Name: measuring diurnal rhythms in autophagic and proteasomal flux
Uploaded: 2019-09-17T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Diurnal Rhythms in Autophagic and Proteasomal Flux at JoVE.com

Bu çalışma RO1HL135846 ve Çocuk Geliştirme Enstitüsü hibe (PD-II-2016-529) tarafından finanse edilmiştir.

Burada açıklanan protokol Washington Üniversitesi tarafından St. Louis Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Fare Muhafazası ve Deneysel Tasarımı
<ol><li>Protein cirogünlük ritimleri tespit etmek için, ev fareleri (erkek veya kadın C57BL/6J, 4−8 haftalık, 20−25 g) standart 12 saat ışık / karanlık döngüleri altında gıda reklam libitumsağlanan . Hayvanları strese girmemek için, fareleri kullanmadan önce tesiste en az b...

<ol>
	<li>Green, C. B., Takahashi, J. S., Bass, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+meter+of+metabolism.">The meter of metabolism.</a> Cell. 134 (5), 728-742 (2008).</li><li>Ma, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS+suppresses+expression+of+asialoglycoprotein-binding+protein+through+TLR4+in+thioglycolate-elicited+peritoneal+macrophages.">LPS suppresses expression of asialoglycoprotein-binding protein through TLR4 in thioglycolate-elicited peritoneal macrophages.</a> Glycoconjugate Journal. 24 (4-5), 243-249 (2007).</li><li>Ryzhikov, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diurnal+Rhythms+Spatially+and+Temporally+Organize+Autophagy.">Diurnal Rhythms Spatially and Temporally Organize Autophagy.</a> Cell Reports. 26 (7), 1880-1892 (2019).</li><li>Martinez-Lopez, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=System-wide+Benefits+of+Intermeal+Fasting+by+Autophagy.">System-wide Benefits of Intermeal Fasting by Autophagy.</a> Cell Metabolism. 26 (6), 856-871 (2017).</li><li>Desvergne, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+modulation+of+proteasome+activity+and+accumulation+of+oxidized+protein+in+human+embryonic+kidney+HEK+293+cells+and+primary+dermal+fibroblasts.">Circadian modulation of proteasome activity and accumulation of oxidized protein in human embryonic kidney HEK 293 cells and primary dermal fibroblasts.</a> Free Radical Biology and Medicine. 94, 195-207 (2016).</li><li>Levine, B., Mizushima, N., Virgin, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+in+immunity+and+inflammation.">Autophagy in immunity and inflammation.</a> Nature. 469 (7330), 323-335 (2011).</li><li>Ciechanover, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+protein+degradation:+from+a+vague+idea+thru+the+lysosome+and+the+ubiquitin-proteasome+system+and+onto+human+diseases+and+drug+targeting.">Intracellular protein degradation: from a vague idea thru the lysosome and the ubiquitin-proteasome system and onto human diseases and drug targeting.</a> Cell Death &amp; Differentiation. 12 (9), 1178-1190 (2005).</li><li>Collins, G. A., Goldberg, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Logic+of+the+26S+Proteasome.">The Logic of the 26S Proteasome.</a> Cell. 169 (5), 792-806 (2017).</li><li>Haspel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+macroautophagic+flux+in+vivo+using+a+leupeptin-based+assay.">Characterization of macroautophagic flux in vivo using a leupeptin-based assay.</a> Autophagy. 7 (6), 629-642 (2011).</li><li>Klionsky, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+use+and+interpretation+of+assays+for+monitoring+autophagy+(3rd+edition).">Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (3rd edition).</a> Autophagy. 12 (1), 1-222 (2016).</li><li>Eckel-Mahan, K., Sassone-Corsi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotyping+Circadian+Rhythms+in+Mice.">Phenotyping Circadian Rhythms in Mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (3), 271-281 (2015).</li><li>Hughes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+Genome-Scale+Analysis+of+Biological+Rhythms.">Guidelines for Genome-Scale Analysis of Biological Rhythms.</a> Journal of Biological Rhythms. 32 (5), 380-393 (2017).</li></ol>

Protokolümüz, farelerde yaygın olarak kullanılan moleküler biyoloji ekipmanlarını kullanarak protein cirosundaki biyolojik ritimleri ölçmenin teknik olarak basit bir aracını tanımlar. Zaman serisi deneylerin uzunluğu ve ilgili biyolojik numunelerin sayısı nedeniyle, farelerin nasıl enjekte edildiği, doku ediniminin zamanlaması ve biyokimyasal işleme ile ilgili tüm deneyboyunca tutarlı olmak önemlidir. Örnekleri. Enjeksiyon, ötenazi ve servikal çıkık adımları, tam ölçekli bir deney başlatma...

Sirkadiyen ritimler, biyolojik fonksiyonda doğa boyunca belirgin olan günlük, öngörülebilir varyasyonları ifade eder. Her biyolojik ölçekte varolurlar, uyku-uyanıklık döngüleri gibi makroskopik davranışlardan biyomoleküllerin ritmik bolluğu gibi moleküler fenomenlere kadar. Son yıllarda sirkadiyen ritim ler üzerine yapılan araştırmalar, sirkadiyen ritim üretimi için kritik öneme sahip "saat genlerinin" keşfi ile dönüştürülmüştür. Saat gen nakavt farelerde çalışmalar metabolizma1gibi zamansal olarak organize çekirdek hücresel süreçler sirkadiyen ritimleri için merkezi bir rol ortaya koymuştur. Sirkadiyen ritimlerin bunu gerçekleştirme yolları arasında protein katabolizmine zamansal bir yapı vermek tir.
Bizim ki de dahil olmak üzere çeşitli gruplar göstermiştir ki hücresel protein katabolizma için iki ana caddeleri, otofaji ve ubikiquitin-proteozom sistemi, diurnal ritimleri tabidir2,3,4,5. Otofaji, protein katabolizmasının lizozom bağımlı kolunu temsil eder. kanal (şaperon aracılı otofaji)6. Ubikitin-proteozom sistemi ana non-lysozomal yoludur, proteinler poli-ubiquitinated ve daha sonra proteozom içine beslenen, bir makromoleküler degradatif makine sitoplazma ve çekirdek boyunca bulunan7,8. Otophagic ve proteazomal aktivite ritimleri büyük olasılıkla hücresel housekeeping bir rol oynamaktadır, çünkü önemlidir. Sonuç olarak, pre-klinik hastalık modelleri ile uyumlu protein katabolizma günlük salınımları tespit edebilir standart bir prosedür olması değerlidir.
Burada, bizim laboratuvar3,9çalışma için temel olarak hizmet vermiştir fare karaciğer, otophagic akı diurnal varyasyonları ölçmek için protokolümüzü sağlamak. Yöntemimiz bir "ciro tamsadı"10olarak sınıflandırılır, proteolitik aktivite (veya akı) ölçmek için çok sayıda grup tarafından kullanılan bir yaklaşım. Bu yaklaşımda farelere lizozom veya proteozomlara özgü proteaz inhibitörleri verilir ve sabit bir zaman aralığından sonra doku örnekleri alınır. Buna paralel olarak sahte enjeksiyona maruz kalan farelerden doku örnekleri alınır. Doku örnekleri homojenize edilir ve daha sonra biyokimyasal olarak ayrılabilmek için kemikozomla zenginleştirilmiş ve sitoplazmik fraksiyonlar elde edilir. Bu kesirler daha sonra makrootofji belirteçlerine (LC3b ve p62) özgü antikorlar veya proteazomal substratlar (poli-ubiquitinated protein) kullanılarak batı lekeleme yoluyla paralel olarak analiz edilir. Zamanla, proteaz inhibitörleri enjekte edilen hayvanlar normalde geri dönüştürülmüş olacak proteinleri birikir. Sonuç olarak, proteaz-inhibitör tedavi örneklerindeki marker proteinlerin bolluğu sahte tedavi edilmiş numunelerle karşılaştırılarak ciro oranı çıkarılır. Bu yöntemi gün içinde sabit zaman aralıklarında tekrarlayarak proteozizde sirkadiyen varyasyonları yeniden oluşturmak mümkündür (Şekil 1A).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>4x SDS PAGE Sample Buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat# NP0008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bortezomib</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>Cat# 5.04314.0001; CAS: 179324-69-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Studio</td>
			<td>LICOR</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilon-FL PVDF membrane 0.45 micron</td>
			<td>Merck Millipore Ltd</td>
			<td>Cat# IPFL00010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K48-linkage Specific Polyubiquitin (D9D5) Rabbit mAb</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat#8081S; RRID:AB_10859893</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC3a</td>
			<td>Boston Biochem</td>
			<td>Cat# UL-430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC3b antibody</td>
			<td>Novus</td>
			<td>Cat#NB100-2220; RRID:AB_10003146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC3b antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>Cat#2775; RRID:AB_915950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leupeptin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat# L2884; CAS: 103476-89-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE 4-12% Bis-Tris Midi Protein Gels</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# WG1403BOX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE LDS Sample Buffer (4x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# NP0007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P62-his</td>
			<td>Novus</td>
			<td>Cat# NBP1-44490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Plus Protein All Blue Prestained Protein Standards</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>Cat# 1610373</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti-p62/SQSTM1</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>Cat#P0067; RRID:AB_1841064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rhPoly-Ub WT (2-7) (K48)</td>
			<td>Boston Biochem</td>
			<td>Cat# UC-230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE Midi-size Gels</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat# WG1403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SIGMAFAST Protease Inhibitor Tablets</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>Cat# S8830</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring diurnal rhythms in autophagic and proteasomal flux

Hücreler istenmeyen proteinlerve diğer malzeme geri dönüşüm için çeşitli yöntemler kullanır, lysosomal ve non-lysosomal yollar da dahil olmak üzere. Protein katabolizmasının birincil lizozomal olmayan yöntemi ubikitin-proteozom sistemi iken, başlıca lizozom-bağımlı yol otofaji olarak adlandırılır. Model organizmalar üzerinde yapılan son çalışmalar, hem otofaji hem de ubikitin-proteozom sisteminin aktivitesinin gün boyunca sabit olmadığını, bunun yerine günlük (sirkadiyen) ritme göre değiştiğini göstermektedir. Protein cirosu biyolojik ritimleri ölçmek için yeteneği hücresel kalite kontrolü nasıl elde edilir anlamak ve ilgi belirli proteinlerin dinamiklerini anlamak için önemlidir. Burada protein cirosunun sirkadiyen bileşenini yakalayan otophagic ve proteasomal akı in vivo'nun ölçülmesi için standart laştırılmış bir protokol salıyoruz. Protokolümüz, fare işleme, doku işleme, fraksiyonve başlangıç malzemesi olarak fare karaciğeri kullanarak otofatik akı nicelliği için ayrıntıları içerir.

Temsili veriler Şekil 2A,B'desunulur ve bu verilerin niceliği Şekil 2C,D'de verilmiştir (ayrıca bkz. Ek Dosya "Örnek Veriler"). Basitlik için, Şekil 2'de yükleme kontrollerini göstermedik, ancak bunlar paralel olarak alınmalıdır. Tipik olarak, β-aktin karşı batı lekeleri bu amaçla kullanılır, ancak toplam protein lekesi (Ponceau S gibi) yeterli olacaktır. Herhan...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Diurnal Rhythms in Autophagic and Proteasomal Flux at JoVE.com

Measuring Diurnal Rhythms in Autophagic and Proteasomal Flux

Protein katabolizmindeki biyolojik ritimleri otofaji ve fare karaciğerinde proteozom yoluyla ölçme protokolümüzü tanımlıyoruz.

Otophagic ve Proteasomal Akı'da Diurnal Ritimlerin Ölçülmesi

Cells employ several methods for recycling unwanted proteins and other material, including lysosomal and non-lysosomal pathways. The main ...

Protokolümüz fare dokularında otofaji ve proteazomal aktivite oranının ölçülmesine olanak sağlar ve bu aktiviteler deki sirkadiyen varyasyonları tespit edecek kadar hassastır. Bu teknik hücre ve dokularda protein katabolizmini değerlendirmek için in vivo olarak kullanılabilir ve gerekli malzemeler nispeten düşük teknolojilidir ve herhangi bir moleküler biyoloji laboratuarı için erişilebilirdir. Prosedürü gösteren Mikhail Ryzhikov, laboratuvarımdan bir doktora sonrası.Her zaman noktasından on beş dakika önce, leupeptin ve bortezomib stok çözeltilerini oda sıcaklığına ısıtın ve steril PBS'de çözülmüş bortezomib'i seyrelterek mililitre çalışma çözeltisi başına 50 miligram verim verin. Proteaz inhibitörü uygulaması için, intraperitoneally her deneysel hayvan içine leupeptin kilogram başına 40 miligram veya bortezomib kilogram başına 1.6 mikrogram enjekte. Negatif kontrol için farelere 0,5 mililitre PBS enjekte edin.Her fareyi enjekte edilirken alınan tedavi türüne göre gruplanmış kafeslere geri döndürün ve farelerin standart bir tabloda tedavi edildiği veya manipüle edildiği zamanı kaydedin. Enjeksiyondan iki saat sonra, kurban edilen her deney hayvanından alınan sol karaciğer lobunu, buz üzerinde uygun şekilde etiketlenmiş 15 mililitrelik konik tüplerle yedi mililitre buz gibi soğuk homojenizasyon tamponuna batırın. Tüm numuneler elde edildiğinde, ilk numuneyi ve homojenizasyon tamponunun tüm hacmini 15 mililitre kapasiteli bir homogenizer'e aktarın ve numuneyi gevşek pistonun 10 darbesi ve 15 kontur ile homojenize edin.Ortaya çıkan ham homojeni orijinal tüpüne geri verin ve bir sonraki numuneyi az önce gösterildiği gibi homojenize edin. Tüm numuneler homojenleştirildiğinde, homojen çekirdekleri ve enkazları santrifüj le çökün ve her nükleer sonrası süpernatantın en üst dört mililitresini yeni 15 mililitrelik tüplere aktarın. Bu ilk süpernatant fraksiyonun protein konsantrasyonunu standart protokollere göre belirleyin ve gerekli olduğu gibi taze homojenizasyon tamponu ile tüm numunelerin konsantrasyonlarını mililitre başına 2,1 miligrama eşitleyin.Downstream analizi ve kalite iyileştirme için, eksi 80 santigrat depolama için 1,5 mililitre mikrosantrifüj tüpler içine normalleştirilmiş toplam protein fraksiyonları 500 mikrolitre aliquot. Kalan toplam protein fraksiyonlarının her birinin 1,5 mililitresini tek tek mikrosantrifüj tüplere aktarın ve protein örneklerini santrifüj ile peletleyin. Elde edilen ikinci fraksiyon süpernatların bir mililitresini buz üzerinde yeni mikrosantrifüj tüplere aktarın ve kalan süpernatanları aspire edin.3K peletleri yıkama başına 1,5 mililitre taze soğuk homojenizasyon tamponu içinde iki kez yıkayın, ardından 3K peleti 200 mikrolitre SDS-PAGE numune tamponunda yeniden askıya alın ve numuneleri 5 dakika boyunca 95 derecede kaynatın. 20, 000 x g ve dört santigrat derece 20 dakika için ikinci kesir supernatants spin ve yeni bir mikrosantrifüj tüp içine ortaya çıkan üçüncü sitoplazmik fraksiyon supernatants aktarın. SDS-PAGE analizi için, sitoplazmik fraksiyonun 150 mikrolitresini 50 mikrolitre 4x SDS-PAGE örnek tamponu ile birleştirin ve sitoplazmik fraksiyon örneklerini 5 dakika boyunca 95 derecede kaynatın.20K peletlerden kalan süpernatantı aspire edin ve numuneleri yıkama başına 1,5 mililitre taze soğuk homojenizasyon tamponu ile iki kez yıkayın. Daha sonra 20K peletini 100 mikrolitre SDS-PAGE örnek arabelleği içinde 95 derecede beş dakika kaynatın. Batı leke analizi için, seri olarak 1x örnek tampon da 1-3 standart eğri proteinleri seyreltmek ve bir 26 iyi 4-12% SDS-PAGE midi jel bir kuyuiçine her standart eğri örnek 10 mikrolitre yük, sonra prestained ticari molekül ağırlığı standart yükleyin.Otophagic akı ölçmek için, uygun kuyulara her 3K pelet numunesinin 12 mikrolitresini yükleyin. Proteasomal akı ölçmek için, uygun kuyulara her sitoplazmik fraksiyonun 12 mikrolitre yükleyin. Tüm kontrol ve deneysel numuneler yüklendiğinde, proteinleri standart protokollere göre poliviniliden florür membranlarına aktarmadan önce protein örneklerini SDS-PAGE ile ayırın.Makrootophagic akı analiz etmek için, anti-p62 veya anti-LcB antikor ile 3K pelet örnekleri içeren leke membranlar dört santigrat derece. Proteazomal akı analiz etmek için, anti-lizin 48-Spesifik poli ubikitin antikor ile sitoplazmik fraksiyon örnekleri içeren leke membranlar dört santigrat derece. Daha sonra standart ikincil antikorlar ve görüntüleme cihazları kullanarak batı lekelerini görüntüleyin.Hem standart eğri hem de deneysel numuneler için ilgi bantları üzerinde densitometrik ölçümler yapmak için uygun bir görüntü analizi yazılımı programı açın ve membranın üst tarafına kadar uzanan leke görüntüsünün altındaki protein monomerini kapsayan uzun bir dikdörtgen çizin. Dikdörtgeni kalan örneklere taşımak için kopyalayıp yapıştırın ve dikdörtgeni örnekler arasında tutarlı tutarak yapıştırın. Nicelliği bir elektronik tabloya kaydedin ve en uygun standart eğri denklemini elde etmek için doğrusal veya polinomlu regresyonda seri olarak seyreltilmiş standart örneği kullanarak elektronik tablo içinde densitometrik standart eğri oluşturun.Bu denklemi kullanarak, deneysel numuneler içindeki ilgi monomerlerinin miktarını tahmin edin. Akı ölçümleri elde etmek için, her inhibitör işlenmiş numunenin ekstrapolate protein miktarını pbs numunelerinin ortalama değerinden aynı zaman noktasından çıkarın. Daha sonra tek yönlü ANOVA kullanarak protein cirosunun zamansal değişiminin istatistiksel önemini değerlendirin.Herhangi bir zaman noktasında otofajik akı için birincil okuma, löpeptin tedavi edilen löpeptin ile lizozomla zenginleştirilmiş 3K pelet fraksiyonundaki sahte numuneler arasındaki makrootophaji spesifik belirteçlerin miktarıarasındaki farktır. Genellikle, sonuçlar bağımsız denemeler arasında karşılaştırma kolaylaştırır ortalama normalleştirilir. Proteolitik akı ölçme prosedürümüz, zamana bağlı bir süreç olan otofaji ve proteozom substratların birikimine neden olan löpeptin veya bortezomibin yeteneğine bağlıdır.Bu teknik, biyolojik ritimlerin karaciğer protein katabolizmini nasıl programdığının araştırılmasına olanak sağlamıştır. Biz hücresel temizlik fonksiyonları üzerinde hastalığın etkilerini araştırmak için önünü açacağını umuyoruz.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Unit 1

Intracellular Membrane Traffic

SCIENTISTS IN ACTION

Stable Isotopic Profiling of Intermediary Metabolic Flux in Developing and Adult Stage Caenorhabditis elegans

Stable Isotopic Profiling of Intermediary Metabolic Flux in Developing and Adult Stage Caenorhabditis elegans

Kararlı İzotopik Profil geliştirilmesi ve Yetişkin Sahne Aracı Metabolik Akı Caenorhabditis elegans</em

Stable isotopic profiling has long permitted sensitive investigations of the metabolic consequences of genetic mutations and/or pharmacologic therapies in ...

Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes

Hızlı Kalsiyum Dekapanları kardiyomiyositlerde Ölçme

Cardiomyocytes have multiple Ca2+ fluxes of varying duration that work together to optimize function 1,2. Changes in Ca2+ activity in response to ...

Monitoring Cell-autonomous Circadian Clock Rhythms of Gene Expression Using Luciferase Bioluminescence Reporters

Lusiferaz Biyoparlaklık Gazeteciler kullanma Gen Ekspresyonunun Hücre-özerk Sirkadiyen Saat Ritimleri İzlenmesi

In mammals, many aspects of behavior and physiology such as sleep-wake cycles and liver metabolism are regulated by endogenous circadian clocks ...

Assaying Proteasomal Degradation in a Cell-free System in Plants

Bitkilerde bir Cell-serbest Sistemde proteozomal indirgenme Assaying

The ubiquitin-proteasome pathway for protein degradation has emerged as one of the most important mechanisms for regulation of a wide spectrum of cellular ...

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Ölçme Mekansal ve zamansal Ca<sup&gt; 2+</supArabidopsis Bitkilerde&gt; Sinyalleri

Developmental and environmental cues induce Ca2+ fluctuations in plant cells. Stimulus-specific spatial-temporal Ca2+ patterns are sensed by cellular Ca2+ ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Hydra Glutatyon kaynaklı Besleme Tepki Ölçüm

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

sertliği ölçme<em&gt; Ex Vivo</emAtomik Kuvvet Mikroskobu Kullanma&gt; Fare aorta

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry

Multifektral Görüntüleme Akış Sitometrisi Kullanılarak LC3, p62 ve LAMP1 Birlikte Lokalizasyonu Ölçülerek Otofajik Fluxın Değerlendirilmesi

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via ...

The Lactate Dehydrogenase Sequestration Assay &#8212; A Simple and Reliable Method to Determine Bulk Autophagic Sequestration Activity in Mammalian Cells

The Lactate Dehydrogenase Sequestration Assay ÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚Â A Simple and Reliable Method to Determine Bulk Autophagic Sequestration Activity in Mammalian Cells

Laktat dehidrogenaz haciz tahlil — Toplu Autophagic haciz etkinliğini memeli hücreleri belirlemek için basit ve güvenilir Yöntem

Bulk autophagy is characterized by the sequestration of large portions of cytoplasm into double/multi-membrane structures termed autophagosomes. Here a ...

Measurement of Energy Metabolism in Explanted Retinal Tissue Using Extracellular Flux Analysis

Explanted Retina doku hücre dışı akı analizi ile enerji metabolizmasında ölçümü

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while ...