Name: silencing the spark: crispr/cas9 genome editing in weakly electric fish
Uploaded: 2019-10-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Silencing the Spark: CRISPR/Cas9 Genome Editing in Weakly Electric Fish at JoVE.com

Авторы признают героические усилия Моники Лукас, Кэтрин Шоу, Райана Тейлора, Джареда Томпсона, Николь Робишо и Хоуп Хили за помощь в размножеству рыб, сборе данных и разработке раннего протокола. Мы также хотели бы поблагодарить трех рецензентов за их предложения по рукописи. Мы считаем, что конечный продукт будет лучшего качества после рассмотрения их замечаний. Эта работа была профинансирована за счет поддержки Со стороны Национального научного фонда #1644965 и #1455405 JRG, а также Грант Совета по естественным наукам и инженерным исследованиям DG для VLS.

Все методы, описанные здесь, были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и использованию (IACUC) Мичиганского государственного университета.
1. Выбор целей sgRNA
ПРИМЕЧАНИЕ: Предусмотрен протокол ручного проектирования сгРНВ в шаге...

Фенотипическое богатство слабоэлектрической рыбы, наряду с недавним распространением ресурсов геномики, мотивирует острую потребность в функциональных геномных инструментах в слабо электрической модели рыб. Эта система особенно привлекательна из-за конвергентной эволюции многочи?...

Электроприем и электрогенез изменились в эволюционной истории позвоночных. Две линии телеостных рыб, остеоглоссиформы и силуриформы, развивались электроприем параллельно, и пять линий телеост (гимназии, мормириды, и род Астроскопус, Малаптерурус, и Synodontis) развивался электрогенез параллельно. Существует поразительная степень конвергенции в этих независимо полученных фенотипов, которые имеют общую генетическую архитектуру1,2,3.
Это, пожалуй, лучше всего иллюстрируется многочисленными конвергентными особенностями гимнотиформ и мормиридов, двух богатых видов телеостовых кладок, которые производят и обнаруживают слабые электрические поля и называются слабо электрическими рыбами. В 50 лет с момента открытия, что слабо электрические рыбы используют электричество, чтобы почувствовать свое окружение и общаться4, растущее сообщество ученых получил огромное понимание эволюции развития1,5 ,6, системы и схемы нейробиологии7,8,9,10, клеточной физиологии11,12, экологии и энергетики13 ,14,15,16,17, поведение18,19, и макроэволюция3,20,21 .
В последнее время наблюдается распространение геномных, транскриптомических и протеомных ресурсов для электрической рыбы1,22,23,24,25,26, 27,28. Использование этих ресурсов уже дало важные идеи относительно связи между генотипом и фенотипом у этих видов1,2,3,28,29 ,30. Основным препятствием для интеграции данных геномики с фенотипическими данными слабоэлектрической рыбы является отсутствие функциональных инструментов геномики31.
Одним из таких инструментов является недавно разработанный кластерных регулярно межпространственных коротких palindromic Повторы в паре с Cas9 эндонуклеазы (CRISPR/Cas9, CRISPR) техники. CRISPR/Cas9 является инструментом редактирования генома, который вошел широкое применение в обеих моделей32,33,34 и не-модель организмов35,36,37, так. Технология CRISPR/Cas9 продвинулась до такой степени, что лаборатория, способная к базовой молекулярной биологии, может легко генерировать генно-специфические зонды, называемые короткими направляющими РНК (sgRNAs), по низкой цене с использованием метода неклонирования38. CRISPR имеет преимущества по сравнению с другими стратегиями нокаута/нокдауна, такими как морфолинос39,40, транскрипционный активатор-подобный эффектор nucleases (TALENs), и цинковый палец nucleases (ЗФНС), которые являются дорогостоящими и много времени для генерации для каждого целевого гена.
Система CRISPR/Cas9 функционирует для создания генных нокаутов, ориентируясь на определенную область генома, направленную последовательностью sgRNA, и вызывая двухцепочечный разрыв. Двухцепочечный разрыв обнаруживается клеткой и вызывает эндогенные механизмы репарации ДНК, преимущественно используя негомологичные конечные соединения (NHEJ). Этот путь очень подвержен ошибкам: во время процесса ремонта молекула ДНК часто включает вставки или удаления (индельи) в двухцепочечном месте разрыва. Эти indels могут привести к потере функции из-за либо (1) сдвиги в открытой раме чтения, (2) вставки преждевременной остановки кодона, или (3) сдвиги в критической первичной структуре гена продукта. В этом протоколе мы используем редактирование CRISPR/Cas9 для целевых точечных мутаций в генах-мишенях, используя NHEJ у слабо электрических видов рыб. Хотя проще и эффективнее, чем другие методы, этот метод мутагенеза, как ожидается, приведет к ряду фенотипических разрывов в F0, который приписывается генетический мозаичный41,42,43 ,44.
Выбор организмов Для содействия будущим исследованиям по сравнительной геномике слабо электрических рыб необходимо было отобрать представительный вид как для гимназиформ, так и для мормиридов для разработки протокола. После обсуждения в ходе совещания «Электрические рыбы» в Монтевидео, Уругвай, в 2016 году был достигнут консенсус сообщества в отношении использования видов, которые уже могут быть выведены в лаборатории и которые имеют сявко. Тренажерный зал Brachyhypopomus gauderio и mormyrid Brienomyrus brachyistius были выбраны в качестве видов, которые соответствуют этим критериям. В обоих видах, естественные сигналы для индуцирования и поддержания условий размножения легко имитировать в неволе. B. gauderio, gymnotiform видов из южной Америки, имеет преимущество низких требований к животноводству: рыба может храниться при относительно высокой плотности в относительно небольших (4 L) танков. B. gauderio также имеет быстрый оборот поколений в условияхневоле. В лабораторных условиях, B. gauderio может развиваться от яйца к взрослому примерно в 4 месяца.
B. brachyistius, вид мормиридных рыб из Западно-Центральной Африки, легко размножается в неволе. B. brachyistius легко доступен через аквариум торговли, был широко использован во многих исследованиях, и в настоящее время имеет ряд геномных ресурсов. Их жизненный цикл составляет 1–3 года, в зависимости от лабораторных условий. Требования к животноводству несколько более интенсивны для этого вида, требуя средних размеров танков (50–100 л) из-за их агрессии во время размножения.
Лаборатории, изучающие другие виды электрических рыб, должны быть в состоянии легко адаптировать этот протокол до тех пор, пока вид может быть выведен, и одноклеточные эмбрионы могут быть собраны и воспитаны во взрослую жизнь. С другими видами, скорее всего, изменятся показатели жилищного строительства, личинки и экстракорпорального оплодотворения (ЭКО); однако, этот протокол может быть использован в качестве отправной точки для размножения попыток в других слабо электрических рыб.
Идеальный ген Целевой для доказательства концепции: scn4aa Слабо электрические мормиридные и gymnotiform рыбы генерировать электрические поля (электрогенез) путем разрядки специализированного органа, называемого электрическим органом. Электрические разряды органов (EOD) являются результатом одновременного производства потенциалов действия в клетках электрических органов, называемых электроцитами. EODs обнаружены массив электрорецепторов в коже для создания высокого разрешения электрических изображений окружения рыбы45. Слабо электрические рыбы также способны обнаруживать особенности eOD волновых форм их conspecifics18, а также их скорость разряда46,что позволяет EODs функционировать дополнительно в качестве сигнала социальной связи, аналогичной пение птиц или лягушки вокализации47.
Основным компонентом действия потенциального поколения в электроцитах как мормирид, так и gymnotiform слабо электрической рыбы является напряжение-gated натриевый канал NaV1.42. Неэлектрические телеост выражают две паралогические копии генов, scn4aa и scn4ab, кодирование для натриевого канала NaV1.430. В обоих gymnotiform и mormyrid слабо электрических линий рыбы, scn4aa развивалась быстро и претерпела многочисленные аминокислотные замены, которые влияют на его кинетические свойства48. Самое главное, scn4aa стала разобщена в обеих линиях к электрическому органу2,3. Относительно ограниченное выражение scn4aa к электрическому органу, а также его ключевая роль в генерации EODs, делает его идеальной мишенью для экспериментов по нокауту CRISPR/Cas9, так как он имеет минимальные пагубные плейотропные эффекты. Поскольку слабо электрические рыбы начинают выгрузку своих личинок электрических органов 6-8 дней после оплодотворения (DPF), ориентация scn4aa идеально подходит для быстрого фенотипирования после микроинъекции эмбриона.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>20 mg/mL RNA grade Glycogen</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R0551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 bp DNA ladder</td>
			<td>NEB</td>
			<td>N3236L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>borosilicate glass capillary with filament</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>BF100-58-10</td>
			<td>(O.D. 1.0mm, I.D. 0.58 mm, 10 cm length)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cas9 protein with NLS; 1 mg/mL</td>
			<td>PNA Biology</td>
			<td>CP01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dneasy Blood &#38; Tissue Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf FemptoJet 4i Microinjector</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>E5252000021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Microloader Pipette Tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10289651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-824-654</td>
			<td>referred to as &#34;precision glass syringe&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>referred to as &#34;delicate task wipe&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAscript T7 Transcription Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEBuffer 3</td>
			<td>NEB</td>
			<td>B7003S</td>
			<td>used for in vitro cleavage assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OneTaq DNA kit</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0480L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovaprim</td>
			<td>Syndel USA</td>
			<td>https://www.syndel.com/ovaprim-ovammmlu010.html</td>
			<td>referred to as &#34;spawning agent&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S37440</td>
			<td>referred to as &#34;thermoplastic&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette puller</td>
			<td>WPI</td>
			<td>SU-P97</td>
			<td>sutter brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick PCR Purification Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reusable needle- requires customization</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7803-02</td>
			<td>Customize to 0.7 inches long; point style 4 and angle 25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA polymerase</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0203L</td>
			<td>Use with the 10X NEB buffer that is included</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon coated tools</td>
			<td>bonefolder.com</td>
			<td>T-SPATULA4PIECE</td>
			<td>referred to as &#34;polytetrafluoroethene&#34; in the protocol</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

silencing the spark: crispr/cas9 genome editing in weakly electric fish

Электроприем и электрогенез изменились в эволюционной истории позвоночных. Существует поразительная степень конвергенции в этих независимо полученных фенотипов, которые имеют общую генетическую архитектуру. Это, пожалуй, лучше всего иллюстрируется многочисленными конвергентными особенностями гимнотиформ и мормиридов, двух богатых видов телеостовых кладок, которые производят и обнаруживают слабые электрические поля и называются слабо электрическими рыбами. За 50 лет, прошедших с момента открытия, что слабо электрические рыбы используют электричество, чтобы почувствовать свое окружение и общаться, растущее сообщество ученых получило огромное понимание эволюции развития, систем и схем нейронауки, клеточной физиологии, экологии, эволюционной биологии и поведения. В последнее время наблюдается распространение геномных ресурсов для электрической рыбы. Использование этих ресурсов уже способствовало получению важных сведений о связи между генотипом и фенотипом этих видов. Основным препятствием для интеграции данных геномики с фенотипическими данными слабоэлектрической рыбы является отсутствие функциональных инструментов геномики. Мы сообщаем здесь полный протокол для выполнения CRISPR/Cas9 мутагенеза, который использует эндогенные механизмы репарации ДНК в слабо электрических рыб. Мы демонстрируем, что этот протокол одинаково эффективен как в мормиридных видах Brienomyrus brachyistius, так и в gymnotiform Brachyhypopomus gauderio с помощью CRISPR/Cas9 для целевой indels и точечных мутаций в первом экзоне натриевый канал гена scn4aa. Используя этот протокол, эмбрионы обоих видов были получены и генотипированы, чтобы подтвердить, что прогнозируемые мутации в первом экзоне канала натрия scn4aa присутствовали. Плей-аут успеха фенотип был подтвержден с записями, показывающими снижение электрических амплитуды разряда органов по сравнению с невведенным размером соответствующих элементов управления.

Целевые объекты сгРНК были определены в пределах exon 1 scn4aa в обоих B. gauderio и B. brachyistius, как описано в разделе 1. СГРН были созданы, как описано в разделе 2. После успешного отбора и синтеза сгРНК(Рисунок 1),декольте в пробирке было протестировано(рисуно...

Watch this Scientific Journal Video about Silencing the Spark: CRISPR/Cas9 Genome Editing in Weakly Electric Fish at JoVE.com

Silencing the Spark: CRISPR/Cas9 Genome Editing in Weakly Electric Fish

Здесь представлен протокол для производства и заднего CRISPR/Cas9 генома нокаут электрической рыбы. Изложены в деталях являются необходимые молекулярной биологии, селекции, и животноводство требования как для gymnotiform и mormyrid, и инъекционные методы для производства Cas9 индуцированных indel F0 личинок.

Молчание Spark: CRISPR/Cas9 Редактирование генома в слабо электрической рыбы

Electroreception and electrogenesis have changed in the evolutionary history of vertebrates. There is a striking degree of convergence in these ...

Редактирование генов CRISPR/Cas9 у слабо электрических рыб, особенно в сравнительном контексте, позволит исследователям проверить гипотезы о том, как специфические гены и генетическая дисперсия способствуют фенотипическим вариациям. CRISPR/Cas9 является эффективным методом генерации мутантных эмбрионов F-zero. Этот протокол позволяет исследователям проводить манипуляции CRISPR-Cas9 в двух конвергентно эволюцию видов слабо электрических рыб.Ключом к использованию этого подхода с некоторыми изменениями в других электрических рыб или других видов рыб является наличие транскриптомных или геномных ресурсов для сделать sgRNAs. Выполнение микроинъекций и визуализация клеток в 3D-месте в 2D плоскости может быть затруднено. Получить небольшую колонию зебры для яиц на практике общих методов микроинъекции.Демонстрацией процедуры с Саввасом Константину будет Джаред Томпсон, техник из моей лаборатории. После жилья видов рыб, представляющих интерес в соответствующих условиях размножения, определить самок рыб, которые появляются gravid. В B.gauderio, самка будет иметь опухшие гонады просто caudal в вентиляционные отверстия.В B.brachyistius самки будут иметь опухшие животы и появляются глубокотелые. После введения анестезии добавьте нерестовой агент в четыре раза больше DPBS в трубку ПЦР с тщательным смешиванием. Раствор станет облачным.Используйте пипетку, чтобы измерить рассчитанную дозу и обойтись разбавленного агента к куску термопластика, прежде чем рисовать раствор в точный стеклянный шприц оснащен 28-го калибра от 19 до 25-миллилитровой длины скошенной иглы. Ввимите раствор в мышцу спинного туловища с гладкой скоростью и дайте игле сидеть в течение двух-четырех секунд до удаления. Затем немедленно поместите рыбу в пресную воду системы для восстановления.Для сбора спермы B.gauderio, через 24 часа, выберите большую мужскую рыбу и как можно быстрее после одации, тщательно высушите рыбу, особенно вокруг головы и Вента. Поместите высушенную рыбу брюшной стороны вверх, передней слева в соответствующий держатель, покрытый MS222 пропитанной влажной бумажное полотенце с головой, как параллельно со столом, как это возможно. Немедленно нанесите давление в caudal к rostral направлению с светом сжимая немедленно над gonads к вентиляции и используя micropipetter с подсказкой, тщательно собираете сперму по мере того как она сжата от мужчины в 50-microliter приращениях.Добавьте алицит спермы непосредственно на 500-микролитерные объемы раствора расширитея спермы на льду. Сразу после сбора поместите рыбу в слизь пальто защиты продукт-обработанной пресной системой воды. Для сбора яиц B.gauderio, после высыхания обезболивающей самки рыбы B.gauderio, немедленно поместите рыбу на бок с головой, обращенной к недоминной руке, и нанесите давление в хвостовом направлении с легким сжатием medially над гонадами к вентиляции.Используя инструмент политетрафторэтилен, тщательно собирайте яйца, как они выдавливаются из клоаки и быстро поместите яйца в небольшой крытый Чашку Петри. Если вы работаете в одиночку после сжатия, коснитесь яичной массы к основанию небольшой чашки Петри, как они изгнаны из женщины. Сразу же после сбора яиц, поместите рыбу в слизь пальто защиты продукт-обработанной пресной воды системы.Для экстракорпорального оплодотворения B.gauderio добавьте 100 микролитров хорошо смешанного раствора спермы SES непосредственно над яичной массой, а затем один миллилитр пресной воды системы. Смешайте подвеску gametes тщательно в течение 30 до 60 секунд, прежде чем добавить дополнительный один-два миллилитров 0,22-микрометровой поры фильтрованной системной воды в клетки. Этикетка блюдо с временем экстракорпорального оплодотворения и поместите блюдо в 29-градусный инкубатор по Цельсию, установив 50-минутный таймер, чтобы проверить ход развития.В период оплодотворения используйте наконечник пипетки микрозагрузщика, чтобы перезагрузить два микролитров инъекционного раствора, представляющих интерес, в микроинъекцию иглы и изгнать жидкость как можно ближе к кончику. Когда одна клетка сформировалась на полюсе животного по крайней мере одной клетки, перенесите блюдо под рассеченный микроскоп и используйте пару тонких щипцы, чтобы сломать кончик иглы под скошенным углом к тому, где конус иглы начинает демонстрировать жесткость. Отверстие иглы должно оставаться как можно меньше при сохранении жесткого конуса.Определите развивающиеся зиготы под микроскопом и используйте пластиковую трубку передачи с разрезом наконечником, чтобы поместить от 10 до 20 яиц в как можно меньше воды на краю слайда стеклянного микроскопа, установленного в перевернутой верхней части чашки Петри. Используя деликатную протрите задачу, осторожно нажмите слайд, чтобы удалить избыток воды, чтобы яйца прочно прилипли к краю слайда. Вода будет злой под слайдом и тянуть яйца к краю.Там должно быть достаточно воды, чтобы держать яйца влажными, сохраняя при этом мало влаги стоя, чтобы избежать движения яйца во время инъекции. Выровняйте яйца против слайда вертикально, перпендикулярно приближающейся игле, и используйте микроманипулятор, чтобы распоставить иглу против хориона. Затем, держа иглу под примерно углом 45 градусов, вставьте кончик сначала в хорион, а затем, в одну клетку, впрыскивает через желток, если это возможно.Удалите все сломанные яйца во время инъекции с тонкой типсов. Когда все яйца были введены, используйте шприц бутылку 0,22-микрометровой поры фильтрованной системной воды, чтобы аккуратно промыть яйца от стадии инъекции в новую 100-миллиметровую чашку Петри. После успешного краткого руководства RNAs отбора и синтеза, в пробирке расщепления могут быть проверены для выбора для одноклеточных микроинъекций.После очистки и клонирования ПЦР в этом репрезентативном эксперименте индуцированные мутации CRISPR-Cas9 были выявлены в отдельных клонах B.gauderio и B.brachyistius с сильным снижением амплитуды разряда электрического органа, в то время как неинъекционные элементы управления отображали только ссылающиеся генотипы. Визуализация амплитуды разряда электрического органа между подтвержденными мутантами CRISPR и размером агента, сочетаемой с необъективными управлениями, показала, что оба мутанта SCN-4 AA B.brachyistius и B.gauderio имели значительно более низкие амплитуды разряда электрических органов, чем элементы управления. При выполнении микро-инъекций, двигаться как можно быстрее и намеренно, чтобы максимизировать количество одноклеточных инъекционных эмбрионов, которые выживают.Не тратьте время на сложные яйца. После того, как успешные мутанты были определены, традиционные методы разведения могут создать стабильные линии мутантов, которые устраняют связанные с CRSPR проблемы мозаичности. Этот протокол позволит исследователям провести сравнительные геномные исследования с функциональной проверкой в двух конвергентно эволюцивах видах слабоэлектри электрических рыб.

Research

JoVE Journal

Biology

Genome Editing with CompoZr Custom Zinc Finger Nucleases (ZFNs)

Genome Editing with CompoZr Custom Zinc Finger Nucleases ZFNs

Геном Редактирование с помощью пользовательских CompoZr нуклеаз цинкового пальца (ZFNs)

Genome editing is a powerful technique that can be used to elucidate gene function and the genetic basis of disease. Traditional gene editing methods such ...

Digital Inline Holographic Microscopy (DIHM) of Weakly-scattering Subjects

Digital Inline Holographic Microscopy DIHM of Weakly-scattering Subjects

Цифровой Инлайн Голографическая микроскопия (DIHM) субъектов слабо-рассеяния

Weakly-scattering objects, such as small colloidal particles and most biological cells, are frequently encountered in microscopy. Indeed, a range of ...

Generation of Genomic Deletions in Mammalian Cell Lines via CRISPR/Cas9

Генерация геномных делеций в линии клеток млекопитающих, через CRISPR / Cas9

The prokaryotic clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated (Cas) 9 system may be re-purposed for site-specific ...

Genome Editing in Astyanax mexicanus Using Transcription Activator-like Effector Nucleases (TALENs)

Genome Editing in Astyanax mexicanus Using Transcription Activator-like Effector Nucleases TALENs

Геном Редактирование в<em&gt; Astyanax mexicanus</em&gt; Использование Транскрипция Активатор-как эффектор Нуклеазы (Таленс)

Identifying alleles of genes underlying evolutionary change is essential to understanding how and why evolution occurs.  Towards this end, much recent ...

Preparing and Injecting Embryos of Culex Mosquitoes to Generate Null Mutations using CRISPR/Cas9

Preparing and Injecting Embryos of Culex Mosquitoes to Generate Null Mutations using CRISPR/Cas9

Подготовка и инъекция эмбрионов комаров Culex для генерации нулевых мутаций с использованием CRISPR/Cas9

Culex mosquitoes are the major vectors of several diseases that negatively impact human and animal health including West Nile virus and diseases caused by ...

Genome Engineering of Primary Human B Cells Using CRISPR/Cas9

Геномная инженерия первичных клеток человека B с использованием CRISPR/Cas9

B cells are lymphocytes derived from hematopoietic stem cells and are a key component of the humoral arm of the adaptive immune system. They make ...

Pupal and Adult Injections for RNAi and CRISPR Gene Editing in Nasonia vitripennis

Pupal and Adult Injections for RNAi and CRISPR Gene Editing in Nasonia vitripennis

Инъекции куколки и взрослых для редактирования генов РНКи и CRISPR в Nasonia vitripennis

The jewel wasp, Nasonia vitripennis, has become an efficient model system to study epigenetics of haplo-diploid sex determination, B-chromosome biology, ...

TGF-&#946;-mediated Endothelial to Mesenchymal Transition (EndMT) and the Functional Assessment of EndMT Effectors using CRISPR/Cas9 Gene Editing

TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-mediated Endothelial to Mesenchymal Transition EndMT and the Functional Assessment of EndMT Effectors using CRISPR/Cas9 Gene Editing

TGF-β-опосредованный переход эндотелия в мезенхимальный переход (EndMT) и функциональная оценка эффекторов EndMT с использованием редактирования генов CRISPR/Cas9

In response to specific external cues and the activation of certain transcription factors, endothelial cells can differentiate into a mesenchymal-like ...

Identification of Alternative Splicing and Polyadenylation in RNA-seq Data

Идентификация альтернативного сплайсинга и полиаденилирования в данных RNA-seq

As well as the typical analysis of RNA-Seq to measure differential gene expression (DGE) across experimental/biological conditions, RNA-seq data can also ...

Construction of Homozygous Mutants of Migratory Locust Using CRISPR/Cas9 Technology

The migratory locust, Locusta migratoria, is not only one of the worldwide plague locusts that caused huge economic losses to human beings but also an ...