Name: measuring diurnal rhythms in autophagic and proteasomal flux
Uploaded: 2019-09-17T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Diurnal Rhythms in Autophagic and Proteasomal Flux at JoVE.com

Эта работа финансировалась ЗА счет RO1HL135846 и гранта Института развития детей (PD-II-2016-529).

Описанный здесь протокол был одобрен Вашингтонским университетом в Сент-Луисе Комитетом по уходу за животными и использованию животных (IACUC).
1. Мышь жилищного и экспериментального дизайна
<ol><li>Для обнаружения ежедневных ритмов в белковой текучести, домашние мыши (мужчи...

<ol>
	<li>Green, C. B., Takahashi, J. S., Bass, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+meter+of+metabolism.">The meter of metabolism.</a> Cell. 134 (5), 728-742 (2008).</li><li>Ma, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS+suppresses+expression+of+asialoglycoprotein-binding+protein+through+TLR4+in+thioglycolate-elicited+peritoneal+macrophages.">LPS suppresses expression of asialoglycoprotein-binding protein through TLR4 in thioglycolate-elicited peritoneal macrophages.</a> Glycoconjugate Journal. 24 (4-5), 243-249 (2007).</li><li>Ryzhikov, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diurnal+Rhythms+Spatially+and+Temporally+Organize+Autophagy.">Diurnal Rhythms Spatially and Temporally Organize Autophagy.</a> Cell Reports. 26 (7), 1880-1892 (2019).</li><li>Martinez-Lopez, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=System-wide+Benefits+of+Intermeal+Fasting+by+Autophagy.">System-wide Benefits of Intermeal Fasting by Autophagy.</a> Cell Metabolism. 26 (6), 856-871 (2017).</li><li>Desvergne, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+proteasome+activity+and+accumulation+of+oxidized+protein+in+human+embryonic+kidney+HEK+293+cells+and+primary+dermal+fibroblasts.">Circadian modulation of proteasome activity and accumulation of oxidized protein in human embryonic kidney HEK 293 cells and primary dermal fibroblasts.</a> Free Radical Biology and Medicine. 94, 195-207 (2016).</li><li>Levine, B., Mizushima, N., Virgin, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+in+immunity+and+inflammation.">Autophagy in immunity and inflammation.</a> Nature. 469 (7330), 323-335 (2011).</li><li>Ciechanover, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+protein+degradation:+from+a+vague+idea+thru+the+lysosome+and+the+ubiquitin-proteasome+system+and+onto+human+diseases+and+drug+targeting.">Intracellular protein degradation: from a vague idea thru the lysosome and the ubiquitin-proteasome system and onto human diseases and drug targeting.</a> Cell Death &amp; Differentiation. 12 (9), 1178-1190 (2005).</li><li>Collins, G. A., Goldberg, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Logic+of+the+26S+Proteasome.">The Logic of the 26S Proteasome.</a> Cell. 169 (5), 792-806 (2017).</li><li>Haspel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+macroautophagic+flux+in+vivo+using+a+leupeptin-based+assay.">Characterization of macroautophagic flux in vivo using a leupeptin-based assay.</a> Autophagy. 7 (6), 629-642 (2011).</li><li>Klionsky, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+use+and+interpretation+of+assays+for+monitoring+autophagy+(3rd+edition).">Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (3rd edition).</a> Autophagy. 12 (1), 1-222 (2016).</li><li>Eckel-Mahan, K., Sassone-Corsi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotyping+Circadian+Rhythms+in+Mice.">Phenotyping Circadian Rhythms in Mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (3), 271-281 (2015).</li><li>Hughes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+Genome-Scale+Analysis+of+Biological+Rhythms.">Guidelines for Genome-Scale Analysis of Biological Rhythms.</a> Journal of Biological Rhythms. 32 (5), 380-393 (2017).</li></ol>

Наш протокол описывает технически простое средство измерения биологических ритмов в белковой обороте у мышей с использованием широко доступного оборудования молекулярной биологии. Из-за продолжительности экспериментов серии времени и количества биологических образцов, участвующи?...

Циркадные ритмы относятся к ежедневным, предсказуемым изменениям в биологической функции, которые очевидны по всей природе. Они существуют на всех биологических масштабах, от макроскопических поведений, таких как циклы сна и бодрствования, до молекулярных явлений, таких как ритмическое изобилие биомолекул. В последние годы исследования циркадных ритмов были преобразованы открытием «генов часов», которые имеют решающее значение для поколения циркадного ритма. Исследования в часы гена нокаут мышей показали центральную роль для циркадных ритмов в временно организации основных клеточных процессов, таких как метаболизм1. Среди способов циркадных ритмов сделать это произошло путем придав височной структуры белка катаболизма.
Несколько групп, включая нашу показали, что два основных пути для клеточного белка катаболизма, аутофагии и убиквитин-протеасомы системы, подлежат суточные ритмы2,3,4,5. Аутофагия представляет лизосо-зависимую руку протеинового катаболизма, в которой белки, представляющие интерес, доставляются в эту универсательную органель либо через строительство нового везикула (макроавтофагия), либо через прямую транслокацию, хотя канал (chaperone опосредовано аутофагии)6. Убиквитин-протеасома система является основным не-лизосомный путь, где белки поли-убиквитина, а затем подается в протеасоме, макромолекулярной деградативной машины найти по всей цитоплазмы и ядра7,8. Ритмы в аутофагической и протеасомной активности имеют важное значение, поскольку они, вероятно, играют определенную роль в сотовой домашнего хозяйства. В результате, это ценно иметь стандартизированную процедуру, которая может обнаружить ежедневные колебания в катамализме белка, который совместим с доклиническими моделями болезней.
Здесь мы предоставляем наш протокол для количественной оценки суточных вариаций в аутофагном потоке в печени мыши, который послужил основой для работы в нашей лаборатории3,9. Наш метод классифицируется как "оборот ный"10, подход, используемый многочисленными группами для измерения протеолитической активности (или потока). При таком подходе ингибиторы протеазы, характерные для лизосомы или протеасомы, вводятся мышам, а затем образцы тканей получаются после фиксированного промежутка времени. Параллельно, образцы тканей получаются у мышей, подвергаемых фиктивным инъекциям. Образцы тканей гомогенизированы, а затем биохимически разделены для получения обогащенных лизоомами и цитоплазмических фракций. Эти фракции затем анализируются параллельно с помощью западных blotting с использованием антител, характерных для макроаутофагии маркеров (LC3b и p62) или протеасомальных субстратов (поли-убиквитинат белка). Со временем животные, вводимые ингибиторами протеазы, накапливают белки, которые обычно были переработаны. В результате, скорость оборота выводится путем сравнения обилия маркерных белков в протеаз-ингибитор обработанных образцов для фиктивных образцов. Повторяя этот метод с фиксированными временными интервалами в течение дня можно реконструировать циркадные вариации в протеолизах(рисунок 1A).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>4x SDS PAGE Sample Buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat# NP0008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bortezomib</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>Cat# 5.04314.0001; CAS: 179324-69-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Studio</td>
			<td>LICOR</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilon-FL PVDF membrane 0.45 micron</td>
			<td>Merck Millipore Ltd</td>
			<td>Cat# IPFL00010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K48-linkage Specific Polyubiquitin (D9D5) Rabbit mAb</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat#8081S; RRID:AB_10859893</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC3a</td>
			<td>Boston Biochem</td>
			<td>Cat# UL-430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC3b antibody</td>
			<td>Novus</td>
			<td>Cat#NB100-2220; RRID:AB_10003146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC3b antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat#2775; RRID:AB_915950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leupeptin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat# L2884; CAS: 103476-89-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE 4-12% Bis-Tris Midi Protein Gels</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# WG1403BOX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE LDS Sample Buffer (4x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# NP0007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P62-his</td>
			<td>Novus</td>
			<td>Cat# NBP1-44490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Plus Protein All Blue Prestained Protein Standards</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>Cat# 1610373</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti-p62/SQSTM1</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>Cat#P0067; RRID:AB_1841064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rhPoly-Ub WT (2-7) (K48)</td>
			<td>Boston Biochem</td>
			<td>Cat# UC-230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE Midi-size Gels</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat# WG1403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SIGMAFAST Protease Inhibitor Tablets</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>Cat# S8830</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring diurnal rhythms in autophagic and proteasomal flux

Клетки используют несколько методов переработки нежелательных белков и других материалов, в том числе лисосомальных и нелисосомальных путей. Основной лизосомы-зависимый путь называется аутофагией, в то время как основным нелизосомным методом белкового катаболизма является система убиквитин-протеаомы. Недавние исследования в модельных организмах показывают, что активность как аутофагии, так и системы убиквитин-протеасомы не является постоянной в течение дня, а вместо этого изменяется в соответствии с ежедневным (циркадным) ритмом. Способность измерять биологические ритмы в белковом обороте важна для понимания того, как достигается контроль качества клеток, и для понимания динамики конкретных белков, представляющих интерес. Здесь мы представляем стандартизированный протокол для количественной оценки аутофагического и протеасомального потока в виво, который фиксирует циркадный компонент текучести белка. Наш протокол включает в себя детали для обработки мышей, обработки тканей, фракционирования и аутофагической количественной оценки потока с использованием печени мыши в качестве исходного материала.

Репрезентативные данные представлены на рисунке 2A,B, и количественная оценка этих данных представлена на рисунке 2C,D (см. также дополнительный файл "Образец данных"). Для простоты мы не изобразили элементы управления погрузкой ?...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Diurnal Rhythms in Autophagic and Proteasomal Flux at JoVE.com

Measuring Diurnal Rhythms in Autophagic and Proteasomal Flux

Мы описываем наш протокол для измерения биологических ритмов в белковом катаболизме с помощью аутофагии и протеасомы в печени мыши.

Измерение суточных ритмов в аутофагическом и протеасомальном потоке

Cells employ several methods for recycling unwanted proteins and other material, including lysosomal and non-lysosomal pathways. The main ...

Наш протокол позволяет измерять скорость аутофагии и протеасомной активности в тканях мыши и достаточно чувствителен для обнаружения циркадных вариаций в этих действиях. Этот метод может быть использован in vivo для оценки белка катаболизма в клетках и тканях и необходимые материалы являются относительно низкими технологиями и доступны для любой лаборатории молекулярной биологии. Демонстрацией процедуры будет Михаил Рыжиков, пост-док из моей лаборатории.За пятнадцать минут до каждой точки времени, тепло лейпептин и бортезомиб фондовых решений для комнатной температуры и разбавить талый бортезомиб в стерильных PBS, чтобы дать 50 миллиграмм на миллилитр рабочий раствор. Для введения ингибитора протеазы интраперитонно вводят 40 миллиграммов на килограмм лейпептина или 1,6 микрограмма на килограмм бортезомиба в каждое экспериментальное животное. Для отрицательного контроля, вводить мышей с 0,5 миллилитров PBS.Верните каждую мышь в клетки, сгруппированные по типу лечения, полученного при введении, и завещать время, в течение которого мышей лечат или манипулируют в стандартизированной таблице. Через два часа после инъекции, погрузить левую долей печени, собранной из каждого принесенного в жертву экспериментального животного в семи миллилитров ледяной гомогенизации буфера в надлежащим образом помечены 15 миллилитров конических трубок на льду. Когда все образцы были приобретены, перенесите первый образец и весь объем буфера гомогенизации в 15 миллилитровую емкость гомогенизатора Dounce и гомогенизируйте образец с 10 штрихами свободного поршня и 15 штрихами плотного поршня.Верните в результате сырой гомогенат в свою оригинальную трубку и гомогенизируйте следующий образец, как только что продемонстрировано. Когда все образцы были гомогенизированы, осадок гомогенатных ядер и мусора центрифугации и передачи верхней четыре миллилитров каждого пост-ядерного супернатанта в новые 15 миллилитров труб. Определите концентрацию белка этой первой супернатантной фракции в соответствии со стандартными протоколами и уравняйте концентрации всех образцов до 2,1 миллиграмма на миллилитр со свежим буфером гомогенизации по мере необходимости.Для анализа вниз по течению и улучшения качества, aliquot 500 микролитров нормализованного общего белка фракций в 1,5 миллилитров микроцентрифуг трубки для хранения минус 80 градусов по Цельсию. Передача 1,5 миллилитров каждой из оставшихся общих белковых фракций в отдельные микроцентрифугные трубки и гранулы образцов белка центрифугации. Перенесите один миллилитр полученных супернатантов второй фракции в новые микроцентрифуговые трубки на льду и аспирировать оставшиеся супернатанты.Вымойте 3K гранулы два раза в 1,5 миллилитров свежего холодного буфера гомогенизации на стирку, затем повторно 3K гранулы в 200 микролитров буфера образца SDS-PAGE и варить образцы при 95 градусов по Цельсию в течение пяти минут. Спин второй фракции supernatants в течение 20 минут на 20000 х и четыре градуса по Цельсию и передачи в результате третьей цитоплазмы фракции supernatants в новую трубку микроцентрифуг. Для анализа SDS-PAGE объедините 150 микролитров цитоплазмической фракции с 50 микролитров буфера образца 4x SDS-PAGE и варите образцы цитоплазмических фракций при 95 градусах Цельсия в течение пяти минут.Аспирировать оставшийся супернатант из гранул 20K и мыть образцы два раза с 1,5 миллилитров свежего холодного буфера гомогенизации на стирку. Затем повторно 20K гранулы в 100 микролитров SDS-PAGE образца буфера для кипения при 95 градусов по Цельсию в течение пяти минут. Для западного анализа помарки, последовательно разбавляют стандартные протеины кривой от одного до 3 в буфере образца 1x для итога 6 разбавлений и нагрузки 10 микролитров каждого стандартного образца кривого в один хорошо 26 наилучшим образом 4 до 12%SDS-PAGE midi гель, после этого загрузите prestained коммерчески молекулярный стандарт веса.Для измерения аутофаготического потока загрузите 12 микролитров каждого образца гранул 3K в соответствующие скважины. Для измерения протеасомного потока загрузите 12 микролитров каждой цитоплазмической фракции в соответствующие скважины. Когда все контрольные и экспериментальные образцы были загружены, отделить образцы белка SDS-PAGE перед передачей белков в поливинилин фторсодержажных мембран в соответствии со стандартными протоколами.Для анализа макроавтофагического потока, пятно мембран, содержащих 3K гранул образцов с анти-p62 или анти-LcB антитела ночь на четыре градуса по Цельсию. Для анализа протеасомного потока, пятно мембран, содержащих цитоплазмические образцы фракции с антилизином 48-Специфические поли убиквитин антитела ночь на четыре градуса цельсия. Затем изображение западных пятен с помощью стандартных вторичных антител и изображений устройств.Для выполнения денситометрических измерений на полосах, представляющих интерес как для стандартной кривой, так и для экспериментальных образцов, откройте соответствующую программу анализа изображений и нарисуйте длинный прямоугольник, охватывающий представляющий интерес белок в нижней части помарки изображения, простирающегося в верхней части мембраны. Копировать и вставлять, чтобы переместить прямоугольник в оставшиеся образцы, сохраняя прямоугольник в соответствии между образцами. Сохраните квантификацию в электронной таблице и создайте денситометрическую стандартную кривую в электронной таблице, используя последовательно разбавленный стандартный образец в линейной или полиномиальной регрессии для получения наилучшего стандартного уравнения кривой.Используя это уравнение, экстраполировать количество мономеров, представляющих интерес в экспериментальных образцах. Для получения измерений потока вычесть экстраполированное количество белка каждого ингибитора обработанный образец из среднего значения образцов PBS из той же точки времени. Затем оцените статистическую значимость временного изменения оборота белка с помощью одной стороны ANOVA.Первичным считыванием для аутофагического потока в любой момент времени является разница в количестве макроавтофагии конкретных маркеров между леупептином обработаны по сравнению с фиктивными образцами в лизосом-обогащенной 3K гранулы фракции разделены на два. Как правило, результаты нормализуются до среднего, что упрощает сравнение независимых экспериментов. Наша процедура измерения протеолитического потока зависит от способности лейпептина или бортезомиба вызывать накопление аутофагии и протеасомных субстратов, что зависит от времени процесса.Этот метод позволил исследование того, как биологические ритмы программы печени белка катаболизма. Мы надеемся, что это проложит путь для изучения влияния болезни на функции клеточного домашнего хозяйства.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Unit 1

Intracellular Membrane Traffic

SCIENTISTS IN ACTION

Stable Isotopic Profiling of Intermediary Metabolic Flux in Developing and Adult Stage Caenorhabditis elegans

Stable Isotopic Profiling of Intermediary Metabolic Flux in Developing and Adult Stage Caenorhabditis elegans

Стабильный Изотопный Профилирование посредник Flux Метаболический в развивающихся странах и взрослой стадии Caenorhabditis Элеганс</em

Stable isotopic profiling has long permitted sensitive investigations of the metabolic consequences of genetic mutations and/or pharmacologic therapies in ...

Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes

Измерение Быстрые потоки кальция в кардиомиоциты

Cardiomyocytes have multiple Ca2+ fluxes of varying duration that work together to optimize function 1,2. Changes in Ca2+ activity in response to ...

Monitoring Cell-autonomous Circadian Clock Rhythms of Gene Expression Using Luciferase Bioluminescence Reporters

Мониторинг Cell-автономных циркадные ритмы часы экспрессии гена люциферазы Использование Репортеры Биолюминесценция

In mammals, many aspects of behavior and physiology such as sleep-wake cycles and liver metabolism are regulated by endogenous circadian clocks ...

Assaying Proteasomal Degradation in a Cell-free System in Plants

Опробование протеасомной деградации в бесклеточной системе у растений

The ubiquitin-proteasome pathway for protein degradation has emerged as one of the most important mechanisms for regulation of a wide spectrum of cellular ...

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Измерение пространственных и временных Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Сигналы в Arabidopsis растений

Developmental and environmental cues induce Ca2+ fluctuations in plant cells. Stimulus-specific spatial-temporal Ca2+ patterns are sensed by cellular Ca2+ ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Измерение глутатион-индуцированной кормления ответ в Hydra

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Измерение Жесткость<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Аорте при помощи мыши атомно-силовой микроскопии

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry

Оценка аутофагического потока путем измерения локализации LC3, p62 и LAMP1 с использованием мультиспектральной визуальной проточной цитометрии

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via ...

The Lactate Dehydrogenase Sequestration Assay &#8212; A Simple and Reliable Method to Determine Bulk Autophagic Sequestration Activity in Mammalian Cells

The Lactate Dehydrogenase Sequestration Assay ÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚Â A Simple and Reliable Method to Determine Bulk Autophagic Sequestration Activity in Mammalian Cells

Лактатдегидрогеназа Assay поглощение — Простой и надежный метод для определения активности сыпучих Autophagic поглощения в клетках млекопитающих

Bulk autophagy is characterized by the sequestration of large portions of cytoplasm into double/multi-membrane structures termed autophagosomes. Here a ...

Measurement of Energy Metabolism in Explanted Retinal Tissue Using Extracellular Flux Analysis

Измерение энергии метаболизма в описаны ткани сетчатки, с помощью анализа внеклеточного Flux

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while ...