Oksijen gradyan ektasittometrisi bireysel hastalık eğilimini değerlendiren fonksiyonel bir tetkiktir. Bugüne kadar, başka işlevsel tahliller mevcut veya kullanılır. Oksijen gradyan ektasittometriorle hücre hastalığı olan hastanın kan hücrelerinin orak başlar hangi oksijen gerginliği belirlemek mümkün.
Bu oksijen gerginliği hastaya özgüdür ve hastalığın şiddeti için bir biyomarker görevi görebilir. Orak hücre hastalığında bu teknik tedavinin etkinliğini izlemek için kullanılabilir ve yeni tedavilerin geliştirilmesinde kullanılabilir. Çok hassas olduğu için bu tekniğin görsel gösterimi önemlidir.
Bu teknikle çalışmaya başladığınızda bilmediğiniz ölçümü etkileyecek çok sayıda faktör vardır. Bunu ilk kez deneyen biri, tekniğin numune hazırlama ve numune işleme için çok hassas olduğunu deneyimleyebilir. Benim tavsiyem mümkün olduğunca standart çalışma ve bir rutin geliştirmektir.
Bu yordamı başlatmak için, bilgisayarı ve ektasitometreyi açın ve bilgisayardaki yazılımı açın. Azotun numuneyi oksijensizleştirmek için uygun olduğundan emin olmak için azot silindirini açın. Fincan bob düşürün ve fincan serbestçe açabilirsiniz emin olun.
Yazılım çalışırken, gaz valfinin açık olduğundan emin olun ve Tamam'ı tıklatın. Ektasitometrenin kendi kendini kontrol işlemini başlattığından emin olun ve başlat'ı seçin. Kendi kendine kontrol başarısız olursa, donanım denetimi, pO2, kendi kendine kontrol'e tıklayarak yeniden çalıştırın. Solda listelenen farklı testler pO2 tonu seçin.
Ekranın sağındaki ayarları seçin ve her ölçüm için aynı ayarları tutmak için metin protokolünün tablobirinde listelenen parametrelere göre ayarlandığından emin olun. Tamam'ı tıklatarak bu ayarları kaydedin, ardından tekrar Tamam'ı tıklatın. İlk olarak, EDTA içeren bir tüp içinde kaplama ile kan örnekleri toplamak ve en az 30 dakika ama en fazla 24 saat için dört santigrat derecede kan saklayın.
Bundan sonra, homojenize etmek için inversiyon tarafından örnekleri nazikçe karıştırın. Numuneler ölçümden önce rulo tezgahta oda sıcaklığına kadar ısınsın. Ölçmeye başlamak için hematoloji analizörünün iğnesinin arkasındaki düğmeye basarak ve tam kan 20 ila 200 mikrolitre arasında bir hematoloji analizörü kullanın.
Daha sonra eklenecek numunenin hacmini hesaplayarak, tüm kan örneğini beş mililitre PVP'de 200 milyon kırmızı kan hücresi nin RBC sayısına standartlaştırın. Başlamak için, bir pipet ucu kesilmiş ve üç kez kan resuspend tarafından önceden ıslak. Daha sonra hesaplanan örnek hacmi bir PVP şişesine pipet.
Homojen olana kadar numuneyi el ile ters çevrilerek hafifçe karıştırın. Yavaş yavaş iğne olmadan üç mililitre şırınga içine kan ve PVP karışımı iki mililitre çizin. 1,5 ila 1,8 mililitre şırıngada kalana kadar görünür hava kabarcıklarını ve fazla numune çözeltisini çıkarmak için pistonu itin.
Toplam numune hacmini konektör aracılığıyla bob'a yavaşça ve eşit bir şekilde enjekte edin. Numunenin seviyesinin oksijen sensörü nün ve küçük emme deliğinin üzerinde olduğundan emin olun. Yazılımda, yeniyi tıklatın ve örnek tanımlayıcıyı, açıklamaları, bağış tarihini ve PVP'nin viskozitesini doldurun.
Tamam ve aspire'i tıklatın. 60 saniye lik aspire ettikten sonra, fincan döner ve 15 saniye boyunca tekrar aspire edilir. Döndürme durduğunda Tamam'ı tıklatın. Makinenin kapağını kapatın.
Tıklayın devam edin ve oksijen gradyan ektasittometri sabit bir kazanç ile yapılır gibi şimdi başlayın. Ölçümden sonra, yazılım tarafından otomatik olarak hesaplanan eğriyi ve parametreleri gösteren raporu yazdırın. Ham verilerin ayarlarda belirtilen klasörde otomatik olarak depolandığından emin olun.
İlk olarak, örnek şırıngayı çıkarın ve distile su veya deiyonize su ile dolu bir şırınga ile değiştirin. Durulama sırasında konektörü temizleyin ve yavaşça temizleyin ve her iki yönde de sifonu çektiğinden emin olun. Sonra şırıngayı çıkarın ve bob'u kaldırın.
Iyice bob ve konektör kurutmak için yumuşak bir bez kullanın. Sonra tüp ve bob kalan herhangi bir su kaldırmak için konektör floş için büyük bir şırınga kullanın. Girişte şırınga tutun ve tüpler geri basınç almak için bob çıkış blok ve kalan su kaldırarak.
Daha sonra oksijen noktasına dokunmaktan kaçınarak bardağı kurulayın. Bob ve fincan sonraki ölçüm için makine hazır düşürün. Makinenin düzgün bir şekilde durulanmasını sağladıktan sonra, uygun tüplerin temizleme solüsyonuyla ilgili olduğundan emin olun.
Yazılımı kapatın, yakın basın ve gün sonu temizleme programına başlamak için basın. Sonra atık şişe boş ve bob ve fincan kurulamak için yumuşak bir bez kullanın. Makinenin kapağını kapatın.
Azot silindirini kapatın ve bilgisayarı ve makineyi kapatın. Oksijen gradyan ektasittometri oksijen konsantrasyonları bir dizi altında kırmızı kan hücrelerinin hasta davranışı incelemek için kullanılabilir. Oksijen gradyan ektasitatominde, numunenin azot gazı ile sürekli oksijensizasyonu, ortam havası ile hızlı reoksijenasyon takip edilir.
Bu koşullar altında, kırmızı kan hücre hastalanması deoksijenasyon altında görülebilir. Hasta kırmızı hücreler uygulanan kesme stresi altında düzgün hizalanmaz, çünkü bu kırınım deseni bir bozulmaya neden olur. Orak kırmızı kan hücreleri oksijen gradyan ektasitometri sırasında koşulları taklit eden ancak oksijenli zaman şekil değişikliği gösteren deoksijenasyon sırasında şekil değişikliği gösterir.
Bu süreç, oksijen gradyan ektasittometrisi sırasında kırınım deseninin bozulmasına ve böylece uzama indeksinin azalmasına neden olur. Ektasitometre tarafından elde edilen temsili eğri, hastalık davranışının farklı özelliklerini yansıtan altı parametreyi gösterir: maksimum uzama indeksi, minimum uzama indeksi, delta EI, hastalık noktası, eğrinin altındaki alan ve kurtarma. Sağlıklı kontrollerden kırmızı kan hücrelerinin temsili eğrileri, HbS özelliği olan hastalar ve homozigot orak hücreli hasta burada gösterilmiştir.
Hidroksil üre ve transfüzyon ile tedavi homozigot orak hücreli hastaların temsili eğrileri net farklılıklar bu töz yararlılığını vurgulamaktadır. Sıcaklık, pH ve PVP ozolaritesi gibi oksijen gradyan ektasitatografisini etkileyen çok sayıda faktör vardır, ancak aynı zamanda su kalıntıları ve kan numunesi çözeltisinin karıştırma derecesi ölçümleri etkileyebilir. Bu nedenle, standart örnek işleme esastır.
Oksijen gradyan ektasittometrisinin sonucu klinik uygulamalarda doğrudan uygulanarak kişiselleştirilmiş tıbba katkıda bulunabilir. Bu teknik, orak hücre hastalığı için yeni tedavilerin potansiyelini araştırmak için hastalanma davranışının incelenmesini mümkün kılar ve hastalığın şiddeti için klinik olarak uygun bir biyomarker olarak hizmet verebilir.
