Standardizzazione di un metodo non letale per caratterizzare lo stato riproduttivo e lo sviluppo larvale delle cozze d'acqua dolce (Bivalvia: Unionida)

Il nostro protocollo standardizza le metodologie per campionare le branchie delle cozze d'acqua dolce gravide e caratterizzare le diverse fasi dello sviluppo larvale fornendo allo stesso tempo un database online per la presentazione dei dati e l'esplorazione dell'Almanacco gravidity. La tecnica non è letale e non influisce sostanzialmente sulla capacità di una cozza femmina di rimanere gravid dopo aver assaggiato le branchie, quindi il metodo può essere applicato sia alle specie comuni che a le specie protette. Questa metodologia può essere applicata agli organismi caratterizzati nelle famiglie Bivalvia di Hyriidae, Margaritiferidae e Unionidae, che sono distribuiti negli ecosistemi d'acqua dolce in tutti i continenti tranne l'Antartide.

È importante aprire le cozze con cura, raccogliere informazioni sulla posizione e assicurarsi che i dati siano raccolti correttamente. Se le identificazioni sono discutibili, si dovrebbero scattare foto e contattare gli esperti appropriati. Inizia raccogliendo cozze vive dal campo usando metodi visivi tattili.

Valutare la gravidità femminile mediante ispezione visiva durante o dopo la raccolta indiscrendo delicatamente le valvole quanto basta per guardare all'interno e vedere se le branchie sono gonfiate. Se si utilizza un campione conservato di un museo, eseguire un'ispezione visiva aprendo le valvole e ispezionando le branchie. Per campionare il contenuto branchiali, preparare un tubo di raccolta di microcentrifugi di plastica da 1,5 millilitri con circa un millilitro di acqua o etanolo, a seconda del momento in cui avrà luogo la valutazione.

Scartare un ago sterile a punta smussata calibro 30 su una siringa da 10 millilitri, svitare il cappuccio per esporre l'ago e spingere il manico della siringa verso il basso in modo che il tappo si trova alla linea zero-millilitro. Raccogliere la femmina gravita e asciugare delicatamente le due valvole usando le punte dei pollici. Utilizzare la punta dell'ago per penetrare delicatamente in un singolo tubo dell'acqua della branchia marsupiale gonfiata, quindi raccogliere delicatamente il contenuto branchiale con la punta smussata dell'ago.

Conservarli nel tubo di microcentrifugo preparato per una valutazione successiva. Registrare informazioni rilevanti, ad esempio l'identificazione delle specie di genere, le informazioni sulla posizione della raccolta e lo stato di gravidità nella scheda tecnica e registrare un identificatore univoco su ogni nave di raccolta per garantire record di dati accurati durante il trasporto. Orientare correttamente la cozza per fotografare la valvola giusta per la convalida dell'identità, deporrla e scattare la fotografia, assicurandosi di includere il tubo campione etichettato nell'immagine.

Per valutare il contenuto della branchia, trasferirli in una piastra di Petri e riempire il fondo del piatto con acqua. Ruotare delicatamente il piatto per raccogliere il contenuto al centro per una visione più concentrata del campione. Posizionare la piastra di Petri al microscopio a dissezione per valutare il campione e, se possibile, scattare una fotografia del campione al microscopio.

Registrare i risultati delle fasi di sviluppo presenti in ciascun campione branchiale. Se le femmine rimuginano sulle larve in più stadi di sviluppo, segnalare ogni fase di sviluppo osservata in un dato campione. Se vengono identificate glochidi completamente sviluppate e l'etanolo non è stato utilizzato per la conservazione, valutarne la vitalità aggiungendo un cristallo di cloruro di sodio a una goccia sottoinsieme del campione branchiali.

La glochidia praticabile risponderà aprendo e chiudendo le valvole o semplicemente chiudendole da una posizione aperta. Segnalare eventuali glochidi testate al sale con una T alla fine della designazione quando i dati vengono registrati. Per segnalare i dati, accedere alla pagina FMGA o all'app per dispositivi mobili e registrare i risultati nel modulo di immissione dati utilizzando menu a discesa e campi di immissione testo.

Per set di dati preesiste di grandi dimensioni, contattare gli autori per il foglio di calcolo modello. Immettere i dati registrati sotto le intestazioni di colonna appropriate, tenendo presente che ogni riga del foglio di calcolo rappresenta le osservazioni di un campione branchiali da un individuo gravid, quindi inviare i risultati e verranno aggiunti al database FMGA dopo essere stati convalidati da un amministratore, che può contattare il raccoglitore per richiedere ulteriori dettagli o foto. Il database FMGA compila tutte le informazioni inviate e consente all'utente di visualizzare i dati temporali sulla gravidità per tutte le specie nel database.

L'Almanacco gravidità delle cozze d'acqua dolce è uno strumento di ricerca progettato per standardizzare la raccolta dei dati sulla gravidità facilitando al contempo le future attività di ricerca, conservazione e recupero. Il protocollo di campionamento branchiali è stato valutato etichettando e riconquistando le femmine ad intervalli mensili durante tutto l'anno. Sebbene le dimensioni dei campioni nello studio siano disuguali tra le specie, i risultati evidenziano le applicazioni benefiche e pratiche di questo protocollo.

Il calendario della gravidità per Villosa lienosa mostra che le femmine gravide che covano glochidi completamente sviluppate sono state trovate in quasi tutti i mesi dell'anno tranne agosto, quando sono state trovate solo femmine che covano masse di uova. La femmina Hamiota australis è stata trovata non gravide in luglio, agosto e dicembre. Una percentuale maggiore di femmine rimuginava glochidia completamente sviluppata in gennaio e febbraio e in ottobre e novembre.

Nessun individuo di Elliptio pullata è stato trovato rimuginare glochidia completamente sviluppata, anche se le femmine rimuginavano masse di uova da maggio a giugno. Solo una femmina di Strophitus williamsi è stata trovata e ricatturata tre volte. Questa femmina è stata trovata rimuginare glochidia completamente sviluppata a marzo, non gravitare a maggio, ha riportato gravid a giugno e cova uova in agosto.

Le femmine gravide di Villosa vibex che rimuginano glochidia completamente sviluppate sono state trovate tra febbraio e giugno. Le cozze d'acqua dolce sono un gruppo altamente imperioso di organismi. Questa metodologia è importante perché fornisce un modo non letale per valutare le caratteristiche riproduttive delle specie in pericolo.

È fondamentale maneggiare le cozze con cura. Le condizioni ambientali, come la temperatura dell'acqua e i flussi di flusso possono essere misurate sul campo per determinare quali condizioni innescano la deposizione delle uova e lo sviluppo larvale nelle cozze d'acqua dolce. La compilazione di dati temporali sulla gravidità per tutte le specie di cozze d'acqua dolce può aiutare gli studi in epidemiologia, morfologia glochidiale, storia della vita, filogenetica, propagazione e traslocazione.