Name: silencing the spark: crispr/cas9 genome editing in weakly electric fish
Uploaded: 2019-10-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Silencing the Spark: CRISPR/Cas9 Genome Editing in Weakly Electric Fish at JoVE.com

Forfatterne erkjenner den heroiske innsatsen til Monica Lucas, Katherine Shaw, Ryan Taylor, Jared Thompson, Nicole Robichaud, og Hope Healey for hjelp med fiskeoppdrett, datainnsamling, og tidlig protokoll utvikling. Vi vil også gjerne takke de tre anmeldere for deres forslag til manuskriptet. Vi tror det endelige produktet til å være av bedre kvalitet etter adressering sine kommentarer. Dette arbeidet ble finansiert av støtte fra National Science Foundation #1644965 og #1455405 til JRG, og naturvitenskap og engineering Research Council DG stipend til VLS.

Alle metoder beskrevet her over ha blitt anerkjent av det institusjonell dyr bekymre og bruk komité (IACUC) av Michigan begrunne universitet.
1. velge sgRNA mål
Merk: En protokoll er gitt for manuell utforming av sgRNAs i trinn 1,1. Dette ble benyttet for scn4aa Target valg. En ekstra protokoll er gitt for å forenkle denne prosessen (trinn 1,2) ved hjelp av EFISHGENOMICS webportal. Det anbefales at brukerne velger protokollen 1,2, som har ...

Den fenotypiske rikdommen av svakt elektrisk fisk, sammen med en fersk spredning av Genomics ressurser, motiverer et sterkt behov for funksjonelle genomisk verktøy i svakt elektrisk fisk modell. Dette systemet er spesielt attraktivt på grunn av den konvergent utviklingen av mange fenotypiske trekk i parallelle linjene av fisk, som er lett oppbevares i laboratoriet.
Protokollen som beskrives her demonstrerer effekten av CRISPR/Cas9 teknikk i linjene av svakt elektrisk fisk som utviklet seg el...

Electroreception og electrogenesis har endret seg i evolusjons historien til virveldyr. To linjene av tetramerisk fisk, visninger og Maller, utviklet electroreception parallelt, og fem linjene av teleosts (Gymnotiformes, mormyrids, og slekter Astroscopus, Malapterurus og Synodontis) utviklet seg electrogenesis parallelt. Det er en slående grad av konvergens i disse uavhengig avledet fenotyper, som deler en felles genetisk arkitektur1,2,3.
Dette er kanskje best illustrert av de mange konvergent funksjonene i gymnotiforms og mormyrids, to arter-rik tetramerisk klader, som produserer og oppdager svake elektriske felt og kalles svakt elektrisk fisk. I 50 år siden oppdagelsen at svakt elektrisk fisk bruker elektrisitet til å fornemme sine omgivelser og kommunisere4, et voksende fellesskap av forskere har fått enorm innsikt i utviklingen av utviklingen1,5 ,6, systemer og kretser nevrovitenskap7,8,9,10, cellular fysiologi11,12, økologi og energi13 ,14,15,16,17, atferd18,19, og makroevolusjon3,20,21 .
Mer nylig har det vært en spredning av genomisk, transcriptomic, og Proteomikk ressurser for elektrisk fisk1,22,23,24,25,26, 27,28. Bruk av disse ressursene har allerede produsert viktig innsikt om sammenhengen mellom genotype og fenotype i disse artene1,2,3,28,29 ,30. Et stort hinder for å integrere Genomics data med fenotypiske data av svakt elektrisk fisk er en gave mangel på funksjonelle Genomics verktøy31.
Et slikt verktøy er den nylig utviklet gruppert regelmessig oppdelt Short Palindromic gjentar sammenkoblet med Cas9 endonuclease (CRISPR/Cas9, CRISPR) teknikk. CRISPR/Cas9 er en Genova redigere bort verktøyet det har inngikk utstrakt bruk inne begge to modell32,33,34 og ingen-modell organisere35,36,37 ens. CRISPR/Cas9 teknologi har kommet til et punkt der et laboratorium i stand til grunnleggende molekylærbiologi kan lett generere gen-spesifikke sonder kalt kort guide RNAs (sgRNAs), til en lav kostnad ved hjelp av en ikke-kloning metode38. CRISPR har fordeler fremfor andre knockout/knockdown strategier, slik som morpholinos39,40, transkripsjon aktivator-lignende effektor nukleaser (TALENs), og sink finger nukleaser (zfner), som er kostbare og tidkrevende å generere for hvert mål genet.
Den CRISPR/Cas9 System funksjoner for å skape genet Knockouts ved å målrette en bestemt region av Genova, regissert av sgRNA sekvensen, og forårsaker en dobbel-strandet pause. Den doble strandet pause oppdages av cellen og utløser endogene DNA reparasjon mekanismer fortrinnsvis bruker ikke-homologe slutten sammenføyning (NHEJ) veien. Denne veien er svært feil utsatt: under reparasjonsprosessen, DNA-molekylet vil ofte innlemme innsettinger eller slettinger (indeler) på dobbel-strandet pause området. Disse indeler kan føre til tap av funksjon på grunn av enten (1) Skift i den åpne lese RAM men, (2) innsetting av en for tidlig stopp-Codon, eller (3) endringer i den kritiske primære strukturen av genet produktet. I denne protokollen, bruker vi CRISPR/Cas9 redigering til målet punkt mutasjoner i målet gener ved hjelp av NHEJ i svakt elektriske fiskearter. Mens enklere og mer effektiv enn andre teknikker, er denne metoden for mutagenese forventes å resultere i en rekke fenotypiske alvorlighetsgradene i F0, som er tilskrevet genetisk mosaikk41,42,43 ,44.
Utvalg av organismer For å tilrettelegge fremtidige studier på komparativ Genomics av svakt elektrisk fisk, en representativ arter for både gymnotiforms og mormyrids for protokoll utvikling nødvendig for å bli valgt. Etter diskusjoner i løpet av 2016 Electric Fish møte i Montevideo, Uruguay, det var samfunnet konsensus for å utnytte arter som allerede kan bli avlet i laboratoriet og som hadde genomisk ressurser tilgjengelig. Den gymnotiform Brachyhypopomus gauderio og mormyrid Brienomyrus brachyistius ble valgt som arter som passer disse kriteriene. I begge artene er naturlige indikatorer for å indusere og opprettholde avl forhold lett å etterligne i fangenskap. B. gauderio, en gymnotiform Art fra Sør-Amerika, har fordelen av krav til lav husdyrhold: fisk kan oppbevares ved relativt høy tetthet i relativt små (4 L) tanker. B. gauderio har også rask generasjonsskifte omsetning under forhold med fange. Under laboratorieforhold, kan B. gauderio utvikle seg fra egg til voksen i ca 4 måneder.
B. brachyistius, en art av mormyrid fisk fra Vest-Sentral-Afrika, raser lett i fangenskap. B. brachyistius er lett tilgjengelig gjennom akvariet handelen, har vært mye brukt i mange studier, og har nå en rekke genomisk ressurser tilgjengelig. Deres livssyklus spenner over 1 − 3 år, avhengig av laboratorieforhold. Kravene til reindrift er noe mer intensive for denne arten, som krever moderat store tanker (50 − 100 L) på grunn av aggresjon under avl.
Laboratorier som studerer andre arter av elektrisk fisk skal kunne enkelt tilpasse denne protokollen så lenge arten kan være avlet, og enkelt celle embryo kan samles og oppvokst i voksen alder. Boliger, larvestadiet husdyrhold, og in vitro befruktning (IVF) priser vil trolig endres med andre arter; Imidlertid kan denne protokollen brukes som et utgangspunkt for avl forsøk i andre svakt elektrisk fisk.
En ideal Gene mål for Proof av begrep: scn4aa Svakt elektrisk mormyrid og gymnotiform fisk genererer elektriske felt (electrogenesis) ved å tømme en spesialisert organ, kalt elektrisk organ. Elektriske orgel utslipp (EODs) er et resultat av samtidig produksjon av handlings potensialer i de elektriske organ cellene som kalles electrocytes. EODs oppdages av en rekke elektroreseptorer i huden for å lage høyoppløselige elektriske bilder av Fiskene omgivelser45. Svakt elektrisk fisk er også i stand til å oppdage funksjoner i deres conspecifics ' EOD bølgeformer18 så vel som deres utslipp priser46, slik at EODs å fungere i tillegg som en sosial kommunikasjon signal analoge til fuglesang eller frosk vocalizations47.
En hovedkomponent i aksjon potensiell generasjon i electrocytes av både mormyrid og gymnotiform svakt elektrisk fisk er spenning-gated natrium kanal NaV 1.42. Ikke-elektriske teleosts uttrykker to paralogous gen kopier, scn4aa og scn4ab, koding for spennings-gated natrium kanal NAV 1.430. I både gymnotiform og mormyrid svakt elektrisk fisk linjene, scn4aa har utviklet seg raskt og gjennomgått mange aminosyre erstatninger som påvirker dens kinetisk egenskaper48. Viktigst, scn4aa har blitt compartmentalized i begge linjene til elektrisk organ2,3. Den relativt begrensede uttrykk for scn4aa til elektrisk organ, så vel som sin nøkkelrolle i generasjonen av EODs, gjør det til et ideelt mål for CRISPR/Cas9 knockout eksperimenter, som det har minimal skadelige pleiotropic effekter. Fordi svakt elektrisk fisk begynner å tømme sine larvestadiet elektriske organer 6 − 8 dager etter befruktning (DPF), er målretting av scn4aa ideell for rask bestemmelse av fenotype etter embryo microinjection.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>20 mg/mL RNA grade Glycogen</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R0551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 bp DNA ladder</td>
			<td>NEB</td>
			<td>N3236L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>borosilicate glass capillary with filament</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>BF100-58-10</td>
			<td>(O.D. 1.0mm, I.D. 0.58 mm, 10 cm length)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cas9 protein with NLS; 1 mg/mL</td>
			<td>PNA Biology</td>
			<td>CP01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dneasy Blood &#38; Tissue Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf FemptoJet 4i Microinjector</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>E5252000021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Microloader Pipette Tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10289651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-824-654</td>
			<td>referred to as &#34;precision glass syringe&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>referred to as &#34;delicate task wipe&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAscript T7 Transcription Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEBuffer 3</td>
			<td>NEB</td>
			<td>B7003S</td>
			<td>used for in vitro cleavage assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OneTaq DNA kit</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0480L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovaprim</td>
			<td>Syndel USA</td>
			<td>https://www.syndel.com/ovaprim-ovammmlu010.html</td>
			<td>referred to as &#34;spawning agent&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S37440</td>
			<td>referred to as &#34;thermoplastic&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette puller</td>
			<td>WPI</td>
			<td>SU-P97</td>
			<td>sutter brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick PCR Purification Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reusable needle- requires customization</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7803-02</td>
			<td>Customize to 0.7 inches long; point style 4 and angle 25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA polymerase</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0203L</td>
			<td>Use with the 10X NEB buffer that is included</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon coated tools</td>
			<td>bonefolder.com</td>
			<td>T-SPATULA4PIECE</td>
			<td>referred to as &#34;polytetrafluoroethene&#34; in the protocol</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

silencing the spark: crispr/cas9 genome editing in weakly electric fish

Electroreception og electrogenesis har endret seg i evolusjons historien til virveldyr. Det er en slående grad av konvergens i disse uavhengig avledet fenotyper, som deler en felles genetisk arkitektur. Dette er kanskje best illustrert av de mange konvergent funksjonene i gymnotiforms og mormyrids, to arter-rik tetramerisk klader som produserer og oppdager svake elektriske felt og kalles svakt elektrisk fisk. I 50 år siden oppdagelsen at svakt elektrisk fisk bruker elektrisitet til å fornemme sine omgivelser og kommunisere, et voksende fellesskap av forskere har fått enorm innsikt i utviklingen av utvikling, systemer og kretser nevrovitenskap, cellulære fysiologi, økologi, evolusjonære biologi og atferd. Flere nylig har det vært en spredning av genomisk ressurser for elektrisk fisk. Bruk av disse ressursene har allerede tilrettelagt viktig innsikt med hensyn til sammenhengen mellom genotype og fenotype i disse artene. Et stort hinder for å integrere Genomics data med fenotypiske data av svakt elektrisk fisk er en gave mangel på funksjonelle Genomics verktøy. Vi rapporterer her en full protokoll for å utføre CRISPR/Cas9 mutagenese som utnytter endogene DNA reparasjon mekanismer i svakt elektrisk fisk. Vi viser at denne protokollen er like effektiv i både mormyrid arter Brienomyrus brachyistius og gymnotiform Brachyhypopomus GAUDERIO ved hjelp CRISPR/Cas9 å målrette indeler og punkt mutasjoner i den første ekson av natrium kanal gen scn4aa. Ved hjelp av denne protokollen ble embryo fra begge artene innhentet og genotyped for å bekrefte at de anslåtte mutasjoner i den første ekson av natrium kanalen scn4aa var til stede. Den Knock-Out suksess fenotype ble bekreftet med opptak viser redusert elektrisk organ utladning amplituder sammenlignet med uninjected størrelse matchet kontroller.

SgRNA målområder ble identifisert i ekson 1 av scn4aa i både B. gauderio og b. brachyistius som beskrevet i avsnitt 1. SgRNAs ble generert som beskrevet i avsnitt 2. Etter vellykket sgRNA utvelgelse og syntese (figur 1), ble in vitro testet (figur 2). Den sgRNAs demonstrere in vitro skjæring ble deretter valgt for enkelt celle microinjections.
Voksen fisk var betinget for reproduksjon (§ 4,1), deretter ...

Watch this Scientific Journal Video about Silencing the Spark: CRISPR/Cas9 Genome Editing in Weakly Electric Fish at JoVE.com

Silencing the Spark: CRISPR/Cas9 Genome Editing in Weakly Electric Fish

Her er en protokoll presentert for å produsere og bak CRISPR/Cas9 Genova knockout elektrisk fisk. Skissert i detalj er nødvendig molekylærbiologi, avl og oppdrett krav til både en gymnotiform og en mormyrid, og injeksjon teknikker for å produsere Cas9-indusert indel F0 larver.

Deaktivere spark: CRISPR/Cas9 Genova redigere i svakt Electric Fish

Electroreception and electrogenesis have changed in the evolutionary history of vertebrates. There is a striking degree of convergence in these ...

CRISPR/Cas9 genredigering i svakt elektrisk fisk, spesielt i komparativ sammenheng, vil gjøre det mulig for forskere å teste hypoteser om hvordan spesifikke gener og genetisk varians bidrar til fenotypisk variasjon. CRISPR/Cas9 er en effektiv metode for generering av muterte F-null embryoer. Denne protokollen gjør det mulig for forskere å utføre CRISPR-Cas9 manipulasjoner i to konvergerende utviklede arter av svakt elektrisk fisk.Nøkkelen til å bruke denne tilnærmingen med noen modifikasjoner i andre elektriske fisk eller andre fiskearter er tilgjengeligheten av transkripsjons- eller genomiske ressurser for å lage sgRNAer. Det kan være vanskelig å utføre mikroinjeksjonene og visualisere cellene på et 3D-sted i et 2D-plan. Få en liten sebrafisk koloni for egg å praktisere generelle mikroinjeksjon teknikker.Å demonstrere prosedyren med Savvas Constantinou vil være Jared Thompson, en tekniker fra laboratoriet mitt. Etter å ha boliger fiskeartene av interesse under de aktuelle avlsforholdene, identifisere kvinnelig fisk som vises gravid. I B.gauderio vil kvinnen ha hovne gonader bare caudal til ventilen.I B.brachyistius kvinner vil ha hovne mager og vises dyp-bodied. Etter anestesiadministrasjon, tilsett gytemiddel til fire ganger volumet av DPBS i et PCR-rør med grundig blanding. Løsningen vil bli overskyet.Bruk en pipette til å måle ut den beregnede dosen og dispensere det fortynnede middelet til et stykke termoplastisk før du trekker oppløsningen inn i en presisjonsglasssprøyte utstyrt med en 28-gauge 19 til 25 milliliter lengde skrå nål. Injiser oppløsningen i dorsal trunk muskelen i en jevn hastighet og la nålen sitte i to til fire sekunder før fjerning. Deretter plasserer du umiddelbart fisk i ferskvann for utvinning.For B.gauderio sperm samling, etter 24 timer, velg en stor mannlig fisk og så raskt som mulig etter sedasjon, tørk fisken grundig, spesielt rundt hodet og Vent. Plasser den tørkede fiskeventralen med forsiden opp, fremre til venstre i passende holder, dekket av et MS222 gjennomvåt fuktig papirhåndkle med hodet så parallelt med bordet som mulig. Umiddelbart påfør trykk i caudal til rostral retning med lys klemme umiddelbart over gonads mot ventilen og bruke en mikropipetter med et tips, forsiktig samle sperm som det er presset fra hannen i 50-mikroliter trinn.Legg aliquot av sperm direkte på 500-mikroliter volumer av sperm extender løsning på is. Umiddelbart etter innsamlingen, plasser fisk i slim strøk beskyttelse produktbehandlet ferskvann. For B.gauderio egg samling, etter tørking en bedøvet B.gauderio kvinnelig fisk, umiddelbart plassere fisken på siden med hodet vendt mot den ikke-dominerende hånden og legge press i caudal til rostral retning med lys klemme medially over gonads mot ventilen.Bruk et polytetrafluoretylenverktøy, samle forsiktig eggene når de klemmes fra cloaca og legger raskt eggene i en liten dekket petriskål. Hvis du arbeider alene etter klemming, berører du eggmassen til bunnen av den lille petriskålen når de blir utvist fra kvinnen. Umiddelbart etter å ha samlet eggene, legg fisken i slimfrakkbeskyttelse produktbehandlet ferskvann.For B.gauderio in vitro befruktning, tilsett 100 mikroliter av den godt blandede sperm SES-løsningen rett over eggmassen, etterfulgt av en milliliter ferskvann. Bland gametes suspensjon grundig i 30 til 60 sekunder før du legger til en ekstra en til to milliliter av 0,22-mikrometer pore filtrert system vann til cellene. Merk parabolen med in vitro befruktningstid og legg parabolen i en 29-graders Celsius inkubator, og angi en 50-minutters timer for å sjekke fremdriften av utviklingen.I befruktningsperioden, bruk en mikrolasterpipettespiss for å laste to mikroliter av injeksjonsoppløsningen av interesse til en mikroinjeksjonsnål og utvise væsken så nær spissen som mulig. Når en enkelt celle har dannet seg på dyrestangen på minst en celle, overfør parabolen under et dissekerende mikroskop og bruk et par fine pinsett for å bryte nålespissen i skrå vinkel mot hvor nålens nål begynner å demonstrere stivhet. Nålens boring skal forbli så liten som mulig samtidig som en stiv taper opprettholdes.Identifiser de utviklende zygotene under mikroskopet og bruk en plastoverføringspipette med en kuttspiss for å plassere 10 til 20 egg i så lite vann som mulig på kanten av glassmikroskopsklien satt i den omvendte toppen av petriskålen. Bruk en delikat oppgavesletting, trykk forsiktig på lysbildet for å fjerne overflødig vann slik at eggene kan feste seg fast til kanten av lysbildet. Vann vil bli ond under sklien og trekke egg mot kanten.Det bør være akkurat nok vann til å holde eggene fuktige samtidig som de opprettholder lite stående fuktighet for å unngå eggbevegelse under injeksjon. Juster eggene mot lysbildet vertikalt, vinkelrett på den nærmer seg nålen, og bruk en mikromanipulator til å plassere nålen mot chorion. Deretter holder nålen i en omtrent 45-graders vinkel, sett spissen først inn i chorion og deretter, inn i den ene cellen, injisere gjennom eggeplommen hvis mulig.Fjern eventuelle ødelagte egg under injeksjonen med fine tang. Når alle eggene er injisert, bruk en sprutflaske med 0,22 mikrometer pore filtrert systemvann for å forsiktig skylle eggene fra injeksjonsstadiet til en ny 100 millimeter diameter Petriskål. Etter en vellykket kort guide RNA-valg og syntese, kan in vitro cleavage testes for valg for enkeltcellemikroinjeksjoner.Etter pcr opprydding og kloning, i dette representative eksperimentet, CRISPR-Cas9 induserte mutasjoner ble identifisert i individuelle B.gauderio og B.brachyistius kloner med sterk elektrisk organ utslipp amplitude reduksjon, mens uinjektede kontroller vises bare referert genotyper. Visualisering av elektroorganutladningsamlituden mellom bekreftede CRISPR-mutanter og agentstørrelse matchet uinjekte kontroller viste at både SCN-4 AA mutant B.brachyistius og B.gauderio embryoer hadde betydelig lavere elektriske organutladningsamlektrier enn kontroller. Når du utfører mikroinjeksjoner, flytte så raskt og bevisst som mulig for å maksimere antall encellede injisert embryoer som overlever.Ikke kast bort tid med vanskelige egg. Når vellykkede mutanter er identifisert, kan tradisjonelle avlsmetoder skape stabile mutantlinjer, noe som eliminerer CRSPR-tilknyttede mosaikkbekymringer. Denne protokollen vil tillate forskere å gjennomføre komparative genomiske studier med funksjonell validering i to konvergerende utviklede arter av svakt elektrisk fisk.

Research

JoVE Journal

Biology

Genome Editing with CompoZr Custom Zinc Finger Nucleases (ZFNs)

Genome Editing with CompoZr Custom Zinc Finger Nucleases ZFNs

Genome Redigerer med CompoZr Custom sink finger nukleaser (ZFNs)

Genome editing is a powerful technique that can be used to elucidate gene function and the genetic basis of disease. Traditional gene editing methods such ...

Digital Inline Holographic Microscopy (DIHM) of Weakly-scattering Subjects

Digital Inline Holographic Microscopy DIHM of Weakly-scattering Subjects

Digital Inline Holografisk Mikros (DIHM) av Weakly-spredning Emner

Weakly-scattering objects, such as small colloidal particles and most biological cells, are frequently encountered in microscopy. Indeed, a range of ...

Generation of Genomic Deletions in Mammalian Cell Lines via CRISPR/Cas9

Generasjon av Genomiske slettinger i pattedyrcellelinjer via CRISPR / Cas9

The prokaryotic clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated (Cas) 9 system may be re-purposed for site-specific ...

Genome Editing in Astyanax mexicanus Using Transcription Activator-like Effector Nucleases (TALENs)

Genome Editing in Astyanax mexicanus Using Transcription Activator-like Effector Nucleases TALENs

Genome Redigerer i<em&gt; Astyanax mexicanus</em&gt; Ved hjelp av transkripsjon Activator-lignende Effector nukleaser (Talens)

Identifying alleles of genes underlying evolutionary change is essential to understanding how and why evolution occurs.  Towards this end, much recent ...

Preparing and Injecting Embryos of Culex Mosquitoes to Generate Null Mutations using CRISPR/Cas9

Preparing and Injecting Embryos of Culex Mosquitoes to Generate Null Mutations using CRISPR/Cas9

Forberede og injisere embryoer av Culex mygg for å generere nullmutasjoner ved hjelp av CRISPR / Cas9

Culex mosquitoes are the major vectors of several diseases that negatively impact human and animal health including West Nile virus and diseases caused by ...

Genome Engineering of Primary Human B Cells Using CRISPR/Cas9

Genomteknikk av primære humane B-celler ved hjelp av CRISPR/Cas9

B cells are lymphocytes derived from hematopoietic stem cells and are a key component of the humoral arm of the adaptive immune system. They make ...

Pupal and Adult Injections for RNAi and CRISPR Gene Editing in Nasonia vitripennis

Pupal and Adult Injections for RNAi and CRISPR Gene Editing in Nasonia vitripennis

Pupal og voksen injeksjoner for RNAi og CRISPR Genredigering i Nasonia vitripennis

The jewel wasp, Nasonia vitripennis, has become an efficient model system to study epigenetics of haplo-diploid sex determination, B-chromosome biology, ...

TGF-&#946;-mediated Endothelial to Mesenchymal Transition (EndMT) and the Functional Assessment of EndMT Effectors using CRISPR/Cas9 Gene Editing

TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-mediated Endothelial to Mesenchymal Transition EndMT and the Functional Assessment of EndMT Effectors using CRISPR/Cas9 Gene Editing

TGF-β mediert endotelial til mesenchymal overgang (EndMT) og den funksjonelle vurderingen av EndMT-effektorer ved hjelp av CRISPR/Cas9 Genredigering

In response to specific external cues and the activation of certain transcription factors, endothelial cells can differentiate into a mesenchymal-like ...

Identification of Alternative Splicing and Polyadenylation in RNA-seq Data

Identifisering av alternativ spleising og polyadenylering i RNA-seq-data

As well as the typical analysis of RNA-Seq to measure differential gene expression (DGE) across experimental/biological conditions, RNA-seq data can also ...

Construction of Homozygous Mutants of Migratory Locust Using CRISPR/Cas9 Technology

The migratory locust, Locusta migratoria, is not only one of the worldwide plague locusts that caused huge economic losses to human beings but also an ...