Name: chronic salmonella infection induced intestinal fibrosis
Uploaded: 2019-09-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis at JoVE.com

نشكر إنغريد بارتا على خدمات علم الأنسجة.

تمت الموافقة على جميع بروتوكولات الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوانات في جامعة كولومبيا البريطانية.
1. إعداد الثقافات السالمونيلا التيفيموريوم ΔAroA لاللقاحات عن طريق الفم من الفئران
<ol><li>من مخزون الجلسرين المجمد من S. Typhimurium ΔAroA، وإعداد لوحة خط باستخدام أجار LB تح?...

<ol>
	<li>Danese, S., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis.">Ulcerative colitis.</a> New England Journal of Medicine. 365 (18), 1713-1725 (2011).</li><li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crohn's+disease.">Crohn's disease.</a> The Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li><li>Knights, D., Lassen, K. G., Xavier, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+inflammatory+bowel+disease+pathogenesis:+linking+host+genetics+and+the+microbiome.">Advances in inflammatory bowel disease pathogenesis: linking host genetics and the microbiome.</a> Gut. 62 (10), 1505-1510 (2013).</li><li>Xavier, R. J., Podolsky, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unravelling+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease.">Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> Nature. 448 (7152), 427-434 (2007).</li><li>Cho, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+and+immunopathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease.">The genetics and immunopathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> Nature Reviews Immunology. 8 (6), 458-466 (2008).</li><li>Ogura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+frameshift+mutation+in+NOD2+associated+with+susceptibility+to+Crohn's+disease.">A frameshift mutation in NOD2 associated with susceptibility to Crohn's disease.</a> Nature. 411 (6837), 603-606 (2001).</li><li>Jostins, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-microbe+interactions+have+shaped+the+genetic+architecture+of+inflammatory+bowel+disease.">Host-microbe interactions have shaped the genetic architecture of inflammatory bowel disease.</a> Nature. 491 (7422), 119-124 (2012).</li><li>Rivas, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+resequencing+of+GWAS+loci+identifies+independent+rare+variants+associated+with+inflammatory+bowel+disease.">Deep resequencing of GWAS loci identifies independent rare variants associated with inflammatory bowel disease.</a> Nature Genetics. 43 (11), 1066-1073 (2011).</li><li>Rioux, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+association+study+identifies+new+susceptibility+loci+for+Crohn+disease+and+implicates+autophagy+in+disease+pathogenesis.">Genome-wide association study identifies new susceptibility loci for Crohn disease and implicates autophagy in disease pathogenesis.</a> Nature Genetics. 39 (5), 596-604 (2007).</li><li>Uhlig, H. H., Powrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+intestinal+inflammation+as+tools+to+understand+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease.">Mouse models of intestinal inflammation as tools to understand the pathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> European Journal of Immunology. 39 (8), 2021-2026 (2009).</li><li>Nell, S., Suerbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+the+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of the microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8 (8), 564-577 (2010).</li><li>Grassl, G. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+enteric+Salmonella+infections.">Pathogenesis of enteric Salmonella infections.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 24 (1), 22-26 (2008).</li><li>Barthel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host.">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and Immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li><li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+Enteric+Salmonella+Infection+in+Mice+Leads+to+Severe+and+Persistent+Intestinal+Fibrosis.">Chronic Enteric Salmonella Infection in Mice Leads to Severe and Persistent Intestinal Fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li><li>Hoiseth, S. K., Stocker, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aromatic-dependent+Salmonella+typhimurium+are+non-virulent+and+effective+as+live+vaccines.">Aromatic-dependent Salmonella typhimurium are non-virulent and effective as live vaccines.</a> Nature. 291 (5812), 238-239 (1981).</li><li>Valdez, Y., Ferreira, R. B., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+Salmonella+virulence+and+host+resistance.">Molecular mechanisms of Salmonella virulence and host resistance.</a> Current Topics in Microbiology and Immunology. 337, 93-127 (2009).</li><li>Valdez, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nramp1+drives+an+accelerated+inflammatory+response+during+Salmonella-induced+colitis+in+mice.">Nramp1 drives an accelerated inflammatory response during Salmonella-induced colitis in mice.</a> Cellular Microbiology. 11 (2), 351-362 (2009).</li><li>Lo, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+orphan+nuclear+receptor+RORalpha+and+group+3+innate+lymphoid+cells+drive+fibrosis+in+a+mouse+model+of+Crohn's+disease.">The orphan nuclear receptor RORalpha and group 3 innate lymphoid cells drive fibrosis in a mouse model of Crohn's disease.</a> Science Immunology. 1 (3), eaaf8864 (2016).</li><li>Burke, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrogenesis+in+Crohn's+disease.">Fibrogenesis in Crohn's disease.</a> American Journal of Gastroenterology. 102 (2), 439-448 (2007).</li><li>Hogan, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+and+regeneration+of+the+respiratory+system:+complexity,+plasticity,+and+mechanisms+of+lung+stem+cell+function.">Repair and regeneration of the respiratory system: complexity, plasticity, and mechanisms of lung stem cell function.</a> Cell Stem Cell. 15 (2), 123-138 (2014).</li><li>Fiocchi, C., Lund, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Themes+in+fibrosis+and+gastrointestinal+inflammation.">Themes in fibrosis and gastrointestinal inflammation.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (5), G677-G683 (2011).</li><li>Rieder, F., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+fibrosis+in+IBD&#8212;a+dynamic,+multifactorial+process.">Intestinal fibrosis in IBD&#8212;a dynamic, multifactorial process.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 6 (4), 228-235 (2009).</li><li>Bouguen, G., Peyrin-Biroulet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+for+adult+Crohn's+disease:+what+is+the+actual+risk?.">Surgery for adult Crohn's disease: what is the actual risk?.</a> Gut. 60 (9), 1178-1181 (2011).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+mechanisms+of+fibrosis.">Cellular and molecular mechanisms of fibrosis.</a> The Journal of Pathology. 214 (2), 199-210 (2008).</li><li>Junqueira, L. C., Bignolas, G., Brentani, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Picrosirius+staining+plus+polarization+microscopy,+a+specific+method+for+collagen+detection+in+tissue+sections.">Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections.</a> Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).</li><li>Lo, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-22+Preserves+Gut+Epithelial+Integrity+and+Promotes+Disease+Remission+during+Chronic+Salmonella+Infection.">IL-22 Preserves Gut Epithelial Integrity and Promotes Disease Remission during Chronic Salmonella Infection.</a> Journal of Immunology. 202 (3), 956-965 (2019).</li><li>Fichtner-Feigl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+IL-13+triggers+TGF-beta1-dependent+tissue+fibrosis+in+chronic+2,4,6-trinitrobenzene+sulfonic+acid+colitis.">Induction of IL-13 triggers TGF-beta1-dependent tissue fibrosis in chronic 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid colitis.</a> Journal of Immunology. 178 (9), 5859-5870 (2007).</li><li>Fichtner-Feigl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-13+signaling+via+IL-13R+alpha2+induces+major+downstream+fibrogenic+factors+mediating+fibrosis+in+chronic+TNBS+colitis.">IL-13 signaling via IL-13R alpha2 induces major downstream fibrogenic factors mediating fibrosis in chronic TNBS colitis.</a> Gastroenterology. 135 (6), e2001-e2007 (2013).</li><li>Johnson, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+fibrosis+is+reduced+by+early+elimination+of+inflammation+in+a+mouse+model+of+IBD:+impact+of+a+&amp;#34;Top-Down&amp;#34;+approach+to+intestinal+fibrosis+in+mice.">Intestinal fibrosis is reduced by early elimination of inflammation in a mouse model of IBD: impact of a &amp;#34;Top-Down&amp;#34; approach to intestinal fibrosis in mice.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 18 (3), 460-471 (2012).</li><li>Darfeuille-Michaud, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+prevalence+of+adherent-invasive+Escherichia+coli+associated+with+ileal+mucosa+in+Crohn's+disease.">High prevalence of adherent-invasive Escherichia coli associated with ileal mucosa in Crohn's disease.</a> Gastroenterology. 127 (2), 412-421 (2004).</li><li>Small, C. L., Reid-Yu, S. A., McPhee, J. B., Coombes, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+infection+with+Crohn's+disease-associated+adherent-invasive+Escherichia+coli+leads+to+chronic+inflammation+and+intestinal+fibrosis.">Persistent infection with Crohn's disease-associated adherent-invasive Escherichia coli leads to chronic inflammation and intestinal fibrosis.</a> Nature Communications. 4, 1957 (2013).</li><li>Imai, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flagellin-mediated+activation+of+IL-33-ST2+signaling+by+a+pathobiont+promotes+intestinal+fibrosis.">Flagellin-mediated activation of IL-33-ST2 signaling by a pathobiont promotes intestinal fibrosis.</a> Mucosal Immunology. , (2019).</li></ol>

وقد تعزز فهمنا لمسببات الأمراض من IBD إلى حد كبير من قبل نماذج الماوس من التهاب الأمعاء. وعلى الرغم من أن هذه النماذج الفردية لا تُلخص جميع سمات المرض البشري المعقد والمتعدد العوامل، فقد كانت مفيدة في تحديد السمات الرئيسية لتطور المرض. لا تزال القيود الليفية المرتبطة بـ IBD حاجة سريرية كبيرة ...

التهاب القولون التقرحي (UC) ومرض كرون (CD) هما الشكلان الرئيسيان من IBD ويتميزان بالاضطرابات الالتهابية المزمنة والانتكاسية في الجهاز الهضمي 1،2. هذه الاضطرابات لها تأثير كبير على نوعية حياة المرضى. وتشمل أعراض IBD آلام البطن والإسهال والغثيان وفقدان الوزن والحمى والتعب3. وقد حددت الدراسات الحديثة العوامل الوراثية والبيئية التي تسهم في مسببات الأمراض؛ ويعتقد أن عوامل الخطر هذه تسهم في تعطيل الحاجز الظهاري مما يؤدي إلى نقل أو الإفراط في المستضدات الإنارة4. ونتيجة لذلك ، فإن هذا يبدأ استجابة التهابية شاذة للنباتات commensal بوساطة الخلايا المناعية المعوية4. قد تمتد ملامح المضاعفات المرتبطة بـ IBD إلى مواقع خارج الجهاز الهضمي التي تؤثر على مختلف الأجهزة بما في ذلك المفاصل والجلد والكبد1و2. وتشمل السمات المميزة للجامعة الوسطى التهاب حاد ومنتشر عادة المترجمة في القولون1. أمراض المرض يؤثر على الغشاء المخاطي وsubmucosa من الأمعاء مما أدى إلى تقرحات الغشاء المخاطي السطحي1. وعلى النقيض من ذلك، يمكن أن يؤثر القرص المضغوط على أي جزء من الجهاز الهضمي على الرغم من أن الأدلة على المرض توجد عادة في القولون واللفائفي القاصي2. وعلاوة على ذلك، فإن التهاب في القرص المضغوط هو transmural، مما يؤثر على جميع طبقات جدار الأمعاء2.
العديد من الجينات حساسية IBD التي تم تحديدها تشير إلى أن خلل تنظيم الحاجز الظهاري أو الحصانة هي العوامل الحاسمة في تطور المرض5. تم العثور على الطفرات في مجال القلة النيوكليوتيدات 2 (NOD2) التي أعربت عنها الخلايا الأحادية أن تكون مرتبطة بزيادة قابلية للإصابة بالقرص المضغوط; هذا يسلط الضوء على وجود صلة بين الكشف المناعي الفطري المتغير للمكونات البكتيرية والمرض6. وقد كشفت دراسات الارتباط على نطاق الجينوم (GWAS) أحدث مسارات إضافية يحتمل أن تشارك في مسببات الأمراض من IBD بما في ذلك الاختلافات الوراثية في: STAT1، NKX2-3، IL2RA، المسارات المعتمدة IL23R مرتبطة الحصانة التكيفية، MUC1، MUC19، وPTGER4 في صيانة حاجز الأمعاء، وATG16Lبوساطة autophagy7،8،9. في حين أن هذه الدراسات الوراثية القائمة على السكان قد عززت فهمنا للIBD, الأليلات قابلية وحدها من المرجح أن تكون غير كافية في بدء وإدامة الأمراض المزمنة3. وقد ارتبطت عوامل أخرى غير وراثية بما في ذلك التعديلات في تكوين ميكروبيوم الأمعاء والحد من التنوع مع التهاب الأمعاء. ومع ذلك، فمن غير الواضح ما إذا كان عسر الهضم الأمعاء يسبق أو هو نتيجة لعسر تنظيم الاستجابات المناعية3. على الرغم من أن مسببات IBD لا تزال غير واضحة، وقد تعزز فهمنا لمسببات المرض من قبل نماذج الماوس التجريبية من التهاب الأمعاء10،11. هذه النماذج بشكل فردي لا تمثل تماما تعقيد المرض البشري، ولكنها قيمة لتوضيح المسارات المرضية الفسيولوجية التي يمكن أن تكون ذات صلة IBD وللتحقق من الاستراتيجيات العلاجية المؤقتة10، 11. نماذج الماوس هذه تعتمد عادة على بدء الالتهاب عن طريق الحث الكيميائي أو العدوى، ونقل الخلايا المناعية، أو التلاعب الوراثي. وعلاوة على ذلك، كثيرا ما تنطوي هذه الاستراتيجيات على اضطرابات في السلامة الظهارية أو تعديل المناعة الفطرية أو التكيفية.
السالمونيلا المعوية هي مسببات الأمراض المعوية التي يمكن أن تصيب البشر والفئران. بعد الابتلاع، السالمونيلا يمكن استعمار الأمعاء عن طريق الغزو المباشر للظهارة، والخلايا M، أو مستضد تقديم الخلايا12. الفئران المصابة شفويا مع S. ينتج عن التيفيمويوم في استعمار المواقع النظامية في المقام الأول مثل الطحال والغدد الليمفاوية المساريقية مع وفرة منخفضة نسبيا في الجهاز الهضمي12. ومع ذلك ، فإن المعالجة المسبقة للفئران مع العقديات تعزز كفاءة استعمار السالمونيلا للأمعاء عن طريق تقليل الآثار الوقائية للميكروبيوتاالعادية 13. وتشمل السمات المرضية لهذا النموذج تعطيل أو تقرح الحاجز الظهاري، وتوظيف المحببات، وذمة شديدة13. بدلا من ذلك، العدوى مع لقاح الصف S. تيفيميوم ΔAroA متحولة يؤدي إلى الاستعمار المزمن من cecum والقولون الذي يستمر حتى اليوم 40 بعد العدوى14. الـ S. سلالة تيفيمواليوم ΔAroA لديه عيب في التركيب الحيوي للأحماض الأمينية العطرية. وهذا يجعل سلالة متحولة avirulent ويمكن استخدامها كلقاح فعال للغاية15. العدوى عن طريق الفم في الفئران يؤدي إلى استجابة التهابية Th1- و Th17-السيتوكين المرتبطة، وإعادة عرض الأنسجة واسعة النطاق، وترسب الكولاجين. ويرتبط علم أمراض الأنسجة مع مستويات مرتفعة من العامل الليفي الموالية مثل TGF-β1, CTGF, ومنتدى إدارة الإنترنت14. تندب الليفي عبر جدارية ذكرت في هذا النموذج تذكرنا تشكيلات التضيق غالبا ما لوحظ في IBD. الحث من التليف من قبل السالمونيلا يتطلب ضراوة ترميز من قبل جزر السالمونيلا المسببة للأمراض (SPI)-1 و 2 12. الأهم من ذلك، هذا S. نموذج العدوى Tymphimurium ΔAroA هو نظام مفيد لدراسة الاستجابات الليفية في الفئران متحولة الحفاظ على خلفية C57/Bl6. سلالة C57/Bl6 حساسة للغاية لS. عدوى التيفييومويوم SL1344 بسبب طفرة فقدان الوظيفة في الجينات ترميز بروتين الضامة الطبيعي المرتبط بالمقاومة (NRAMP)-116,17. لقد وجدنا أن IL-17A وRORα تعتمد على الخلايا الليمفاوية الفطرية هي المساهمين المهمين في مسببات الأمراض في هذا النموذج18.
ومن المضاعفات الرئيسية للقرص المضغوط هو الترسيب غير المنظم والمفرط للمصفوفة خارج الخلية (ECM) بما في ذلك الكولاجين2،19. على الرغم من أن الجهاز الهضمي لديه قدرة عالية نسبيا لتجديد, تندب الليفي يمكن أن تنشأ بسبب استجابات التئام الجروح التي لم تحل التي ترتبط مع التهاب مزمن وحاد20,21. في مؤتمر نزع السلاح، وهذا يؤدي إلى آثار ضارة على بنية الأنسجة مما يؤدي إلى ضعف كبير في الجهاز21،22. الطبيعة عبر جدارية للالتهاب لوحظ في مؤتمر نزع السلاح في نهاية المطاف تسبق سماكة جدار الأمعاء المرتبطة تضيق أعراض أو تشكيل تضيق21. حوالي ثلث مرضى القرص المضغوط تتطلب استئصال الأمعاء لهذه المضاعفات22. لا توجد علاجات فعالة مضادة للليفي في IBD بالنظر إلى أن استخدام مثبطات المناعة مثل أزاثيوبرين أو مضادات TNFα البيولوجيا ليس لها تأثير أو خفضت فقط بشكل متواضع متطلبات التدخلات الجراحية19،23 . في حين يعتقد أن التليف هو نتيجة للالتهاب المزمن، ويعتقد أن الخلايا من أصل mesenchymal مثل الخلايا الليفية وpericytes لتكون المصادر الخلوية الأولية من ECM في تندب الليفي21،24. S المزمنة. عدوى تيفيموريوم ΔAroA هو نموذج ماوس قوي من التليف المعوي الذي يمكن أن يقدم رؤى في مسببات الأمراض من الميزات الشبيهة بالقرص المضغوط.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 ml round bottom safe lock tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel beads</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large-Orifice Pipet Tips</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>2707134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL megablock plates</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>82.1972.002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gavage needles</td>
			<td>FST</td>
			<td>18061-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mixer mill</td>
			<td>Retsch</td>
			<td>MM</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

chronic salmonella infection induced intestinal fibrosis

تليف الأنسجة يتميز بالتراكم المرضي للمصفوفة خارج الخلية مثل الكولاجين هو نتيجة للالتهاب المستمر وإصلاح dysregulated. في مرض الأمعاء الالتهابي (IBD)، يؤدي التليف إلى تشكيلات تضيق متكررة لا يوجد علاج فعال لها سوى الاستئصال الجراحي. بسبب ظهورها في وقت متأخر، والعمليات التي تدفع التليف هو أقل دراسة وغير معروف إلى حد كبير. ولذلك، فإن المضاعفات الليفية تمثل تحديا كبيرا في IBD. في هذا البروتوكول، يتم وصف نموذج قوي في الجسم الحي من التليف المعوي حيث العقدية قبل العلاج من الفئران C57Bl/6 تليها اللقاحات عن طريق الفم مع الصف لقاح السالمونيلا Typhimurium ΔAroA متحولة يؤدي إلى الاستعمار المسبب المستمر و التليف من cecum. منهجيات إعداد S. يتم شرح قياس الأحمال المسببة للأمراض في السيكوم والطحال، وتقييم ترسب الكولاجين في الأنسجة المعوية. هذا النموذج المرض التجريبي مفيد لفحص العوامل المضيفة التي إما تعزيز أو تفاقم التليف المعوي الشبيه بالقرص المضغوط.

علاج العقديات تليها العدوى عن طريق الفم مع S. التيفيموريوم ΔAroA يؤدي إلى التهاب معوي قوي والتليف وخاصة في cecum(الشكل 1). يمكن استرداد أعباء مسببات الأمراض النموذجية من 108 إلى 109 CFU لكل 1 غرام من cecum و 104 CFU لكل 1 غرام من الطحال من الحيوانات المصابة(ا...

Watch this Scientific Journal Video about Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis at JoVE.com

Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis

يصف هذا البروتوكول نموذج الماوس من التليف المعوي الذي يحركه السالمونيلا الذي يشبه السمات المرضية الرئيسية لمرض كرون بما في ذلك التهاب عبر الجدارية والتليف. يمكن استخدام هذه الطريقة لتقييم العوامل المضيفة التي تغير النتائج الليفية باستخدام الفئران المتحولة التي تم الحفاظ عليها على خلفية وراثية C57Bl/6.

عدوى السالمونيلا المزمنة الناجمة عن التليف المعوي

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and ...

تليف الأنسجة هو الطريقة الأساسية التي تفشل فيها الأجهزة بمرور الوقت ، استجابة للالتهاب المزمن أو الشيخوخة. وفي الواقع، أود أن أزعم أنه إذا كنت لا تموت من عامل المعدية أو السرطان، عليك أن تموت على الأرجح من تليف الجهاز مع تقدمك في العمر. لسوء الحظ، ليس هناك الكثير من نماذج الماوس العظيمة لمحاكاة تليف الأنسجة البشرية.لذا ما طورناه هو نموذج فأر لمرض كرون، هذا مرض في الإنسان يسبب تليف الأمعاء وغير قابل للعلاج إلى حد كبير. في الواقع، الطريقة الوحيدة التي يمكن علاجها هي من خلال الإزالة الجراحية للأنسجة الليفية وإعادة ربط الأمعاء. ميزة نموذجنا هو أنه penetrant تماما في جميع سلالات الماوس وأنه يحاكي عن كثب جدا مرض كرون الإنسان والتليف لا يزال قائما لأكثر من شهر، وهو في الحقيقة نموذج قوي.الجزء الأكثر تحديا من هذا الإجراء هو التعامل مع الفئران وخاصة غافاج عن طريق الفم منذ ذلك يتطلب الكثير من شهادة الممارسة الخاصة. عند تنفيذ هذا الإجراء للمرة الأولى، ينبغي للمرء أن يدرك أن العمل مع السالمونيلا يتطلب احتياطات السلامة المناسبة وتقنية عقيمة. وينبغي أن يخطط للتخلص من النفايات والبكتيريا قبل التجربة.إن العرض المرئي لهذا الإجراء مهم جداً لأنه ينطوي على التعامل مع السالمونيلا التي تتطلب احتياطات سلامة خاصة بالإضافة إلى تقنية معقمة مناسبة. لبدء هذا الإجراء، حدد لوحة مع LB agar تحتوي على ستريبتوميسين بتركيز 100 ميكروغرام لكل ملليلتر. باستخدام حلقة التلقيح العقيمة، streak لوحة مع مخزون الجلسرين المجمدة من السهم دلتا S typhimurium أ.احتضان ليلة وضحاها في 37 درجة مئوية. يمكن تخزين لوحات متتالية في أربع درجات مئوية لمدة تصل إلى أسبوع واحد. قبل يوم واحد من الإصابة بالعدوى، قم بحل 0.5 جرام من ستريبتوميسين في 2.5 ملليلتر من الماء لإعداد المضاد الحيوي.تصفية تعقيم حل ستريبتوميسين. ثم، استخدام لمبة يميل 22 مقياس غوفاج إبرة مع حقنة ملليلتر واحد لgavage شفويا الفئران مع 100 ميكرولترات من محلول الستربتوميسين. بعد ذلك، أضف ثلاثة ملليلترات من مرق LB تحتوي على ستريبتوميسين بتركيز 50 ميكروغرام لكل ملليلتر إلى أنبوب الثقافة.باستخدام حلقة تلقيح، تلقيح مرق LB مع مستعمرة واحدة. احتضان الثقافة الهوائية بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية مع اهتزاز في 200 دورة في الدقيقة. في يوم العدوى ، قم بأداء اثنين متتاليين من واحد إلى 10 تخفيفات من ثقافات السالمونيلا بين عشية وضحاها مع PBS العقيمة لإعداد جرعة العدوى النهائية.وهذا يؤدي إلى 100 microliter inoculum تحتوي على ما يقرب من ثلاثة ملايين مستعمرة تشكيل وحدات. بعد هذا، استخدام لمبة يميل 22 إبرة غافاج قياس مع حقنة ملليلتر لgavage كل فأر مع 100 ميكرولترات من السالمونيلا المعدة. أولا، المنصوص عليها اثنين milliliter آمنة قفل جولة أسفل الأنابيب الدقيقة، إضافة ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني عقيمة وحبة الفولاذ المقاوم للصدأ autoclaved لكل أنبوب.قبل وزن الأنابيب قبل جمع الأنسجة. بعد القتل الرحيم الفئران، استئصال أنسجة cecal وsplenic، والتأكد من جمع الأنسجة من الحيوانات الفردية في أنابيب منفصلة. وزن كل أنبوب لتحديد الأوزان الأنسجة.استخدام جهاز مطحنة خلاط لتجانس الأنسجة في 30 هيرتز لمدة 15 دقيقة. ثم، نقل 900 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني في كل بئر من كتلة 96-جيدا ميليلتر اثنين من ميغالتر. Pipette 100 ميكرولترات من تجانس الأنسجة في البئر الأول، ومزيج جيد.تنفيذ عمليات تخفيف تسلسلية عن طريق إضافة 100 ميكرولترات إلى آبار لاحقة، حتى يتم الحصول على 10 إلى التخفيف السادس السلبي. لوحة 10 ميكرولترات من كل تخفيف في ثلاث ية على LB أجار الذي يحتوي على ستريبتومايسين. ثم، عد وحدات تشكيل مستعمرة متوسط وتحديد وحدات تشكيل مستعمرة لكل غرام من الأنسجة كما هو مبين في بروتوكول النص.فتح فيجي، وهو برنامج التصوير مفتوحة المصدر وسحب وإسقاط ملف الصورة tif على شريط الأدوات. على شريط القوائم، حدد صورة، اكتب، رصة RGB لتقسيم الصورة إلى قنوات حمراء وخضراء وأزرق. قم بزلاقة الشريط الأفقي في أسفل اللوحة لتعيين القناة إلى اللون الأخضر.افتح الصورة، ضبط، أداة العتبة. ضبط الحدود الدنيا والقصوى لإزالة أي إشارات الخلفية. بمجرد تعيين العتبة المطلوبة، قم بإغلاق أداة العتبة والذهاب إلى تحليل، تعيين القياسات، تحقق من المنطقة، والكسر المنطقة، والحد إلى عتبة وتسمية العرض.الحصول على اختيار الأنسجة مع إما التحديدات اليدوي أو أداة التحديدات المضلعة وقياس نسبة مئوية منطقة إيجابية للكولاجين عن طريق النقر تحليل، قياس. ثم تطبيع المنطقة المطلقة إيجابية للكولاجين تلطيخ إلى منطقة الأنسجة. علاج ستريبتومايسين تليها عدوى فموية مع S التيثيموريوم دلتا السهم يؤدي إلى التهاب الأمعاء القوية والتليف، وخاصة في cecum.ويمكن استرداد الأعباء النموذجية للأمراض من 100 مليون إلى مليار مستعمرة تشكيل وحدات لكل غرام من ال cecum من الحيوانات المصابة، في حين يمكن عادة 10 ألف مستعمرة تشكيل وحدات يمكن استردادها في غرام من الطحال. تقييم التليف في أقسام سيكال الملونة picrosirius الحمراء يشير إلى ذروة التليف بعد 21 يوما من العدوى ، في حين يتم حل الكثير من الأمراض بحلول اليوم 42 بعد العدوى. يعد الإعداد الدقيق للمواد أمرًا ضروريًا لأن هذه التجربة تتطلب عدة أيام للإعداد.وينبغي أن يتم إعداد لوحات LB و السالمونيلا وStreptomycin جميع aseptically. قبل التجربة، تأكد من أن المجرب على دراية بالبروتوكول الحيواني وكذلك مخاطر السلامة. عند تقييم عبء الكولاجين، قد يختار المجرب إجراء فحوصات بيولوجية أخرى، مثل تسلسل الحمض النووي الريبي لتقييم ملامح التعبير الجيني أو قياس تدفق الخلايا المناعية لتقييم المجموعات الفرعية للخلايا المناعية أو ELISA الأنسجة لتقييم لمحات السيتوكين.لذا نموذجنا جيد بشكل خاص في تقليد مرض بشري يسمى مرض كرون حيث تحصل على تليف الأمعاء ، والذي لا يمكن علاجه إلى حد كبير والطريقة الوحيدة التي يمكنك علاجها هي إزالة جزء من الأمعاء وخيطه معًا مرة أخرى ونأمل ألا يعود. نموذجنا قوي جداً وقد أظهرنا بالفعل أن استهداف الخلايا اللمفاوية الفطرية من النوع الثالث، وهو عامل نسخ يسمى ألفا الخام، أو إنترلوكين 17 يخفف من المرض ويمنع التليف. نموذجنا جيد بشكل خاص في تحديد العوامل التي تلعب في التسبب في مرض كرون وتليف الأمعاء ونحن بالفعل على الطريق لتحديد عدد من الأهداف التي يمكن علاجها علاجيا للتخفيف من مرض الأمعاء الالتهابية.وقد دخلت نموذجنا بالفعل في الوصول إلى ILC3 أو ألفا NIL17 قد يكون في اللعب في أمراض ليفية أخرى ، وتشمل هذه الأمور مثل الصدفية ، والتصلب المتعدد ، والتليف الرئوي مجهول السبب. لذلك فمن الممكن أن استهداف هذه العوامل نفسها قد يخفف من التليف في تلك الأمراض أيضا. على الرغم من أن تيار السالمونيلا المتحول ليس خبيثًا ، فمن المهم اتباع بروتوكولات السلامة الحيوية القياسية التي يقدمها المرفق.أيضا، منذ أبخرة الفورمالديهايد معروفة لتكون مسرطنة، من المهم أن تعمل وراء غطاء الدخان خلال خطوة التثبيت.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

على المدى الطويل المزمن<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; عدوى مجرى الهواء في الفئران

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

نموذج الفأر لالتهاب الناجم عن مسببات الأمراض المزمنة في مواقع المحلية والجهازية

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

بروتوكول لتصيب<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em&gt; مع<em&gt; السالمونيلا التيفية الفأرية</em

In the last decade, C. elegans has emerged as an invertebrate organism to study interactions between hosts and pathogens, including the host defense ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

الكمي عصاري خلوي مقابل رغوي<em&gt; السالمونيلا</em&gt; في الضامة الابتدائية التي كتبها التفاضلية Permeabilization

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

متعدد الوسائط التصوير النهج استناداً إلى التصوير المقطعي الجزيئية الصغيرة-الأشعة المقطعية والأسفار لتقييم طولية لتليف الرئة الناجمة عن بليوميسين في الفئران

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

عزل السالمونيلا تيفيموريوم-التي تحتوي على فاجوسوميس من الضامة

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Intestinal Organoids to Study and Modify Epithelial Cell Protection Against Salmonella and Other Pathogens

Using Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Intestinal Organoids to Study and Modify Epithelial Cell Protection Against Salmonella and Other Pathogens

باستخدام الإنسان المستحثة الخلايا الجذعية مستحث المعوية المشتقة لدراسة وتعديل الحماية الخلوية الظهاريه ضد السالمونيلا ومسببات الامراض الأخرى

The intestinal &#8216;organoid&#8217; (iHO) system, wherein 3-D structures representative of the epithelial lining of the human gut can be produced from ...

Mechanistic Insight into the Development of TNBS-Mediated Intestinal Fibrosis and Evaluating the Inhibitory Effects of Rapamycin

البصيرة الميكانيكية في تطوير التليف المعوي عبر TNBS بوساطة وتقييم الآثار المثبطة للراباميسين

Significant studies have been carried out to understand effective management of intestinal fibrosis. However, the lack of better knowledge of fibrosis has ...

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

نموذج التلقيح المتأخر لعدوى الجروح المزمنة الزائفة الجيروجينوسا

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...

Phage Therapy Application to Counteract Pseudomonas aeruginosa Infection in Cystic Fibrosis Zebrafish Embryos

Phage Therapy Application to Counteract Pseudomonas aeruginosa Infection in Cystic Fibrosis Zebrafish Embryos

Phage تطبيق العلاج لمواجهة Pseudomonas aeruginosa العدوى في التليف الكيسي حمار وحشي أجنة

Antimicrobial resistance, a major consequence of diagnostic uncertainty and antimicrobial overprescription, is an increasingly recognized cause of severe ...