Name: adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice
Uploaded: 2020-01-31T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice at JoVE.com

המחקר שלנו היה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NSFC) (81771755), מכללות והמדע של האוניברסיטה וטכנולוגיה מפתח מחקר הפרויקט של מחוז חביי (ZD2017009) ואת המעבדה לבעלי חיים של ניסוי רפואי מרכז, אוניברסיטת חביי. . אנו אסירי תודה על תמיכתם

כל העכברים הניסיוניים (150 בסך הכל) היו גברים בריאים DBA/1 עכברים, 6 – 8 בן שבועות (20.0 ± 1.5 g), גדל בסביבה מסוימת ללא הפתוגן (SPF). אין טיפול מיוחד לפני דוגמנות. הניסוי התחלק לקבוצת שליטה בריאה (15 עכברים), קבוצת בקרת מודל (15 עכברים) וקבוצת טיפול בתאים (55 עכברים). מחקר זה אושר על ידי רווחה בעלי חיים והוועדה...

<ol>
	<li>Tob&#243;n, G. J., Youinou, P., Saraux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+environment,+geo-epidemiology,+and+autoimmune+disease:+Rheumatoid+arthritis.">The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis.</a> Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0 (2010).</li><li>Cross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+rheumatoid+arthritis:+estimates+from+the+Global+Burden+of+Disease+2010+study.">The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).</li><li>Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queir&#243;z Cunha, F. D., Ulloa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+neuroimunomodulation+to+bioelectronic+treatment+of+rheumatoid+arthritis.">From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis.</a> Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).</li><li>Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cells:+an+innate+activation+scheme+linked+to+diverse+effector+functions.">Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).</li><li>Bianca, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+Natural+Killer+T-Cells+Development.">Unraveling Natural Killer T-Cells Development.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1950 (2018).</li><li>Mitsuo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+CD161+CD8++T+cells+in+the+peripheral+blood+of+patients+suffering+from+rheumatic+diseases.">Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases.</a> Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).</li><li>Miellot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+invariant+NK+T+cells+protects+against+experimental+rheumatoid+arthritis+by+an+IL-10-dependent+pathway.">Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway.</a> European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).</li><li>Miellot-Gafsou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+activation+of+invariant+natural+killer+T+cells+in+a+rheumatoid+arthritis+model+and+application+to+disease+treatment.">Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment.</a> Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+on+immunoregulation+of+iNKT+cells+in+RA+by+novel+synthetic+immunostimulator+CH1b.">Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b.</a> Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+correlation+between+the+percentage+of+iNKT+cells+and+the+ratio+of+IFN-&#947;/IL-4+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-&#947;/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis.</a> Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).</li><li>Sharif, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+natural+killer+T+cells+by+&#945;-galactosylceramide+treatment+prevents+the+onset+and+recurrence+of+autoimmune+Type+1+diabetes.">Activation of natural killer T cells by &#945;-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes.</a> Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).</li><li>Gapin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+invariant+natural+killer+T+cells.">Development of invariant natural killer T cells.</a> Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).</li><li>Kwon, D. I., Lee, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Differentiation+Program+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells.">Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells.</a> Immune Network. 17 (6), (2017).</li><li>Thapa, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+differentiation+of+ROR-&#947;t+expressing+iNKT17+cells+is+orchestrated+by+Runx1.">The differentiation of ROR-&#947;t expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7018 (2017).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focuson+interferon-&#947;.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-&#947;.</a> Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).</li><li>Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+cost-effectiveness+A+systematic+review+and+stepwise+approach+for+selecting+a+transferable+health+economic+evaluation+rheumatoid+arthritis.">How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis.</a> Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).</li><li>Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+T+cell-dependent+peripheral+polyarthritis+in+genetically+unaltered+mice.">Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice.</a> Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).</li><li>Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+B-cell-dependent+chronic+arthritis+with+glucose-6-phosphate+isomerase.">Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).</li><li>Kamradt, T., Schubert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+and+clinical+implications+of+G6PI+in+experimental+models+of+rheumatoid+arthritis.">The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).</li><li>Horikoshi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Invariant+NKT+Cells+with+Glycolipid+Ligand+&#945;-Galactosylceramide+Ameliorates+Glucose-6-Phosphate+Isomerase+Peptide-Induced+Arthritis.">Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand &#945;-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis.</a> PlosOne. 7 (12), 51215 (2012).</li><li>Zhang, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+mixed+peptides+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+rheumatoid+arthritis+in+DBA+/1+mice.">Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice.</a> Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).</li><li>Motohashi, S., Nakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cell-based+immunotherapy+for+cancer.">Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer.</a> Immunotherapy. 1 (1), 73 (2017).</li><li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+requirement+of+natural+killer+T-cells+in+tolerogenic+APCs-mediated+suppression+of+collagen-induced+arthritis.">The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis.</a> Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).</li><li>Luc, V. K., Lan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+Potential+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells+in+Autoimmunity.">Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity.</a> Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).</li><li>Chiba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+collagen-induced+arthritis+by+natural+killer+T+cell+activation+with+OCH,+a+sphingosine-truncated+analog+of+&#945;-galactosylceramide.">Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of &#945;-galactosylceramide.</a> Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Bruns, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+an+immunodominant+self-peptide+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+arthritis+in+DBA/1+mice.">Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice.</a> Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).</li><li>Parietti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rituximab+treatment+overcomes+reduction+of+regulatory+iNKT+cells+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis.</a> Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).</li><li>Yoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+mechanism(s)+of+the+inhibition+of+disease+progression+by+combination+treatment+with+fingolimod+plus+pathogenic+antigen+in+a+glucose-6-phosphate+isomerase+peptide-induced+arthritis+mouse+model.">Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model.</a> Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+adoptive+immunotherapy+on+rheumatoid+arthritis+with+Thymus-derived+invariant+natural+killer+T+cells.">Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells.</a> International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).</li></ol>

תאים iNKT הם תאי T מיוחדים המגשרים חסינות מולדת ואדפטיבית מפותחים בעיקר מ CD4+/cd8+ thymocytes. תאים iNKT יש פונקציות immunoregulatory מגוונת אינטראקציה עם תאים חיסוניים אחרים על ידי מגע ישיר הפרשת ציטוקינים שונים23, המשפיעים על תאים דנדריטים (DCs), מקרופאגים, נויטרופילים, B ת...

דלקת מפרקים שגרונית (RA) היא מחלה אוטואימונית מאופיין על ידי כרונית, החלטיות מתקדמת עם 0.5 – 1%השכיחות 1,2. הפתוגנזה הבסיסית מיוחסת התפשטות נורמלית של התאים האוטומטיים CD4+ ו CD8+ T, המתבטאת בגידול ביחס של CD4+IFN-γ+ ו CD4+il-17a+ T תאים, ואת מספר מופחת של CD4+il-4+ ו CD4+CD25 + FoxP3 + T תאים. לכן, הפרשת ציטוקינים דלקתיים מוגברת, ותגובה דלקתית מוגזמת הורסת את האיזון הטבעי ואת תפקוד הסובלנות של המערכת החיסונית של הגוף. יתר על כן, המסייע T לימפוציטים (Th) 1 תאים החודרים המפרק להחמיר את התגובה הדלקתית נזק משותף. לכן, עיכוב של תגובה דלקתית מוגזמת ושחזור של סובלנות החיסונית ואיזון החיסון הם המפתח לטיפול RA3,4.
התאים iNKT יש גם תא NK ו-T פונקציות תא ומאפיינים. התאים iNKT הנמל ברורים, קולטן תא T קבוע (TCR) α-שרשרת עם מוגבל TCR β-שרשרת repertoires5 ולהכיר את האנטיגן גליקולפיד הציג על ידי מורכבות מורכבת היסטולידית העיקריים (mhc) מולקולה cd1d ו על פני השטח של תאים אנטיגן הצגת. מיצ ואח '6 זיהה מספר גדול של תאים inkt ופגמים פונקציונליים במחלות אוטואימוניות רבות, כולל RA. Aurore ואח '7 הפגינו כי תאים inkt יש השפעה חיובית על שמירה על סובלנות אוטואימונית וכי כאשר מספר ותפקוד של תאים inkt משוחזרים, המחלה היא להקלה. בנוסף, Miellot-גסו ואח '8 נמצא כי תאים inkt לא רק abרוזין את המחלה אלא גם הגביר את ההתקדמות של המחלה. אלה התוצאות סותרות מראים כי תאים iNKT הם תאים T הטרוגנית, ואת הפונקציה של קבוצות מערכות שונות יכול להיות הפוך. במחקר קליני של RA, תדירות של תאים iNKT בקורלציה עם התוצאה של פעילות המחלה9. התוצאות אישרו גם כי התדירות של inkt הצטמצמה בחולים RA, מספר CD4+ifn-γ+ תא מערכות המשנה של התא גדל, ואת רמות הסוד של ציטוקינים דלקתיות ifn-γ ו-tnf-α גדל10,11. בנוסף, שריף ואח '12 חקר סוכרת סוג 1 (T1D) ומצא כי עירוי סלקטיבי של תאים inkt upregulated את הביטוי של cy, דלקתיות IL-4, מתוחזק סובלנות החיסונית, ומנעו את ההתפתחות של סוכרת מסוג 1. לכן, עירוי המאמצת של תאים מסוימים iNKT או הפעלה ממוקדת של תאים iNKT מגביר את רמת התאים iNKT בחולים RA, אשר יכול להיות פריצת דרך בטיפול RA.
חיסוני הסלולר הוא כעת עניין רב והיה בשימוש נרחב בטיפול בסרטן. עם זאת, תאים iNKT הם נדירים, הטרוגנית החיסונית תאים (רק 0.3% מהמספר הכולל של PBMCs)13, אשר מגביל יישומים קליניים פוטנציאליים. תאים אלה מחולקים בעיקר לשלוש אוכלוסיות משנה: 1) iNKT1 תאים, אשר יש ביטוי גבוה של פרוליקמיה לוקמיה אבץ אצבע (PLZF) ומקדם תמלול T-box (T-bet); 2) iNKT2 תאים עם ביטוי ביניים של חלבון מאגד PLZF ו-טה 3 (GATA3); 3) iNKT17 תאים בעלי ביטוי נמוך של הקולטן PLZF ו retinoid הקשורים ליתומים גרעיני (ROR)-γt להפריש IFN-γ, IL-4, ו-IL-1714. תאים iNKT הופעל להפריש Th1, Th2, ו Th17 כמו ציטוקינים, אשר קובעים את ההשפעות האימונומודולטוריים שונים של תאים iNKT15. האפקטים האימונומודולטוריים והאימונותרפיה של הפעלה ספציפית של אוכלוסיות משנה שונות של תאי iNKT שונים. לכן, הבחירה של פנוטיפים ספציפיים של תאים iNKT (בעיקר iNKT2) עם פונקציות אנטי דלקתיות כדי לווסת את התגובה החיסונית של הגוף יכול לתקן את חוסר האיזון החיסונית הפרעות החיסון RA.
הקמתה של המודל החי האידיאלי הוא משמעותי מאוד לטיפול ולחקר של הפתוגנזה RA. כיום, הדגמים הנפוצים ביותר בשימוש בעלי חיים בוגרים כוללים דלקת מפרקים הנגרמת קולגן, דלקת מפרקים, מפרקים zymosan המושרה, ודלקת מפרקים רב המושרה16–17. עם זאת, אין מודל שיכול לדמות לחלוטין את כל התכונות של RA האנושית. סוג II קולגן המושרה דלקת מפרקים (CIA) הוא מודל דלקת מפרקים קלאסית. ה-CIA נגרמת על ידי חיסון של עכברים עם סוג II הקולגן הספציפי נוגדנים חד שבטיים, המשקף את התלות הנוגדן של מודל זה מחלה. Benurs ואח ' תיאר מודל עם תגובה חיסונית מערכתית ל גלוקוז-6-פוספט איזומראז (G6PI), אשר משרה מערכת מפרקים סימטרית היקפית סימטרי בזנים של העכבר הרגיש18,19. במודל זה, התפתחות של דלקת מפרקים תלויה בתאי T, B תאים, וחסינות מולדת18,19,20. Horikoshi21 נמצא כי מודלים RA כתוצאה מחיסון של DBA/1 עכברים עם שברי G6PI פוליפטידים דומים יותר לאדם RA במונחים של CD4+ T תאים ציטוקינים (כלומר, IL-6 ו-tnf-α) מאשר דגמי ה-CIA. כדי להגביר את ההשפעה המעוררת על אתר הזיהוי של TCR, שברי הפוליפפטיד המעורבים של G6PI (hGPI325-339 ו-hGPI469-483) שימשו לחיסון של עכברים DBA/1 כדי לבנות את מודל העכבר RA. שיעור ההצלחה של גישה זו יכול להיות גבוה בגלל hGPI325-339 ו-hGPI469-483 הם אימונומישומיניטית עבור התגובות האלה של תא T-A-q-מוגבל. לכן, מודל זה יכול לדמות את התפשטות יתר של CD4+ T תאים ופגמים תא inkt בחולים RA22. המחקר הבסיסי של RA immunopathology הניח את הבסיס לחקירה העמוקה יותר שלנו.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZF</td>
			<td>BD</td>
			<td>563490</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PE MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-048-801</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Columns</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>MS</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Allegra&#174; X-15R</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiR</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D12731</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Center</td>
			<td>Tianjin Aviation Electromechanical Co., Ltd.</td>
			<td>BMJ-1</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Hamster Anti-Mouse TCR &#946; Chain</td>
			<td>BD</td>
			<td>553170</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>Accuri C6</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freund&#39;s complete adjuvant</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5881</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062202</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062203</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>caliper IVIS lumina II</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin Calcium</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10004974</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KRN7000</td>
			<td>AdipoGen</td>
			<td>AG-CN2-0013</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse CD1d Tetramer-PE</td>
			<td>MBL</td>
			<td>TS-MCD-1</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse percoll</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P8620</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Olympus-II</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-ROR-&#978;t</td>
			<td>BD</td>
			<td>562683</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-T-bet</td>
			<td>BD</td>
			<td>561316</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis toxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7208</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phorbol esters</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10008014</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis Buffer</td>
			<td>BD</td>
			<td>555899</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-100-1ACS</td>
			<td>Israel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Th1/Th2/Th17 cytokines kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>560485</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica EM UC6</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice

דלקת מפרקים שגרונית (RA) היא מחלה חיסונית כרונית מורכבת דלקתית. הפתוגנזה של המחלה קשורה הרוצח הטבעי קבוע T (iNKT) תאים. חולים עם RA פעיל מציגים פחות תאים iNKT, הפונקציה תא פגום, ו פולריזציה מוגזמת של Th1. במחקר זה, מודל בעל חיים RA הוקמה באמצעות תערובת של hGPI325-339 ו-hGPI469-483 פפטידים. התאים iNKT הושגו על ידי vivo אינדוקציה וטיהור מבחנה, ואחריו אינפוזיה לתוך עכברים RA לטיפול חיסוני המאמצת. במערכת הדמיה vivo (IVIS) מעקב חשף כי תאים iNKT הופצו בעיקר בטחול ובכבד. ביום 12 לאחר טיפול בתאים, התקדמות המחלה האט למטה באופן משמעותי, הסימפטומים הקליניים היו להקלה, שפע של תאים iNKT ב בלוטת התימוס גדל, הפרופורציה של iNKT1 ב בלוטת התימוס ירד, ואת רמות של TNF-α, IFN-γ, ו-IL-6 ב הנסיוב ירד. חיסוני המאמצת של תאים iNKT שוחזר את האיזון של תאים חיסוניים תוקן דלקת מוגזמת של הגוף.

מדד דלקת מפרקים ניקוד ועובי כפה עלה לאחר הדוגמנות. בהשוואה לקבוצת הביקורת, הבהונות של קבוצת מודל RA החלו להראות נפיחות אדומה ב 6 ימים לאחר הדוגמנות, עם החמרה הדרגתית. במהלך 14 ימים, הנפיחות האדומה במפרק הקרסול הגיעה לשיאה, ולאחריה הקלה הדרגתית. עובי כף היד השתנה באופן דומה (P < 0.05) (<strong class="x...

Watch this Scientific Journal Video about Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice at JoVE.com

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

פרוטוקול זה משתמש G6PI פפטידים מעורבים לבנות מודלים דלקת מפרקים שגרונית כי הם קרובים לזו של דלקת מפרקים שגרונית האדם ב CD4+ T תאים ציטוקינים. טוהר גבוהה קבוע הרוצח טבעי תאים T (בעיקר iNKT2) עם פנוטיפים ספציפיים פונקציות הושגו על-ידי בvivo אינדוקציה וטיהור מבחנה עבור חיסוני המאמצת.

חיסוני המאמצת של תאים iNKT ב גלוקוז-6-פוספט איזומראז (G6PI)-הנגרמת עכברים RA

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

הפרוטוקול שלנו מתאר שיטה לבניית מודל RA. שיעור ההצלחה שלה הוא מעל 93 אחוזים ואת הפתוגנזה שלה תלויה בתאי T, תאי B, וחסינות המולדת, אשר מאפשר לחוקרים ללמוד טוב יותר את הפתוגנזה של RA מנקודת מבט חיסונית גלובלית. לאחר מכן אנו משתמשים בתאי INKT עם השפעות אימונומודולטוריות לטיפול בהם.לתאי INKT יש השפעה טובה על הטיפול על ידי מבוא vivo המספקים תמיכה בסיסית בנתונים ליישום הקליני של תאי INKT ומפוצצים באמת את ערך היישום הקליני של תאי INKT. היתרון הגדול ביותר של טכנולוגיה זו הוא שזה פשוט לתפעול וקל להעתקה. הדגמת ההליך תהיה צ'ן שנגדה, גאו שיאנג, וג'אנג ג'ינגנן, סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי.כדי להתחיל, לשקול 1.75 מיליגרם של שניהם HGPI325 כדי 339 ו HGPI469 כדי 483 שברים ולהמיס אותם 5.25 מיליליטר של 4 מעלות צלזיוס משולש מים מזוקקים. ממיסים את ה-Adjuvant של Complete Freund באמבט מים של 50 מעלות צלזיוס. משוך 5.25 מיליליטר לתוך צינור צנטריפוגה 10 מיליליטר נוסף וקרר אותו לשימוש.שים את התערובת של פתרון HG6PI ופתרון ה-Adjuvant של Complete Freund ביחידת אמולסיה מלאכותית עם שני מזרקי זכוכית, מחוברים. באמבט קרח, לדחוף את המזרק במהירות ותדירות קבועה של עשר עד עשרים פעמים בדקה כדי לחקות לחלוטין את פתרון פפטיד התערובת ולהשלים את הפתרון יידג'ובנט של פרוינד. לאחר מכן, לשמור את טיפות אמולסיה במים במשך עשר דקות.לאחר מכן, להזריק 150 microliters של HG6PIs אמולסיה לתוך שורש הזנב של העכבר תת עורית. מיד ואחרי 48 שעות, להזריק 200 מיליגרם של רעלן שעלת לתוך העכבר תוך-אפינלי. עכשיו, להזריק עכבר DBA1 נורמלי תוך ניתוחית ללא גייזר במינון של 0.1 מיליגרם לקילוגרם של משקל גוף.שלושה ימים לאחר הדוגמנות, לאחר הרדמה, לבודד את הטחול של העכבר. הכן השעיה של תא יחיד על ידי חיתוך ושחזה של הטחול במסנת רשת 200. לשטוף את ההשעיה התא עם PBS.צנטריפוגה ב 200 פעמים g במשך חמש דקות ולהשליך את supernatant. להשעות מחדש את התאים עם מיליליטר אחד של פתרון רקמת דם שלמה. הוסף שלושה מיליליטר של מדיום הפרדת לימפוציטים עכבר.ואז צנטריפוגה התאים במשך 20 דקות ב 300 פעמים גרם בטמפרטורת החדר. כדי לטהר את תאי INKT, יש להוסיף 10 לתאים השביעיים עם 100 מיקרוליטרים של ארבע מעלות צלזיוס PBS, להוסיף 10 מיקרוליטר של אלפא גאוסר טעון CD1 tetramer PE ולטגירה אותם ב 4 מעלות צלזיוס במשך רבע שעה בחושך. לשטוף את התאים פעמיים עם PBS ו resuspend אותם 80 microliters של PBS.מוסיפים 20 מיקרוליטרים של מיקרוביאדות נגד PE ומדגרים אותן בארבע מעלות צלזיוס במשך עשרים דקות בחושך. לשטוף אותם פעמיים עם PBS ו resuspend התאים עם 500 microliters של PBS. מקם את עמודת המיון בשדה המגנטי של סדרן MACS ושטוף ב- 500 מיקרוליטרים של PBS.הוסף את השעיית התא המוכן לעמודת המיון, אסוף את הזרימה דרך וטוף שלוש פעמים במאגר PBS. הסר את השדה המגנטי והוסף מיליליטר אחד של מאגר PBS לעמודת המיון. דחף במהירות את הבוכנה בלחץ מתמיד כדי לדחוף את התאים המסווים לתוך צינור האיסוף.ולהשיג את תאי INKT מטוהרים. ספירה באמצעות מונה תאים אוטומטי. כדי לזהות את פנוטיפ התא INKT, ראשית, לקחת פעם אחת עשר עד השישי תאים מתאי INKT מטוהרים ולתלות אותם שוב 50 microliters של PBS.הוסף 0.5 מיקרוליטרים של אלפא גאוסר PE CD1 tetramer, או 10 microliters של FITC TCR בטא בצינור הבקרה החיובי יחיד. הוסף 0.5 microliters של אלפא גאוס PE CD1 tetramer, להוסיף 10 microliters של FITC TCR בטא בצינור המדגם. דגירה אותם בארבע מעלות צלזיוס במשך שלושים דקות בחושך.לאחר מכן, לשטוף את התאים PBS ולאחר מכן צנטריפוגה ב 200 פעמים g במשך חמש דקות. השלך את העל-טבעי והוסף מיליליטר אחד של פתרון העבודה של קיבוע FoxP3. ותדיגר את התאים במשך 45 דקות בארבע מעלות צלזיוס בחושך.לאחר מכן, להוסיף מיליליטר אחד של פתרון עבודה 1x permeabilization ו צנטריפוגה התאים ב 500 פעמים גרם בטמפרטורת החדר במשך חמש דקות. השלך את העל-טבעי. הוסף מיקרוליטר אחד של AlexaFluor 647 עכבר נגד PLZF ומיקרוליטר אחד של PerCP Cy5.5 עכבר נגד Tbet ודגירה במשך שלושים דקות בטמפרטורת החדר בחושך.לאחר מכן, להוסיף שני microliters של חיץ permeabilization פתרון עבודה צנטריפוגה ב 200 פעמים g במשך חמש דקות לניקוי. השלך את העל-טבעי. תן שימוש חוזר בתאים ב-500 מיקרוליטרים של PBS ולמדוד לפי ציטומטריית זרימה.במחקר זה, בהשוואה לקבוצת הביקורת, הבהונות של קבוצת מודל RA החלו להראות נפיחות אדומה לאחר דוגמנות עם החמרה הדרגתית. ב 14 ימים, הנפיחות האדומה במפרק הקרסול הגיעה לשיאה ואחריה הקלה הדרגתית. התוצאות הפתולוגיות מראות כי מידת החדירה של תאים דלקתיים ברקמת הסינוביאלית בקרסול של עכברי מודל RA הייתה שונה בשלבים שונים.שיא הדלקת התרחשה ביום 14 לאחר דוגמנות. בקבוצת המודל RA, רמות הסרום של ציטוקיני פרו דלקתיים גדלו באופן משמעותי 11 ימים ו 14 ימים לאחר הדוגמנות. בעוד ציטוקיני אנטי דלקתיים ירדו באופן משמעותי.נתון זה מראה כי שיעור INKT2 בעכברים רגילים היה בסביבות חמישה אחוזים. שיעור INK2 היה כ 82 אחוזים לאחר אינדוקציה vivo. שיעור INK2 היה יותר מ 92 אחוזים לאחר טיהור MACS.כאן אנו מראים שיטה לחקות את הפוליפפטיד העיקרי שאנו רואים ב- RA. טיפות אמולסיה נשמרים במים במשך 10 דקות. התוצאות מתפזרות. פרוטוקול זה הוא הרחבה חדשה לטיפול בתאי NKT מיוחדים שהועלו RA.אשר ניתן ליישם כלפי אימונותרפיה התא או מחלות אוטואימוניות אחרות וגידולים. מודל זה יכול לעורר את ההתפשטות הכוללת של תאי CD4 T ותאי NKT גירעונות בחולים RA, אשר מניח את היסודות למחקר מעמיק של מסלולי החיסון RA. בפרוטוקול זה, רעלן שעלת מוזרק interperitoneally במהלך הדוגמנות.נא ללבוש בגדים ניסיוניים וכפפות חד פעמיות. ולשאת את כל הסטנדרטים של פעולה כדי למנוע פצע דקירה זיהומים.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

גרורה ניסויית חיסוני CTL המאמצת העברת דגם עכבר

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

הכנת תאים דנדריטים גידול Antigen טעון בוגרים לחיסוניים

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

אינדוקציה מואצת סוכרת סוג 1 בעכברים על ידי העברת המאמצת של CD4 + T תאי Diabetogenic

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Intralymphatic חיסוני וחיסון בעכברים

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

הערכת התפתחותם של תאי Murine Plasmacytoid דנדריטים בתיקונים של Peyer באמצעות העברת מאמצת של אבות Hematopoietic

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

Generation of CAR T Cells for Adoptive Therapy in the Context of Glioblastoma Standard of Care

דור של תאי T CAR למאמצת תרפיה בהקשר של גליובלסטומה טיפול סטנדרטי

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

אינדוקציה של Murine דלקת מעיים על ידי העברת המאמצת של מפעיל CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; גבוה</sup&gt; תאי T לעכברי immunodeficient

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

אינדוקציה של שיתוק ופציעה מערכת הראייה אצל עכברים מאת T תאים ספציפיים עבור אופטיקה Neuromyelitis Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

דור שמסווגת נוגדנים חד-שבטיים אנושי מתאי B אנטיגן ספציפי נדיר במחזור הדם

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

העברת סטיאוטטי המאמצת של תאים חיסוניים ציטוטוקסיות במודלים מאתר של האדם Orthotopic גליובלסטומה Xenografts

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...