats ont également confirmé que la fréquence de l'iNKT a été diminuée chez les patients atteints de polyarthrite rhumatoïde, que le nombre de sous-ensembles de cellulesT CD4et IFN a augmenté, et que les niveaux sécréteurs de cytokines inflammatoires IFN et TNF-MD ont augmenté de10,11. En outre, Sharif et coll.12 ont étudié le diabète de type 1 (T1D) et ont constaté que l'infusion sélective de cellules iNKT régulait l'expression de la cytokine inflammatoire IL-4, maintenait la tolérance immunitaire et empêchait le développement du diabète de type 1. Par conséquent, l'infusion adoptive de cellules spécifiques d'iNKT ou l'activation ciblée des cellules d'iNKT augmente le niveau des cellules d'iNKT dans les patients de RA, qui peut être une percée dans le traitement de RA.
L'immunothérapie cellulaire est actuellement d'un grand intérêt et a été largement utilisé dans la thérapie contre le cancer. Cependant, les cellules iNKT sont rares, les cellules immunorégulatrices hétérogènes (seulement 0,3% du nombre total de PBMC)13, ce qui limite les applications cliniques potentielles. Ces cellules sont principalement divisées en trois sous-populations : 1) les cellules iNKT1, qui ont une forte expression de la leucémie promyélolocytique de la protéine zinc-doigt (PLZF) et du facteur de transcription de la boîte T (T-bet); 2) cellules iNKT2 avec expression intermédiaire de PLZF et gatA protéine de liaison 3 (GATA3); 3) cellules iNKT17 avec une faible expression de PLZF et rétinoïde-connexe récepteur nucléaire orphelin (ROR)-t qui sécrètent IFN-, IL-4, et IL-1714. Les cellules iNKT activées sécrètent des cytokines de type Th1, Th2 et Th17, qui déterminent les différents effets immunomodulatoires des cellules iNKT15. Les effets immunomodulatoires et immunothérapeutiques de l'activation spécifique de diverses sous-populations de cellules iNKT sont différents. Par conséquent, la sélection de phénotypes spécifiques de cellules iNKT (principalement iNKT2) avec des fonctions anti-inflammatoires pour réguler la réponse immunitaire de l'organisme peut corriger le déséquilibre immunitaire et les troubles immunitaires dans la PR.
L'établissement d'un modèle animal idéal est d'une grande importance pour le traitement et l'étude de la pathogénie de RA. À l'heure actuelle, les modèles animaux les plus couramment utilisés et matures comprennent l'arthrite induite par le collagène, l'arthrite adjuvante, l'arthrite induite par les zymosans et l'arthrite induite par le polysaccharide16à17. Cependant, il n'existe aucun modèle qui puisse simuler pleinement toutes les caractéristiques de la POLY humaine. L'arthrite induite par le collagène de type II (CIA) est un modèle classique de l'arthrite. La CIA est induite par la vaccination des souris avec des anticorps monoclonaux de type II spécifiques au collagène, reflétant la dépendance d'anticorps de ce modèle de maladie. Benurs et coll. ont décrit un modèle avec une réponse immunitaire systémique à l'isomérase glucose-6-phosphate (G6PI), qui induit la polyarthrite symétrique périphérique dans les souches sensibles de souris18,19. Dans ce modèle, le développement de l'arthrite dépend des lymphocytes T, des cellules B et de l'immunité innée18,19,20. Horikoshi21 a constaté que les modèles de RA résultant de la vaccination des souris DBA/1 avec des fragments de polypeptide G6PI sont plus semblables à la RA humaine en termes de CD4- lymphocytes T et cytokines (c.-à-d., IL-6 et TNF-) que les modèles de la CIA. Afin d'augmenter l'effet stimulant sur le site de reconnaissance TCR, les fragments mixtes de polypeptide de G6PI (hGPI325-339 et hGPI469-483) ont été utilisés pour immuniser les souris DBA/1 pour construire le modèle de souris RA. Le taux de réussite de cette approche peut être élevé parce que hGPI325-339 et hGPI469-483 sont immunodominants pour les réponses de lymphocytes T I-A q-restricted. Par conséquent, ce modèle peut simuler la surprolifération des cellules CD4t et des défauts de cellules iNKT chez les patients atteints de POLY22. La recherche fondamentale de l'immunopathologie de RA a jeté les bases de notre recherche plus approfondie.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZF</td>
			<td>BD</td>
			<td>563490</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PE MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-048-801</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Columns</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>MS</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Allegra&#174; X-15R</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiR</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D12731</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Center</td>
			<td>Tianjin Aviation Electromechanical Co., Ltd.</td>
			<td>BMJ-1</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Hamster Anti-Mouse TCR &#946; Chain</td>
			<td>BD</td>
			<td>553170</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>Accuri C6</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freund&#39;s complete adjuvant</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5881</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062202</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062203</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>caliper IVIS lumina II</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin Calcium</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10004974</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KRN7000</td>
			<td>AdipoGen</td>
			<td>AG-CN2-0013</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse CD1d Tetramer-PE</td>
			<td>MBL</td>
			<td>TS-MCD-1</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse percoll</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P8620</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Olympus-II</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-ROR-&#978;t</td>
			<td>BD</td>
			<td>562683</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-T-bet</td>
			<td>BD</td>
			<td>561316</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis toxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7208</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phorbol esters</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10008014</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis Buffer</td>
			<td>BD</td>
			<td>555899</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-100-1ACS</td>
			<td>Israel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Th1/Th2/Th17 cytokines kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>560485</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica EM UC6</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice

La polyarthrite rhumatoïde (PR) est une maladie auto-immune inflammatoire chronique complexe. La pathogénie de la maladie est liée aux cellules tueuses naturelles invariantes De T (iNKT). Les patients présentant la RA active présentent moins de cellules iNKT, fonction cellulaire défectueuse, et polarisation excessive de Th1. Dans cette étude, un modèle animal de RA a été établi utilisant un mélange de hGPI325-339 et de peptides de hGPI469-483. Les cellules d'iNKT ont été obtenues par induction in vivo et purification in vitro, suivies de l'infusion dans des souris de RA pour l'immunothérapie adoptive. Le suivi du système d'imagerie in vivo (IVIS) a révélé que les cellules iNKT étaient principalement distribuées dans la rate et le foie. Le jour 12 après la thérapie cellulaire, la progression de la maladie a ralenti de manière significative, les symptômes cliniques ont été allégés, l'abondance des cellules iNKT dans le thymus a augmenté, la proportion d'iNKT1 dans le thymus a diminué, et les niveaux de TNF-, IFN-, et IL-6 dans le sérum a diminué. L'immunothérapie adoptive des cellules iNKT a rétabli l'équilibre des cellules immunitaires et a corrigé l'inflammation excessive du corps.

Le score de l'indice d'arthrite et l'épaisseur de la patte ont augmenté après la modélisation. Comparé au groupe témoin, les orteils du groupe modèle de RA ont commencé à montrer le gonflement rouge à 6 jours après modélisation, avec l'aggravation progressive. À 14 jours, l'enflure rouge dans l'articulation de cheville a culminé, suivie du soulagement progressif. L'épaisseur de la patte a changé de la même façon(P et lt; 0,05) (Figure 1).
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Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

Ce protocole utilise des peptides mixtes G6PI pour construire des modèles de polyarthrite rhumatoïde qui sont plus proches de celui de la polyarthrite rhumatoïde humaine dans les cellulesT CD4 et cytokines. Des lymphocytes T tueurs naturels invariants de haute pureté (principalement iNKT2) avec des phénotypes et des fonctions spécifiques ont été obtenus par induction in vivo et purification in vitro pour l'immunothérapie adoptive.

Immunothérapie adoptive des cellules iNKT dans les souris de RA induites par l'isomérase de glucose-6-Phosphate (G6PI)

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Notre protocole décrit une méthode pour construire un modèle RA. Son taux de réussite est de plus de 93 pour cent et sa pathogénie dépend des cellules T, des cellules B et de l’immunité innée, ce qui permet aux chercheurs de mieux étudier la pathogénie de la PR d’un point de vue immunitaire mondial. Ensuite, nous utilisons des cellules INKT avec des effets immunomodulateurs pour leur traitement.Les cellules INKT ont un bon effet sur le traitement par introduction in vivo qui fournissent un soutien de base des données pour l’application clinique des cellules INKT et explose vraiment la valeur d’application clinique des cellules INKT. Le plus grand avantage de cette technologie est qu’elle est simple à utiliser et facile à copier. Chen Shengde, Gao Xiang et Zhang Jingnan, étudiants diplômés de mon laboratoire, feront la démonstration de la procédure.Pour commencer, pesez 1,75 milligramme de HGPI325 à 339 et HGPI469 à 483 fragments et dissolvez-les en 5,25 millilitres de 4 degrés Celsius triple eau distillée. Dissoudre l’Adjuvant de Freund complet dans un bain d’eau de 50 degrés Celsius. Dessinez 5,25 millilitres dans un autre tube de centrifugeuse de 10 millilitres et refroidissez-le pour utilisation.Mettez le mélange de solution HG6PI et de solution Adjuvant de Complete Freund dans une unité d’émulsification artificielle avec deux seringues en verre, connectées. Dans un bain de glace, poussez la seringue à une vitesse et une fréquence constantes de dix à vingt fois par minute pour émulsionner complètement la solution peptidique du mélange et compléter la solution Adjuvant de Freund. Ensuite, gardez les gouttelettes d’émulsion dans l’eau pendant dix minutes.Ensuite, injectez 150 microlitres des HG6PI émulsifiés dans la racine de la queue de la souris sous-cutanée. Immédiatement et après 48 heures, injecter 200 milligrammes de toxine de coqueluche dans la souris intraperineally. Maintenant, injectez la souris normale DBA1 intraperineally sans le gausser à la posologie de 0.1 milligrammes par kilogramme de poids corporel.Trois jours après la modélisation, après anesthésie, isoler la rate de la souris. Préparer une suspension à cellule unique en coupant et en broyant la rate dans un tamis de 200 mailles. Laver la suspension cellulaire avec PBS.Centrifugeuse à 200 fois g pendant cinq minutes et jeter le supernatant. Suspendre à nouveau les cellules avec un millilitre de solution de tissu sanguin entier. Ajouter trois millilitres de milieu de séparation des lymphocytes de souris.Et puis centrifuger les cellules pendant 20 minutes à 300 fois g à température ambiante. Pour purifier les cellules INKT, résuspendez 10 à la septième cellule avec 100 microlitres de quatre degrés Celsius PBS, ajoutez 10 microlitres d’alpha gausser chargé cd1 tetramer PE et les incuber à 4 degrés Celsius pendant quinze minutes dans l’obscurité. Lavez les cellules deux fois avec PBS et résuspendez-les dans 80 microlitres de PBS.Ajouter 20 microlitres de microbilles anti-PE et les incuber à quatre degrés Celsius pendant vingt minutes dans l’obscurité. Lavez-les deux fois avec PBS et résuspendez les cellules avec 500 microlitres de PBS. Placez la colonne de tri dans le champ magnétique du trieur MACS et rincez avec 500 microlitres de PBS.Ajouter la suspension cellulaire préparée à la colonne de tri, recueillir le flux à travers, et rincer trois fois avec tampon PBS. Retirez le champ magnétique et ajoutez un millilitre de tampon PBS à la colonne de tri. Poussez rapidement le piston à une pression constante pour conduire les cellules étiquetées dans le tube de collecte.Et obtenir les cellules INKT purifiées. Comptez avec un compteur de cellules automatisé. Pour identifier le phénotype cellulaire INKT, d’abord, prendre une fois dix à la sixième cellule des cellules INKT purifiées et les résuspendre dans 50 microlitres de PBS.Ajoutez 0,5 microlitres de tétramer CD1 ALPHA gausser PE, ou 10 microlitres de bêta TCR FITC dans le tube de contrôle positif unique. Ajouter 0,5 microlitres de tétramer ALPHA gausser PE CD1, Ajouter 10 microlitres de bêta FITC TCR dans le tube de l’échantillon. Incubez-les à quatre degrés Celsius pendant trente minutes dans le noir.Après cela, laver les cellules dans PBS, puis centrifugeuse à 200 fois g pendant cinq minutes. Jetez le supernatant et ajoutez un millilitre de solution de travail de permeabilisation de fixation FoxP3. Et incuber les cellules pendant 45 minutes à quatre degrés Celsius dans l’obscurité.Ensuite, ajoutez un millilitre de solution de travail de 1x permeabilization et centrifugez les cellules à 500 fois g à température ambiante pendant cinq minutes. Jeter le surnatant. Ajouter un microlitre d’AlexaFluor 647 souris anti-PLZF et un microlitre de PerCP Cy5.5 souris anti-Tbet et incuber pendant trente minutes à température ambiante dans l’obscurité.Ensuite, ajoutez deux microlitres de solution de travail tampon de perméabilisation et centrifugeuse à 200 fois g pendant cinq minutes pour le nettoyage. Jeter le surnatant. Resuspendez les cellules en 500 microlitres de PBS et mesurez par cytométrie d’écoulement.Dans cette étude, comparée au groupe témoin, les bouts du groupe modèle de RA ont commencé à montrer le gonflement rouge après modélisation avec l’aggravation graduelle. À 14 jours, l’enflure rouge dans l’articulation de la cheville a culminé suivie d’un soulagement graduel. Les résultats pathologiques montrent que le degré d’infiltration des cellules inflammatoires dans le tissu synovial de cheville des souris modèles de RA était différent à différents stades.L’inflammation maximale s’est produite le jour 14 après modélisation. Dans le groupe modèle de RA, les niveaux de sérum des cytokines pro-inflammatoires ont sensiblement augmenté 11 jours et 14 jours après modélisation. Tandis que les cytokines anti-inflammatoires ont sensiblement diminué.Ce chiffre montre que le taux d’INKT2 chez les souris normales était d’environ cinq pour cent. Le taux d’INK2 était d’environ 82 pour cent après induction in vivo. Le taux d’INK2 était de plus de 92 pour cent après la purification du MACS.Ici, nous montrons une méthode pour émulsionner le polypeptide majeur que nous voyons dans ra. Les gouttelettes émulsionnifiées sont conservées dans l’eau pendant 10 minutes. Les résultats se dispersent. Ce protocole est un nouvel add-on pour le traitement des cellules NKT spéciales soulevées par la PR.Qui peut être appliqué vers l’immunothérapie cellulaire ou d’autres maladies auto-immunes et les tumeurs. Ce modèle peut stimuler la prolifération globale des lymphocytes T CD4 et des déficits des cellules NKT chez les patients atteints de PR, ce qui pose les bases d’une étude approfondie des voies immunitaires de la PR. Dans ce protocole, la toxine de coqueluche est injectée l’interperitoneally pendant la modélisation.S’il vous plaît porter des vêtements expérimentaux et des gants jetables. Et porter toutes les normes de fonctionnement afin de prévenir les blessures au couteau une infection.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Métastases expérimentales et CTL Modèle adoptifs souris Transfert immunothérapie

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Recherche

Immunologie et infection

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

Préparation de la tumeur cellules dendritiques matures antigène chargées pour l&#39;immunothérapie

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

Accélération de diabète de type 1 chez la souris par induction transfert adoptif de lymphocytes CD4 + T Cells diabétogéniques

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Intralymphatique Immunothérapie et vaccination chez la souris

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

Évaluer le développement de cellules murines dendritiques plasmacytoïdes dans les plaques de Peyer Utiliser le transfert adoptif de progéniteurs hématopoïétiques

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

Generation of CAR T Cells for Adoptive Therapy in the Context of Glioblastoma Standard of Care

Génération de la RCA cellules T pour la thérapie adoptive dans le contexte de glioblastome norme de diligence

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction de murin inflammation intestinale par transfert adoptif de effecteur CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Haute</sup&gt; T cellules dans des souris immunodéficientes

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induction de paralysie et de lésion du système visuel chez la souris par le particulier de cellules T pour Neuromyélite optique autoantigènes Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Génération de discriminatif anticorps monoclonaux humains de cellules rares spécifiques de l’antigène B circulant dans le sang

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

Stéréotaxique transfert adoptif de cellules immunitaires cytotoxiques dans des modèles murins de xénogreffes de glioblastome Multiforme Orthotopic homme

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...