Vår protokoll standardiserer metoder for å prøve gjellene av gravid ferskvannsblåskjell og karakterisere de ulike stadiene av larvalutvikling samtidig som den gir en online database for datainnsending og utforskning av Gravidity Almanac. Teknikken er nonlethal og påvirker ikke en kvinnelig blåskjell evne til å forbli gravid etter prøvetaking gjellene, derfor kan metoden brukes på både vanlige og beskyttede arter. Denne metodikken kan brukes på organismer preget i Bivalvia-familiene til Hyriidae, Margaritiferidae og Unionidae, som distribueres i ferskvannsøkosystemer på alle kontinenter unntatt Antarktis.
Det er viktig å åpne blåskjell med forsiktighet, samle inn stedsinformasjon og sørge for at data samles inn riktig. Hvis identifikasjoner er tvilsomme, bør man ta bilder og kontakte de aktuelle ekspertene. Start med å samle levende blåskjell fra feltet ved hjelp av taktile visuelle metoder.
Evaluer kvinnelig graviditet ved visuell inspeksjon enten under eller etter innsamling ved å forsiktig lirke åpne ventilene akkurat nok til å se inni og se om gjellene er oppblåst. Hvis du bruker et bevart eksemplar fra et museum, utfører du visuell inspeksjon ved å åpne ventilene og inspisere gjellene. For å prøve gjelleinnholdet, lag et 1,5-milliliter plastmikrocentrifugeoppsamlingsrør med omtrent en milliliter enten vann eller etanol, avhengig av hvor snart evalueringen vil finne sted.
Pakk ut en steril 30-gauge skråspiss kanyle på en 10-milliliter sprøyte, skru av hetten for å eksponere nålen, og skyv håndtaket på sprøyten ned slik at proppen er på null milliliter linjen. Plukk opp gravid kvinne og forsiktig lirke åpne de to ventilene ved hjelp av tuppene på tommelen. Bruk nålespissen til å forsiktig trenge inn i et enkelt vannrør av den oppblåste pungdyrgellen, og øse deretter forsiktig gjelleinnholdet ut med den skråspissen på nålen.
Oppbevar dem i det tilberedte mikrocentrifugerøret for senere evaluering. Registrer relevant informasjon, for eksempel identifisering av slektsarter, innsamlingsstedsinformasjon og graviditetsstatus på databladet, og registrer en unik identifikator på hvert innsamlingsfartøy for å sikre nøyaktige dataposter under transport. Orienter blåskjellen riktig for å fotografere høyre ventil for identitetsvalidering, legge den ned og ta bildet, og sørg for å inkludere det merkede prøverøret på bildet.
For å evaluere gjelleinnholdet, overfør dem til en petriskål og fyll bunnen av fatet med vann. Virvle forsiktig parabolen for å samle innhold i midten for en mer konsentrert visning av prøven. Plasser petriskålen under et disseksjonsmikroskop for å evaluere prøven, og ta om mulig et bilde av prøven under mikroskopet.
Registrer resultatene av hvilke utviklingsstadier som finnes i hvert gjelleprøve. Hvis hunnene ruger larver på flere utviklingsstadier, rapporter hvert utviklingsstadium observert i et gitt utvalg. Hvis fullt utviklet glochidia identifiseres og etanol ikke ble brukt til bevaring, vurdere deres levedyktighet ved å legge til en krystall av natriumklorid til en undergruppedråpe av gjelleprøven.
Levedyktig glochidia vil reagere ved å åpne og lukke sine ventiler eller bare lukke dem fra en åpen stilling. Rapporter enhver salttestet glochidia med en T på slutten av betegnelsen når data registreres. Hvis du vil rapportere dataene, åpner du FMGA-siden eller mobilappen og registrerer resultatene i dataregistreringsskjemaet ved hjelp av rullegardinmenyer og tekstregistreringsfelt.
Kontakt forfatterne for malregnearket for store eksisterende datasett. Skriv inn de registrerte dataene under de riktige kolonneoverskriftene, husk at hver rad i regnearket representerer observasjoner av et gjelleeksempel fra en gravid person, og deretter sender du inn resultatene, og de vil bli lagt til i FMGA-databasen etter å ha blitt validert av en administrator, som kan kontakte samleren for å be om ytterligere detaljer eller bilder. FMGA-databasen samler all informasjon som sendes inn og gjør det mulig for brukeren å visualisere tidsmessige graviditetsdata for alle arter i databasen.
Freshwater Mussel Gravidity Almanac er et forskningsverktøy designet for å standardisere innsamling av graviditetsdata samtidig som det tilrettelegger for fremtidig forskning, bevaring og gjenopprettingsarbeid. Gill-sampling protokollen ble evaluert ved merking og recapturing kvinner med månedlige intervaller gjennom hele året. Selv om utvalgsstørrelsene i studien er ulike på tvers av arter, fremhever resultatene de gunstige og praktiske anvendelsene av denne protokollen.
Gravidity kalenderen for Villosa lienosa viser gravid kvinner brooding fullt utviklet glochidia ble funnet i nesten hver måned i året unntatt august, da bare kvinner rugende egg masser ble funnet. Kvinnelige Hamiota australis ble funnet ikke-gravid i juli, august og desember. En større andel kvinner var i fullutviklet glochidia i januar og februar og i oktober og november.
Ingen individer av Elliptio pullata ble funnet grublende fullt utviklet glochidia, selv om kvinner var rugende egg masser fra mai til juni. Bare én Strophitus williamsi kvinne ble funnet og gjenerobret tre ganger. Denne kvinnen ble funnet grublende fullt utviklet glochidia i mars, ikke gravid i mai, rapporterte gravid i juni, og rugende egg i august.
Gravid kvinner av Villosa vibex grublende fullt utviklet glochidia ble funnet mellom februar og juni. Ferskvannsblåskjell er en svært imperiled gruppe organismer. Denne metodikken er viktig fordi den gir en ikke-dødelig måte å evaluere reproduktive egenskaper av imperiled arter.
Det er viktig å håndtere blåskjell med forsiktighet. Miljøforhold, som vanntemperatur og strømstrømmer, kan måles i feltet for å avgjøre hvilke forhold som utløser gyting og larveutvikling i ferskvannsblåskjell. Sammenstilling av timelige graviditetsdata for alle arter av ferskvannsblåskjell kan hjelpe studier i epidemiologi, glochidial morfologi, livshistorie, fylogenetikk, forplantning og translokasjon.