Name: solid phase 11c-methylation, purification and formulation for the production of pet tracers
Uploaded: 2019-10-24T14:30:00
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Diese Studie wurde teilweise durch ein Stipendium 18-05 von der Alzheimer es Society of Canada (für A. K.) und der Brain Canada Foundation mit Unterstützung von Health Canada unterstützt. Die Autoren möchten die McGill University Faculty of Medicine, das Montreal Neurological Institute und das McConnell Brain Imaging Centre für die Unterstützung dieser Arbeit würdigen. Wir danken auch Frau Monica Lacatus-Samoila für die Hilfe bei der Qualitätskontrolle und Drs. Jean-Paul Soucy und Gassan Massarweh für den Zugang zu Radioisotopen und der Radiochemieanlage.

1. Herstellung von Puffern und Eluenten
<ol><li>2,72 g Natriumacetattrihydrat in 100 ml Wasser auflösen, um 0,2 m Natriumacetatlösung (Lösung A) herzustellen.</li>
	<li>11,4 ml Eisessigsäure in 1 L Wasser auflösen, um 0,2 M Essigsäurelösung (Lösung B) zuzubereiten.</li>
	<li>Kombinieren Sie 50 ml Lösung A mit 450 ml Lösung B, um den Acetatpuffer bei pH 3,7 (Puffer 1) gemäß pufferreferenzzentrum15vorzubereiten. Überprüfen Sie den pH-Wert des Puffers mit pH-Streifen oder einem pH-Mes...

<ol>
	<li>Langstrom, B., Lundqvist, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+preparation+of+11C-methyl+iodide+and+its+use+in+the+synthesis+of+11C-methyl-L-methionine.">The preparation of 11C-methyl iodide and its use in the synthesis of 11C-methyl-L-methionine.</a> The International journal of applied radiation and isotopes. 27 (7), 357-363 (1976).</li><li>Larsen, P., Ulin, J., Dahlstr&#248;m, K., Jensen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+[11C]iodomethane+by+iodination+of+[11C]methane.">Synthesis of [11C]iodomethane by iodination of [11C]methane.</a> Applied radiation and isotopes. 48 (2), 153-157 (1997).</li><li>Jewett, D. 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Buffer Reference Center Available from: <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/life-science/core-bioreagents/biological-buffers/learning-center/buffer-reference-center.html">https://www.sigmaaldrich.com/life-science/core-bioreagents/biological-buffers/learning-center/buffer-reference-center.html</a> (2019)</li><li>Philippe, C., Mitterhauser, M., Wadsak, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+18,+Synthesis+of+2-(4-N-[11C]Methylaminophenyl)-6-Hydroxybenzothiazole+([11C]6-OH-BTA-1;+[11C]PIB).">Chapter 18, Synthesis of 2-(4-N-[11C]Methylaminophenyl)-6-Hydroxybenzothiazole ([11C]6-OH-BTA-1; [11C]PIB).</a> Radiochemical Syntheses. , 177-189 (2012).</li><li>Shao, X., Fawaz, M. V., Jang, K., Scott, P. J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+Applications+of+[11C]Hydrogen+Cyanide.">Synthesis and Applications of [11C]Hydrogen Cyanide.</a> Radiochemical Syntheses. , 207-232 (2015).</li><li>Ametamey, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiosynthesis+and+preclinical+evaluation+of+11C-ABP688+as+a+probe+for+imaging+the+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+5.">Radiosynthesis and preclinical evaluation of 11C-ABP688 as a probe for imaging the metabotropic glutamate receptor subtype 5.</a> Journal of Nuclear Medicine. 47 (4), 698-705 (2006).</li><li>Ametamey, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+PET+studies+of+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+5+with+11C-ABP688.">Human PET studies of metabotropic glutamate receptor subtype 5 with 11C-ABP688.</a> Journal of Nuclear Medicine. 48 (2), 247-252 (2007).</li></ol>

Trotz der jüngsten Entstehung und FDA-Zulassung von mehreren 18F-markierten PET-Tracern, wie Florbetapir, Florbetaben und Flutemetamol, [11C]PiB bleibt ein Gold Standard Tracer für Amyloid-Bildgebung aufgrund der schnellen Gehirnaufnahme und niedrige unspezifische band. Derzeit wird dieser Tracer entweder über nasse Chemie16 oder mit einem "Trockenschleifen"-Ansatz4,17synthetisiert. Beide Methoden erforder...

Die Positronen-Emissionstomographie (PET) ist eine molekulare bildgebende Modalität, die auf dem Nachweis des radioaktiven Zerfalls eines Isotops beruht, das an einem biologisch aktiven Molekül befestigt ist, um die In-vivo-Visualisierung biochemischer Prozesse, Signale und Transformationen zu ermöglichen. . Carbon-11 (t1/2 = 20,3 min) ist eines der am häufigsten verwendeten Radioisotope in PET wegen seiner Fülle an organischen Molekülen und der kurzen Halbwertszeit, die mehrere Tracer-Verabreichungen am selben Tag für dasselbe menschliche oder tierische Subjekt und die Strahlenbelastung der Patienten reduziert. Viele mit diesem Isotop gekennzeichnete Tracer werden in klinischen Studien und in der medizinischen Grundlagenforschung für die in vivo PET-Bildgebung klassischer und neu entstehender biologisch relevanter Targets verwendet - [11C]raclopride für D2/D3-Rezeptoren, [11C] PiB für Amyloid-Plaques, [11C]PBR28 für Translocator-Protein - um nur einige zu nennen.
Carbon-11-markierte PET-Tracer werden überwiegend durch 11C-Methylierung von nicht-radioaktiven Vorläufern hergestellt, die -OH (Alkohol, Phenol und Carbonsäure), -NH (Amin und Amid) oder -SH (Thiol) Gruppen enthalten. Kurz gesagt, das Isotop wird im Gasziel eines Zyklotrons über eine 14N(p,))11C Kernreaktion in chemischer Form von [11C]CO2 erzeugt. Letzteres wird dann in [11C]methyliodid ([11C]CH3I) entweder über Nasschemie (Reduktion auf [11C]CH3OH mit LiAlH4 gefolgt von Abschreckung mit HI)1 oder Chemie (katalytische Reduktion auf [11C]CH4 gefolgt von radikaler Iodination mit molekularem I2)2. [11C] CH3I kann dann weiter in das reaktivere 11C-Methyltriflate ([11C]CH3OTf) umgewandelt werden, indem es über eine silberne Triflatesäule3übergeben wird. Die 11-C-Methylierungerfolgt dann entweder durch Blasen des radioaktiven Gases in eine Lösung des nicht-radioaktiven Vorläufers in organischem Lösungsmittel oder über das elegantere Lösungsmittel "Loop"-Verfahren4,5. Der 11C-Tracer wird dann mit Hilfe von HPLC gereinigt, in einem biokompatiblen Lösungsmittel umformuliert und durch einen sterilen Filter geleitet, bevor er menschlichen Probanden verabreicht wird. Alle diese Manipulationen müssen schnell und zuverlässig sein, angesichts der kurzen Halbwertszeit von Kohlenstoff-11. Der Einsatz eines HPLC-Systems erhöht jedoch signifikant die Verluste des Tracers und die Produktionszeit, erfordert oft den Einsatz toxischer Lösungsmittel, erschwert die Automatisierung und führt gelegentlich zu fehlgeschlagenen Synthesen. Darüber hinaus verlängert die erforderliche Reinigung der Reaktoren und der HPLC-Säule Verzögerungen zwischen den Synthesen nachfolgender Tracerchargen und erhöht die Strahlenexposition des Personals.
Die Radiochemie von Fluor-18 (t1/2 = 109,7 min), dem anderen weit verbreiteten PET-Isotop, wurde vor kurzem durch die Entwicklung von Kassetten-basierten Kits vorangetrieben, die die Notwendigkeit einer HPLC-Reinigung ausdemivieren. Durch den Einsatz von Solid-Phase-Extraktions-Kartuschen (SPE) ermöglichen diese Volleinweg-Kits die zuverlässige Routineproduktion von 18F-Tracern, einschließlich [18F]FDG, [18F]FMISO, [18F]FMC und anderen, mit kürzerer Synthese reduzierter Personaleinsatz und minimale Wartung der Geräte. Einer der Gründe, warum Carbon-11 ein weniger beliebtes Isotop in der PET-Bildgebung bleibt, ist das Fehlen ähnlicher Kits für die Routinemäßigproduktion von 11C-Tracern. Ihre Entwicklung würde die synthetische Zuverlässigkeit deutlich verbessern, die radiochemischen Erträge erhöhen und die Automatisierung und vorbeugende Wartung der Produktionsmodule vereinfachen.
Derzeit verfügbare Produktionskits nutzen preiswerte, EINweg-SPE-Kartuschen anstelle von HPLC-Säulen für die Trennung des Radiotracers von unreagiertem radioaktiven Isotop, Vorläufer und anderen radioaktiven und nicht-radioaktiven Nebenprodukten. Im Idealfall verläuft die Radiolabel-Reaktion auch auf der gleichen Patrone; z. B. die [18F]Fluormethylierung von Dimethylaminoethanol mit gasförmigem [18F]CH2BrF bei der Herstellung von Prostatakrebs-Bildgebung PET Tracer [18F]fluoromethylcholin tritt auf einer Kation-Austausch-Harzkartusche auf 6. Obwohl ähnliche Verfahren für die Radiobeschriftung von mehreren 11C-Tracern auf Patronen berichtet wurden7,8 und wurde besonders leistungsfähig für die Radiosynthese von [11C]cholin9 und [11C]Methionin10, diese Beispiele bleiben auf onkologische PET-Tracer beschränkt, bei denen die Trennung vom Vorläufer oft nicht erforderlich ist. Kürzlich berichteten wir über die Entwicklung von "[11C]kits" für die Herstellung von [11C]CH3I11 und nachfolgender 11C-Methylierung sowie fester phasengestützter Synthese12 in unseren Bemühungen, die routinemäßige Produktion von 11C-Tracern zu vereinfachen. Hier möchten wir unsere Fortschritte am Beispiel der soliden Phase unterstützten Radiosynthese von [11C]PiB, einem Radiotracer für die Bildgebung von Aa, demonstrieren, der das Feld der Alzheimer-Krankheit (AD) Revolutioniert hat, als es 2003 zum ersten Mal entwickelt wurde ( Abbildung 1) 13,14. Bei dieser Methode wird flüchtige [11C]CH3OTf (bp 100 °C) über 6-OH-BTA-0 Vorläufer auf dem Harz einer Einwegpatrone abgelagert. PET Tracer [11C]PiB wird dann durch Elution aus der Kartusche mit biokompatiblem wässrigem Ethanol von der Vorstufe und radioaktiven Verunreinigungen getrennt. Darüber hinaus haben wir diese Methode der[11C]PiB Radiosynthese mit einem ferngesteuerten Radiochemie-Synthesemodul und Einwegkassettenkits automatisiert. Insbesondere haben wir diese Radiosynthese auf einem 20-Ventil-Radiochemiemodul implementiert, das mit Spritzenantrieb (Dispenser) ausgestattet ist, der standardmäßig 20 ml Einweg-Kunststoffspritze, Gasdurchflussregler, Vakuumpumpe und Messgerät passt. Aufgrund der Einfachheit dieser Methode sind wir zuversichtlich, dass sie auf die meisten kommerziell erhältlichen automatisierten Synthesizer umgestellt werden kann, entweder auf Kassettenbasis oder mit stationären Ventilen ausgestattet. Diese solide Phasenunterstützte Technik erleichtert [11C]PiB-Produktion, die den GMP-Vorschriften (Good Manufacturing Practice) entspricht, und verbessert die Synthesezuverlässigkeit. Die hier beschriebene Technik reduziert auch die Für die Radiosynthese erforderliche Vorläufermenge, verwendet nur "grüne" biokompatible Lösungsmittel und verringert die Zeit zwischen aufeinanderfolgenden Produktionschargen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-OH-BTA-0</td>
			<td>ABX advanced biochemical compounds</td>
			<td>5101</td>
			<td>Non-radioactive precursor of [11C]PiB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-OH-BTA-1</td>
			<td>ABX advanced biochemical compounds</td>
			<td>5140</td>
			<td>Non-radioactive standard of [11C]PiB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1200 HPLC system</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>Agilent 1200</td>
			<td>Analytical HPLC system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Commercial alcohols</td>
			<td>432526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe (luer-tip, 250 &#181;L)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>HAM80701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MZ Analytical PerfectSil 120</td>
			<td>MZ-Analysentechik GmbH</td>
			<td>MZ1440-100040</td>
			<td>Analytical HPLC column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perkin Elmer Clarus 480 GC system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Clarus 480</td>
			<td>Gas chromotograph</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polycarbonate manifold</td>
			<td>Scintomics</td>
			<td>ACC-101</td>
			<td>Synthesis manifold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restek MTX-Wax column (30 m, 0.53 mm)</td>
			<td>Restek</td>
			<td>70625-273</td>
			<td>Analytical GC column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scintomics GRP module</td>
			<td>Scintomics</td>
			<td>Scintomics GRP</td>
			<td>Automated synthesis unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sep-Pak tC18 Plus</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT020515</td>
			<td>Solid phase extraction cartridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>solvent-resistant manifold</td>
			<td>Scintomics</td>
			<td>ACC-201</td>
			<td>Synthesis manifold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>405181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile extension line</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>8255059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLLG013SL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile vial (20mL)</td>
			<td>Huayi</td>
			<td>SVV-20A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile water</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>JF7623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synthra MeIplus Research</td>
			<td>Synthra</td>
			<td>MeIplus Research</td>
			<td>[11C]CH3I/[11C]CH3OTf module</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (10 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (20 mL)</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4617207V</td>
			<td>Dispenser syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vent filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>TEFG02525</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

solid phase 11c-methylation, purification and formulation for the production of pet tracers

Die routinemäßige Produktion von Radiotracern, die in der Positronenemissionstomographie (PET) verwendet werden, beruht hauptsächlich auf nasser Chemie, bei der das radioaktive Synthon mit einem nicht-radioaktiven Vorläufer in Lösung reagiert. Dieser Ansatz erfordert die Reinigung des Tracers durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) gefolgt von einer Neuformulierung in einem biokompatiblen Lösungsmittel für die menschliche Verabreichung. Wir haben vor kurzem einen neuartigen 11C-Methylierungsansatz für die hocheffiziente Synthese von Kohlenstoff-11-gekennzeichneten PET-Radiopharmazeutika entwickelt, wobei wir festaktige Phasenkartuschen als Einweg-"3-in-1"-Einheiten für die Synthese, Reinigung und Neuformulierung der Tracer. Dieser Ansatz versagt den Einsatz von präparativem HPLC und reduziert die Verluste des Tracers in Transferleitungen und durch radioaktiven Zerfall. Darüber hinaus verbessert die auf Patronen basierende Technik die Synthesezuverlässigkeit, vereinfacht den Automatisierungsprozess und erleichtert die Einhaltung der GMP-Anforderungen (Good Manufacturing Practice). Hier zeigen wir diese Technik am Beispiel der Produktion eines PET Tracer Pittsburgh-Verbindung B ([11C]PiB), einem Goldstandard-In-vivo-Bildgebungsmittel für Amyloid-Plaques im menschlichen Gehirn.

Um eine typische Radiosynthese von [11C]PiB zusammenzufassen, wird gasförmiges [11C]CH3OTf zuerst durch eine tC18-Patrone geleitet, die mit einer Vorstufevorstufe vorinstalliert ist (Abbildung 1). Die Trennung des Reaktionsgemisches erfolgt dann durch sukzessive Elution mit wässrigen Ethanollösungen wie folgt. Zuerst elutiert 12,5% EtOH die Mehrheit der unreagierten [11C]CH3OTf und 6-OH-BTA-0, dann wä...

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Solid Phase 11C-Methylation, Purification and Formulation for the Production of PET Tracers

Wir berichten über eine effiziente Carbon-11-Radiolabeling-Technik zur Herstellung klinisch relevanter Tracer für die Positronen-Emissionstomographie (PET) mit Festphasen-Extraktionspatronen. 11 C-Methylierungsmittel wird durch eine Patrone mit Vorläufer vorinstalliert und aufeinanderfolgende Elution mit wässrim Ethanol liefert chemisch und radiochemisch reine PET-Tracer in hohen radiochemischen Erträgen.

Feste Phase 11C-Methylierung, Reinigung und Formulierung für die Herstellung von PET Tracern

Routine production of radiotracers used in positron emission tomography (PET) mostly relies on wet chemistry where the radioactive synthon reacts with a ...

Carbon-11 ist eines der am weitesten verbreiteten Radioisotope in der Positronenemissionstomographie wegen seiner Fülle an organischen Molekülen und einer kurzen Halbwertszeit von 20 Minuten. In diesem Video zeigen wir eine effiziente Carbon-11-Radiolabel-Technik mit Festphasen-Extraktionspatronen. Im Vergleich zu herkömmlichen Methoden verakademien die auf Patronen basierenden Techniken den Einsatz von HPLC, verkürzen die Radiosynthesezeit, verbessern die Synthesezuverlässigkeit, vereinfachen den Automatisierungsprozess und erleichtern die Einhaltung der Good Manufacturing Practices, GMP.Die patronenbasierte Technik wird hier auf der Radiosynthese von C11 PiB demonstriert, einem PET-Tracer, der für die In-vivo-Bildgebung von Amyloid-Plaques im Gehirn von Alzheimer-Patienten verwendet wird. Kürzlich haben wir die Drei-in-Eins-Technik auf die Radiosynthese von C11 ABP688, einem PET-Tracer zur Abbildung von metabotropen Glutamatrezeptoren Typ 5, sowie anderer Kohlenstoff-11-markierter Tracer angewendet. Kombinieren Sie 450 Milliliter 0,2-Molar-Lösung essigsäure mit 50 Milliliter 0,2-Molar-Lösung von Natriumacetat, um den Acetatpuffer bei pH 3,7 als Puffer eins vorzubereiten.Überprüfen Sie den pH-Wert des Puffers mit pH-Streifen oder einem pH-Messgerät. Kombinieren Sie dann 12,5 Milliliter absolutes Ethanol mit 87,5 Milliliter Acetatpuffer in einer 100-Milliliter-Flasche, um 12,5% wässrige Ethanollösung als Waschlösung herzustellen. Kombinieren Sie 15 Milliliter absolutes Ethanol mit 85 Milliliter Acetatpuffer in einer 100-Milliliter-Flasche, um 15% wässrige Ethanollösung als Waschzweizulage herzustellen.Kombinieren Sie fünf Milliliter absolutes Ethanol mit fünf MilliliterAcetatpuffer, um 50% wässrige Ethanollösung als Endeluent zu machen, und ziehen Sie 2,5 Milliliter dieser Lösung in eine 10-Milliliter-Spritze. Um die tC18-Patrone vom weiblichen Ende aus vorzukonditionen, verwenden Sie eine Spritze, um 10 Milliliter Wasser zu übergeben, gefolgt von fünf Millilitern Aceton durch die Patrone. Trocknen Sie die Patrone mit einem Stickstoffstrom von 50 Millilitern pro Minute für eine Minute.In einem Eppendorf-Rohr zwei Milligramm des Vorläufers 6-OH-BTA-0 in einem Milliliter wasserfreiem Aceton auflösen. Halten Sie eine Luer-Spitze, 250-Mikroliter, Präzisionsglasspritze nach unten, ziehen Sie 100 Mikroliter der Vorläuferlösung und dann 50 Mikroliter Luftkissen. Entfernen Sie die Nadel, und tippen Sie auf die Spritze, um sicherzustellen, dass sich das Luftkissen über der Lösung in einer Spritze befindet.Tragen Sie die Vorläuferlösung vom weiblichen Ende auf die tC18-Patrone auf, indem Sie den Kolben langsam ganz nach unten drücken. Drücken Sie die Luft nicht weiter. Sichern und montieren Sie den Standard-Einwegkrümmer mit fünf Ports am Synthesemodul.Port eins hat zwei Positionen. Schließen Sie den horizontalen Einlass an den automatisierten Spender an, der mit einer 20-Milliliter-Spritze ausgestattet ist. Verbinden Sie den vertikalen Einlass mit der Flasche mit Waschen.Schließen Sie den Ausgang des Moduls an, das C11-Methyltriflat erzeugt, um zwei der Verteiler zu portieren. Installieren Sie die tC18-Patrone, die mit dem Vorläufer 6-OH-BTA-0 zwischen den Ports drei und vier geladen ist. Port five hat zwei Positionen.Schließen Sie den horizontalen Auslass mit der Abfallflasche und den vertikalen Auslass an die sterile Durchstechflasche zur Tracersammlung über den sterilen Filter an. Verwenden Sie in der bleigeschirmten Heißzelle eine Teflon-Leitung, um C11-Methyltriflate über Port 2 in den Verteiler zu liefern, und leiten Sie es mit 20 Millilitern pro Minute Ausgangsstrom durch die geladene tC18-Patrone. Das Methyltriflatmodul C11 regelt den Durchfluss über die Ports drei und vier in die Abfallflasche.Sobald die gesamte Radioaktivität übertragen und in der tC18-Patrone eingeschlossen wurde, wie sie vom Radioaktivitätsdetektor überwacht wird, stoppen Sie den Gasfluss, indem Sie Port zwei schließen. Lassen Sie die Patrone für zwei Minuten sitzen, um die Reaktion abzuschließen. Dann, durch Port eins, ziehen Sie 19 Milliliter waschen eine Lösung aus der 100-Milliliter-Flasche in die Spenderspritze bei 100 Milliliter pro Minute.18,5 Milliliter waschen Sie eine Lösung aus dem Spender über die tC18-Patrone über die Ports drei und vier und in die Abfallflasche mit 50 Millilitern pro Minute. Stellen Sie sicher, dass Luftblasen im Verteiler fehlen, da sie die Trenneffizienz beeinträchtigen könnten. Wiederholen Sie das Zurückziehen und Dosieren viermal mit 18,5 Milliliter n. Chr. eine Lösung jedes Mal und ein Gesamtvolumen von 92,5 Millilitern durch tC18.Schalten Sie die Eingangsleitung an Port eins von Waschen eins zu waschen zwei. Wiederholen Sie das Zurückziehen und Dosieren dreimal mit 18,5 Milliliter Waschen zwei Lösung jedes Mal und Gesamtvolumen von 55,5 Milliliter durch tC18. Klappe fünf in Richtung der enddauernden Durchstechflasche umschalten.Trennen Sie die Leitung vom Spender und schließen Sie sie an die 10-Milliliter-Spritze an, die 2,5 Milliliter der endluenten Lösung und 7,5 Milliliter Luft enthält. Halten Sie die Spritze nach unten, schieben Sie manuell die endgültige Eluentenlösung, gefolgt von der Luft durch die tC18-Patrone über die Ports drei und vier und in die sterile Durchstechflasche zur Tracer-Sammlung über den sterilen Filter. Schalten Sie die Spritze auf die Spritze, die 10 Milliliter des sterilen Phosphatpuffers enthält, und schieben Sie das gesamte Volumen durch die tC18-Patrone in die sterile Durchstechflasche.Trennen Sie die Spritze, und spülen Sie die Linie mit der gleichen Spritze mit 10 Milliliter Luft. Mit einer Ein-Milliliter-Spritze, entnahme Proben für die Vorab-Qualitätskontrolle Verfahren, bakterielle Endotoxin-Test, und Sterilitätstest. Um die Qualitätskontrolle vor der Veröffentlichung durchzuführen, bestimmen Sie zunächst die radiochemische Identität, radiochemische Reinheit, chemische Reinheit und Molaktivität des Tracers durch ein analytisches HPLC-System, das mit UV-Radioaktivitätsdetektoren und einer umgedrehten Phase säule ausgestattet ist.Bestimmen Sie die Retentionszeiten von 6-OH-BTA-0 und 6-OH-BTA-1, und kalibrieren Sie das Gerät, um den Inhalt jeder Verbindung zu quantifizieren. Bestimmen Sie den Restlösungsmittelgehalt durch das mit einer Kapillarsäule ausgestattete Analytische Gaschromatographiesystem. Bestimmen Sie die Retentionszeiten von Aceton und Ethanol, und kalibrieren Sie das Gerät, um den Gehalt jedes Lösungsmittels zu quantifizieren.Diese Studie führte die Radiosynthese von C11 PiB durch C11-Methylierung von 6-OH-BTA-0-Vorläufer mit C11-Methyltriflate durch. Qualitätskontrolle analytische HPLC von C11 PiB zeigt, dass die radiochemische Reinheit 98% die Retentionszeiten von 6-OH-BTA-0 Vorläufer und 6-OH-BTA-1 Tracer Peak auf dem UV-Chromatogramm waren 3,6 bzw. 5,9 Minuten. Die Analyse der UV-Spur zeigt die Restvorläuferkonzentration unterhalb der akzeptablen Grenze von 1,3 Mikrogramm, wenn keine anderen nicht-radioaktiven Verunreinigungen mehr zur Folge haben.Dies deutet darauf hin, dass die radiochemische und chemische Reinheit des Tracers für klinische PET-Studien akzeptabel ist. Die Erhöhung der Vorläufermenge 6-OH-BTA-0 von 0,1 Milligramm auf 0,3 Milligramm verbesserte die radiochemische Ausbeute von 18,1% auf 32,1% auf Kosten einer etwas höheren Menge des Vorläufers im Endprodukt. Diese Technik sollte auf viele verschiedene Systeme mit einem geeigneten Polaritätsunterschied zwischen dem Vorläufer und dem radioaktiv markierten Produkt anwendbar sein.Alle Manipulationen mit radioaktiven Isotopen müssen in einer bleigeschützten Heißzelle von Personal durchgeführt werden, das über eine angemessene Ausbildung im Umgang mit radioaktiven Stoffen verfügt.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Solid Phase 11C-Methylation, Purification and Formulation for the Production of PET Tracers

Determination of the Gas-phase Acidities of Oligopeptides

Bestimmung der Gas-Phase Aciditäten von Oligopeptides

Amino acid residues located at different positions in folded proteins often exhibit different degrees of acidities. For example, a cysteine residue ...

Forschung

Chemie

Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies

Produktion von Disulfid-stabilisierte Transmembrane Peptid-Komplexe für Structural Studies

Physical  interactions among the lipid-embedded alpha-helical domains of membrane  proteins play a crucial role in folding and assembly of membrane ...

Thin-layer Chromatographic (TLC) Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Thin-layer Chromatographic TLC Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Dünnschicht-Chromatographie-(TLC) Trennungen und Bioassays der Pflanzenextrakte antimikrobielle Verbindungen zu identifizieren

A common screen for plant antimicrobial compounds consists of separating plant extracts by paper or thin-layer chromatography (PC or TLC), exposing the ...

Synthesis and Purification of Iodoaziridines Involving Quantitative Selection of the Optimal Stationary Phase for Chromatography

Synthese und Reinigung von Iodoaziridines Einbeziehung Quantitative Auswahl der optimalen stationären Phase für die Chromatographie

The highly diastereoselective preparation of cis-N-Ts-iodoaziridines through reaction of diiodomethyllithium with N-Ts aldimines is described. ...

Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology

Synthesemethoden für Asymmetric Ferrocen abgeleitete Bio-Konjugat-Systemen über Festphasen-Resin-basierte Methodik

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. ...

Supercritical Nitrogen Processing for the Purification of Reactive Porous Materials

Kritischer Stickstoff Verarbeitung für die Reinigung von Reactive Porous Materials

Supercritical fluid extraction and drying methods are well established in numerous applications for the synthesis and processing of porous materials. ...

X-ray Powder Diffraction in Conservation Science: Towards Routine Crystal Structure Determination of Corrosion Products on Heritage Art Objects

X-ray Powder Diffraction in Conservation Science: Auf dem Weg Routine Kristallstrukturbestimmung von Korrosionsprodukten auf Heritage Kunstobjekte

The crystal structure determination and refinement process of corrosion products on historic art objects using laboratory high-resolution X-ray powder ...

Measurement of Particle Size Distribution in Turbid Solutions by Dynamic Light Scattering Microscopy

Die Messung der Partikelgrößenverteilung in trüber Lösungen durch Dynamic Light Scattering Mikroskopie

A protocol for measuring polydispersity of concentrated polymer solutions using dynamic light scattering is described. Dynamic light scattering is a ...

Integration of Miniaturized Solid Phase Extraction and LC-MS/MS Detection of 3-Nitrotyrosine in Human Urine for Clinical Applications

Integration von miniaturisierter Festphasenextraktion und LC-MS / MS-Nachweis von 3-Nitrotyrosin im menschlichen Urin für klinische Anwendungen

Free 3-nitrotyrosine (3-NT) has been extensively used as a possible biomarker for oxidative stress. Increased levels of 3-NT have been reported in a wide ...

Protocol for the Solid-phase Synthesis of Oligomers of RNA Containing a 2'-O-thiophenylmethyl Modification and Characterization via Circular Dichroism

Protocol for the Solid-phase Synthesis of Oligomers of RNA Containing a 2'-O-thiophenylmethyl Modification and Characterization via Circular Dichroism

Protokoll für die Festphasensynthese von Oligomeren der RNA mit einem 2&#39;-<em&gt; O</em&gt; -thiophenylmethyl-Modifikation und Charakterisierung über Kreisdichroismus

Solid-phase synthesis has been used to obtain canonical and modified polymers of nucleic acids, specifically of DNA or RNA, which has made it a popular ...