Vores protokol standardiserer metoder til prøveudtagning af gællerne af gravide ferskvandsmuslinger og karakteriserer de forskellige stadier af larveudvikling, samtidig med at der tilvejebringes en online database for indsendelse af data og udforskning af Gravidity Almanac. Teknikken er ikke-dødelige og påvirker ikke i væsentlig grad en hunmuslings evne til at forblive gravid efter prøveudtagning af gællerne, derfor kan metoden anvendes på både almindelige og beskyttede arter. Denne metode kan anvendes på organismer, der er karakteriseret i De Bivalvia-familier Hyriidae, Margaritiferidae og Unionidae, som er fordelt i ferskvandsøkosystemer på alle kontinenter undtagen Antarktis.
Det er vigtigt at åbne muslinger med omhu, indsamle lokaliseringsoplysninger og sørge for, at data indsamles korrekt. Hvis identifikationer er tvivlsomme, bør man tage billeder og kontakte de relevante eksperter. Start med at indsamle levende muslinger fra marken ved hjælp af taktile visuelle metoder.
Evaluer kvindelig graviditet ved visuel inspektion enten under eller efter indsamling ved forsigtigt at åbne ventilerne lige nok til at se ind og se, om gællerne er oppustet. Hvis der anvendes en konserveret prøve fra et museum, skal der foretages visuel inspektion ved at åbne ventilerne og inspicere gællerne. Gælleindholdet skal udtages til prøve og klargøre et 1,5 milliliter plastmikrocentrifugeopsamlingsrør med ca. en milliliter enten vand eller ethanol, afhængigt af hvor hurtigt evalueringen vil finde sted.
Udpak en steril 30-gauge skrå-tip nål på en 10-milliliter sprøjte, skru hætten for at udsætte nålen, og skub håndtaget på sprøjten ned, så proppen er på nul-milliliter linje. Sammig hunnen op, og lir forsigtigt åbne de to ventiler ved hjælp af tommelfingrenes spidser. Brug nålespidsen til forsigtigt at trænge ind i et enkelt vandrør i det oppustede pungdyr, og scoop derefter forsigtigt gællens indhold ud med den skrå spids af nålen.
Opbevar dem i det forberedte mikrocentrifugerør til senere evaluering. Registrere relevante oplysninger, såsom identifikation af slægtsarter, oplysninger om indsamlingssted og status for farting på databladet, og registrere en entydig identifikator på hvert indsamlingsfartøj for at sikre nøjagtige dataregistreringer under transporten. Korrekt orientere muslingen til at fotografere den rigtige ventil til identitetsvalidering, læg den ned, og tag fotografiet, og sørg for at medtage det mærkede prøverør i billedet.
For at vurdere gællens indhold, overføre dem til en petriskål og fylde bunden af skålen med vand. Drej forsigtigt skålen for at indsamle indhold i midten for et mere koncentreret udsyn til prøven. Petriskålen anbringes under et disekturmikroskop for at vurdere prøven og om muligt tage et fotografi af prøven under mikroskopet.
Der registreres de resultater, som udviklingsfaserne er til stede i hver gælleprøve af. Hvis hunnerne rugerlarver på flere udviklingsstadier, skal du rapportere alle udviklingstrin, der observeres i en given prøve. Hvis der identificeres fuldt udviklede glochidia, og ethanol ikke blev anvendt til konservering, skal det vurderes, at de er levedygtige, ved at tilsætte en krystal af natriumchlorid til en delmængdedråbe af hildingsprøven.
Levedygtige glochidia vil reagere ved at åbne og lukke deres ventiler eller blot lukke dem fra en åben position. Rapporter eventuelle salt-testede glochidia med et T i slutningen af betegnelsen, når data registreres. Hvis du vil rapportere dataene, skal du få adgang til FMGA-siden eller mobilappen og registrere resultaterne i dataindtastningsformularen ved hjælp af rullemenuer og tekstindtastningsfelter.
Hvis du vil have store allerede eksisterende datasæt, skal du kontakte forfatterne til skabelonregnearket. Indtast de registrerede data under de relevante kolonneoverskrifter, og vær opmærksom på, at hver række i regnearket repræsenterer observationer af en gælleprøve fra en gravid person, derefter indsende resultaterne, og de vil blive tilføjet til FMGA-databasen efter at være blevet valideret af en administrator, der kan kontakte indsamleren for at anmode om yderligere oplysninger eller fotos. FMGA-databasen samler alle de indsendte oplysninger og giver brugeren mulighed for at visualisere tidsmæssige virkelighedsdata for alle arter i databasen.
Ferskvandsmuslingen Gravidity Almanac er et forskningsværktøj, der er designet til at standardisere indsamlingen af graviditetsdata og samtidig lette fremtidige forsknings-, bevarings- og genopretningsindsatser. Protokollen til hildingsprøvetagning blev evalueret ved mærkning og genindkapsling af hunner med månedlige intervaller i løbet af året. Selv om stikprøvestørrelserne i undersøgelsen er ulige på tværs af arter, fremhæver resultaterne de gavnlige og praktiske anvendelser af denne protokol.
Den gravideitet kalender for Villosa lienosa viser gravid hunner rugende fuldt udviklede glochidia blev fundet i næsten hver måned af året undtagen august, hvor kun hunner rugende æg masserne blev fundet. Kvinde Hamiota australis blev fundet ikke-gravid i juli, august og december. En større andel af hunnerne var rugende fuldt udviklede glochidia i januar og februar og i oktober og november.
Ingen individer af Elliptio pullata blev fundet rugende fuldt udviklede glochidia, selv om hunnerne var rugende æg masserne fra maj til juni. Kun én Strophitus williamsi kvinde blev fundet og generobret tre gange. Denne kvinde blev fundet rugende fuldt udviklede glochidia i marts, ikke gravid i maj, rapporterede gravid i juni, og rugende æg i august.
Gravid hunner af Villosa vibex rugende fuldt udviklede glochidia blev fundet mellem februar og juni. Ferskvandsmuslinger er en meget imperiled gruppe af organismer. Denne metode er vigtig, fordi den giver en ikke-dødelige måde at vurdere de forsædle arters formeringskarakteristika på.
Det er afgørende at håndtere muslinger med omhu. Miljøforhold, såsom vandtemperatur og strømstrømme, kan måles i marken for at bestemme, hvilke forhold der udløser gydning og larveudvikling i ferskvandsmuslinger. Udarbejdelsen af tidsmæssige graviditetsdata for alle arter af ferskvandsmuslinger kan hjælpe med undersøgelser i epidemiologi, glochidial morfologi, livshistorie, fylogenetikene, formering og translokation.
