Name: immunohistochemistry test for the lyssavirus antigen detection from formalin-fixed tissues
Uploaded: 2021-10-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunohistochemistry Test for the Lyssavirus Antigen Detection from Formalin-Fixed Tissues at JoVE.com

Vi tackar arbetarna, epidemiologerna och dotterbolagen till folkhälsoavdelningar för provinlämningar till Centers for Disease Control and Prevention. Resultaten och slutsatserna i denna rapport är författarnas och representerar inte nödvändigtvis den officiella positionen för Centers for Disease Control and Prevention. Användning av handelsnamn och kommersiella källor är endast för identifiering och innebär inte godkännande av Centers for Disease Control and Prevention.

Medan IHC-protokollet utfördes på formalin-fasta vävnader, som inaktiverar RABV om det finns, bör lämpliga biosäkerhetsprotokoll följas korrekt. Alla biosäkerhetsförfaranden beskrivs i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) 5th Edition (https://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm), inklusive att bära korrekt personlig skyddsutrustning (PPE) och vaccinationskrav enligtbeskrivningen 12. Dessutom bör korrekt inneslutning och hantering av farliga kemi...

<ol>
	<li>Rupprecht, C., Kuzmin, I., Meslin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+rabies:+current+conundrums,+concerns,+contradictions+and+controversies.">Lyssaviruses and rabies: current conundrums, concerns, contradictions and controversies.</a> F1000Research. 6, 184 (2017).</li><li>Fooks, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+rabies+and+prospects+for+elimination.">Current status of rabies and prospects for elimination.</a> Lancet. 384 (9951), 1389-1399 (2014).</li><li>Finke, S., Brzozka, K., Conzelmann, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+fluorescence-labeled+rabies+virus:+enhanced+green+fluorescent+protein-tagged+phosphoprotein+P+supports+virus+gene+expression+and+formation+of+infectious+particles.">Tracking fluorescence-labeled rabies virus: enhanced green fluorescent protein-tagged phosphoprotein P supports virus gene expression and formation of infectious particles.</a> Journal of Virology. 78 (22), 12333-12343 (2004).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+Expert+Consulation+on+Rabies,+Third+Report.">WHO Expert Consulation on Rabies, Third Report.</a> WHO Technical Report Series. 1012, 1 (2018).</li><li>Goldwasser, R. A., Kissling, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+antibody+staining+of+street+and+fixed+rabies+virus+antigens.">Fluorescent antibody staining of street and fixed rabies virus antigens.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 98 (2), 219-223 (1958).</li><li>Lembo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+direct,+rapid+immunohistochemical+test+for+rabies+diagnosis.">Evaluation of a direct, rapid immunohistochemical test for rabies diagnosis.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (2), 310-313 (2006).</li><li>Fekadu, M., Greer, P. W., Chandler, F. W., Sanderlin, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+avidin-biotin+peroxidase+system+to+detect+rabies+antigen+in+formalin-fixed+paraffin-embedded+tissues.">Use of the avidin-biotin peroxidase system to detect rabies antigen in formalin-fixed paraffin-embedded tissues.</a> Journal of Virological Methods. 19 (2), 91-96 (1988).</li><li>Hamir, A. N., Moser, G., Rupprecht, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+five+year+(1985-1989)+retrospective+study+of+equine+neurological+diseases+with+special+reference+to+rabies.">A five year (1985-1989) retrospective study of equine neurological diseases with special reference to rabies.</a> Journal of Comparative Pathology. 106 (4), 411-421 (1992).</li><li>Inoue, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reactive+antigenicity+of+nucleoproteins+of+lyssaviruses+recognized+by+a+monospecific+antirabies+virus+nucleoprotein+antiserum+on+paraffin+sections+of+formalin-fixed+tissues.">Cross-reactive antigenicity of nucleoproteins of lyssaviruses recognized by a monospecific antirabies virus nucleoprotein antiserum on paraffin sections of formalin-fixed tissues.</a> Pathology International. 53 (8), 525-533 (2003).</li><li>Webster, J. D., Miller, M. A., Dusold, D., Ramos-Vara, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prolonged+formalin+fixation+on+diagnostic+immunohistochemistry+in+domestic+animals.">Effects of prolonged formalin fixation on diagnostic immunohistochemistry in domestic animals.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (8), 753-761 (2009).</li><li>Feiden, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+staining+of+rabies+virus+antigen+with+monoclonal+and+polyclonal+antibodies+in+paraffin+tissue+sections.">Immunohistochemical staining of rabies virus antigen with monoclonal and polyclonal antibodies in paraffin tissue sections.</a> Zentralblatt fur Veterinarmedizin Reihe B. 35 (4), 247-255 (1988).</li><li>Manning, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+rabies+prevention--United+States,+2008:+recommendations+of+the+Advisory+Committee+on+Immunization+Practices.">Human rabies prevention--United States, 2008: recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices.</a> Morbidity and Mortality Weekly Reports Recommendations and Reports. 57, 1-28 (2008).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory techniques in rabies. 1, 67-72 (2018).</li><li>Patrick, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Rabies+Surveillance+Using+a+Direct+Rapid+Immunohistochemical+Test.">Enhanced Rabies Surveillance Using a Direct Rapid Immunohistochemical Test.</a> Journal of Visualized Experiments. (146), (2019).</li><li>Whitfield, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+study+of+the+fluorescent+antibody+test+for+rabies+diagnosis+in+fresh+and+formalin-fixed+brain+tissue+specimens.">A comparative study of the fluorescent antibody test for rabies diagnosis in fresh and formalin-fixed brain tissue specimens.</a> Journal of Virology Methods. 95 (1-2), 145-151 (2001).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diagnostic procedures for antigen detection. , (2016).</li><li>Jarvis, J. A., Franke, M. A., Davis, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+direct+fluorescent+antibody+test+does+not+inactivate+rabies+or+eastern+equine+encephalitis+viruses.">Rabies direct fluorescent antibody test does not inactivate rabies or eastern equine encephalitis viruses.</a> Journal of Virology Methods. 234, 52-53 (2016).</li></ol>

På grund av den höga dödstalen av rabies efter symptomet insättande, diagnos av misstänkta djur för RABV infektion är extremt avgörande för en lämplig post-exposure profylaktisk behandling. Rabies diagnos beror främst på DFA, DRIT och PCR-baserade tekniker med färska eller frysta vävnader. För testning av formalin-fasta vävnader ger IHC-testet en alternativ metod för känslig och specifik detektion av RABV-antigen. Medan de vävnader som är fixerade i formalin har proteiner stabiliserade på grund av mo...

Rabies är en akut progressiv encefalit orsakad av den negativa känslan RNA-virus som tillhör släktet lyssavirus1. Nästan 99% av alla mänskliga dödsfall orsakade av infektionen med rabiesvirus (RABV), typmedlemmen av släktet, överförs av hundar2. Rabies diagnos av misstänkta djur förlitar sig på påvisande av antigen (främst viral kodade nukleoprotein, N protein) i komplex med genomisk RNA (ribonukleoprotein komplex, RNP) ihjärnvävnaden 3. Antigen detektion av direkt fluorescerande antikroppar (DFA) test anses vara guld standard för rabies diagnos4. Metoden använder färskt eller färskt fruset hjärnmaterial, ett beröringsintryck på en glidning, fixering i aceton, färgning med kommersiellt tillgängligt fluorescerande isothiocyanat (FITC) märkt monoklonal eller polyklonal antikropp (mAbs/ pAbs) och läst av fluorescensmikroskopi5. DFA-testet är snabbt, känsligt och specifikt för rabiesantigendetektering i färsk hjärnvävnad. Nyligen visades ett direkt snabbt immunohistokemiskt test (DRIT), modifierad immunohistokemi (IHC) teknik, uppvisa liknande känslighet som DFA men erbjuder fördelen med ljusmikroskopi för visualisering6. Medan detektionsmetoden som används i DRIT liknar IHC, använder det första steget färska eller frysta vävnader för att generera beröringsintryck av provet följt av fixering i formalin.
IHC är en allmänt använd teknik för att bestämma histologiska förändringar och detektion av proteiner med hjälp av specifika antikroppar i formalin-fasta vävnader inbäddade i paraffinblock. IHC är ett fastställt alternativt test för rabiesantigendetektion i vävnadssektionerna7. IHC har använts särskilt för diagnos av retrospektiva fall som uppvisade neurologiska sjukdomar för att bestämma bördan av rabies8. Paraffin-inbäddade formalin-fasta vävnader bevarar proteinerna för detektion även efter flera år när de lagras vid omgivningstemperatur9. Formalinbehandling ändrar proteiner genom att korslänka och ändra aminosyran sidokedjor, vilket kan göra epitoperna inte längre reaktiva mot antikroppar10. Medan IHC-testet för rabies antigen detektion involverar antingen mAbs eller pAbs, den senare är fördelaktig eftersom flera epitoper och divergerande lyssavirus kan detekteras11.
De standardsteg som är involverade i IHC är formalin fixering av vävnader, inbäddning i paraffinblock, sektionering av vävnader, deparaffinisering och hydrering, epitopåterhämtning, reaktivitet mot primära och sekundära antikroppar och utveckling med kromogena substrat. Detta manuskript beskriver en detaljerad redogörelse för protokollet för rabies diagnos. För rabies antigen detektion, mus serum immuniseras med RABV (pAbs) genereras vid U.S. Centers for Disease Control and Prevention (CDC) Atlanta, Georgia, i kombination med biotinylerade anti-mouse sekundära antikroppar används. Biotinylerade abs detekteras genom tillsats av streptavidin-pepparrot peroxidas (HRP) komplex följt av färgutvecklingen med amino-etylkarbazol substrat.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3% hydrogen peroxide</td>
			<td>Pharamacy brands</td>
			<td></td>
			<td>Off the shelf 3% H2O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Amino-9-ethylcarbazole (AEC)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A6926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetate Buffer pH 5.2</td>
			<td>Poly Scientific R&#38;D Corp.</td>
			<td>s140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffered Formalin 10% Phosphate Buffered</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td>Certified</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slips Corning</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-553-471</td>
			<td>24 X 50 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 190 Proof</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 200 Proof</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gill&#39;s hematoxylin formulation #2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>CS401-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoMark Biotin-Streptavidin Peroxidase Kit</td>
			<td>seracare</td>
			<td>71-00-18</td>
			<td>Mouse Primary Antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmunoHistoMount</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>i1161</td>
			<td>Mounting media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N, Dimethyl formamide GR</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>RR14440.01</td>
			<td>01M, pH 7.2 (pH 7.2-7.6)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plan-APOCHROMAT 40X/0.95 Objective</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plan-APOCHROMATIC 20X/0.75 Objective</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>53702</td>
			<td>Protease, Streptomyces griseus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scott&#39;s Tap Water&#160;</td>
			<td>Poly Scientific R&#38;D Corp.</td>
			<td>s1887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Slide stain set</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-294-72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TWEEN-80&#160;</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P1754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>X3S-4</td>
			<td>Histological Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Axioplan 2 imaging - microscope</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunohistochemistry test for the lyssavirus antigen detection from formalin-fixed tissues

En av de primära diagnostiska metoderna för rabies är påvisande av viral ribonukleoprotein (RNP) komplexa (antigen) i de infekterade vävnadsproverna. Medan det direkta fluorescerande antikroppstestet (DFA) eller det direkta snabba immunohistokemiska testet (DRIT) oftast används för antigendetektion, kräver båda testerna färska och/eller frysta vävnader för intryck på diabilder före antigendetektionen med antikroppar. Om prover samlas in och fixeras i formalin är inget av testerna optimalt för antigendetektion, men testning kan utföras av konventionell immunohistokemi (IHC) efter inbäddning i paraffinblock och sektionering. Med denna IHC-metod färgas vävnader med anti-rabies antikroppar, avsnitt är deparaffiniserade, antigen hämtas genom partiell proteolys eller andra metoder och inkuberas med primära och sekundära antikroppar. Antigener färgas med pepparrot peroxidas / amino etylkarbazol och kontrastained med hematoxylin för visualisering med hjälp av ett lätt mikroskop. Utöver den specifika antigendetektion erbjuder formalinfixering andra fördelar som bestämning av histologiska förändringar, avslappnade förhållanden för lagring och transport av prover (under omgivningstemperatur), förmåga att testa retrospektiva fall och förbättrad biologisk säkerhet genom inaktivering av smittämnen.

Figur 2 visar representativa IHC-färgningsresultat av positiva och negativa kontrollprover i olika testade hjärnvävnader. Figur 2A,D,G representerar positiva prover vid 200x, medan figur 2B,E,H motsvarar 400x förstoring. Figur 2A-C motsvarar hjärnstammen; Figur 2D-F mot...

Watch this Scientific Journal Video about Immunohistochemistry Test for the Lyssavirus Antigen Detection from Formalin-Fixed Tissues at JoVE.com

Immunohistochemistry Test for the Lyssavirus Antigen Detection from Formalin-Fixed Tissues

Här presenterar vi ett immunohistokemi testprotokoll för påvisande av rabies virus antigen som ett alternativt diagnostiskt test för formalin-fasta vävnader.

Immunohistokemitest för lyssavirusantigendetektering från formalin-fasta vävnader

One of the primary diagnostic modalities for rabies is the detection of viral ribonucleoprotein (RNP) complex (antigen) in the infected tissue samples. ...

Vävnader som används för immunohistokemi och för diagnostisk histopatologi är rutinmässigt fixerade i 10% fosfatbuffert formalin. Upptäckten av rabiesvirusantigen i hjärnvävnad som har fixerats i formalin utgör en unik utmaning, och IHC-testet har visat sig vara en känslig och specifik metod för rabiesvirusantigendetektering. Den främsta fördelen med biopsi eller andra detektionsmetoder är att antigener kan detekteras i förhållande till vävnad och cellulär morfologi.Med IHC, lokalisering av rabies antigen i hjärnan och icke-hjärnvävnader, ge ytterligare information som inte kunde erhållas genom rutinmässiga Hematoxylin och Eosin fläck avsnitt. Rabies diagnostiska testning är viktigt för inledandet av post-exposure profylax hos människor som utsätts för rabies virus. IHC är en av de vanligaste testerna på formalin-fasta vävnader.Med specifika antikroppar kan det användas för påvisande av respektive patogener. För att börja denna procedur, placera tre till fem millimeter bitar av hjärnvävnad, samlas in efter obduktion, i en 10%buffrad formalinlösning i 24 till 72 timmar. Registrera den ungefärliga vävnadsvikten, vävnadstypen och volymen formalin.Placera vävnaderna i 70% etanol för längre vävnadslagring efter formalinfixering och före bearbetning. Efter provfixeringen dissekerar du vävnaden för att inkludera de viktiga hjärnområdena, såsom tvärsnitt av hjärnstammen, lillhjärnan eller hippocampus. Skär till en tjocklek mellan tre och fem millimeter.Placera vävnaderna i bearbetningskassetter. Bearbeta vävnadskassetterna för paraffinvaxinfiltration. Bädda in dem i paraffinblock och dela upp dem på en mikrotom.Ställ först in färgningsskålen enligt figur 1 i textprotokollet. Fyll varje maträtt med 250 milliliter av den beredda lösningen. För att förbereda AEC substrat stamlösning, använd en glaspipett för att lösa upp en 20 milligram tablett AEC i 5 milliliter N, N-Dimetylformamid.För att förbereda proteaslagerlösningen, lös upp 7 milligram proteas i 200 milliliter PBS. För att förbereda sköljbufferten, tillsätt 100 milliliter Tween 80 till 990 milliliter PBS och blanda väl för att bilda en homogen lösning av PBT-T. Använd en mikrotom, gör en fem mikrometer paraffinsektion.Ladda sektionen på ett vattenbad vid 38 grader Celsius och samla den på glasrutschbanor. Märk bilderna med en reagensbeständig penna. Placera diabilderna på en bricka och smält i en ugn på 55 till 60 grader Celsius i en timme.Ta sedan bort bilderna från ugnen och deparaffinisera dem omedelbart, med 3 på varandra följande xylensköljningar på 5 minuter vardera. Därefter återfuktar du avsnitten på bilden genom sekventiella nedsänkningar i minskande utspädningar av etanol till avjoniserat vatten, som beskrivs i textprotokollet. Behandla bilderna med proteasen i 30 minuter för proteolytisk antigenhämtning, skölj sedan bilderna i PBS-T i 10 minuter och behandla dem med 3% väteperoxid i 10 minuter.Tvätta sedan bilderna igen med PBS-T i 10 minuter. Till att börja med tar du bort en bild från bufferten, ser till att bara hantera en bild i taget, medan de andra förblir nedsänkta, och använder en pappershandduk för att fläcka av överskottsbufferten runt vävnadssektionen. Placera diabilderna i en fuktighetskammare och inkubera med normalt getserum vid rumstemperatur i 15 minuter.Inkubera sedan diabilderna i fuktighetskammaren med den optimala förutbestämda utspädningen primära anti-rabiesantikroppar och negativa kontrollantikroppar vid rumstemperatur i 60 minuter utan tvättar däremellan. Tvätta därefter diabilderna med PBS-T i 10 minuter och inkubera i en fuktighetskammare med den biotinylerade antikroppen vid rumstemperatur i 15 minuter. Tvätta bilderna igen med PBS-T i 10 minuter.Inkubera diabilderna och fuktighetskammaren med banddelning och HRB-komplex vid rumstemperatur i 15 minuter och tvätta PBS-T i 10 minuter. Inkubera sedan med AEC i en fuktighetskammare vid rumstemperatur i 10 minuter. Tvätta rutschkanorna i avjoniserat vatten i 10 minuter och kontra med Gills Hematoxilyn, utspädd en till två med avjoniserat vatten i två minuter.Skölj sedan av överskottet av hematoxylin genom att doppa sköljning av diabilderna i avjoniserat vatten. Skölj rutschkanorna i Scott's Tap Water i 30 sekunder och tvätta i avjoniserat vatten i 10 minuter. Ta bort diabilderna en i taget och montera dem med vattenlösligt monteringsmedium.Använd sedan ett ljusmikroskop för att läsa bilderna. I denna studie demonstreras ett immunocytiskt kemitest för påvisande av rabiesvirusantigen som ett alternativt diagnostiskt test för formalin-fasta vävnader. Ett representativt immunocytiskt kemi färgningsresultat av positiva och negativa kontrollprover i olika hjärnvävnader visas här, inklusive hjärnstammen, lillhjärnan och purkinje cellerna, och hippocampus.Magenta röd färgning, som indikerar färgutvecklingen med hjälp av AEC substrat mot den blå motstained bakgrunden, beror på reaktivitet av antikroppar mot rabies antigen. Ett positivt resultat i Immunohistokemi motsvarar magentaröd färgning i vävnadssektionerna. Färgning av cytoplasmic införanden och granulat införanden av varierande storlek är vägledande för prover positiva för RABV infektioner.Proverna anses vara negativa om ingen specifik röd färgning eller endast den blå bakgrunden, på grund av hematoxylin, observerades. Förutom den positiva färgningen kan fördelningen av inneslutningar ge indirekt kvantifiering av nivåerna av rabiesantigen i provet, vilket kan motsvara vävnadsprovens virusbelastning. Oavsett distributionsnivåer kommer varje specifik färgning att klassificera provet som positivt för rabv-antigendetektering.Vävnader bör fixeras på lämpligt sätt i formalin och undvika att frysa vävnaderna under denna process. Rabiesantigen detekteras av IHC, då molekylära tekniker kan utföras på paraffinsektioner för att bestämma Lyssavirus variant baserat på RNA sekvens information. Reagenser som xylen och formalin ska hanteras i rökhuvar.Försiktighet bör vidtas vid hantering av AEC eftersom det är cancerframkallande.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

Detektion av infektiösa virus från Field-in Myggor av vero-cellodling analys

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test

Diagnos lungtuberkulos med Xpert MTB / RIF Test

Tuberculosis (TB) due to Mycobacterium tuberculosis (MTB) remains a major public health issue: the infection affects up to one third of the world ...

A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas

A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas

A Novel Microdissection förhållningssätt till Återställa<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Särskilda Avskrifter från formalinfixerad paraffininbäddade Lung Granulom

Microdissection has been used for the examination of tissues at DNA, RNA, and protein levels for over a decade. Laser capture microscopy (LCM) is the most ...

Detection of Human Leukocyte Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizing Label-free Biosensor Technology

Upptäckt av HLA-antigen Biomarkers i bröstcancer Använda Label fria Biosensor Teknik

According to the American Cancer Society, more than 200,000 women will be diagnosed with invasive breast cancer each year and approximately 40,000 will ...

Isolation of Leukocytes from the Murine Tissues at the Maternal-Fetal Interface

Isolering av leukocyter från Murina vävnader på Maternal-Fetal Interface

Immune tolerance in pregnancy requires that the immune system of the mother undergoes distinctive changes in order to accept and nurture the developing ...

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

Nasal Wipes för influensa A-virus Upptäckt och isolering från svin

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

Generation of Two-color Antigen Microarrays for the Simultaneous Detection of IgG and IgM Autoantibodies

Generation av två färger Antigen Microarrays för samtidig detektion av IgG och IgM autoantikroppar

Autoantibodies, which are antibodies against self-antigens, are present in many disease states and can serve as markers for disease activity. The levels ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

Detection och anrikning av sällsynta antigenspecifika B-celler för analys av Fenotyp och funktion

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

Isolation, Characterization, and Purification of Macrophages from Tissues Affected by Obesity-related Inflammation

Isolering, karakterisering och rening av makrofager från vävnader som påverkas av fetma-relaterade Inflammation

Obesity promotes a chronic inflammatory state that is largely mediated by tissue-resident macrophages as well as monocyte-derived macrophages. ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Test för påvisande av Antigen-specifika T-cell cytolytisk funktion använder en Vaccination modell

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...