Name: measuring diurnal rhythms in autophagic and proteasomal flux
Uploaded: 2019-09-17T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Diurnal Rhythms in Autophagic and Proteasomal Flux at JoVE.com

Detta arbete finansierades av RO1HL135846 och ett Children ' s Development Institute Grant (PD-II-2016-529).

Protokollet som beskrivs här godkändes av Washington University i St. Louis djuromsorg och användning kommittén (IACUC).
1. mus hus och experimentell design
<ol><li>För att upptäcka dagliga rytmer i protein omsättningen, hus möss (manliga eller kvinnliga C57BL/6J, 4 − 8 vecka gammal, 20 − 25 g) under standard 12 h ljus/mörker cykler med mat som AD libitum. För att undvika att betona djuren, anpassa sig möss i minst en vecka i anläggningen före användning och undvik...

<ol>
	<li>Green, C. B., Takahashi, J. S., Bass, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+meter+of+metabolism.">The meter of metabolism.</a> Cell. 134 (5), 728-742 (2008).</li><li>Ma, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS+suppresses+expression+of+asialoglycoprotein-binding+protein+through+TLR4+in+thioglycolate-elicited+peritoneal+macrophages.">LPS suppresses expression of asialoglycoprotein-binding protein through TLR4 in thioglycolate-elicited peritoneal macrophages.</a> Glycoconjugate Journal. 24 (4-5), 243-249 (2007).</li><li>Ryzhikov, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diurnal+Rhythms+Spatially+and+Temporally+Organize+Autophagy.">Diurnal Rhythms Spatially and Temporally Organize Autophagy.</a> Cell Reports. 26 (7), 1880-1892 (2019).</li><li>Martinez-Lopez, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=System-wide+Benefits+of+Intermeal+Fasting+by+Autophagy.">System-wide Benefits of Intermeal Fasting by Autophagy.</a> Cell Metabolism. 26 (6), 856-871 (2017).</li><li>Desvergne, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+proteasome+activity+and+accumulation+of+oxidized+protein+in+human+embryonic+kidney+HEK+293+cells+and+primary+dermal+fibroblasts.">Circadian modulation of proteasome activity and accumulation of oxidized protein in human embryonic kidney HEK 293 cells and primary dermal fibroblasts.</a> Free Radical Biology and Medicine. 94, 195-207 (2016).</li><li>Levine, B., Mizushima, N., Virgin, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+in+immunity+and+inflammation.">Autophagy in immunity and inflammation.</a> Nature. 469 (7330), 323-335 (2011).</li><li>Ciechanover, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+protein+degradation:+from+a+vague+idea+thru+the+lysosome+and+the+ubiquitin-proteasome+system+and+onto+human+diseases+and+drug+targeting.">Intracellular protein degradation: from a vague idea thru the lysosome and the ubiquitin-proteasome system and onto human diseases and drug targeting.</a> Cell Death &amp; Differentiation. 12 (9), 1178-1190 (2005).</li><li>Collins, G. A., Goldberg, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Logic+of+the+26S+Proteasome.">The Logic of the 26S Proteasome.</a> Cell. 169 (5), 792-806 (2017).</li><li>Haspel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+macroautophagic+flux+in+vivo+using+a+leupeptin-based+assay.">Characterization of macroautophagic flux in vivo using a leupeptin-based assay.</a> Autophagy. 7 (6), 629-642 (2011).</li><li>Klionsky, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+use+and+interpretation+of+assays+for+monitoring+autophagy+(3rd+edition).">Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (3rd edition).</a> Autophagy. 12 (1), 1-222 (2016).</li><li>Eckel-Mahan, K., Sassone-Corsi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotyping+Circadian+Rhythms+in+Mice.">Phenotyping Circadian Rhythms in Mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (3), 271-281 (2015).</li><li>Hughes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+Genome-Scale+Analysis+of+Biological+Rhythms.">Guidelines for Genome-Scale Analysis of Biological Rhythms.</a> Journal of Biological Rhythms. 32 (5), 380-393 (2017).</li></ol>

Vårt protokoll beskriver ett tekniskt enkelt sätt att mäta biologiska rytmer i protein omsättningen hos möss som använder allmänt tillgänglig molekylärbiologisk utrustning. På grund av tidsseriens experiment och antalet biologiska prover är det viktigt att vara konsekvent i hela experimentet när det gäller hur möss injiceras, tidpunkten för vävnads förvärvet och den biokemiska bearbetningen av Prover. I stegen för injektion, eutanasi och cervikal dislokation kan det krävas operatörs övning innan ett...

Dygnsrytmen avser dagliga, förutsägbara variationer i biologisk funktion som är uppenbar i naturen. De finns i varje biologisk skala, från makroskopiska beteenden som sömn-vakna cykler, till molekylära fenomen som den rytmiska överflöd av biomolekyler. Under de senaste åren har forskning om dygnsrytmen omvandlats genom upptäckten av "klockgener" som är avgörande för den dygnsrytm generationen. Studier i Clock Gene knockout möss har avslöjat en central roll för dygnsrytmen i temporally organisera centrala cellulära processer såsom metabolism1. Bland de sätt dygns rytmer göra detta hända är genom att förmedla en tidsmässig struktur till protein katabolism.
Flera grupper inklusive vår har visat att de två stora vägar för cellulära proteinkatabolism, autofagi och ubiquitin-Proteasome systemet, är föremål för dygnsrytm2,3,4,5. Autofagi representerar den lysosome-beroende armen av proteinkatabolism där proteiner av intresse levereras till denna nedbrytande organell antingen genom byggandet av en roman vesikel (macroautofagi) eller genom direkt flyttning om en kanal (Chaperone medierad autofagi)6. Den ubiquitin-Proteasome systemet är den viktigaste icke-lysosomala vägen, där proteiner är Poly-ubiquitinated och sedan matas in i Proteasome, en makromolekylär nedbrytande maskin som finns i hela cytoplasman och Nucleus7,8. Rytmer i autofagi och proteasomen aktivitet är viktiga eftersom de sannolikt spelar en roll i cellulära städning. Som ett resultat, det är värdefullt att ha en standardiserad procedur som kan upptäcka dagliga svängningar i proteinkatabolism som är kompatibel med prekliniska sjukdomsmodeller.
Här, vi tillhandahåller vårt protokoll för kvantifiering av dygns variationer i autofagi Flux i mus levern, som har fungerat som grund för arbete i vårt laboratorium3,9. Vår metod klassificeras som en "omsättning assay"10, en metod som används av många grupper för att mäta proteolytisk aktivitet (eller Flux). I denna metod ges proteashämmare som är specifika för lysosomer eller proteasomer till möss och därefter erhålls vävnadsprov efter ett fast tidsintervall. Parallellt med detta erhålls vävnadsprover från möss som utsätts för simulerade injektioner. Vävnadsproverna är homogeniserade och sedan biokemiskt separerade för att få lysosome-berikade och cytoplasmiska fraktioner. Dessa fraktioner analyseras sedan parallellt via Western blotting med antikroppar som är specifika för makroautofagi markörer (LC3b och P62) eller proteasomen substrat (poly-ubiquitinated protein). Med tiden, djur injiceras med proteashämmare ackumulera proteiner som normalt skulle ha återvunnits. Som ett resultat av detta kan omsättningen härledas genom en jämförelse av förekomsten av markör proteiner i de behandlade proverna från proteashämmare till de simulerade proverna. Genom att upprepa denna metod vid fasta tidsintervall över dagen är det möjligt att rekonstruera cirkadiska variationer i proteolys (figur 1a).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>4x SDS PAGE Sample Buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat# NP0008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bortezomib</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>Cat# 5.04314.0001; CAS: 179324-69-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Studio</td>
			<td>LICOR</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilon-FL PVDF membrane 0.45 micron</td>
			<td>Merck Millipore Ltd</td>
			<td>Cat# IPFL00010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K48-linkage Specific Polyubiquitin (D9D5) Rabbit mAb</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat#8081S; RRID:AB_10859893</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC3a</td>
			<td>Boston Biochem</td>
			<td>Cat# UL-430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC3b antibody</td>
			<td>Novus</td>
			<td>Cat#NB100-2220; RRID:AB_10003146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC3b antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat#2775; RRID:AB_915950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leupeptin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat# L2884; CAS: 103476-89-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE 4-12% Bis-Tris Midi Protein Gels</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# WG1403BOX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE LDS Sample Buffer (4x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# NP0007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P62-his</td>
			<td>Novus</td>
			<td>Cat# NBP1-44490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Plus Protein All Blue Prestained Protein Standards</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>Cat# 1610373</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti-p62/SQSTM1</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>Cat#P0067; RRID:AB_1841064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rhPoly-Ub WT (2-7) (K48)</td>
			<td>Boston Biochem</td>
			<td>Cat# UC-230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE Midi-size Gels</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat# WG1403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SIGMAFAST Protease Inhibitor Tablets</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>Cat# S8830</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring diurnal rhythms in autophagic and proteasomal flux

Celler använder flera metoder för att återvinna oönskade proteiner och annat material, inklusive lysosomala och icke-lysosomala vägar. Den viktigaste lysosome-beroende vägen kallas autofagi, medan den primära icke-lysosomala metoden för proteinkatabolism är ubiquitin-Proteasome systemet. Nyligen genomförda studier i modellorganismerna tyder på att aktiviteten hos både autofagi och ubiquitin-Proteasome-systemet inte är konstant över dagen utan i stället varierar beroende på en daglig (dygnsrytmen) rytm. Förmågan att mäta biologiska rytmer i protein omsättningen är viktig för att förstå hur cellulär kvalitetskontroll uppnås och för att förstå dynamiken i specifika proteiner av intresse. Här presenterar vi ett standardiserat protokoll för att kvantifiera autofagi och proteasomen Flux in vivo som fångar den cirkadiska komponenten i protein omsättningen. Vårt protokoll innehåller information för mushantering, vävnads bearbetning, fraktionering och autofagi Flux-kvantifiering med hjälp av mus levern som utgångsmaterial.

Representativa data presenteras i figur 2A, B, och kvantifieringen av dessa uppgifter finns i figur 2C, D (se även kompletterande fil "exempeldata"). För enkelhetens skull har vi inte avbildat lastnings kontrollerna i figur 2 , men dessa bör erhållas parallellt. Typiskt, västerländska blotting mot β-Actin används för detta ändamål, men en totalprotein fläck (såsom Ponce...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Diurnal Rhythms in Autophagic and Proteasomal Flux at JoVE.com

Measuring Diurnal Rhythms in Autophagic and Proteasomal Flux

Vi beskriver vårt protokoll för mätning av biologiska rytmer i proteinkatabolism via autofagi och proteasomen i mus levern.

Mätning av dygnsrytmen i autofagi och Proteasomal Flux

Cells employ several methods for recycling unwanted proteins and other material, including lysosomal and non-lysosomal pathways. The main ...

Vårt protokoll tillåter mätning av hastigheten för autofagi och proteasomal aktivitet i musvävnader och är tillräckligt känslig för att upptäcka dygnsrytmvariationer inom dessa aktiviteter. Denna teknik kan användas in vivo för att utvärdera proteinkatabolism i celler och vävnader och de material som krävs är relativt lågteknologiska och tillgängliga för alla molekylärbiologiska labb. Demonstrerar proceduren blir Mikhail Ryzhikov, en post-doc från mitt laboratorium.För femton minuter före varje tidspunkt, värma leupeptin och bortezomib stamlösningar till rumstemperatur och späda den tinade bortezomib i steril PBS att ge en 50 milligram per milliliter arbetslösning. För administrering av proteashämmare injicerar intraperitoneally 40 milligram per kilo leupeptin eller 1, 6 mikrogram per kilo bortezomib i varje försöksdjur. För en negativ kontroll, injicera möss med 0,5 milliliter PBS.Returnera varje mus till burar grupperade efter den typ av behandling som tas emot när de injiceras och registrera den tid som mössen behandlas eller manipuleras i ett standardiserat bord. Två timmar efter injektionen, dränka den vänstra leverloben skördas från varje offrade försöksdjur i sju milliliter iskall homogenisering buffert i lämpligt märkta 15 milliliter koniska rör på is. När alla prover har förvärvats, överför det första provet och hela volymen av homogeniseringsbuffert till en 15 milliliter kapacitet Dounce homogenisator och homogenisera provet med 10 slag av den lösa kolven och 15 slag av den snäva kolven.Returnera den resulterande rå homogenate till sitt ursprungliga rör och homogenisera nästa prov som just visat. När alla proverna har homogeniserats, sedimenterar homogenatekärnorna och skräpet genom centrifugation och överför de fyra översta milliliterna av varje post-nukleär supernatant till nya 15 milliliterrör. Bestäm proteinkoncentrationen av denna första supernatantfraktion enligt standardprotokoll och utjämna koncentrationerna av alla proverna till 2,1 milligram per milliliter med färsk homogeniseringsbuffert vid behov.För nedströmsanalys och kvalitetsförbättring, alikvoter 500 mikroliter av de normaliserade totala proteinfraktionerna i 1,5 milliliter mikrocentrifugrör för minus 80 grader Celsius lagring. Överför 1,5 milliliter av var och en av de återstående totala proteinfraktionerna till enskilda mikrocentrifugrör och pelleten proteinproverna genom centrifugering. Överför en milliliter av den resulterande andra fraktionen supernatanter i nya mikrocentrifugrör på is och aspirera de återstående supernatanterna.Tvätta 3K pellets två gånger i 1,5 milliliter av färsk kall homogenisering buffert per tvätt, sedan återanvända 3K pelleten i 200 mikroliter av SDS-PAGE provbuffert och koka proverna vid 95 grader Celsius i fem minuter. Snurra den andra fraktionen supernatanter i 20 minuter vid 20, 000 x g och fyra grader Celsius och överföra den resulterande tredje cytoplasmatiska fraktionen supernatanter i en ny microcentrifug röret. För SDS-PAGE analys, kombinera 150 mikroliter av cytoplasmatiska fraktionen med 50 mikroliter av 4x SDS-PAGE provbuffert och koka cytoplasmatiska fraktionsprover vid 95 grader Celsius i fem minuter.Aspirera den återstående supernatanten från 20K pellets och tvätta proverna två gånger med 1,5 milliliter färsk kall homogeniseringsbuffert per tvätt. Sedan resuspend 20K pelleten i 100 mikroliter av SDS-PAGE provbuffert för kokning vid 95 grader Celsius i fem minuter. För analys av western blot, seriellt späda standard kurvan proteiner en till tre i 1x provbuffert för totalt sex utspädningar och belastning 10 mikroliter av varje standard kurvprov i en brunn av en 26 väl fyra till 12%SDS-PAGE midi gel, sedan ladda en förutbestämd kommersiell molekylvikt standard.För att mäta autophagiskt flussmedel, lasta 12 mikroliter av varje 3K-pelletsprov i lämpliga brunnar. För att mäta det proteasomala flusset, lasta 12 mikroliter av varje cytoplasmatisk fraktion i lämpliga brunnar. När alla kontroll- och försöksprover har laddats, separera proteinproverna genom SDS-PAGE innan proteinerna överförs till polyvinylidenfluoridmembran enligt standardprotokoll.För analys av makroautopagiskt fluss, blot-membran som innehåller 3K-pelletsproverna med anti-p62 eller anti-LcB-antikropp över natten vid fyra grader Celsius. För analys av proteasomal flux, blot membran som innehåller cytoplasmatiska fraktion prover med anti-lysin 48-Specifika poly ubiquitin antikropp över natten vid fyra grader Celsius. Sedan bild de västra blots med hjälp av standard sekundära antikroppar och bildbehandling enheter.För att utföra densitometriska mätningar på band av intresse för både standardkurvan och experimentella prover, öppna ett lämpligt program för bildanalysprogram och rita en lång rektangel som omfattar proteinmonomen av intresse längst ner på blot-bilden som sträcker sig till toppen av membranet. Kopiera och klistra in för att flytta rektangeln till de återstående proven, vilket håller rektangeln konsekvent mellan samplingar. Spara kvantifieringen i ett kalkylblad och generera en densitometrisk standardkurva inom kalkylbladet med hjälp av det serieutspädda standardprovet i antingen linjär eller polynomregression för att få en standardkurvaekvation med bästa möjliga passform.Med hjälp av denna ekvation extrapolerar du mängden av monomererna av intresse inom försöksproverna. För att erhålla fluxmätningar subtrahera den extrapolerade proteinmängden för varje inhibitorbehandlat prov från det genomsnittliga värdet av PBS-proverna från samma tidspunkt. Utvärdera sedan den statistiska signifikansen av den tidsmässiga variationen i proteinomsättningen med hjälp av enkelriktad ANOVA.Den primära avläsningen för autophagic flux vid en given timepoint är skillnaden i mängden macroautophagy specifika markörer mellan leupeptin behandlas kontra skenprover i lysosome-berikade 3K pellet fraktion dividerat med två. Vanligtvis normaliseras resultaten till medelvärdet som förenklar jämförelsen mellan oberoende experiment. Vårt förfarande för mätning av proteolytiska flux beror på förmågan hos leupeptin eller bortezomib att orsaka ackumulering av autofagi och proteasom substrat, som är en tidsberoende process.Denna teknik har möjligen utforskning av hur biologiska rytmer programmera leverprotein katabolism. Vi hoppas att det kommer att bana väg för att undersöka effekterna av sjukdomen på cellulära hushållning funktioner.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Unit 1

Intracellular Membrane Traffic

SCIENTISTS IN ACTION

Stable Isotopic Profiling of Intermediary Metabolic Flux in Developing and Adult Stage Caenorhabditis elegans

Stable Isotopic Profiling of Intermediary Metabolic Flux in Developing and Adult Stage Caenorhabditis elegans

Stabil Isotopic Profilering av förmedlande Metabola Flux i utvecklingsländer och vuxna Stage Caenorhabditis elegans</em

Stable isotopic profiling has long permitted sensitive investigations of the metabolic consequences of genetic mutations and/or pharmacologic therapies in ...

Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes

Mätning Snabb Kalcium flöden i Cardiomyocytes

Cardiomyocytes have multiple Ca2+ fluxes of varying duration that work together to optimize function 1,2. Changes in Ca2+ activity in response to ...

Monitoring Cell-autonomous Circadian Clock Rhythms of Gene Expression Using Luciferase Bioluminescence Reporters

Övervakning Cell-autonoma dygnsrytm klocka rytmer av genuttryck Använda Luciferas bioluminiscens Reportrar

In mammals, many aspects of behavior and physiology such as sleep-wake cycles and liver metabolism are regulated by endogenous circadian clocks ...

Assaying Proteasomal Degradation in a Cell-free System in Plants

Analys proteasomal Nedbrytning i ett cellfritt system i växter

The ubiquitin-proteasome pathway for protein degradation has emerged as one of the most important mechanisms for regulation of a wide spectrum of cellular ...

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Mätning rumsliga och tids Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Signaler i Arabidopsis växter

Developmental and environmental cues induce Ca2+ fluctuations in plant cells. Stimulus-specific spatial-temporal Ca2+ patterns are sensed by cellular Ca2+ ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Mätning Glutation-inducerad Foder Response i Hydra

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Mätning av styvheten hos<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mus Aorta Använda atomkraftsmikroskopi

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry

Bedömning av autophagic Flux genom mätning av LC3-, p62- och LAMP1-co-lokalisering med användning av multispektral bildflödescytometri

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via ...

The Lactate Dehydrogenase Sequestration Assay &#8212; A Simple and Reliable Method to Determine Bulk Autophagic Sequestration Activity in Mammalian Cells

The Lactate Dehydrogenase Sequestration Assay ÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚Â A Simple and Reliable Method to Determine Bulk Autophagic Sequestration Activity in Mammalian Cells

Laktatdehydrogenas kvarstad analysen — En enkel och tillförlitlig metod för att bestämma Bulk Autophagic kvarstad aktivitet i däggdjursceller

Bulk autophagy is characterized by the sequestration of large portions of cytoplasm into double/multi-membrane structures termed autophagosomes. Here a ...

Measurement of Energy Metabolism in Explanted Retinal Tissue Using Extracellular Flux Analysis

Mätning av energimetabolism i explanterad retinala vävnaden med hjälp av extracellulära Flux analys

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while ...