Name: live cell imaging to assess the dynamics of metaphase timing and cell fate following mitotic spindle perturbations
Uploaded: 2019-09-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging to Assess the Dynamics of Metaphase Timing and Cell Fate Following Mitotic Spindle Perturbations at JoVE.com

DLM wird von einem NSF-GRFP unterstützt. ALM wird durch fördermittelweise aus dem Smith Family Award for Excellence in Biomedical Research gefördert.

1. Erzeugung von hTERT-RPE-1-Zellen, die rFP-Histone 2B (RFP-H2B) und s-tubulin-EGFP (tub-EGFP) stabil exemiten
HINWEIS: Alle Schritte folgen aseptischen Techniken und finden in einem Sicherheitsschrank der Biosicherheitsstufe II+ (BSL2+) statt.
<ol><li>Generieren Sie Retrovirus, das die Gene von Interesse (-Tubulin-EGFP und RFP-H2B) durch die Transfektion von 293T-Zellen mit den entsprechenden lentiviralen Plasmiden gemäß den Anweisungen des Herstellers des lipidbasierten Transfektionsabg...

<ol>
	<li>Szuts, D., Krude, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+arrest+at+the+initiation+step+of+human+chromosomal+DNA+replication+causes+DNA+damage.">Cell cycle arrest at the initiation step of human chromosomal DNA replication causes DNA damage.</a> Journal of Cell Science. 117, 4897-4908 (2004).</li><li>Gayek, A. S., Ohi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CDK-1+Inhibition+in+G2+Stabilizes+Kinetochore-Microtubules+in+the+following+Mitosis.">CDK-1 Inhibition in G2 Stabilizes Kinetochore-Microtubules in the following Mitosis.</a> PLoS One. 11, e0157491 (2016).</li><li>Mackay, D. R., Makise, M., Ullman, K. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrosome+aberrations:+cause+or+consequence+of+cancer+progression?.">Centrosome aberrations: cause or consequence of cancer progression?.</a> Nature reviews, Cancer. 2, 815-825 (2002).</li><li>Godinho, S. A., Kwon, M., Pellman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrosomes+and+cancer:+how+cancer+cells+divide+with+too+many+centrosomes.">Centrosomes and cancer: how cancer cells divide with too many centrosomes.</a> Cancer Metastasis Reviews. 28, 85-98 (2009).</li><li>Quintyne, N. J., Reing, J. E., Hoffelder, D. R., Gollin, S. M., Saunders, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spindle+multipolarity+is+prevented+by+centrosomal+clustering.">Spindle multipolarity is prevented by centrosomal clustering.</a> Science. 307, 127-129 (2005).</li><li>Magidson, V., Khodjakov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circumventing+photodamage+in+live-cell+microscopy.">Circumventing photodamage in live-cell microscopy.</a> Methods in Cell Biology. 114, 545-560 (2013).</li></ol>

Die zeitliche Auflösung der Zeitraffer-Bildgebung ermöglicht die Visualisierung und Bewertung sequenzieller zellulärer Ereignisse innerhalb einzelner Zellen. Ansätze, die die zelluläre Synchronisierung nutzen, gefolgt von der Erfassung und Fixierung von Zellen zu sequenziellen Zeitpunkten, sind insofern begrenzt, als Vergleiche zwischen Gruppen von Zellen durchgeführt werden. In Kontexten, in denen die zelluläre Reaktion auf Störungen ungleichmäßig sein kann oder in denen der zu visualisierte Prozess dynamisch ...

Die bildbasierte Analyse fester Zellen wird häufig verwendet, um die Veränderungen der Zellpopulationsebene als Reaktion auf verschiedene Störungen zu bewerten. In Kombination mit der Zellsynchronisierung, gefolgt von der Erfassung und Abbildung von seriellen Zeitpunkten, können solche Ansätze verwendet werden, um eine zelluläre Abfolge von Ereignissen vorzuschlagen. Dennoch ist die Bildgebung fester Zellen insofern begrenzt, als zeitliche Beziehungen für eine Population impliziert und nicht auf der Ebene einzelner Zellen nachgewiesen werden. Auf diese Weise reicht die Bildgebung und Analyse fester Zellen zwar aus, um robuste Phänotypen und stationäre Veränderungen zu beobachten, aber die Fähigkeit, vorübergehende Veränderungen im Laufe der Zeit zu erkennen und Veränderungen, die sich nur auf eine Teilpopulation der Zellen auswirken, ist unvollkommen. Im Gegensatz dazu ist die Live-Zell-Bildgebung ein eloquentes Werkzeug, das verwendet werden kann, um zelluläre und subzelluläre Prozesse innerhalb einer einzelnen Zelle oder Zellpopulation im Laufe der Zeit und ohne die Hilfe von Synchronisationsansätzen zu beobachten, die sich selbst auf das zelluläre Verhalten auswirken können. 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6.
Die Bildung einer bipolaren mitotischen Spindel ist für die richtige Chromosomensegregation während der Zellteilung unerlässlich, was zu zwei genetisch identischen Tochterzellen führt. Defekte in der mitotischen Spindelstruktur, die die mitotische Progression korrumpieren und die Genauigkeit der Chromosomensegregation beeinträchtigen, können zu katastrophalen Zellteilungen und einer verminderten Zelllebensfähigkeit führen. Aus diesem Grund sind mitotische Gifte, die die Spindelbildung verändern, vielversprechende Therapeutika, um die schnelle Proliferation von Krebszellen7,8,9zu begrenzen. Dennoch ist die feste Zellanalyse der Spindelstruktur nach Zugabe von mitotischen Giften in ihrer Fähigkeit, den dynamischen Prozess der Spindelbildung zu beurteilen, begrenzt und kann nicht darauf hinweisen, ob beobachtete Veränderungen der Spindelstruktur dauerhaft sind oder stattdessen vorübergehend und kann überwunden werden, um eine erfolgreiche Zellteilung zu ermöglichen.
In diesem Protokoll beschreiben wir einen Ansatz zur Bewertung der Dynamik der Mitose nach Spindelstörungen durch Live-Zell-Bildgebung. Mit der hTERT verewigten RPE-1-Zelllinie, die entwickelt wurde, um ein Mit dem RFP-markiertes Histone 2B auszudrücken, um Chromatin zusammen mit einem EGFP-getaggten -Tubulin zu visualisieren, um Mikrotubuli, das Timing der Metaphasenchromosomausrichtung, den Anaphasenbeginn und letztlich Das mitotische Zellschicksal wird anhand visueller Hinweise auf Chromosomenbewegung, Verdichtung und kerntechnische Morphologie beurteilt.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05% Trypsin</td>
			<td>Gibo-Life sciences</td>
			<td>25-510</td>
			<td>A serine protease used to release adherent cells from culture dishes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15ml centrifuge tubes</td>
			<td>Olympus Plastics</td>
			<td>28-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x CFI Plan Fluor objective&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>For use in Live-cell imaging to visualize both bright field and fluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T Cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3216</td>
			<td>For use in retroviral transfection; used in step 1.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>a-tubulin-EGFP&#160;</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>various numbers</td>
			<td>Expression vector for alpha tubulin fused to a green fluorescent protein tag; for use in the visualization of tubulin in live-cell imaging: commercially available through addgene and other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alisertib</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S1133</td>
			<td>Small molecule inhibitor of the mitotic kinase Aurora A. Stock concentration is prepared at 10mM in DMSO, and used at a final concentration of 100nM.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blasticidin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11139-03</td>
			<td>Antibiotic selection agent; used to select for a-tub-EGFP expressing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C02</td>
			<td>Airgas</td>
			<td></td>
			<td>For use in cell culture and live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chroma ET-DS Red (TRITC/Cy3)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>49005</td>
			<td>Single band filter set; excitation wavelength 545nm with 25nm bandwidth and emission at 605nm wavelength with 70nm bandwidth; for visualization of H2B-RFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chroma ET-EGFP (FITC/Cy2)</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>49002</td>
			<td>Single band filter set; excitation wavelength 470nm with 40nm bandwidth and emission at 525nm wavelength with 50nm bandwidth; for visualization of GFP-tubulin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable glass Pastuer pipets, sterilized&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-6A</td>
			<td>For use in aspirating cells&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Gibo-Life sciences</td>
			<td>11965-084</td>
			<td>Cell culture medium for growth of RPE-1 and 293T cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Gibo-Life sciences</td>
			<td>10438-026</td>
			<td>Cell culture medium supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 and p3000</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L3000-015</td>
			<td>Lipid based transfection reagent for transfection of plasmids; used in 1.1.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi well Tissue Culture dishes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>various</td>
			<td>for use in cell culture, transfection/infection, and live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Ti-E microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Inverted epifluorescence microscope for use in live-cell imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS Elements HC&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Version 4.51</td>
			<td>Image acquisition and analysis software; used in sections 3 &#38; 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPTI-MEM</td>
			<td>Gibo-Life sciences</td>
			<td>31985-070</td>
			<td>Reduced serum medium for cell transfection; used in step 1.1.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin&#160;</td>
			<td>Gibo-Life sciences</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>antibiotic used in cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate bufferred saline (PBS)</td>
			<td>Caisson labs</td>
			<td>PBP06-10X1LT</td>
			<td>sterile saline solution for use with cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pMD2.G</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>12259</td>
			<td>Lentiviral VSV-G envelope expression construct; used in step 1.1.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H9268</td>
			<td>Cationic polymer used to enhane viral infection efficiency; used in step 1.1.10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>psPAX</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>12260</td>
			<td>2nd generation lentiviral packaging plasmid; used in step 1.1.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>ant-pr-1</td>
			<td>Antibiotic selection agent; used to select for RFP-H2B expressing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RFP- Histone 2B (H2B)</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>various numbers</td>
			<td>Expression vector for red fluorescent protein-tagged histone 2B; for use in the visualization of chromatin in live-cell imaging: commercially available through Addgene and other vendors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAi Max</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>13778-150</td>
			<td>Lipid based transfection reagent for transfection of siRNA constructs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPE-1 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-4000</td>
			<td>Human retinal pigment epithelial cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish 100x20mm</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>353003</td>
			<td>for use in culturing adherent cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zyla sCMOS camera&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Camera attached to the micrscope, used for capturing images of cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live cell imaging to assess the dynamics of metaphase timing and cell fate following mitotic spindle perturbations

Live-Zell-Zeitraffer-Bildgebung ist ein wichtiges Werkzeug in der Zellbiologie, das Einblicke in zelluläre Prozesse bietet, die andernfalls von der Fixed-Cell-Analyse übersehen, missverstanden oder falsch interpretiert werden könnten. Während die fixe Zellbildgebung und -analyse robust und ausreichend ist, um den zellulären Stationären Zustand zu beobachten, kann sie bei der Definition einer zeitlichen Reihenfolge der Ereignisse auf zellulärer Ebene eingeschränkt sein und ist schlecht gerüstet, um die transiente Natur dynamischer Prozesse einschließlich mitotische Progression. Im Gegensatz dazu ist die Live-Zell-Bildgebung ein eloquentes Werkzeug, das verwendet werden kann, um zelluläre Prozesse auf einzelzelliger Ebene im Laufe der Zeit zu beobachten, und hat die Fähigkeit, die Dynamik von Prozessen zu erfassen, die sonst in der Bildgebung fester Zellen schlecht dargestellt wären. Hier beschreiben wir einen Ansatz zur Erzeugung von Zellen, die fluoreszierend markierte Marker von Chromatin und Mikrotubuli tragen, und deren Verwendung in Live-Zell-Bildgebungsansätzen zur Überwachung der Metaphasenchromosomausrichtung und des mitotischen Austritts. Wir beschreiben bildgebende Techniken zur Beurteilung der Dynamik der Spindelbildung und der mitotischen Progression, einschließlich der Identifizierung von Zellen in verschiedenen Stadien der Mitose, der Identifizierung und Verfolgung von mitotischen Defekten und der Analyse der Spindeldynamik und mitotischezellliche semittizische Zellschicksale nach der Behandlung mit mitotischen Inhibitoren.

Bewertung der mitotischen Progression in Gegenwart von Spindelstörungen Die Regelung der Spindelpolfokussierung ist ein wesentlicher Schritt in der richtigen bipolaren Spindelbildung. Störung in diesem Prozess durch Proteinabbau, Medikamentenhemmung oder Veränderungen in der Zentromitenzahl korrupte Spindelstruktur und Verzögerung oder Stopp der mitotischen Progression10,11,12</...

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Live Cell Imaging to Assess the Dynamics of Metaphase Timing and Cell Fate Following Mitotic Spindle Perturbations

Hier stellen wir ein Protokoll zur Beurteilung der Dynamik der Spindelbildung und der mitotischen Progression vor. Unsere Anwendung der Zeitraffer-Bildgebung ermöglicht es dem Anwender, Zellen in verschiedenen Stadien der Mitose zu identifizieren, mitotische Defekte zu verfolgen und zu identifizieren und die Spindeldynamik und das mitotische Zellschicksal bei Exposition gegenüber Anti-Mitotik-Medikamenten zu analysieren.

Live Cell Imaging zur Bewertung der Dynamik von Metaphasen-Timing und Zellschicksal nach mitotischen Spindelstörungen

Live cell time-lapse imaging is an important tool in cell biology that provides insight into cellular processes that might otherwise be overlooked, ...

Die Live-Zell-Bildgebung ermöglicht die Beobachtung dynamischer zellulärer Prozesse im Laufe der Zeit innerhalb einer einzelnen Zelle. Diese Ansätze sind mächtig, um die Bedingungen zu bewerten, die den dynamischen Prozess der Zellteilung beeinflussen, und die Auswirkungen auf die Proliferation und Lebensfähigkeit von Tochterzellen aufzudecken. Phototoxizität, die sich aus der Lichtexposition während der Bildgebung ergibt, stellt eine bedeutende Herausforderung im Zusammenhang mit diesem Protokoll dar.Daher sollten die Belichtungszeiten und das Bildgebungsintervall und die Bilddauer optimiert werden. Verwenden Sie mit aseptischer Technik und einem Sicherheitsschrank auf Biosicherheitsebene zwei eine sterile Einwegglas-Pasteurpipette, um das Medium aus der Kulturplatte zu saugen, die die Zelllinie enthält, die das Ausdruckskonstrukt von Interesse trägt. Waschen Sie die Zellen kurz mit 10 Millilitern steriler PBS mit Wirbeln und behandeln Sie die Zellen mit zwei Millilitern 0,05%Trypsin.Nach zwei bis fünf Minuten bei 37 Grad Celsius acht Milliliter frisches Medium auf die Platte geben, um die Reaktion zu stoppen und die abgetrennten Zellen mit sanfter Pipettierung wieder aufzuhängen. Übertragen Sie die Zelllösung in ein steriles 15-Milliliter-Rohr und sammeln Sie die Zellen durch Zentrifugation. Setzen Sie das Pellet in 10 Milliliter PBS wieder auf und zentrieren Sie die Zellen erneut.Setzen Sie das Pellet in 10 Milliliter Medium zum Zählen aus und verdünnen Sie die Zellen auf ein bis zwei Mal 10 bis 5. Zellen pro Milliliter Zellkultur mittlerer Konzentration. Dann säen Sie 500 Mikroliter Zellen in jeden Brunnen einer sterilen 12-Well-Bild-Bodenplatte und legen Sie die Platte in den Zellkultur-Inkubator, damit die Zellen an der Oberfläche der Platte haften können. Nicht mehr als 30 Minuten vor der Bildgebung, fügen Sie eine relevante Konzentration eines mitotischen Medikaments zu einem oder mehreren der Brunnen und fügen Sie ein gleiches Volumen des Inhibitor verdünnungsmittel, um die gleiche Anzahl von Brunnen wie die Kontrollen.Um das Mikroskop für die Bildgebung vorzubereiten, legen Sie die Platte auf die Bühne eines invertierten Epifluoreszenzmikroskops, das mit einer hochauflösenden Kamera, einer auf 37 Grad Celsius vorgewärmten Umweltkammer und einem Abgabesystem für befeuchtetes 5% Kohlendioxid ausgestattet ist. Wählen Sie ein 20-faches Luftobjektiv mit einer numerischen Blende von 0,5 und ausgestattet für die kontrastreiche Fluoreszenz und den Phasenkontrast oder die Lichtfeldabbildung und sehen Sie die Zellen, um den Kurs anzupassen und den Fokus zu finden, um Zellen in den Fokus zu rücken. Um die optimalen Belichtungszeiten für die Bildaufnahme von Hellfeld, GFP und RFP einzustellen, wählen Sie die entsprechenden Filterwürfel mit der entsprechenden Anregung und Emission für die Fluorophore aus, die abgebildet werden, und klicken Sie auf Wiedergabe.Wenn das Signal nicht intensiv genug ist, passen Sie die automatische Belichtung an und wählen Sie in jedem Fluorophorkanal die entsprechende Binning aus dem Dropdown-Menü Format aus. Wählen und kalibrieren Sie die Mikroskopstufe gemäß den Anweisungen des Herstellers auf die Multi-Well-Schale und verwenden Sie die Bildaufnahmesoftware, um die zu bebildernden Brunnen hervorzuheben oder anderweitig auszuwählen. Öffnen Sie das Bedienfeld "Generierte Punkte", und wählen Sie unter Arbeitsbereich Eingeschränkt und Rahmen aus, um den Koordinatenauswahlbereich einzuschränken, um die Grenzen des Brunnens auszuschließen.Wählen Sie im Dropdown-Menü Flächenbeschränkung die Option Ganzer Bereich aus, und wählen Sie eine zufällige Punktplatzierung aus. Legen Sie die Anzahl auf sechs fest, und klicken Sie auf Randomize, um die Anzahl und Verteilung der Punkte auszuwählen, die pro Brunnen erfasst werden sollen. Klicken Sie dann auf die Werte und geben Sie die Werte in das Zeitreihenbedienfeld ein, um das Zeitintervall und die Dauer für das Sammeln der Bilder auszuwählen und einzugeben.Um das mit RFP-H2B beschriftete Chromatin zu visualisieren, wählen Sie die mit dem RFP-Filterwürfel aufgenommenen Bilder aus und identifizieren Sie eine Zelle, die mit der Mitose eintritt, wie die anfängliche Chromatinverdichtung und der Kernhüllenabbau zeigen, um das mitotische Timing der Metaphasenausrichtung und des Anaphasenbeginns in einzelnen Zellen zu bestimmen. Verfolgen Sie die Zelle von Interesse durch aufeinander folgende Zeitpunkte im erworbenen Film, um die Anzahl der Zeitpunkte oder Minuten vom mitotischen Eintrag zu bestimmen, bis RFP-H2B mit Chromatin als Chromatin die Ausrichtung am Zelläquator während der Metaphase abschließt. Um das mitotische Timing, die mitotische Treue und das Zellschicksal zu überwachen, verfolgen Sie die Zelle weiterhin durch aufeinander folgende Zeitpunkte, um die Zeitkoordinate zu identifizieren, bei der die Anaphase-Chromosomensegregation erkennbar ist und/oder wann Chromatin-Dekomprimierung und Kernhüllen-Reformation stattgefunden haben.Visualisieren Sie dann RFP-H2B, um Zellen in jeder Population zu identifizieren, die mitotische Defekte aufweisen, einschließlich verzögerter Chromosomen und Chromatinbrücken während der Anaphasen-Chromosomensegregation. Durch die Visualisierung von Alpha Tubulin-EGFP kann beobachtet werden, dass Zellen, die spindeldellösen, dynamische Veränderungen erfahren, wenn Spindelzugfokussierung erreicht wird und eine bipolare mitotische Spindel zur Vorbereitung der Zellteilung gebildet wird. Gleichzeitig mit der Spindelbaugruppe kann die Chromosomenbewegung mit RFP-H2B visualisiert werden, um die Chromosomenausrichtung und Seigerungstreue zu bewerten.Mit Hilfe von Live-Zell-Bildgebungsansätzen zeigen diese repräsentativen Ergebnisse, dass Zellen mit einem normalen Zentromatgehalt in der Lage sind, vom Kernhüllenabbau durch Metaphasenausrichtung und Anaphasenbeginn zu einer bipolaren Teilung in weniger als 30 Minuten zu gelangen. In Gegenwart von zusätzlichen Zentrosomen sind fast 50% der Zellen in der Lage, eine transiente multipolare mitotische Spindel zu überwinden und eine bipolare Spindel in vollständiger Zellteilung zu bilden. Die übrigen Zellen sind nicht in der Lage, eine bipolare Spindel zu erreichen und als Ergebnis mitosis durch eine multipolare Teilung zu beenden.Unabhängig davon, ob die Spindel-Bipolarität erreicht wird, weisen Zellen mit zusätzlichen Zentrosomen eine signifikant erhöhte Mitosedauer im Vergleich zu Zellen mit zwei Zentrosomen auf. Hinweise darauf, dass die Dynamik der mitotischen Progression verändert werden kann, auch wenn Veränderungen im mitotischen Ergebnis nicht sichtbar sind. Bei der Definition der Expositionszeiten für Fluoreszenzkanäle können Sie die Belichtungszeiten optimieren, um die Phototoxizität zu begrenzen.Auch Kamerapixelbinning kann ausgewählt werden, um niedrigere Belichtungszeiten zu ermöglichen. Dieses Verfahren hat Anwendungen in pharmakologischen Screenings, Invasions- und Migrationsanalysen. Diese Ansätze können auch verwendet werden, um die Wirksamkeit von medikamentösen Behandlungen oder die Dynamik der zellulären Beweglichkeit zu untersuchen.

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