Name: silencing the spark: crispr/cas9 genome editing in weakly electric fish
Uploaded: 2019-10-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Silencing the Spark: CRISPR/Cas9 Genome Editing in Weakly Electric Fish at JoVE.com

Författarna erkänner heroiska insatser av Monica Lucas, Katherine Shaw, Ryan Taylor, Jared Thompson, Nicole Robichaud, och Hope Healey för hjälp med fisk hållning, datainsamling, och tidiga protokoll utveckling. Vi vill också tacka de tre granskarna för deras förslag till manuskriptet. Vi anser att slutprodukten är av bättre kvalitet efter att ha adressera deras kommentarer. Detta arbete finansierades genom stöd från National Science Foundation #1644965 och #1455405 till JRG, och Naturvetenskaps-och Ingenjörsvetenskaps rådet DG Grant till VLS.

Alla metoder som beskrivs här har godkänts av den institutionella djuromsorg och användning kommittén (IACUC) av Michigan State University.
1. Val av sgRNA-mål
Anmärkning: Ett protokoll ges för manuell utformning av sgRNAs i steg 1,1. Detta utnyttjades för scn4aa mål urval. Ett ytterligare protokoll ges för att underlätta denna process (steg 1,2) med hjälp av EFISHGENOMICS webbportal. Det rekommenderas att användare väljer proto...

Den fenotypiska rikedomen av svagt elektrisk fisk, tillsammans med en ny spridning av genomik resurser, motiverar ett starkt behov av funktionella genomiska verktyg i svagt elektrisk fisk modell. Detta system är särskilt attraktivt på grund av den konvergent utvecklingen av många fenotypiska drag i parallella linjer av fisk, som lätt hålls i laboratoriet.
Det protokoll som beskrivs här visar effekten av CRISPR/Cas9 teknik i linjer av svagt elektrisk fisk som utvecklats electrogenesis oc...

Electroreception och electrogenesis har förändrats i den evolutionära historien av ryggradsdjur. Två linjer av benfisk fisk, artikel fiskar och Siluriformes, utvecklades elektromottagning parallellt, och fem linjer av fiskar (Gymnotiformes, mormyrids, och släktena astroscopus, Malapterurus och Synodontis) utvecklades elektrogenes parallellt. Det finns en slående grad av konvergens i dessa oberoende härledda fenotyper, som delar en gemensam genetisk arkitektur1,2,3.
Detta är kanske bäst exemplifieras av de många konvergent dragen i gymnotiforms och mormyrids, två artrika benfisk klader, som producerar och upptäcka svaga elektriska fält och kallas svagt elektrisk fisk. Under de 50 år sedan upptäckten att svagt elektrisk fisk använder elektricitet för att känna sin omgivning och kommunicera4, en växande gemenskap av forskare har fått enorma insikter i utvecklingen av utvecklingen1,5 ,6, system och kretsar neurovetenskap7,8,9,10, cellulär fysiologi11,12, ekologi och energetik13 ,14,15,16,17, beteende18,19och makro evolution3,20,21 .
På senare tid har det skett en spridning av genomiska, transkriptomiska och proteomiska resurser för elfisk1,22,23,24,25,26, 27,28. Användningen av dessa resurser har redan gett viktiga insikter om sambandet mellan genotyp och fenotyp hos dessa arter1,2,3,28,29 ,30. Ett stort hinder för att integrera genomik-data med fenotypiska data av svagt elektrisk fisk är en närvarande brist på funktionella genomiska verktyg31.
Ett sådant verktyg är den nyligen utvecklade klustrade regelbundet Interfördelade korta Palindromic repetitioner paras ihop med Cas9 Endonuklease (CRISPR/Cas9, CRISPR) teknik. CRISPR/Cas9 är ett genomredigeringsverktyg som har gått in i utbredd användning i både modell32,33,34 och icke-modellorganismer35,36,37 lika. CRISPR/Cas9-tekniken har utvecklats till en punkt där ett laboratorium som kan grundläggande molekylärbiologi enkelt ska kunna generera genspecifika sonder som kallas Short guide RNAs (sgRNAs), till en låg kostnad med en icke-kloningsmetod38. CRISPR har fördelar jämfört med andra knockout/knockdown strategier, såsom morpholinos39,40, transkription Activator-liknande effektor nukleaser (talens), och zink finger nukleaser (zfns), som är kostsamma och tidskrävande att generera för varje målgen.
CRISPR/Cas9-systemet fungerar för att skapa genknockouts genom att rikta in sig på en specifik region i arvsmassan, regisserad av sgRNA-sekvensen, och orsaka en dubbel-strandad rast. Den dubbelsträngade rasten upptäcks av cellen och utlöser endogena DNA-reparationsmekanismer företrädesvis med hjälp av den icke-homolog sammanfogning (NHEJ) vägen. Denna väg är mycket felbenägna: Under reparationsprocessen kommer DNA-molekylen ofta införliva infogningar eller borttagningar (indels) på den dubbelsträngade rastplatsen. Dessa indels kan resultera i en förlust av funktion på grund av antingen (1) förskjutningar i den öppna Läs ramen, (2) införande av en för tidig stopp kodon, eller (3) förskjutningar i den kritiska primära strukturen av genprodukten. I detta protokoll använder vi CRISPR/Cas9 redigering för att rikta punktmutationer i målgener med hjälp av NHEJ i svagt elektriska fiskarter. Även om det är enklare och effektivare än andra tekniker förväntas denna metod för mutagenes resultera i en rad fenotypiska svårighetsgrader i F0, som tillskrivs genetisk mosaik41,42,43 ,44.
Val av organismer För att underlätta framtida studier av den jämförande genomik av svagt elektrisk fisk, måste en representativ art för både gymnotiforms och mormyrids för protokoll utveckling väljas. Efter diskussioner under 2016 Electric Fish möte i Montevideo, Uruguay, det var gemenskap konsensus att utnyttja arter som redan kunde föds upp i laboratoriet och som hade genomiska resurser tillgängliga. Den gymnotiform brachyhypopomus gauderio och mormyryd brienomyrus brachyistius valdes som arter som passar dessa kriterier. I båda arterna är naturliga ledtrådar för att framkalla och bibehålla avels förhållanden lätt att efterlikna i fångenskap. B. gauderio, en gymnotiform arter från Sydamerika, har fördelen av låga djurhållning krav: fisk kan hållas på relativt hög densitet i relativt små (4 L) tankar. B. gauderio har också en snabb generations omsättning under företags förhållanden. Under laboratorieförhållanden kan B. gauderio utvecklas från ägg till vuxen i ca 4 månader.
B. brachyistius, en art av mormyryd fisk från väst-Centralafrika, häckar lätt i fångenskap. B. brachyistius är lätt tillgänglig genom akvarium handel, har använts i många studier, och nu har ett antal genomiska resurser tillgängliga. Deras livscykel spänner över 1 − 3 år, beroende på laboratorieförhållanden. Djurhållnings kraven är något intensivare för denna art, vilket kräver måttligt stora tankar (50 − 100 L) på grund av deras aggression under avel.
Laboratorier som studerar andra arter av elektrisk fisk bör lätt kunna anpassa detta protokoll så länge som arten kan uppfödas, och encelliga embryon kan samlas in och fostras till vuxen ålder. Bostäder, larv uppfödning och provrörsbefruktning (IVF) priser kommer sannolikt att förändras med andra arter; Detta protokoll kan dock användas som utgångspunkt för avels försök i andra svagt elektriska fiskar.
Ett ideal gen mål för proof of Concept: scn4aa Svagt elektrisk mormyryd och gymnotiform fisk generera elektriska fält (electrogenesis) genom att fullgöra ett specialiserat organ, som kallas elektriska organ. Elektriska organ utsläpp (EODs) resultat från samtidig produktion av åtgärder potentialer i de elektriska organ celler som kallas elektrocyter. EODs upptäcks av en rad Elektroreceptorer i huden för att skapa högupplösta elektriska bilder av fiskens omgivning45. Svagt elektrisk fisk är också kapabla att upptäcka funktioner i deras conspecifics EOD vågformer18 samt deras utsläpp av46, vilket gör att EODS att fungera dessutom som en social kommunikation signal analogt med fågelsång eller groda vocalizations47.
En huvudsaklig del av åtgärden potentiell generation i elektrocyter av både mormyryd och gymnotiform svagt elektrisk fisk är spännings-gated natrium kanal nav 1.42. Icke-elektriska fiskar uttrycka två paralogous genkopior, scn4aa och scn4ab, kodning för spännings-gated natrium Channel nav 1.430. I både gymnotiform och mormyryd svagt elektrisk fisk linjer, scn4aa har utvecklats snabbt och genomgått många aminosyran substitutioner som påverkar dess Kinetic egenskaper48. Viktigast av allt, scn4aa har blivit uppdelade i båda linjerna till den elektriska orgel2,3. Det relativt begränsade uttrycket av scn4aa till den elektriska orgeln, liksom dess nyckelroll i generering av EODS, gör det till ett idealiskt mål för CRISPR/Cas9 knockout experiment, eftersom det har minimal skadliga pleiotrop effekter. Eftersom svagt elektrisk fisk börjar urladdning deras larv elektriska organ 6 − 8 dagar efter befruktning (DPF), inriktning av scn4aa är idealiskt lämpad för snabb fenotypning efter embryo mikroinjektion.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>20 mg/mL RNA grade Glycogen</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R0551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 bp DNA ladder</td>
			<td>NEB</td>
			<td>N3236L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>borosilicate glass capillary with filament</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>BF100-58-10</td>
			<td>(O.D. 1.0mm, I.D. 0.58 mm, 10 cm length)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cas9 protein with NLS; 1 mg/mL</td>
			<td>PNA Biology</td>
			<td>CP01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dneasy Blood &#38; Tissue Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf FemptoJet 4i Microinjector</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>E5252000021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Microloader Pipette Tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10289651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-824-654</td>
			<td>referred to as &#34;precision glass syringe&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>referred to as &#34;delicate task wipe&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAscript T7 Transcription Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEBuffer 3</td>
			<td>NEB</td>
			<td>B7003S</td>
			<td>used for in vitro cleavage assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OneTaq DNA kit</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0480L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovaprim</td>
			<td>Syndel USA</td>
			<td>https://www.syndel.com/ovaprim-ovammmlu010.html</td>
			<td>referred to as &#34;spawning agent&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S37440</td>
			<td>referred to as &#34;thermoplastic&#34; in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette puller</td>
			<td>WPI</td>
			<td>SU-P97</td>
			<td>sutter brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick PCR Purification Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reusable needle- requires customization</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7803-02</td>
			<td>Customize to 0.7 inches long; point style 4 and angle 25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA polymerase</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0203L</td>
			<td>Use with the 10X NEB buffer that is included</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon coated tools</td>
			<td>bonefolder.com</td>
			<td>T-SPATULA4PIECE</td>
			<td>referred to as &#34;polytetrafluoroethene&#34; in the protocol</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

silencing the spark: crispr/cas9 genome editing in weakly electric fish

Electroreception och electrogenesis har förändrats i den evolutionära historien av ryggradsdjur. Det finns en slående grad av konvergens i dessa oberoende härledda fenotyper, som delar en gemensam genetisk arkitektur. Detta är kanske bäst exemplifieras av de många konvergent dragen i gymnotiforms och mormyrids, två arter-rika benfisk klader som producerar och upptäcka svaga elektriska fält och kallas svagt elektrisk fisk. Under 50 år sedan upptäckten att svagt elektrisk fisk använder el för att känna sin omgivning och kommunicera, en växande gemenskap av forskare har fått enorma insikter i utvecklingen av utveckling, system och kretsar neurovetenskap, cellulär fysiologi, ekologi, evolutionsbiologi och beteende. På senare tid har det skett en spridning av genomiska resurser för elektrisk fisk. Användningen av dessa resurser har redan underlättat viktiga insikter när det gäller sambandet mellan genotyp och fenotyp hos dessa arter. Ett stort hinder för att integrera genomik-data med fenotypiska data av svagt elektrisk fisk är en närvarande brist på funktionella genomik-verktyg. Vi rapporterar här ett fullständigt protokoll för att utföra CRISPR/Cas9 mutagenes som utnyttjar endogena DNA-reparationsmekanismer i svagt elektrisk fisk. Vi visar att detta protokoll är lika effektivt i både den mormyryd arten brienomyrus brachyistius och gymnotiform brachyhypopomus gauderio genom att använda CRISPR/Cas9 för att rikta indels och punktmutationer i den första exon av natrium kanal gen scn4aa. Med detta protokoll erhölls embryon från båda arterna och genotypades för att bekräfta att de förutspådda mutationerna i den första exon av natrium kanalen scn4aa var närvarande. Den knock-out framgång fenotyp bekräftades med inspelningar som visar minskade elektriska organ urladdnings amplituder jämfört med uninjected storlek matchade kontroller.

SgRNA målplatser identifierades inom exon 1 av scn4aa i både b. gauderio och b. brachyistius som beskrivs i avsnitt 1. SgRNAs genererades enligt beskrivningen i avsnitt 2. Efter lyckad sgRNA-markering och-syntes (figur 1) testades in vitro-klyvning (figur 2). SgRNAs som demonstrerar in vitro-skärning valdes sedan ut för encellig mikroinjektioner.
Vuxna fiskar var konditionerade för reproduktion (avsnitt...

Watch this Scientific Journal Video about Silencing the Spark: CRISPR/Cas9 Genome Editing in Weakly Electric Fish at JoVE.com

Silencing the Spark: CRISPR/Cas9 Genome Editing in Weakly Electric Fish

Här presenteras ett protokoll för att producera och bakre CRISPR/Cas9 Genome knockout elektrisk fisk. Beskrivs i detalj är de nödvändiga molekylära biologi, avel och djurhållning krav för både en gymnotiform och en mormyrid, och injektion tekniker för att producera Cas9-inducerad indel F0 larver.

Dämpning av gnistan: CRISPR/Cas9 genom redigering i svagt elektrisk fisk

Electroreception and electrogenesis have changed in the evolutionary history of vertebrates. There is a striking degree of convergence in these ...

CRISPR/Cas9 genredigering hos svagt elektrisk fisk, särskilt i ett jämförande sammanhang, kommer att göra det möjligt för forskare att testa hypoteser om hur specifika gener och genetisk varians bidrar till fenotypisk variation. CRISPR/Cas9 är en effektiv metod för att generera muterade F-zero-embryon. Detta protokoll gör det möjligt för forskare att genomföra CRISPR-Cas9-manipulationer i två konvergent utvecklade arter av svagt elektrisk fisk.Nyckeln till att använda detta tillvägagångssätt med vissa ändringar i andra elektriska fiskar eller andra fiskarter är tillgången på transkriptomiska eller genomiska resurser för att göra sgRNAs. Att utföra mikroinjektionerna och visualisera cellerna på en 3D-plats inom ett 2D-plan kan vara svårt. Skaffa en liten zebrafisk koloni för ägg att öva allmänna mikroinjektionstekniker.Demonstrerar proceduren med Savvas Constantinou blir Jared Thompson, en tekniker från mitt laboratorium. Efter inhysning av fiskarter av intresse under lämpliga avel villkor, identifiera kvinnliga fiskar som visas gravid. I B.gauderio, kommer honan har svullna könssemes bara caudal till ventilen.I B.brachyistius kommer honorna att ha svullna magar och framstå som djupt arbetsföra. Efter anestesi administration, lägga lekmedel till fyra gånger volymen av DPBS i en PCR-röret med grundlig blandning. Lösningen kommer att bli grumlig.Använd en pipett för att mäta ut den beräknade dosen och dosera det utspädda medlet till en bit termoplast innan lösningen ritas i en precisionsglasspruta utrustad med en 28-gauge 19 till 25-milliliter längd avfasad nål. Injicera lösningen i ryggstammuskeln i jämn takt och låt nålen sitta i två till fyra sekunder före borttagning. Sedan, omedelbart placera fisk i färskt system vatten för återhämtning.För B.gauderio spermie insamling, efter 24 timmar, välj en stor hane fisk och så snabbt som möjligt efter sedering, torka fisken ordentligt, särskilt runt huvudet och Vent. Placera den torkade fisken ventrala sidan uppåt, främre till vänster i lämplig hållare, täckt i en MS222 indränkt fuktig pappershandduk med huvudet så parallellt med bordet som möjligt. Omedelbart tillämpa tryck i caudal till rostral riktning med ljus klämma omedelbart över gonads mot ventilen och med hjälp av en mikropipetter med en spets, försiktigt samla spermierna som det pressas från hanen i 50-microliter increments.Lägg till alikvot av spermier direkt på 500-mikroliter volymer av spermier extender lösning på is. Omedelbart efter insamlingen, placera fisk i slem coat skydd produktbehandlat färskt system vatten. För B.gauderio ägg insamling, efter torkning en a en sövd B.gauderio kvinnlig fisk, omedelbart placera fisken på sin sida med huvudet mot nondominant handen och tillämpa tryck i caudal till rostral riktning med ljus klämma mediala över gonads mot ventilen.Med hjälp av ett polytetrafluoretenverktyg, samla försiktigt äggen när de pressas från kloaken och snabbt placera äggen i en liten täckt petriskål. Om du arbetar ensam efter att ha klämt, rör vid äggmassan till basen av den lilla Petri-skålen när de utvisas från honan. Omedelbart efter insamling av äggen, placera fisken i slem coat skydd produktbehandlat färskt system vatten.För B.gauderio in vitro-fertilisering, tillsätt 100 mikroliter av den väl blandade spermier SES-lösningen direkt över äggmassan, följt av en milliliter färsksystemvatten. Blanda gametes suspensionen noggrant i 30 till 60 sekunder innan du lägger till ytterligare en till två milliliter av 0,22-mikrometer pore filtrerat systemvatten till cellerna. Märk skålen med in vitro-befruktningstiden och placera skålen i en 29-graders Celsius inkubator, ställa in en 50-minuters timer för att kontrollera utvecklingens framsteg.Under befruktningsperioden, använd en mikroladdare pipett spets för att backload två mikroliter av injektionslösning av intresse i en mikroinjektion nål och utvisa vätskan så nära spetsen som möjligt. När en enda cell har bildats vid djurpolen i minst en cell, överför skålen under ett dissekerande mikroskop och använd ett par fina tlykningar för att bryta nålspetsen i en avfasad vinkel mot där nålens avsmalnande börjar visa styvhet. Nålens borrsvaga bör förbli så liten som möjligt samtidigt som en styv kona bibehålls.Identifiera de utvecklande zygoterna under mikroskopet och använd en plastöverföringspipett med en skuren spets för att placera 10 till 20 ägg i så lite vatten som möjligt på kanten av glasmikroskopet som i den inverterade toppen av petri-skålen. Med hjälp av en delikat uppgift torka, tryck försiktigt på bilden för att ta bort överflödigt vatten så att äggen att hålla fast vid kanten av bilden. Vatten kommer att vara ond under bilden och dra ägg mot kanten.Det bör finnas precis tillräckligt med vatten för att hålla äggen fuktig samtidigt som lite stående fukt för att undvika ägg rörelse under injektion. Rikta äggen mot bilden vertikalt, vinkelrätt mot den annalkande nålen, och använd en mikromanipulator för att placera nålen mot chorion. Sedan, hålla nålen i ungefär 45-graders vinkel, sätt in spetsen först i chorion och sedan, i den enda cellen, injicera genom äggulan om möjligt.Ta bort eventuella trasiga ägg under injektionen med fina trings. När alla ägg har injicerats, använd en spruta flaska 0,22-mikrometer por filtrerat system vatten för att försiktigt spola äggen från injektionsstadiet i en ny 100-millimeters diameter Petriskål. Efter en lyckad kort guide RNAs urval och syntes, in vitro-klyvning kan testas för urval för encelliga mikroinjektioner.Efter PCR rensa upp och kloning, i detta representativa experiment, CRISPR-Cas9 inducerade mutationer identifierades i enskilda B.gauderio och B.brachyistius kloner med starka elektriska organ ansvarsfrihet amplitud minskning, medan oinjected kontroller visas endast refererade genotyper. Visualisering av den elektriska orgel ansvarsfrihet amplituden mellan bekräftade CRISPR mutanter och agent storlek matchade uninjected kontroller visat att både SCN-4 AA mutant B.brachyistius och B.gauderio embryon hade betydligt lägre elektriska orgel ansvarsfrihet amplituder än kontroller. När du utför mikroinjektionerna, rör dig så snabbt och medvetet som möjligt för att maximera antalet encelliga injicerade embryon som överlever.Slösa inte tid med svåra ägg. När framgångsrika mutanter har identifierats, kan traditionella avelsmetoder skapa stabila mutantlinjer, som eliminerar CRSPR associerade mosaicism oro. Detta protokoll kommer att göra det möjligt för forskare att genomföra jämförande genomiska studier med funktionell validering i två konvergent evolverade arter av svagt elektrisk fisk.

Research

JoVE Journal

Biology

Genome Editing with CompoZr Custom Zinc Finger Nucleases (ZFNs)

Genome Editing with CompoZr Custom Zinc Finger Nucleases ZFNs

Genome redigering med CompoZr anpassade nukleaser zink finger (ZFNs)

Genome editing is a powerful technique that can be used to elucidate gene function and the genetic basis of disease. Traditional gene editing methods such ...

Digital Inline Holographic Microscopy (DIHM) of Weakly-scattering Subjects

Digital Inline Holographic Microscopy DIHM of Weakly-scattering Subjects

Digital Inline Holographic mikroskopi (DIHM) av svagt-spridnings Ämnen

Weakly-scattering objects, such as small colloidal particles and most biological cells, are frequently encountered in microscopy. Indeed, a range of ...

Generation of Genomic Deletions in Mammalian Cell Lines via CRISPR/Cas9

Generation av genomiska Strykningar i däggdjurscellinjer via CRISPR / Cas9

The prokaryotic clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated (Cas) 9 system may be re-purposed for site-specific ...

Genome Editing in Astyanax mexicanus Using Transcription Activator-like Effector Nucleases (TALENs)

Genome Editing in Astyanax mexicanus Using Transcription Activator-like Effector Nucleases TALENs

Genome redigering i<em&gt; Astyanax mexicanus</em&gt; Använda transkriptionsaktivator-liknande Effector nukleaser (Talens)

Identifying alleles of genes underlying evolutionary change is essential to understanding how and why evolution occurs.  Towards this end, much recent ...

Preparing and Injecting Embryos of Culex Mosquitoes to Generate Null Mutations using CRISPR/Cas9

Preparing and Injecting Embryos of Culex Mosquitoes to Generate Null Mutations using CRISPR/Cas9

Förbereda och injicera embryon från Culex myggor för att generera nullmutationer med CRISPR / Cas9

Culex mosquitoes are the major vectors of several diseases that negatively impact human and animal health including West Nile virus and diseases caused by ...

Genome Engineering of Primary Human B Cells Using CRISPR/Cas9

Genomteknik för primära mänskliga B-celler med CRISPR/Cas9

B cells are lymphocytes derived from hematopoietic stem cells and are a key component of the humoral arm of the adaptive immune system. They make ...

Pupal and Adult Injections for RNAi and CRISPR Gene Editing in Nasonia vitripennis

Pupal and Adult Injections for RNAi and CRISPR Gene Editing in Nasonia vitripennis

Pupal och vuxna injektioner för RNAi och CRISPR Genredigering i Nasonia vitripennis

The jewel wasp, Nasonia vitripennis, has become an efficient model system to study epigenetics of haplo-diploid sex determination, B-chromosome biology, ...

TGF-&#946;-mediated Endothelial to Mesenchymal Transition (EndMT) and the Functional Assessment of EndMT Effectors using CRISPR/Cas9 Gene Editing

TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-mediated Endothelial to Mesenchymal Transition EndMT and the Functional Assessment of EndMT Effectors using CRISPR/Cas9 Gene Editing

TGF-β-medierad endotel till mesenkymal övergång (EndMT) och funktionell bedömning av endmt-effektorer med CRISPR / Cas9 Genredigering

In response to specific external cues and the activation of certain transcription factors, endothelial cells can differentiate into a mesenchymal-like ...

Identification of Alternative Splicing and Polyadenylation in RNA-seq Data

Identifiering av alternativ skarvning och polyadenylering i RNA-seq-data

As well as the typical analysis of RNA-Seq to measure differential gene expression (DGE) across experimental/biological conditions, RNA-seq data can also ...

Construction of Homozygous Mutants of Migratory Locust Using CRISPR/Cas9 Technology

The migratory locust, Locusta migratoria, is not only one of the worldwide plague locusts that caused huge economic losses to human beings but also an ...