Vårt protokoll standardiserar metoder för provtagning av gälarna av gravid sötvattenmusslor och karakteriserar de olika stadierna av larvutveckling samtidigt som de tillhandahåller en online-databas för datainlämning och utforskning av Gravidity Almanackan. Tekniken är nonlethal och påverkar inte väsentligen en honmussla förmåga att förbli gravid efter provtagning av gälarna, därför kan metoden tillämpas på både vanliga och skyddade arter. Denna metodik kan tillämpas på organismer som kännetecknas i Bivalvia familjerna Hyriidae, Margaritiferidae och Unionidae, som distribueras i sötvattenekosystem på varje kontinent utom Antarktis.
Det är viktigt att öppna musslor med omsorg, samla in platsinformation och se till att data samlas in på rätt sätt. Om identifieringar kan ifrågasättas bör man ta bilder och kontakta lämpliga experter. Börja med att samla levande musslor från fältet med hjälp av taktila visuella metoder.
Utvärdera kvinnlig graviditet genom visuell inspektion antingen under eller efter insamling genom att försiktigt bända upp ventilerna precis tillräckligt för att titta inuti och se om gälarna är uppblåsta. Om du använder ett bevarat exemplar från ett museum, utför visuell inspektion genom att öppna ventilerna och inspektera gälarna. För att ta prov på gälinnehållet, preparera ett 1,5 milliliter uppsamlingsrör av plast med ungefär en milliliter antingen vatten eller etanol, beroende på hur snart utvärdering kommer att ske.
Packa upp en steril 30-gauge avfasningsnål på en 10-milliliter spruta, skruva av locket för att exponera nålen och tryck ner handtaget på sprutan så att proppen är vid noll-milliliter-linjen. Plocka upp den gravid honan och försiktigt bända upp de två ventilerna med hjälp av tummarnas spetsar. Använd nålspetsen för att försiktigt tränga in i ett enda vattenrör av den uppblåsta pungkälen, och skopa försiktigt ut gälinnehållet med nålens fasade spets.
Förvara dem i det förberedda mikrocentrifugröret för senare utvärdering. Registrera relevant information, såsom identifiering av släkte-arter, information om insamlingsplats och graviditetsstatus på databladet och registrera en unik identifierare på varje insamlingskärl för att säkerställa korrekta dataposter under transporten. Korrekt orientera musslan för att fotografera rätt ventil för identitetsvalidering, fastställa den, och ta fotografiet, se till att inkludera den märkta provröret i bilden.
För att utvärdera gälinnehållet, överför dem till en petriskål och fyller botten av skålen med vatten. Snurra försiktigt skålen för att samla innehåll i centrum för en mer koncentrerad bild av provet. Placera petriskålen under ett dissekeringsmikroskop för att utvärdera provet och om möjligt ta ett fotografi av provet under mikroskopet.
Registrera vars resultat utvecklingsstadier finns i varje gillprov. Om honorna ruvande larver på flera utvecklingsstadier, rapportera varje utvecklingsstadium som observerats i ett visst prov. Om fullt utvecklade glochidia identifieras och etanol inte användes för konservering, utvärdera deras bärkraft genom att tillsätta en kristall av natriumklorid till en delmängdsdropp av gälprovet.
Livskraftig glochidia kommer att svara genom att öppna och stänga sina ventiler eller helt enkelt stänga dem från en öppen position. Rapportera eventuellt salttestad glochidia med ett T i slutet av beteckningen när data registreras. Om du vill rapportera data kommer du åt FMGA-sidan eller mobilappen och registrerar resultaten i datainmatningsformuläret med hjälp av dropdown-menyer och textinmatningsfält.
För stora redan existerande datamängder kontaktar du författarna för mallens kalkylblad. Ange de inspelade uppgifterna under lämpliga kolumnrubriker, med tanke på att varje rad på kalkylbladet representerar observationer av ett gälprov från en gravid individ, sedan skicka in resultaten och de kommer att läggas till FMGA-databasen efter att ha validerats av en administratör, som kan kontakta insamlaren för att begära ytterligare detaljer eller foton. FMGA-databasen sammanställer all information som lämnas in och gör det möjligt för användaren att visualisera temporala graviditetsdata för alla arter i databasen.
Freshwater Mussel Gravidity Almanac är ett forskningsverktyg som syftar till att standardisera insamling av graviditet data samtidigt underlätta framtida forskning, bevarande och insatser återhämtning. Gill-samplingsprotokollet utvärderades genom att märka och återerövra honor med månadsintervall under hela året. Även om urvalsstorlekarna i studien är ojämlika mellan olika arter, belyser resultaten de positiva och praktiska tillämpningarna av detta protokoll.
Den gravidity kalendern för Villosa lienosa visar gravid honor grubblande fullt utvecklade glochidia hittades i nästan varje månad av året utom augusti, då endast honor grubblande ägg massorna hittades. Kvinna Hamiota australis hittades inte-gravid i juli, augusti och december. En större andel av honorna grubblade i januari och februari fullt utvecklad glochidia samt i oktober och november.
Inga individer av Elliptio pullata hittades grubblande fullt utvecklade glochidia, även om honor var grubblande ägg massorna från maj till juni. Endast en Strophitus williamsi hona hittades och återerövrades tre gånger. Denna hona hittades grubblande fullt utvecklade glochidia i mars, inte gravid i maj, rapporterade gravid i juni, och grubblande ägg i augusti.
Gravid honor av Villosa vibex grubblande fullt utvecklade glochidia hittades mellan februari och juni. Sötvattenmusslor är en mycket imperiled grupp av organismer. Denna metod är viktig eftersom den ger ett icke-dödligt sätt att utvärdera reproduktionsegenskaper hos imperiled arter.
Det är kritiskt att hantera musslor med omsorg. Miljöförhållanden, såsom vattentemperatur och strömflöden kan mätas i fältet för att avgöra vilka förhållanden som utlöser lek- och larvutveckling i sötvattenmusslor. Sammanställningen av tidsmässiga graviditet data för alla arter av sötvatten musslor kan bistå studier i epidemiologi, glochidial morfologi, livshistoria, fylogenetik, förökning och flyttning.
