Name: solid phase 11c-methylation, purification and formulation for the production of pet tracers
Uploaded: 2019-10-24T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Solid Phase 11C-Methylation, Purification and Formulation for the Production of PET Tracers at JoVE.com

Это исследование было частично поддержано грантом 18-05 от Общества Альцгеймера Канады (для А. К.) и Фонда Мозга Канады при поддержке Министерства здравоохранения Канады. Авторы хотели бы отметить, Макгилл университет факультета медицины, Монреальский неврологический институт и Макконнелл мозга Imaging центр для поддержки этой работы. Мы также благодарим г-жу Моника Лакатус-Самойла за помощь в проведении процедур контроля качества, а д-ра Джин-Поля Суси и Гассана Массарвеха за доступ к радиоизотопам и радиохимии.

1. Подготовка буферов и элевентов
<ol><li>Растворите 2,72 г тригидрата ацетата натрия в 100 мл воды для приготовления раствора ацетата 0,2 м натрия (решение А).</li>
	<li>Растворите 11,4 мл ледниковой уксусной кислоты в 1 л воды, чтобы подготовить раствор уксусной кислоты 0,2 м (раствор B).</li>
	<li>Объединит?...

<ol>
	<li>Langstrom, B., Lundqvist, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+preparation+of+11C-methyl+iodide+and+its+use+in+the+synthesis+of+11C-methyl-L-methionine.">The preparation of 11C-methyl iodide and its use in the synthesis of 11C-methyl-L-methionine.</a> The International journal of applied radiation and isotopes. 27 (7), 357-363 (1976).</li><li>Larsen, P., Ulin, J., Dahlstr&#248;m, K., Jensen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+[11C]iodomethane+by+iodination+of+[11C]methane.">Synthesis of [11C]iodomethane by iodination of [11C]methane.</a> Applied radiation and isotopes. 48 (2), 153-157 (1997).</li><li>Jewett, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+synthesis+of+[11C]methyl+triflate.">A simple synthesis of [11C]methyl triflate.</a> International journal of radiation applications and instrumentation. Part A, Applied radiation and isotopes. 43 (11), 1383-1385 (1992).</li><li>Wilson, A. A., Garcia, A., Houle, S., Vasdev, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+commercial+radiosynthetic+modules+in+captive+solvent+[11C]-methylation+reactions.">Utility of commercial radiosynthetic modules in captive solvent [11C]-methylation reactions.</a> Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals. 52 (11), 490-492 (2009).</li><li>Wilson, A. A., Garcia, A., Jin, L., Houle, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotracer+synthesis+from+[(11)C]-iodomethane:+a+remarkably+simple+captive+solvent+method.">Radiotracer synthesis from [(11)C]-iodomethane: a remarkably simple captive solvent method.</a> Nuclear medicine and biology. 27 (6), 529-532 (2000).</li><li>Fedorova, O. S., Vaitekhovich, F. P., Krasikova, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+Synthesis+of+[18F]Fluoromethylcholine+for+Positron-Emission+Tomography+Imaging.">Automated Synthesis of [18F]Fluoromethylcholine for Positron-Emission Tomography Imaging.</a> Pharmaceutical Chemistry Journal. 52 (8), 730-734 (2018).</li><li>Jewett, D. M., Ehrenkaufer, R. L., Ram, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+captive+solvent+method+for+rapid+radiosynthesis:+application+to+the+synthesis+of+[1-(11)C]palmitic+acid.">A captive solvent method for rapid radiosynthesis: application to the synthesis of [1-(11)C]palmitic acid.</a> The International journal of applied radiation and isotopes. 36 (8), 672-674 (1985).</li><li>Watkins, G. L., Jewett, D. M., Mulholland, G. K., Kilbourn, M. R., Toorongian, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+captive+solvent+method+for+rapid+N-[11C]methylation+of+secondary+amides:+application+to+the+benzodiazepine,+4'-chlorodiazepam+(RO5-4864).">A captive solvent method for rapid N-[11C]methylation of secondary amides: application to the benzodiazepine, 4'-chlorodiazepam (RO5-4864).</a> International journal of radiation applications and instrumentation. Part A, Applied radiation and isotopes. 39 (5), 441-444 (1988).</li><li>Hockley, B. G., Henderson, B., Shao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+27,+Synthesis+of+{11C]Raclopride.">Chapter 27, Synthesis of {11C]Raclopride.</a> Radiochemical Syntheses. , 167-175 (2012).</li><li>Lodi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+and+reproducibility+of+N-[11C]methyl-choline+and+L-(S-methyl-[11C])methionine+solid-phase+synthesis:+a+useful+and+suitable+method+in+clinical+practice.">Reliability and reproducibility of N-[11C]methyl-choline and L-(S-methyl-[11C])methionine solid-phase synthesis: a useful and suitable method in clinical practice.</a> Nuclear Medicine Communications. 29 (8), 736-740 (2008).</li><li>Jolly, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+"[(11)C]kits"+for+a+fast,+efficient+and+reliable+production+of+carbon-11+labeled+radiopharmaceuticals+for+Positron+Emission+Tomography.">Development of "[(11)C]kits" for a fast, efficient and reliable production of carbon-11 labeled radiopharmaceuticals for Positron Emission Tomography.</a> Applied radiation and isotopes. 121, 76-81 (2017).</li><li>Boudjemeline, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+solid+phase+supported+radiosynthesis+of+[(11)+C]PiB+using+tC18+cartridge+as+a+"3-in-1"+production+entity.">Highly efficient solid phase supported radiosynthesis of [(11) C]PiB using tC18 cartridge as a "3-in-1" production entity.</a> Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals. 60 (14), 632-638 (2017).</li><li>Mathis, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+lipophilic+thioflavin-T+derivative+for+positron+emission+tomography+(PET)+imaging+of+amyloid+in+brain.">A lipophilic thioflavin-T derivative for positron emission tomography (PET) imaging of amyloid in brain.</a> Bioorganic and medicinal chemistry letters. 12 (3), 295-298 (2002).</li><li>Mathis, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+evaluation+of+11C-labeled+6-substituted+2-arylbenzothiazoles+as+amyloid+imaging+agents.">Synthesis and evaluation of 11C-labeled 6-substituted 2-arylbenzothiazoles as amyloid imaging agents.</a> Journal of medicinal chemistry. 46 (13), 2740-2754 (2003).</li><li>. Buffer Reference Center Available from: <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/life-science/core-bioreagents/biological-buffers/learning-center/buffer-reference-center.html">https://www.sigmaaldrich.com/life-science/core-bioreagents/biological-buffers/learning-center/buffer-reference-center.html</a> (2019)</li><li>Philippe, C., Mitterhauser, M., Wadsak, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+18,+Synthesis+of+2-(4-N-[11C]Methylaminophenyl)-6-Hydroxybenzothiazole+([11C]6-OH-BTA-1;+[11C]PIB).">Chapter 18, Synthesis of 2-(4-N-[11C]Methylaminophenyl)-6-Hydroxybenzothiazole ([11C]6-OH-BTA-1; [11C]PIB).</a> Radiochemical Syntheses. , 177-189 (2012).</li><li>Shao, X., Fawaz, M. V., Jang, K., Scott, P. J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+Applications+of+[11C]Hydrogen+Cyanide.">Synthesis and Applications of [11C]Hydrogen Cyanide.</a> Radiochemical Syntheses. , 207-232 (2015).</li><li>Ametamey, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiosynthesis+and+preclinical+evaluation+of+11C-ABP688+as+a+probe+for+imaging+the+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+5.">Radiosynthesis and preclinical evaluation of 11C-ABP688 as a probe for imaging the metabotropic glutamate receptor subtype 5.</a> Journal of Nuclear Medicine. 47 (4), 698-705 (2006).</li><li>Ametamey, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+PET+studies+of+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+5+with+11C-ABP688.">Human PET studies of metabotropic glutamate receptor subtype 5 with 11C-ABP688.</a> Journal of Nuclear Medicine. 48 (2), 247-252 (2007).</li></ol>

Несмотря на недавнее появление и одобрение FDA нескольких 18F-маркированных ПЭТ-трассировщиков, таких как флорбетапир, флорбетабен и флетеметамол,No 11C'PiB остается золотым стандартом трассировщика для амилоидной визуализации из-за быстрого поглощения мозга и низкой неспецифи?...

Позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) - это молекулярная методика визуализации, которая опирается на обнаружение радиоактивного распада изотопов, прикрепленного к биологически активной молекуле, чтобы обеспечить визуализацию биохимических процессов, сигналов и преобразований in vivo . Углерод-11 (т1'2 и 20,3 мин) является одним из наиболее часто используемых радиоизотопов в ПЭТ из-за его изобилия в органических молекул и короткий период полураспада, который позволяет для нескольких контрольных администраций в тот же день к тому же человеку или животному вопросу и снижает радиационную нагрузку на пациентов. Многие трассы помечены с этим изотопом используются в клинических исследованиях и в фундаментальных исследованиях здоровья для in vivo ПЭТ-изображения классических и возникающих биологически значимых целей -11C raclopride для D2/D3 рецепторов,No 11C PiB для амилоидных бляшек,No 11C'PBR28 для белка транслокатора - назвать лишь некоторые из них.
Углерод-11 помечены ПЭТ трассаторы в основном производятся через 11C-метилирования нерадиоактивных прекурсоров, содержащих -OH (алкоголь, фенол и карбоксиловая кислота), -NH (амина и амида) или -SH (тиол) групп. Короче говоря, изотоп генерируется в газовой цели циклотрона через 14N (p, )11C ядерной реакции в химической формеNo 11C'CO2. Последний затем преобразуется в11Сметилйййййййййййййййййййд(No 11C'CH3I) либо с помощью влажной химии (сокращение до11C'CH3OH с LiAlH4, за которым следует закалка с HI)1 или сухой химия (каталитическое снижение до11C'CH4 с последующим радикальным йодинацией с молекулярным I2)2. 11С. CH3Я могу затем быть преобразованы в более реактивные 11C-метил трифлат (No11C CH3OTf), передавая его над серебряной колонкойтрифла3. 11C-метилирование затем выполняется либо восходящей радиоактивный газ в раствор нерадиоактивного предшественника в органическом растворителе или через более элегантный плен растворителя "петля" метод4,5. 11C-tracer затем очищается с помощью HPLC, переформулируется в биосовместимый растворитель, и прошел через стерильный фильтр, прежде чем вводиться к людям. Все эти манипуляции должны быть быстрыми и надежными, учитывая короткий период полураспада углерода-11. Однако использование системы HPLC значительно увеличивает потери трассировщика и время производства, часто требует использования токсичных растворителей, усложняет автоматизацию и иногда приводит к неудачным синтезам. Кроме того, необходимая очистка реакторов и колонны HPLC продлевает задержки между синтезами последующих трассиковых партий и увеличивает подверженность персонала радиации.
Радиохимия фтора-18 (т1'2 и 109,7 мин), другие широко используемые ПЭТ изотоп, недавно была выдвинута через развитие кассетных комплектов, которые излечиваются необходимость очистки HPLC. Используя картриджи из твердой фазы (SPE), эти полностью одноразовые комплекты позволяют надежное рутинное производство 18F-трассеров, в том числе18F-FDG,No 18F'FMISO,No 18F'FMC и др., с более коротким синтезом сокращение участия персонала и минимальное техническое обслуживание оборудования. Одной из причин, по которой углерод-11 остается менее популярным изотопом в ПЭТ-изображении, является отсутствие аналогичных комплектов для обычного производства 11C-трассеров. Их разработка позволит значительно повысить синтетическую надежность, повысить радиохимические урожаи и упростить автоматизацию и профилактическое обслуживание производственных модулей.
Имеющиеся в настоящее время производственные комплекты используют недорогие одноразовые картриджи SPE вместо столбцов HPLC для отделения радиотрактора от неотреагированных радиоактивных изотопов, прекурсоров и других радиоактивных и нерадиоактивных побочных продуктов. В идеале реакция радиомаркировки также происходит на том же картридже; Например, фторметилирование диметиламиноэтана с газообразным газомNo 18F'CH2BrF при производстве пэт-трекера длявизуализации рака простаты 6. Хотя аналогичные процедуры для радиомаркировки нескольких 11C-трассировочных веществ на картриджах были зарегистрированы7,8 и стал особенно мощным для радиосинтезаNo 11C'choline9 и11C'methionine10, эти примеры остаются ограниченными онкологических ПЭТ трассаторов, где отделение от предшественника часто не требуется. Недавно мы сообщили о разработке«11комплектов» для производства11C'CH3I11 и последующего 11C-метилирования, а также твердого фазово-поддерживаемого синтеза12 в наших усилиях по упростить рутинное производство 11C-трассировок. Здесь мы хотим продемонстрировать наш прогресс на примере твердой фазы, поддерживаемой радиосинтезомNo 11C'PiB, радиотрейстом для изображения АЗ, который произвел революцию в области визуализации болезни Альцгеймера (АД), когда она была впервые разработана в 2003 году ( Рисунок 1) 13,14. В этом методе, летучиеNo 11C CH3OTf (bp 100 кв. C) передается через 6-OH-BTA-0 прекурсор на хранение на мели с одноразовым картриджом. ПЭТ-трассировщик No11C'PiB затем отделяется от прекурсора и радиоактивных примесей путем выяснения картриджа с биосовместимым aqueous этанолом. Кроме того, мы автоматизировали этот метод радиосинтеза No11C'PiB с помощью дистанционно управляемого модуля синтеза радиохимии и одноразовых кассетных комплектов. В частности, мы реализовали этот радиосинтез на 20-клапанном радиохимическом модуле, оснащенном шприц-драйвом (дозатором), который подходит для стандартных 20 мл одноразового пластикового шприца, контроллера потока газа, вакуумного насоса и датчика. Благодаря простоте этого метода, мы уверены, что он может быть изменен на ибольшинство коммерчески доступных автоматизированных синтезаторов, либо кассетных или тех, оснащенных стационарными клапанами. Этот метод, поддерживаемый твердой фазой, облегчает производство11C'PiB в соответствии с правилами хорошей производственной практики (GMP) и повышает надежность синтеза. Описанный здесь метод также уменьшает количество прекурсора, необходимого для радиосинтеза, использует только "зеленые" биосовместимые растворители и уменьшает время между последовательными производственными партиями.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-OH-BTA-0</td>
			<td>ABX advanced biochemical compounds</td>
			<td>5101</td>
			<td>Non-radioactive precursor of [11C]PiB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-OH-BTA-1</td>
			<td>ABX advanced biochemical compounds</td>
			<td>5140</td>
			<td>Non-radioactive standard of [11C]PiB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1200 HPLC system</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>Agilent 1200</td>
			<td>Analytical HPLC system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Commercial alcohols</td>
			<td>432526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe (luer-tip, 250 &#181;L)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>HAM80701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MZ Analytical PerfectSil 120</td>
			<td>MZ-Analysentechik GmbH</td>
			<td>MZ1440-100040</td>
			<td>Analytical HPLC column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perkin Elmer Clarus 480 GC system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Clarus 480</td>
			<td>Gas chromotograph</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polycarbonate manifold</td>
			<td>Scintomics</td>
			<td>ACC-101</td>
			<td>Synthesis manifold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restek MTX-Wax column (30 m, 0.53 mm)</td>
			<td>Restek</td>
			<td>70625-273</td>
			<td>Analytical GC column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scintomics GRP module</td>
			<td>Scintomics</td>
			<td>Scintomics GRP</td>
			<td>Automated synthesis unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sep-Pak tC18 Plus</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT020515</td>
			<td>Solid phase extraction cartridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>solvent-resistant manifold</td>
			<td>Scintomics</td>
			<td>ACC-201</td>
			<td>Synthesis manifold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>405181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile extension line</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>8255059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLLG013SL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile vial (20mL)</td>
			<td>Huayi</td>
			<td>SVV-20A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile water</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>JF7623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synthra MeIplus Research</td>
			<td>Synthra</td>
			<td>MeIplus Research</td>
			<td>[11C]CH3I/[11C]CH3OTf module</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (10 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (20 mL)</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4617207V</td>
			<td>Dispenser syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vent filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>TEFG02525</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

solid phase 11c-methylation, purification and formulation for the production of pet tracers

Регулярное производство радиочастот, используемых в позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ), в основном зависит от влажной химии, где радиоактивный синтион реагирует с нерадиоактивным предшественником в растворе. Такой подход требует очищения трассировщика высокой производительностью жидкой хроматографии (HPLC), с последующим переформулированием в биосовместимый растворитель для человеческого управления. Недавно мы разработали новый подход 11C-метилирования для высокоэффективного синтеза углерода-11 помечены ПЭТ радиофармацевтических препаратов, пользуясь твердых картриджей фазы как одноразовые "3-в-1" единиц для синтеза, очистки и переформулирование трассировок. Такой подход устраняет использование подготовительного HPLC и уменьшает потери трассировщика в линиях передачи и из-за радиоактивного распада. Кроме того, технология на основе картриджа повышает надежность синтеза, упрощает процесс автоматизации и облегчает соблюдение требований надлежащей производственной практики (GMP). Здесь мы демонстрируем эту технику на примере производства ПЭТ-трекера Pittsburgh соединения B(No 11C'PiB), золотого стандарта in vivo image einio image einiloid plaques in the human brains.

Подводя итоги типичного радиосинтезаNo 11C'PiB, газоемкий No11C'CH3OTf впервые проходит через картридж tC18, предварительно загруженный раствором прекурсора (Рисунок 1). Разделение реакционной смеси достигается путем последовательного elution с aque...

Watch this Scientific Journal Video about Solid Phase 11C-Methylation, Purification and Formulation for the Production of PET Tracers at JoVE.com

Solid Phase 11C-Methylation, Purification and Formulation for the Production of PET Tracers

Мы сообщаем об эффективном методе радиомаркировки углерода-11 для производства клинически значимых трассаторов для позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) с использованием твердой фазовой картриджи. 11 Год C-метилалинг агент проходит через картридж, предварительно загруженный с предшественником и последовательной elution с aqueous этанол обеспечивает химически и радиохимически чистых ПЭТ трассаторов в высоких радиохимических урожаев.

Твердый этап 11C-метилирование, очищение и формулирование для производства ПЭТ-трассаторов

Routine production of radiotracers used in positron emission tomography (PET) mostly relies on wet chemistry where the radioactive synthon reacts with a ...

Углерод-11 является одним из наиболее широко используемых радиоизотопов в позитронно-эмиссионной томографии из-за его изобилия в органических молекулах и короткого периода полуиссяка в 20 минут. В этом видео мы показываем эффективную технику радиозабелки углерода-11 с использованием картриджей для извлечения твердой фазы. По сравнению с обычными методами, методы на основе картриджа устраняет использование HPLC, сокращает время радиосинтеза, повышает надежность синтеза, упрощает процесс автоматизации и облегчает соблюдение хороших производственных практик, GMP.Техника на основе картриджа продемонстрирована здесь, на радиосинтезе C11 PiB, ПЭТ-трассировщика, используемого для виво-изображения амилоидных бляшек в мозге пациентов, страдающих болезнью Альцгеймера. Недавно мы применили технику «три в одном» к радиосинтезу C11 ABP688, ПЭТ-трассировщику для визуализации метаботропных глутаматных рецепторов типа 5, а также других трассировщиков с маркировкой углерода-11. Смешайте 450 миллилитров 0,2-молярного раствора уксусной кислоты с 50 миллилитров 0,2-молярного раствора ацетата натрия для подготовки ацетатного буфера при рН 3,7 в качестве буферного.Проверить рН буфера с рН полосы или рН метр. Затем смешайте 12,5 миллилитров абсолютного этанола с 87,5 миллилитров ацетатного буфера в 100-миллилитровой бутылке, чтобы сделать 12,5% раствор этанола в качестве мытья. Комбинат 15 миллилитров абсолютного этанола с 85 миллилитров ацетата буфера в 100-миллилитровую бутылку, чтобы сделать 15%aqueous этанола раствор, как мыть два.Объедините пять миллилитров абсолютного этанола с пятью миллилитров буфера ацетата, чтобы сделать 50%aqueous этанола раствор в качестве окончательного элюента, и привлечь 2,5 миллилитров этого решения в 10-миллилитровый шприц. Для предварительного предварительного tC18 картридж, от женского конца, использовать шприц, чтобы пройти 10 миллилитров воды следуют пять миллилитров ацетона через картридж. Высушите картридж потоком азота по 50 миллилитров в минуту в течение одной минуты.В трубке Эппендорфа растворяют два миллиграмма предшественника 6-OH-BTA-0 в одном миллилитров ацетона ангидроуса. Держа Люэр-наконечник, 250-микролитер, точный стеклянный шприц вниз, снять 100 микролитров раствора прекурсора, а затем 50 микролитров воздушной подушки. Снимите иглу и коснитесь шприца, чтобы убедиться, что воздушная подушка выше раствора в шприце.Нанесите раствор-прекурсор на картридж tC18 из женского конца, медленно толкая поршень всю дорогу вниз. Не толкай воздух дальше. Защитите и соберите стандартный пяти порт одноразовый многообразие на модуле синтеза.Порт один имеет две позиции. Подключите горизонтальный вход к автоматизированному дозатору, оснащенному 20-миллилитровый шприц. Подключите вертикальный вход к бутылке с мытьем.Соедините выход модуля, который производит метиловый трифлат C11, чтобы портировать два из многообразия. Установите картридж tC18, загруженный предшественником 6-OH-BTA-0 между портами три и четыре. Порт пять имеет две позиции.Подключите горизонтальную розетку к бутылке отходов и вертикальной розетке к стерильному флакону для сбора трассировщиков через стерильный фильтр. В горячей ячейке, защищенной свинцом, используйте тефлоновую линию для доставки метилового трифлата C11 в многообразный через порт два, и передать его через загруженный картридж tC18 на 20 миллилитров в минуту выходной поток. Модуль метилового трифлата C11 регулирует поток через порты три и четыре и в бутылку с отходами.После того, как вся радиоактивность была передана и в ловушке в картридже tC18, как контролируется детектором радиоактивности, остановить поток газа, закрыв порт два. Пусть картридж сидеть в течение двух минут, чтобы завершить реакцию. Затем, через порт один, снять 19 миллилитров мыть один раствор из 100-миллилитровой бутылки в распределительный шприц на 100 миллилитров в минуту.Разпредельте 18,5 миллилитров мытья один раствор из дозатора через картридж tC18 через порты три и четыре и в бутылку отходов на 50 миллилитров в минуту. Обеспечь отсутствие пузырьков воздуха в многообразии, так как они могут снизить эффективность разделения. Повторите снятие и распределение четыре раза с 18,5 миллилитров мытья один раствор каждый раз и общий объем 92,5 миллилитров, проходящих через tC18.Переключите входную линию на порт один от мытья один мыть два. Повторите снятие и дозирование три раза с 18,5 миллилитров мыть два раствора каждый раз и общий объем 55,5 миллилитров, проходящих через tC18. Переключить клапан пять к окончательному флакону.Отсоедините линию от дозатора и соедините ее с 10-миллилитровым шприцем, содержащим 2,5 миллилитров окончательного элюентного раствора и 7,5 миллилитров воздуха. Держа шприц вниз, вручную нажмите окончательный раствор элуента, а затем воздух через картридж tC18 через порты три и четыре и в стерильный флакон для сбора трассировщика через стерильный фильтр. Переключите шприц на тот, который содержит 10 миллилитров стерильного фосфатного буфера, и протолкнуть весь объем через картридж tC18 в стерильный флакон.Отключите шприц и смойте линию 10 миллилитров воздуха с помощью того же шприца. Используя одноми миллилитровый шприц, изымайте образцы для процедур контроля качества пререлеазы, теста на бактериальный эндотоксин и теста на бесплодие. Для выполнения процедур предрелизного контроля качества сначала определите радиохимическую идентичность, радиохимическую чистоту, химическую чистоту и молярную активность трассировщика с помощью аналитической системы HPLC, оснащенной уф-детекторами радиоактивности и колонкой обратной фазы.Определите время хранения 6-OH-BTA-0 и 6-OH-BTA-1 и откалибровайте прибор для количественной оценки содержания каждого соединения. Определить содержание остаточного растворителя с помощью аналитической газохроматографической системы, оснащенной капиллярной колонкой. Определите время хранения ацетона и этанола и откалибровайте прибор для количественной оценки содержания каждого растворителя.Это исследование выполнило радиосинтез C11 PiB C11-метилированием 6-OH-BTA-0 прекурсора с метиловым трифлатом C11. Контроль качества аналитических HPLC C11 PiB показывает, радиохимической чистоты было 98%Время удержания 6-OH-BTA-0 предшественника и 6-OH-BTA-1 трассировщик пик на УФ хроматограммы были 3,6 и 5,9 минут, соответственно. Анализ УФ-следа показывает остаточную концентрацию прекурсоров ниже допустимого предела в 1,3 микрограмма при отсутствии других нерадиоактивных примесей.Это указывает на то, что радиохимическая и химическая чистота трассировщика приемлема для клинических ПЭТ-исследований. Увеличение количества прекурсоров 6-OH-BTA-0 с 0,1 миллиграмма до 0,3 миллиграмма улучшило радиохимическую урожайность с 18,1% до 32,1% за счет чуть более высокого количества прекурсора в конечном продукте. Этот метод должен быть применим ко многим различным системам с подходящей разницей в полярности между прекурсором и радиозабрюшьемый продукт.Все манипуляции с радиоактивными изотопами должны выполняться в горячей камере с свинцовой защитой персоналом, который имеет надлежащую подготовку для обработки радиоактивных материалов.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Solid Phase 11C-Methylation, Purification and Formulation for the Production of PET Tracers

Determination of the Gas-phase Acidities of Oligopeptides

Определение газовой фазе кислотность олигопептидов

Amino acid residues located at different positions in folded proteins often exhibit different degrees of acidities. For example, a cysteine residue ...

Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies

Производство дисульфид-стабилизировались трансмембранного пептидные комплексы для структурных исследований

Physical  interactions among the lipid-embedded alpha-helical domains of membrane  proteins play a crucial role in folding and assembly of membrane ...

Thin-layer Chromatographic (TLC) Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Thin-layer Chromatographic TLC Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Тонкослойная Хроматографическое (ТСХ) Разделение и Биоанализы растительных экстрактов для идентификации антимикробные соединения

A common screen for plant antimicrobial compounds consists of separating plant extracts by paper or thin-layer chromatography (PC or TLC), exposing the ...

Synthesis and Purification of Iodoaziridines Involving Quantitative Selection of the Optimal Stationary Phase for Chromatography

Синтез и очистка Iodoaziridines Вовлечение Количественный Выбор оптимального стационарной фазы для хроматографии

The highly diastereoselective preparation of cis-N-Ts-iodoaziridines through reaction of diiodomethyllithium with N-Ts aldimines is described. ...

Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology

Синтетическая методология для асимметричных Ферроцен, полученных Bio-сопряженных систем через Solid методологии фазы смолу на основе

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. ...

Supercritical Nitrogen Processing for the Purification of Reactive Porous Materials

Обработка сверхкритической азота для очистки реактивных пористых материалов

Supercritical fluid extraction and drying methods are well established in numerous applications for the synthesis and processing of porous materials. ...

X-ray Powder Diffraction in Conservation Science: Towards Routine Crystal Structure Determination of Corrosion Products on Heritage Art Objects

Рентгеновская дифракция в порошок по сохранению науки: На пути к Обычной кристаллической структуры Определение продуктов коррозии на наследие предметов искусства

The crystal structure determination and refinement process of corrosion products on historic art objects using laboratory high-resolution X-ray powder ...

Measurement of Particle Size Distribution in Turbid Solutions by Dynamic Light Scattering Microscopy

Измерение Распределение частиц по размерам в мутных растворах с помощью динамического рассеяния света микроскопии

A protocol for measuring polydispersity of concentrated polymer solutions using dynamic light scattering is described. Dynamic light scattering is a ...

Integration of Miniaturized Solid Phase Extraction and LC-MS/MS Detection of 3-Nitrotyrosine in Human Urine for Clinical Applications

Интеграция миниатюрной твердофазной экстракции и LC-MS / MS Обнаружение 3-нитротирозина в моче человека для клинических применений

Free 3-nitrotyrosine (3-NT) has been extensively used as a possible biomarker for oxidative stress. Increased levels of 3-NT have been reported in a wide ...

Protocol for the Solid-phase Synthesis of Oligomers of RNA Containing a 2'-O-thiophenylmethyl Modification and Characterization via Circular Dichroism

Protocol for the Solid-phase Synthesis of Oligomers of RNA Containing a 2'-O-thiophenylmethyl Modification and Characterization via Circular Dichroism

Протокол твердофазного синтеза олигомеров РНК, содержащий 2&#39;-<em&gt; O</em&gt; -тиофенилметильная модификация и характеризация с помощью циркулярного дихроизма

Solid-phase synthesis has been used to obtain canonical and modified polymers of nucleic acids, specifically of DNA or RNA, which has made it a popular ...