Name: preparation of high-quality fermented fish product
Uploaded: 2019-08-23T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of High-Quality Fermented Fish Product at JoVE.com

وقد تم دعم هذا البحث ماليا من قبل الصندوق المخصص لصندوق جيانغسو للعلوم الطبيعية (BK20170185)، ومشروع من جيانغسو مدير مصايد الأسماك (Y2017-30)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (NFSC31801575)، الصين بحوث الزراعة نظام (CARS-45-26)، البرنامج الوطني للانضباط من الدرجة الأولى لعلوم وتكنولوجيا الأغذية (JUFSTR20180201)، وبرنامج يي تونغ جيانغسو لما بعد الدكتوراه.

1. إعداد عينة
<ol><li>تُذوّب لحم سمك الحفش المجمد تحت الماء المتدفق تحت 20 درجة مئوية. ثم، نظيفة، والجلد قبالة وقطع الأسماك إلى مكعبات (2 سم × 2 سم × 1.5 سم). ملاحظة: المواد الخام يمكن أن تكون طازجة أو المجمدة لحم الحفش.</li>
	<li>خلط مكعبات السمك مع 6-12٪ (ث / الخامس) محلول الملح بمعدل 1:1 (كتلة مكعب السمك لح...

<ol>
	<li>Riebroy, S., Benjakul, S., Visessanguan, W., Tanaka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+during+fermentation+and+properties+of+som-fug+produced+from+different+marine+fish.">Changes during fermentation and properties of som-fug produced from different marine fish.</a> Journal of Food Processing and Preservation. 31 (6), 751-770 (2007).</li><li>Xu, Y., Xia, W., Yang, F., Jinmoon, K., Nie, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+fermentation+temperature+on+the+microbial+and+physicochemical+properties+of+silver+carp+sausages+inoculated+with+Pediococcus+pentosaceus.">Effect of fermentation temperature on the microbial and physicochemical properties of silver carp sausages inoculated with Pediococcus pentosaceus.</a> Food Chemistry. 118 (3), 512-518 (2010).</li><li>Cano-Garcia, L., Flores, M., Belloch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+and+aromatic+potential+of+Debaryomyces+hansenii+strains+isolated+from+naturally+fermented+sausages.">Molecular characterization and aromatic potential of Debaryomyces hansenii strains isolated from naturally fermented sausages.</a> Food Research International. 52 (1), 42-49 (2013).</li><li>Chen, Q., Liu, Q., Sun, Q., Kong, B., Xiong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flavour+formation+from+hydrolysis+of+pork+sarcoplasmic+protein+extract+by+a+unique+LAB+culture+isolated+from+Harbin+dry+sausage.">Flavour formation from hydrolysis of pork sarcoplasmic protein extract by a unique LAB culture isolated from Harbin dry sausage.</a> Meat Science. 100, 110-117 (2015).</li><li>Saithong, P., Panthavee, W., Boonyaratanakornkit, M., Sikkhamondhol, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+starter+culture+of+lactic+acid+bacteria+in+plaa-som,+a+Thai+fermented+fish.">Use of a starter culture of lactic acid bacteria in plaa-som, a Thai fermented fish.</a> Journal of Bioscience &amp; Bioengineering. 110 (5), 553-557 (2010).</li><li>Zeng, X., Xia, W., Jiang, Q., Guan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+Sensory+Characteristics+of+Whole+Carp+Inoculated+With+Autochthonous+Starter+Cultures.">Biochemical and Sensory Characteristics of Whole Carp Inoculated With Autochthonous Starter Cultures.</a> Journal of Aquatic Food Product Technology. 24 (1), 52-67 (2015).</li><li>Casaburi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+sensory+characteristics+of+traditional+fermented+sausages+of+Vallo+di+Diano+(Southern+Italy)+as+affected+by+the+use+of+starter+cultures.">Biochemical and sensory characteristics of traditional fermented sausages of Vallo di Diano (Southern Italy) as affected by the use of starter cultures.</a> Meat Science. 76 (2), 295-307 (2007).</li><li>Gao, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+autochthonous+starter+cultures+on+the+volatile+flavour+compounds+of+Chinese+traditional+fermented+fish+(Suan+yu).">Effect of autochthonous starter cultures on the volatile flavour compounds of Chinese traditional fermented fish (Suan yu).</a> International Journal of Food Science and Technology. 51 (7), 1630-1637 (2016).</li><li>Zeng, X. F., Xia, W. S., Jiang, Q. X., Xu, Y. S., Fan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+Mixed+Starter+Cultures+to+Flavor+Profile+of+Suanyu+-+A+Traditional+Chinese+Low-Salt+Fermented+Whole+Fish.">Contribution of Mixed Starter Cultures to Flavor Profile of Suanyu - A Traditional Chinese Low-Salt Fermented Whole Fish.</a> Journal of Food Processing and Preservation. 41 (5), 15 (2017).</li><li>Anihouvi, V. B., Sakyi-Dawson, E., Ayernor, G. S., Hounhouigan, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiological+changes+in+naturally+fermented+cassava+fish+(Pseudotolithus+sp.)+for+lanhouin+production.">Microbiological changes in naturally fermented cassava fish (Pseudotolithus sp.) for lanhouin production.</a> International Journal of Food Microbiology. 116 (2), 287-291 (2007).</li><li>Corral, S., Salvador, A., Flores, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salt+reduction+in+slow+fermented+sausages+affects+the+generation+of+aroma+active+compounds.">Salt reduction in slow fermented sausages affects the generation of aroma active compounds.</a> Meat Science. 93 (3), 776-785 (2013).</li><li>Wang, W., Xia, W., Pei, G., Xu, Y., Jiang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+during+fermentation+of+Suanyu+as+a+traditional+fermented+fish+product+of+China.">Proteolysis during fermentation of Suanyu as a traditional fermented fish product of China.</a> International Journal of Food Properties. 20 (90), 29-38 (2017).</li><li>Coventry, M. J., Hickey, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+spices+and+manganese+on+meat+starter+culture+activity.">The effect of spices and manganese on meat starter culture activity.</a> Meat Science. 33 (3), 391-399 (1993).</li><li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+on+quality+characteristics+of+pickled+and+fermented+sturgeon+(Acipenser+sinensis)+meat+in+retort+cooking.">Comparative study on quality characteristics of pickled and fermented sturgeon (Acipenser sinensis) meat in retort cooking.</a> International Journal of Food Science &amp; Technology. , (2019).</li><li>Mendonca, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+yeast+flora+in+artisanal+country+style+and+industrial;dry+cured+sausage+(yeast+in+fermented+sausage).">Dynamics of the yeast flora in artisanal country style and industrial;dry cured sausage (yeast in fermented sausage).</a> Food Control. 29 (1), 143-148 (2013).</li><li>Zeng, X. F., Xia, W. S., Jiang, Q. X., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+autochthonous+starter+cultures+on+microbiological+and+physico-chemical+characteristics+of+Suan+yu,+a+traditional+Chinese+low+salt+fermented+fish.">Effect of autochthonous starter cultures on microbiological and physico-chemical characteristics of Suan yu, a traditional Chinese low salt fermented fish.</a> Food Control. 33 (2), 344-351 (2013).</li><li>Gao, P., Jiang, Q., Xu, Y., Xia, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esterase+activities+of+autochthonous+starter+cultures+to+increase+volatile+flavor+compounds+in+Chinese+traditional+fermented+fish+(Suan+yu).">Esterase activities of autochthonous starter cultures to increase volatile flavor compounds in Chinese traditional fermented fish (Suan yu).</a> International Journal of Food Properties. 20 (1), 663-672 (2017).</li><li>Wahyuni, S., Holilah, , Asranudin, , Noviyanti, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+shelf+life+of+wikau+maombo+brownies+cake+using+Accelerated+Shelf+Life+Testing+(ASLT)+method+with+Arrhenius+model.">Estimation of shelf life of wikau maombo brownies cake using Accelerated Shelf Life Testing (ASLT) method with Arrhenius model.</a> IOP Conference Series Earth and Environmental Science. 122 (1), 12-22 (2018).</li><li>Zeng, X. F., Xia, W. S., Jiang, Q. X., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+and+microbial+properties+of+Chinese+traditional+low-salt+fermented+whole+fish+product+Suan+yu.">Chemical and microbial properties of Chinese traditional low-salt fermented whole fish product Suan yu.</a> Food Control. 30 (2), 590-595 (2013).</li><li>Yu, D., Jiang, Q., Xu, Y., Xia, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+shelf+life+extension+of+refrigerated+grass+carp+(Ctenopharyngodon+idellus)+fillets+by+chitosan+coating+combined+with+glycerol+monolaurate.">The shelf life extension of refrigerated grass carp (Ctenopharyngodon idellus) fillets by chitosan coating combined with glycerol monolaurate.</a> International Journal of Biological Macromolecules. 101, 448-454 (2017).</li><li>Czerner, M., Tomas, M. C., Yeannes, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ripening+of+salted+anchovy+(Engraulis+anchoita):+development+of+lipid+oxidation,+colour+and+other+sensorial+characteristics.">Ripening of salted anchovy (Engraulis anchoita): development of lipid oxidation, colour and other sensorial characteristics.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 91 (4), 609-615 (2011).</li></ol>

في هذه الدراسة، يتم توفير تقنية جديدة لإنتاج منتجات الأسماك المخمرة عالية الجودة مع رائحة النبيذ واختبارات للخصائص الحسية. العمليات الرئيسية لهذه التقنية هي النقع والتجفيف والتخمير والتعقيم. في عملية التبيلة، وتركيز الملح، ودرجة الحرارة والوقت تؤثر جميع الخصائص النصية للأسماك. صلابة و?...

المنتج التجاري الحالي الأسماك المتبلة في الصين لديه مشكلة الطعم المالح الثقيل، رائحة النبيذ غير كافية، مرونة الفقراء ولون شاحب، مما يقلل من مقبولية للمستهلكين. ولذلك، تحتاج تقنية جديدة لمنتج لحوم السمك عالية الجودة مع رائحة النبيذ إلى خلق والأمثل.
في السنوات الأخيرة، وقد اجتذب تطبيق تقنيات التخمير الحديثةفي اللحوم والأسماك اهتمام المزيد والمزيد من الباحثين 1،2،3،4. وبتلقيح ثقافات البدايات في اللحوم والأسماك، تم تعزيز سلامة الأغذية، وقصر وقت التجهيز؛ وقد تم تعديل خصائص المنتج الحسية. Saithong وآخرون5 معزولة بكتيريا الملبنة (LAB) من بلا سوم الطبيعية واستخدمت هذا LAB كثقافة بداية، مما تسبب في الحموضة العالية وقمع البكتيريا المسببة للأمراض. وأفاد تسنغ وآخرون6 بأن التلقيح مع الثقافات كاتب autochthonous خفض وقت التخمير وتحسين الخصائص الحسية للعينات. وادعى كازابوري وآخرون7 أن استخدام الثقافات الميكروبية بداية تؤثر على تطوير رائحة في اللحوم المخمرة. في هذه الثقافات كاتب, S. سيريفيسيا يمكن أن تنتج رائحة النبيذ عن طريق التخمير الكحولية ويمكن أن تعطي أيضا المنتج الصفات العضوية المحسنة الأخرى. ولذلك، S. cerevisiae هو ثقافة كاتبمناسبة للمنتجات النبيذ رائحة 8،9،10 ويمكن إجراء النبيذ رائحة المنتج الأسماك من قبل S. cerevisiae.
في عملية صنع النبيذ رائحة المنتج الأسماك، نسيج اللحوم والأسماك يمكن أن تتأثر محتوى الملح، ومحتوى المياه، ودرجة الحموضة، وتطهير البروتين، الخ. ولذلك، يمكن أن التتبيلة والتجفيف والتخمير والتعقيم تؤثر جميعها على خصائص الملمس. تشكيل نكهة وطعم معقد ويتأثر أساسا بالنقع والتخمير، لأنه يرتبط ارتباطا كبيرا بتحلل الكربوهيدرات والبروتينات والدهون، وأكسدة الدهون الخفيفة11،12. ويمكن أن تتأثر أيضا بإضافة التوابل13. لتطوير اللون ، يحدث رد فعل مايار الذي يشارك في عملية التخمير والتعقيم10.
هذه المادة يمكن أن توفر الدعم التقني للتصنيع من المنتجات الأسماك المخمرة مع رائحة النبيذ، والتي هي ذات أهمية كبيرة لتطوير صناعة تجهيز الأسماك. هذه التقنية يمكن أن تحسن طعم المنتج عن طريق زيادة البروتيوليز (المزيد من الأحماض الأمينية الحرة والببتيدات القابلة للذوبان TCA)، وتعديل نكهة أساسا عن طريق الكحول (الإيثانول، 1-octen-3-ol، 2-ميثيل-1-بروبانول و 3-ميثيل-1-بيوتانول)، استرات (خلات الإيثيل) و الألدهيدات (nonanal، 3-ميثيل بيوتانال والبنزالدهايد)، وزيادة mouthfeel من صلابة أعلى، والربيع، وgumminess والمضغ، وإعطاء أكثر جاذبية لون russet من قبل وسطح مشرق14. كما أنه يعطي المستهلكين الراحة لأنه يمكن تخزين المنتج في درجة حرارة الغرفة. كما هو موضح في دراسات سابقة أخرى15،16،17، وقد ثبت التخمير مع S. سيريفيسياي أيضا لتحسين كبير الصفات العضوية في اللحوم الأخرى أو المنتجات السمكية.
وتجدر الإشارة إلى أن البروتوكول المقدم يمكن تطبيقه أيضا في أنواع أخرى من الأسماك، مثل سمك الشبوط العشبي، والكارب الفضي، والكارب الأسود، وسمك الشبوط الكبير الرأس، وسمك القد، وسمك السلمون، وما إلى ذلك. وللحصول على جودة عالية من المنتجات السمكية، ينبغي استخدام الأسماك التي لا تعالج، مثل الأسماك الطازجة أو الأسماك في الجليد أو الأسماك المجمدة المخزنة لمدة تقل عن سنة واحدة. إلى جانب ذلك، منذ أكسدة الدهون خفيفة يمكن أن تعزز نكهة في حين أن أكسدة الدهون واسعة النطاق يجلب نكهة غير سارة، ويفضل الأسماك مع أقل من الدهون أو ينصح الأسماك منزوع الدسم.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,4,6-trimethylpyridine</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.</td>
			<td>Purity 98%</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colorimeter</td>
			<td>Hunterlab</td>
			<td>UltraScan Pro1166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DB-WAX column</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>30 m &#215; 0.25 mm &#215; 0.25&#956;m</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital pH meter</td>
			<td>Mettler toledo Instrument (Shanghai) Co., Ltd.</td>
			<td>DELTA-320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drying oven</td>
			<td>Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>DHG-9070A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen sturgeon</td>
			<td>Huada Marine Industry Group Co., Ltd</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatograph-mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>TSQ Quantum XLS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidities incubator</td>
			<td>Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>LHS-250HC-II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharomyces cerevisiae</td>
			<td>Angel Yeast Co., Ltd</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spices</td>
			<td>Auchan Supermarket</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilization pot</td>
			<td>Longqiang Machinery Technology Co., Ltd.</td>
			<td>RHS-03-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supelco</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>65&#956;m, PDMS/DVB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Texture analyzer</td>
			<td>Stable Micro Systems, Ltd.</td>
			<td>TA-XT2i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum package machine</td>
			<td>Quanzhou Yiminxin Electromechanical Co., Ltd.</td>
			<td>YMX-958-10L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of high-quality fermented fish product

يوفر هذا البروتوكول طريقة لإعداد المنتجات الصناعية الأسماك المخمرة مع سمك الحفش(Aquilaria سينينسيس)منتج اللحوم. وكانت الإجراءات كما يلي: (1) المعالجة المسبقة لسمك الحفش المستزرع، بما في ذلك قطع الرأس، والتجريد، والسلخ، والتنظيف، والقطع؛ (2) المعالجة المسبقة لسمك الحفش المستزرع؛ (3) المعالجة المسبقة للحفش المستزرع؛ (3) المعالجة المسبقة للحفش المستزرع؛ (3) المعالجة المسبقة للحفش المستزرع؛ (3) المعالجة المسبقة للحفش المس (2) نقع مكعبات السمك في 6-12٪ (ث / الخامس) محلول الملح (1:1، كتلة مكعب السمك لحجم الحل)؛ (3) تجفيف مكعبات السمك إلى محتوى الماء من 50-60٪ عن طريق الهواء الساخن (40-60 درجة مئوية) أو عن طريق الفراغ؛ (4) التخمير التي تنطوي على تلقيح مكعبات الأسماك مع 0.4-1.6٪ (ث / ث) S. سيريفيسياي في حل نكهة لمكعبات السمك والتخمير في 25-35 درجة مئوية لمدة 6-10 ح؛ (5) ختم مكعبات الأسماك في حزم فراغ مع حلول النقع والتخمير؛ (6) تعقيم في 115-121 درجة مئوية لمدة 10-20 دقيقة. منتج لحم الحفش الذي أعدته هذه الطريقة له طعم لذيذ وهو يانع وسميك، لديه أنواع مختلفة وكميات كبيرة من مركبات النكهة المتطايرة مثل الكحول وإسترات التي يمكن أن تخفي رائحة عفنة وغير سارة من الأسماك، لديه ملح معتدل المحتوى ولكن خصائص الملمس جيدة مثل الربيع عالية، gumminess ومضغ، ولها لون russet مشرق ومظهر جذاب. ويمكن أيضا تطبيق هذه التقنية الجديدة في تجهيز الأسماك الأخرى لتوفير الأطعمة الخفيفة الأسماك مريحة التي يمكن تخزينها في درجة حرارة الغرفة. وهو مناسب لكل من الأسماك البحرية وأسماك المياه العذبة.

تركيز الملح المناسب، والوقت التتبيلة ودرجة الحرارة جعل نوعية المنتج التركيبي أفضل. وكانت أفضل ظروف النقع على النحو التالي: تركيز الملح من 8٪ في محلول التبيلة. النقع الوقت من 2 ح. ودرجة حرارة النقع من 10 درجة مئوية. انظر الشكل 1.
في عملية التجفيف، يمكن أن يؤثر محت...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of High-Quality Fermented Fish Product at JoVE.com

Preparation of High-Quality Fermented Fish Product

والهدف من البروتوكول هو توفير تقنية تخمير الأسماك الصناعية على أساس تلقيح Saccharomyces cerevisiae.

إعداد منتجات الأسماك المخمرة عالية الجودة

This protocol provides a method for preparation of industrialized fermented fish product with sturgeon (Aquilaria sinensis) meat product. The procedures ...

هذا الإجراء ينتج عالية الجودة من المنتجات السمكية المخمرة مع رائحة النبيذ، ويمكن تطبيقها في إنتاج الصناعة. هذه التقنية يعطي المنتج السمكي مظهر جذاب، نكهة فريدة من نوعها، طعم لذيذ، وخصائص الملمس جيدة. ويمكن تخزين هذا المنتج في درجة حرارة الغرفة لمدة سنة واحدة على الأقل.لبدء هذا الإجراء، ذوبان، تنظيف، والجلد المجمدة اللحوم سمك الحفش كما هو مبين في بروتوكول النص. قطع الأسماك إلى مكعبات. بعد ذلك، اخلطي مكعبات السمك مع محلول ملحي من 6 إلى 12٪ بنسبة واحد إلى واحد عند 10 درجات مئوية لمدة ساعة إلى ثلاث ساعات.ثم، وضع مكعبات السمك المتبل على صفي الفولاذ المقاوم للصدأ واجففها بالهواء الساخن في درجة حرارة تتراوح بين 40 و 60 درجة مئوية لمدة ست إلى 10 ساعات. لتحضير سائل التوابل، اخلطي التوابل بما في ذلك 1.2 وحدة من البصل الأخضر، ووحدة واحدة من الزنجبيل، و0.6 وحدة من اليانسون النجمي، و0.6 وحدة من الشمر، و0.3 وحدة من الشاي الأخضر، و0.3 وحدة من الفلفل مع 40 وحدة من الماء. يغلي لمدة نصف ساعة، وجمع الترشيح.لتحضير محلول النكهة، اخلطي التوابل السائلة والنبيذ الأصفر والنبيذ الأبيض وسكر قصب الصوديوم والغلوتامات الأحادية والخل في الكسور الكتلية المعروضة هنا. بعد ذلك، اخلطي مكعبات السمك المجفف مع محلول النكهة، وتلقين 0.4 إلى 1.6٪ saccharomyces cerevisiae بنسبة واحد إلى واحد. ختم الخليط في وعاء، وتخمر في درجة حرارة تتراوح بين 25 و 35 درجة مئوية، لمدة ست إلى 10 ساعات.ضع مكعبات السمك المخمرة في حزمة فراغ مع حلول النقع والتخمير وختم حزمة الفراغ بقوة 0.085 ميجاباسكال، وقت ختم 3.6 ثانية، ووقت التبريد من 5.5 ثانية. ثم تعقيم مكعبات السمك معبأة باستخدام درجة حرارة التعقيم بين 115 و 121 درجة مئوية لمدة 10 إلى 20 دقيقة. في هذه الدراسة، يتم إعداد منتجات الأسماك المخمرة عالية الجودة.استخدام تركيز الملح مناسبة، تنقع الوقت، ودرجة الحرارة يجعل المنتجات نوعية التركيبية أفضل. ويبدو أن أفضل ظروف النقع هي تركيز الملح من 8٪، وحل النقع، وهو وقت النقع من ساعتين. ودرجة حرارة من 10 درجة مئوية.في عملية التجفيف، يمكن أن يؤثر محتوى الرطوبة النهائية ودرجة حرارة التجفيف على جودة الملمس والمستشعر. ويبدو أن أفضل ظروف التجفيف هي محتوى الرطوبة من مكعبات السمك المجفف من 55٪، ودرجة حرارة التجفيف من 50 درجة مئوية. في عملية التخمير، إضافة saccharomyces cerevisiae، ودرجة الحرارة، والوقت كل تأثير طعم، نكهة، اللون، وخصائص الملمس من الأسماك.الأسماك المخمرة الناجحة لديها درجات عالية للذوق والنكهة واللون والملمس، مما أدى إلى طعم متناغم، عطر تخمير، النبيذ، لون russet، سطح مشرق، الكراميل، والملمس العناد. فشل المنتج الأسماك لديها درجات منخفضة للذوق، نكهة، اللون، والملمس مما أدى إلى سوء الذوق، والمرارة، والمرارة، والأسماك، واللون الشاحب، وسطح خشن، وخشونة الفم، والملمس المتدهور. التعقيم المناسب وكثافة ويبدو أن 4.5 دقيقة.ودرجة حرارة التعقيم المناسبة يبدو أن 121 درجة مئوية. ثم يتم حساب اعتبارات التخزين وتحديدها كما هو موضح في بروتوكول النص. والتنبؤ لمدة الصلاحية هو 264 يوما في 25 درجة مئوية أو 205 يوما في 35 درجة مئوية.عند تنفيذ هذا الإجراء ، من المهم ملاحظة أن كل من خطوات التخمير والتعقيم أمر حيوي لنجاح هذه التقنية. بعد تعلم هذا الإجراء، يمكن استخدامه في تخمير أنواع الأسماك الأخرى. في المستقبل، يمكن التحقيق في التخمير مع سلالات أخرى.مثل اللاكتوباسيلوس، المكورات العنقودية، وما إلى ذلك. المناطق، تأكد من اتخاذ الاحتياطات عند تعقيم المنتجات السمكية، كما درجة حرارة عالية للغاية يمكن أن يسبب ضررا.

preparation-of-high-quality-fermented-fish-product

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications

This protocol demonstrates a simple sample preparation to reduce spatial heterogeneity in ion signals during matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) mass spectrometry. The heterogeneity of ion signals is a severe problem in MALDI, which results in poor data reproducibility and makes MALDI unsuitable for quantitative analysis. By regulating sample plate temperature during sample preparation, thermal-induced hydrodynamic flows inside droplets of sample solution are able to reduce the heterogeneity problem. A room-temperature sample preparation chamber equipped with a temperature-regulated copper base block that holds MALDI sample plates facilitates precise control of the sample drying condition. After drying of sample droplets, the temperature of sample plates is returned to room temperature and removed from the chamber for subsequent mass spectrometric analysis. The areas of samples are examined with MALDI-imaging mass spectrometry to obtain the spatial distribution of all components in the sample. In comparison with the conventional dried-droplet method that prepares samples under ambient conditions without temperature control, the samples prepared with the method demonstrated herein show significantly better spatial distribution and signal intensity. According to observations using carbohydrate and peptide samples, decreasing substrate temperature while maintaining the surroundings at ambient temperature during the drying process can effectively reduce the heterogeneity of ion signals. This method is generally applicable to various combinations of samples and matrices.

A protocol for reducing spatial heterogeneities of ion signals in MALDI mass spectrometry by regulating substrate temperature during sample drying processes is demonstrated.

إعداد العينات MALDI متجانسة للتطبيقات الكمية

This protocol demonstrates a simple sample preparation to reduce spatial heterogeneity in ion signals during matrix-assisted laser desorption/ionization ...

A Filtration-based Method of Preparing High-quality Nuclei from Cross-linked Skeletal Muscle for Chromatin Immunoprecipitation

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful method to determine protein binding to chromatin DNA. Fiber-rich skeletal muscle, however, has been a challenge for ChIP due to technical difficulty in isolation of high-quality nuclei with minimal contamination of myofibrils. Previous protocols have attempted to purify nuclei before cross-linking, which incurs the risk of altered DNA-protein interaction during the prolonged nuclei preparation process. In the current protocol, we first cross-linked the skeletal muscle tissue collected from mice, and the tissues were minced and sonicated. Since we found that ultracentrifugation was not able to separate nuclei from myofibrils using cross-linked muscle tissue, we devised a sequential filtration procedure to obtain high-quality nuclei devoid of significant myofibril contamination. We subsequently prepared chromatin by using an ultrasonicator, and ChIP assays with anti-BMAL1 antibody revealed robust circadian binding pattern of BMAL1 to target gene promoters. This filtration protocol constitutes an easily applicable method to isolate high-quality nuclei from cross-linked skeletal muscle tissue, allowing consistent sample processing for circadian and other time-sensitive studies. In combination with next-generation sequencing (NGS), our method can be deployed for various mechanistic and genomic studies focusing on skeletal muscle function.

We present a filtration-based protocol to isolate high-quality nuclei from cross-linked mouse skeletal muscle wherein we removed the need for ultracentrifugation, making it easily applicable. We show that chromatin prepared from the nuclei is suitable for chromatin immunoprecipitation and likely chromatin immunoprecipitation sequencing studies.

A طريقة الترشيح القائم على إعداد نوى عالية الجودة من عبر ربط العضلات والهيكل العظمي للكروماتين مناعي

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful method to determine protein binding to chromatin DNA. Fiber-rich skeletal muscle, however, has been a ...

Biosynthesis of a Flavonol from a Flavanone by Establishing a One-pot Bienzymatic Cascade

Flavonols are a major subclass of flavonoids with a variety of biological and pharmacological activities. Here, we provide a method for the in vitro enzymatic synthesis of a flavonol. In this method, Atf3h and Atfls1, two key genes in the biosynthetic pathway of the flavonols, are cloned and overexpressed in Escherichia coli. The recombinant enzymes are purified via an affinity column and then a bienzymatic cascade is established in a specific synthetic buffer. Two flavonols are synthesized in this system as examples and determined by TLC and HPLC/LC/MS analyses. The method displays obvious advantages in the derivation of flavonols over other approaches. It is time- and labor-saving and highly cost-effective. The reaction is easy to be accurately controlled and thus scaled up for mass production. The target product can be purified easily due to the simple components in the system. However, this system is usually restricted to the production of a flavonol from a flavanone.

The derivation of a flavonol is crucial for its application in healthcare and the food industry. Here, we provide a detailed protocol for the biosynthesis of a flavonol from a flavanone and discuss the crucial steps and its advantages over other approaches.

التركيب الحيوي للفلافونول من فلافانون عن طريق إنشاء تتالي بينزيماتي واحد وعاء

Flavonols are a major subclass of flavonoids with a variety of biological and pharmacological activities. Here, we provide a method for the in vitro ...

Obtaining High-Quality Transcriptome Data from Cereal Seeds by a Modified Method for Gene Expression Profiling

The characterization of gene expression is dependent on RNA quality. In germinating, developing and mature cereal seeds, the extraction of high-quality RNA is often hindered by high starch and sugar content. These compounds can reduce both the yield and the quality of the extracted total RNA. The deterioration in quantity and quality of total RNA can subsequently have a significant impact on the downstream transcriptomic analyses, which may not accurately reflect the spatial and/or temporal variation in the gene expression profile of the samples being tested. In this protocol, we describe an optimized method for extraction of total RNA with sufficient quantity and quality to be used for whole transcriptome analysis of cereal grains. The described method is suitable for several downstream applications used for transcriptomic profiling of developing, germinating, and mature cereal seeds. The method of transcriptome profiling using a microarray platform is shown. This method is specifically designed for gene expression profiling of cereals with described genome sequences. The detailed procedure from microarray handling to final quality control is described. This includes cDNA synthesis, cRNA labelling, microarray hybridization, slide scanning, feature extraction, and data quality validation. The data generated by this method can be used to characterize the transcriptome of cereals during germination, in various stages of grain development, or at different biotic or abiotic stress conditions. The results presented here exemplify high-quality transcriptome data amenable for downstream bioinformatics analyses, such as the determination of differentially expressed genes (DEGs), characterisation of gene regulatory networks, and conducting transcriptome-wide association study (TWAS).

A method for transcriptome profiling of cereals is presented. The microarray-based gene expression profiling starts with the isolation of high-quality total RNA from cereal grains and continues with the generation of cDNA. After cRNA labelling and microarray hybridization, recommendations are given for signal detection and quality control.

الحصول على بيانات النسخ عالية الجودة من بذور الحبوب من خلال طريقة معدلة لتنميط التعبير الجيني

The characterization of gene expression is dependent on RNA quality. In germinating, developing and mature cereal seeds, the extraction of high-quality ...

Single Cell Analysis Of Transcriptionally Active Alleles By Single Molecule FISH

Gene transcription is an essential process in cell biology, and allows cells to interpret and respond to internal and external cues. Traditional bulk population methods (Northern blot, PCR, and RNAseq) that measure mRNA levels lack the ability to provide information on cell-to-cell variation in responses. Precise single cell and allelic visualization and quantification is possible via single molecule RNA fluorescence in situ hybridization (smFISH). RNA-FISH is performed by hybridizing target RNAs with labeled oligonucleotide probes. These can be imaged in medium/high throughput modalities, and, through image analysis pipelines, provide quantitative data on both mature and nascent RNAs, all at the single cell level. The fixation, permeabilization, hybridization and imaging steps have been optimized in the lab over many years using the model system described herein, which results in successful and robust single cell analysis of smFISH labeling. The main goal with sample preparation and processing is to produce high quality images characterized by a high signal-to-noise ratio to reduce false positives and provide data that are more accurate. Here, we present a protocol describing the pipeline from sample preparation to data analysis in conjunction with suggestions and optimization steps to tailor to specific samples.&#160;

Single molecule RNA fluorescence in situ hybridization (smFISH) is a method to accurately quantify levels and localization of specific RNAs at the single cell level. Here, we report our validated lab protocols for wet-bench processing, imaging and image analysis for single cell quantification of specific RNAs.

تحليل خلية واحدة من الأليل النشطة نسخيا بواسطة جزيء واحد FISH

Gene transcription is an essential process in cell biology, and allows cells to interpret and respond to internal and external cues. Traditional bulk ...

Nano-Differential Scanning Fluorimetry for Screening in Fragment-based Lead Discovery

Thermal shift assays (TSAs) examine how the melting temperature (Tm) of a target protein changes in response to changes in its environment (e.g., buffer composition). The utility of TSA, and specifically of nano-Differential Scanning Fluorimetry (nano-DSF), has been established over the years, both for finding conditions that help stabilize a specific protein and for looking at ligand binding by monitoring changes in the apparent Tm. This paper presents an efficient screening of the Diamond-SGC-iNEXT Poised (DSi-Poised) fragment library (768 compounds) by the use of nano-DSF, monitoring Tm to identify potential fragment binding. The prerequisites regarding protein quality and concentration for performing nano-DSF experiments are briefly outlined followed by a step-by-step protocol that uses a nano-liter robotic dispenser commonly used in structural biology laboratories for preparing the required samples in 96-well plates. The protocol describes how the reagent mixtures are transferred to the capillaries needed for nano-DSF measurements. In addition, this paper provides protocols to measure thermal denaturation (monitoring intrinsic tryptophan fluorescence) and aggregation (monitoring light back-scattering) and the subsequent steps for data transfer and analysis. Finally, screening experiments with three different protein targets are discussed to illustrate the use of this procedure in the context of lead discovery campaigns. The overall principle of the method described can be easily transferred to other fragment libraries or adapted to other instruments.

Monitoring changes in the melting temperature of a target protein (i.e., thermal shift assay, TSA) is an efficient method for screening fragment libraries of a few hundred compounds. We present a TSA protocol implementing robotics-assisted nano-Differential Scanning Fluorimetry (nano-DSF) for monitoring intrinsic tryptophan fluorescence and light back-scattering for fragment screening.

قياس فلوري المسح الضوئي النانوي للفحص في اكتشاف الرصاص القائم على الشظايا

Thermal shift assays (TSAs) examine how the melting temperature (Tm) of a target protein changes in response to changes in its environment (e.g., buffer ...

Preparation of High-Temperature Sample Grids for Cryo-EM

The sample grids for cryo-electron microscopy (cryo-EM) experiments are usually prepared at a temperature optimal for the storage of biological samples, mostly at 4 &#176;C and occasionally at room temperature. Recently, we discovered that the protein structure solved at low temperature may not be functionally relevant, particularly for proteins from thermophilic archaea. A procedure was developed to prepare protein samples at higher temperatures (up to 70 &#176;C) for cryo-EM analysis. We showed that the structures from samples prepared at higher temperatures are functionally relevant and temperature dependent. Here we describe a detailed protocol for preparing sample grids at high temperature, using 55 &#176;C as an example. The experiment made use of a vitrification apparatus modified using an additional centrifuge tube, and samples were incubated at 55 &#176;C. The detailed procedures were fine-tuned to minimize vapor condensation and obtain a thin layer of ice on the grid. Examples of successful and unsuccessful experiments are provided.

This paper provides a detailed protocol for preparing sample grids at temperatures as high as 70 &#176;C, prior to plunge freezing for cryo-EM experiments.

إعداد شبكات عينات ذات درجة حرارة عالية ل Cryo-EM

The sample grids for cryo-electron microscopy (cryo-EM) experiments are usually prepared at a temperature optimal for the storage of biological samples, ...

The Extraction of Liver Glycogen Molecules for Glycogen Structure Determination

Liver glycogen is a hyperbranched glucose polymer that is involved in the maintenance of blood sugar levels in animals. The properties of glycogen are influenced by its structure. Hence, a suitable extraction method that isolates representative samples of glycogen is crucial to the study of this macromolecule. Compared to other extraction methods, a method that employs a sucrose density gradient centrifugation step can minimize molecular damage. Based on this method, a recent publication describes how the density of the sucrose solution used during centrifugation was varied (30%, 50%, 72.5%) to find the most suitable concentration to extract glycogen particles of a wide variety of sizes, limiting the loss of smaller particles. A 10 min boiling step was introduced to test its ability to denature glycogen degrading enzymes, thus preserving glycogen. The lowest sucrose concentration (30%) and the addition of the boiling step were shown to extract the most representative samples of glycogen.

An optimal sucrose concentration was determined for the extraction of liver glycogen using sucrose density gradient centrifugation. The addition of a 10 min boiling step to inhibit glycogen-degrading enzymes proved beneficial.

استخراج جزيئات الجليكوجين في الكبد لتحديد بنية الجليكوجين

Liver glycogen is a hyperbranched glucose polymer that is involved in the maintenance of blood sugar levels in animals. The properties of glycogen are ...

Preparation of siRNA Mixture for Mitochondrial DNA Synthesis

To begin, prepare a 140 nano molar mix of small interfering RNA or siRNA by diluting the siRNA in optimum medium. Add the five microliters of the diluted mix to the wells of a black 384 well cell culture microplate. Prepare the appropriate amount of RNAiMAX transfection reagent solution in optimum medium and add 10 microliters to each well of the 384 well plate with a reagent dispenser.

تحضير خليط siRNA لتخليق الحمض النووي للميتوكوندريا

تحضير شبكات المجهر الإلكتروني للتصوير بالتبريد الخلوي في الموقع

Sample Preparation for In Situ Cryotomography of Mammalian Cells

In situ cellular cryotomography is a powerful technique for studying complex objects in their native frozen-hydrated cellular context, making it highly relevant to cellular biology and virology. The potential of combining cryotomography with other microscopy modalities makes it a perfect technique for integrative and correlative imaging. However, sample preparation for in situ cellular tomography is not straightforward, as cells do not readily attach and stretch over the electron microscopy grid. Additionally, the grids themselves are fragile and can break if handled too forcefully, resulting in the loss of imageable areas. The geometry of tissue culture dishes can also pose a challenge when manipulating the grids with tweezers. Here, we describe the tips and tricks to overcome these (and other) challenges and prepare good-quality samples for in situ cellular cryotomography and correlative imaging of adherent mammalian cells. With continued advances in cryomicroscopy technology, this technique holds enormous promise for advancing our understanding of complex biological systems.

تسليط الضوء على المؤلف: تحسين إعداد الشبكة للتصوير المقطعي الإلكتروني بالتبريد المحسن 

This method provides an accessible and flexible protocol for the preparation of electron microscopy (EM) grids for in situ cellular cryotomography and correlative light and electron microscopy (CLEM).

تحضير العينة للتصوير بالتبريد في الموقع لخلايا الثدييات

In situ cellular cryotomography is a powerful technique for studying complex objects in their native frozen-hydrated cellular context, making it highly ...