Name: preparation of high-quality fermented fish product
Uploaded: 2019-08-23T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of High-Quality Fermented Fish Product at JoVE.com

Dit onderzoek werd financieel gesteund door het gereserveerde Fonds voor het Jiangsu Natural Science Fund (BK20170185), project van Jiangsu Fisheries Administrator (Y2017-30), National Natural Science Foundation of China (NFSC31801575), China Agricultures Research Systeem (CARS-45-26), nationaal eersteklas discipline programma van Food Science and Technology (JUFSTR20180201), en Yi tong-Jiangsu postdoctoraal programma.

1. monstervoorbereiding
<ol><li>Ontdooien van bevroren steur vlees onder stromend water onder 20 °C. Reinig vervolgens de huid en snijd de vis in blokjes (2 cm × 2 cm × 1,5 cm). Opmerking: grondstoffen kunnen vers of bevroren steur vlees zijn.</li>
	<li>Meng visblokjes met 6-12% (w/v) zoutoplossing met een snelheid van 1:1 (Fish Cube Mass naar Solution volume), bij 10 °C voor 1-3 h.</li>
	<li>Zet de gemarineerde visblokjes op een roestvrijstalen gridding plaat en droge visblokjes bij 40-60 °C voor ongeveer 6-10...

<ol>
	<li>Riebroy, S., Benjakul, S., Visessanguan, W., Tanaka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+during+fermentation+and+properties+of+som-fug+produced+from+different+marine+fish.">Changes during fermentation and properties of som-fug produced from different marine fish.</a> Journal of Food Processing and Preservation. 31 (6), 751-770 (2007).</li><li>Xu, Y., Xia, W., Yang, F., Jinmoon, K., Nie, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+fermentation+temperature+on+the+microbial+and+physicochemical+properties+of+silver+carp+sausages+inoculated+with+Pediococcus+pentosaceus.">Effect of fermentation temperature on the microbial and physicochemical properties of silver carp sausages inoculated with Pediococcus pentosaceus.</a> Food Chemistry. 118 (3), 512-518 (2010).</li><li>Cano-Garcia, L., Flores, M., Belloch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+and+aromatic+potential+of+Debaryomyces+hansenii+strains+isolated+from+naturally+fermented+sausages.">Molecular characterization and aromatic potential of Debaryomyces hansenii strains isolated from naturally fermented sausages.</a> Food Research International. 52 (1), 42-49 (2013).</li><li>Chen, Q., Liu, Q., Sun, Q., Kong, B., Xiong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flavour+formation+from+hydrolysis+of+pork+sarcoplasmic+protein+extract+by+a+unique+LAB+culture+isolated+from+Harbin+dry+sausage.">Flavour formation from hydrolysis of pork sarcoplasmic protein extract by a unique LAB culture isolated from Harbin dry sausage.</a> Meat Science. 100, 110-117 (2015).</li><li>Saithong, P., Panthavee, W., Boonyaratanakornkit, M., Sikkhamondhol, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+starter+culture+of+lactic+acid+bacteria+in+plaa-som,+a+Thai+fermented+fish.">Use of a starter culture of lactic acid bacteria in plaa-som, a Thai fermented fish.</a> Journal of Bioscience &amp; Bioengineering. 110 (5), 553-557 (2010).</li><li>Zeng, X., Xia, W., Jiang, Q., Guan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+Sensory+Characteristics+of+Whole+Carp+Inoculated+With+Autochthonous+Starter+Cultures.">Biochemical and Sensory Characteristics of Whole Carp Inoculated With Autochthonous Starter Cultures.</a> Journal of Aquatic Food Product Technology. 24 (1), 52-67 (2015).</li><li>Casaburi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+sensory+characteristics+of+traditional+fermented+sausages+of+Vallo+di+Diano+(Southern+Italy)+as+affected+by+the+use+of+starter+cultures.">Biochemical and sensory characteristics of traditional fermented sausages of Vallo di Diano (Southern Italy) as affected by the use of starter cultures.</a> Meat Science. 76 (2), 295-307 (2007).</li><li>Gao, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+autochthonous+starter+cultures+on+the+volatile+flavour+compounds+of+Chinese+traditional+fermented+fish+(Suan+yu).">Effect of autochthonous starter cultures on the volatile flavour compounds of Chinese traditional fermented fish (Suan yu).</a> International Journal of Food Science and Technology. 51 (7), 1630-1637 (2016).</li><li>Zeng, X. F., Xia, W. S., Jiang, Q. X., Xu, Y. S., Fan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+Mixed+Starter+Cultures+to+Flavor+Profile+of+Suanyu+-+A+Traditional+Chinese+Low-Salt+Fermented+Whole+Fish.">Contribution of Mixed Starter Cultures to Flavor Profile of Suanyu - A Traditional Chinese Low-Salt Fermented Whole Fish.</a> Journal of Food Processing and Preservation. 41 (5), 15 (2017).</li><li>Anihouvi, V. B., Sakyi-Dawson, E., Ayernor, G. S., Hounhouigan, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiological+changes+in+naturally+fermented+cassava+fish+(Pseudotolithus+sp.)+for+lanhouin+production.">Microbiological changes in naturally fermented cassava fish (Pseudotolithus sp.) for lanhouin production.</a> International Journal of Food Microbiology. 116 (2), 287-291 (2007).</li><li>Corral, S., Salvador, A., Flores, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salt+reduction+in+slow+fermented+sausages+affects+the+generation+of+aroma+active+compounds.">Salt reduction in slow fermented sausages affects the generation of aroma active compounds.</a> Meat Science. 93 (3), 776-785 (2013).</li><li>Wang, W., Xia, W., Pei, G., Xu, Y., Jiang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+during+fermentation+of+Suanyu+as+a+traditional+fermented+fish+product+of+China.">Proteolysis during fermentation of Suanyu as a traditional fermented fish product of China.</a> International Journal of Food Properties. 20 (90), 29-38 (2017).</li><li>Coventry, M. J., Hickey, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+spices+and+manganese+on+meat+starter+culture+activity.">The effect of spices and manganese on meat starter culture activity.</a> Meat Science. 33 (3), 391-399 (1993).</li><li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+on+quality+characteristics+of+pickled+and+fermented+sturgeon+(Acipenser+sinensis)+meat+in+retort+cooking.">Comparative study on quality characteristics of pickled and fermented sturgeon (Acipenser sinensis) meat in retort cooking.</a> International Journal of Food Science &amp; Technology. , (2019).</li><li>Mendonca, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+yeast+flora+in+artisanal+country+style+and+industrial;dry+cured+sausage+(yeast+in+fermented+sausage).">Dynamics of the yeast flora in artisanal country style and industrial;dry cured sausage (yeast in fermented sausage).</a> Food Control. 29 (1), 143-148 (2013).</li><li>Zeng, X. F., Xia, W. S., Jiang, Q. X., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+autochthonous+starter+cultures+on+microbiological+and+physico-chemical+characteristics+of+Suan+yu,+a+traditional+Chinese+low+salt+fermented+fish.">Effect of autochthonous starter cultures on microbiological and physico-chemical characteristics of Suan yu, a traditional Chinese low salt fermented fish.</a> Food Control. 33 (2), 344-351 (2013).</li><li>Gao, P., Jiang, Q., Xu, Y., Xia, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esterase+activities+of+autochthonous+starter+cultures+to+increase+volatile+flavor+compounds+in+Chinese+traditional+fermented+fish+(Suan+yu).">Esterase activities of autochthonous starter cultures to increase volatile flavor compounds in Chinese traditional fermented fish (Suan yu).</a> International Journal of Food Properties. 20 (1), 663-672 (2017).</li><li>Wahyuni, S., Holilah, , Asranudin, , Noviyanti, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+shelf+life+of+wikau+maombo+brownies+cake+using+Accelerated+Shelf+Life+Testing+(ASLT)+method+with+Arrhenius+model.">Estimation of shelf life of wikau maombo brownies cake using Accelerated Shelf Life Testing (ASLT) method with Arrhenius model.</a> IOP Conference Series Earth and Environmental Science. 122 (1), 12-22 (2018).</li><li>Zeng, X. F., Xia, W. S., Jiang, Q. X., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+and+microbial+properties+of+Chinese+traditional+low-salt+fermented+whole+fish+product+Suan+yu.">Chemical and microbial properties of Chinese traditional low-salt fermented whole fish product Suan yu.</a> Food Control. 30 (2), 590-595 (2013).</li><li>Yu, D., Jiang, Q., Xu, Y., Xia, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+shelf+life+extension+of+refrigerated+grass+carp+(Ctenopharyngodon+idellus)+fillets+by+chitosan+coating+combined+with+glycerol+monolaurate.">The shelf life extension of refrigerated grass carp (Ctenopharyngodon idellus) fillets by chitosan coating combined with glycerol monolaurate.</a> International Journal of Biological Macromolecules. 101, 448-454 (2017).</li><li>Czerner, M., Tomas, M. C., Yeannes, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ripening+of+salted+anchovy+(Engraulis+anchoita):+development+of+lipid+oxidation,+colour+and+other+sensorial+characteristics.">Ripening of salted anchovy (Engraulis anchoita): development of lipid oxidation, colour and other sensorial characteristics.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 91 (4), 609-615 (2011).</li></ol>

In deze studie wordt een nieuwe techniek voor de productie van kwalitatief hoogwaardig gefermenteerd visproduct met wijn aroma en proeven voor sensorische eigenschappen verstrekt. De belangrijkste processen van deze techniek zijn het marineren, drogen, fermentatie en sterilisatie. In het marinerende proces, de zoutconcentratie, de temperatuur en de tijd alle invloed op de textuur eigenschappen van de vis. De hardheid en kauw van het product toenemen geleidelijk met de toename van de zoutconcentratie (0-12%, w/v) en de ve...

Huidige commerciële Gemarineerde vis product in China heeft het probleem van de zware zoute smaak, onvoldoende wijn aroma, slechte elasticiteit en bleke kleur, waardoor de aanvaardbaarheid voor consumenten afneemt. Daarom moet er een nieuwe techniek voor een kwalitatief hoogwaardig visvlees product met wijn aroma worden gecreëerd en geoptimaliseerd.
In de afgelopen jaren heeft de toepassing van moderne fermentatie technieken in vlees en vis de aandacht getrokken van meer en meer onderzoekers1,2,3,4. Door de inoculatie van starterculturen in vlees en vis, is de voedselveiligheid verbeterd, de verwerkingstijd is verkort; en het product sensorische eigenschappen zijn gewijzigd. Saithong et al.5 geïsoleerde Lactobacillus bacteriën (Lab) van natuurlijke plaa-som en gebruikt dit Lab als een starter cultuur, die induceerde hoge zuurgraad en onderdrukt pathogene bacteriën. Zeng et al.6 meldde dat inoculatie met de autochtone starterculturen de fermentatie tijd verminderde en de sensorische eigenschappen van monsters verbeterde. Casaburi et al.7 beweerde dat het gebruik van microbiële starterculturen de ontwikkeling van aroma in gefermenteerd vlees beïnvloedt. In deze starterculturen kon S. cerevisiae wijn aroma produceren door alcoholische gisting en kon het product ook andere verbeterde organoleptische kwaliteiten geven. Daarom is s. cerevisiae een geschikte starter cultuur voor wijn aroma producten8,9,10 en wijn aroma vis product kan worden gemaakt door S. cerevisiae.
In het proces van het maken van wijnbouwproducten met wijn aroma kan de textuur van vlees en vis worden aangetast door zoutgehalte, watergehalte, pH, eiwit denaturatie, enz. Daarom kunnen marineren, drogen, fermentatie en sterilisatie alle invloed hebben op de textuur eigenschappen. De vorming van smaak en smaak is ingewikkeld en wordt voornamelijk beïnvloed door marineren en fermentatie, omdat het sterk gerelateerd is aan hydrolyse van koolhydraten, eiwitten en lipiden, en milde lipide-oxidatie11,12. Het kan ook worden beïnvloed door toevoeging van specerijen13. Voor de ontwikkeling van kleur, Maillard reactie optreedt die betrokken is bij het proces van fermentatie en sterilisatie10.
Dit artikel zou technische ondersteuning kunnen bieden voor de industrialisatie van gefermenteerd visproduct met wijn aroma, wat van groot belang is voor de ontwikkeling van de visverwerkende industrie. Deze techniek kan de smaak van het product verbeteren door verhoogde proteolyse (meer vrije aminozuren en TCA-oplosbare peptiden), de smaak wijzigen voornamelijk door alcoholen (ethanol, 1-octen-3-OL, 2-methyl-1-propanol en 3-methyl-1-butanol), esters (ethylacetaat) en aldehyden (nonanal, 3-Methylbutanal en benzaldehyde), verhoging van de mondgevoel door hogere hardheid, springheid, de en chewiness, en geven aantrekkelijkere kleur van de rood bruin door en een helder oppervlak14. Het geeft consumenten ook gemak omdat het product bij kamertemperatuur kan worden bewaard. Zoals beschreven in andere eerdere studies15,16,17, is de fermentatie met S. cerevisiae ook bewezen om de organoleptische kwaliteiten in andere vlees-of visproducten aanzienlijk te verbeteren.
Het is vermeldenswaard dat het geïntroduceerde protocol ook kan worden toegepast bij andere vissoorten, zoals Graskarper, zilver karper, zwarte karper, Apristurus karper, kabeljauw, zalm, enz. Voor de hoge kwaliteit van visproducten moet vis zonder verwerking worden gebruikt, zoals verse vis, vis in ijs of diepgevroren vis die minder dan 1 jaar is opgeslagen. Behalve, omdat milde lipide-oxidatie smaak kan verbeteren terwijl uitgebreide lipide-oxidatie onaangename smaak brengt, vis met minder vet de voorkeur of magere vis wordt aanbevolen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,4,6-trimethylpyridine</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.</td>
			<td>Purity 98%</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colorimeter</td>
			<td>Hunterlab</td>
			<td>UltraScan Pro1166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DB-WAX column</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>30 m &#215; 0.25 mm &#215; 0.25&#956;m</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital pH meter</td>
			<td>Mettler toledo Instrument (Shanghai) Co., Ltd.</td>
			<td>DELTA-320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drying oven</td>
			<td>Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>DHG-9070A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen sturgeon</td>
			<td>Huada Marine Industry Group Co., Ltd</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatograph-mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>TSQ Quantum XLS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidities incubator</td>
			<td>Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>LHS-250HC-II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharomyces cerevisiae</td>
			<td>Angel Yeast Co., Ltd</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spices</td>
			<td>Auchan Supermarket</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilization pot</td>
			<td>Longqiang Machinery Technology Co., Ltd.</td>
			<td>RHS-03-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supelco</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>65&#956;m, PDMS/DVB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Texture analyzer</td>
			<td>Stable Micro Systems, Ltd.</td>
			<td>TA-XT2i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum package machine</td>
			<td>Quanzhou Yiminxin Electromechanical Co., Ltd.</td>
			<td>YMX-958-10L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of high-quality fermented fish product

Dit protocol biedt een methode voor de bereiding van geindustrialiseerd gefermenteerd visproduct met het vleesproduct van Sturgeon (Aquilaria sinensis). De procedures waren: (1) voor behandeling van gekweekte steur, met inbegrip van onthoofding, ontbranding, villen, schoonmaken en snijden; (2) het marineren van visblokjes in 6-12% (w/v) zoutoplossing (1:1, Fish Cube Mass naar Solution volume); 3. het drogen van visblokjes tot een watergehalte van 50-60% door hete lucht (40-60 °C) of door vacuüm; (4) fermentatie waarbij het inoculeren van visblokjes met 0,4-1,6% (w/w) S. cerevisiae in smaak oplossing voor het vissen van blokjes en fermenteren bij 25-35 °c gedurende 6-10 uur; 5. afdichten van visblokjes in vacuümverpakkingen met marinerende en fermenterende oplossingen; (6) steriliseren bij 115-121 °C gedurende 10-20 min. Het steur vleesproduct bereid door deze methode heeft een heerlijke smaak die mellow en dik is, heeft verschillende soorten en grote hoeveelheden vluchtige smaakstoffen zoals alcoholen en esters die muffe en onaangename geur van vis kunnen maskeren, heeft matig zout inhoud maar goede textuur eigenschappen zoals hoge springheid, de en chewiness, en heeft heldere roodbruine kleur en aantrekkelijk uiterlijk. Deze nieuwe techniek kan ook worden toegepast bij de verwerking van andere vissen om handige vissnacks te leveren die bij kamertemperatuur kunnen worden bewaard. Het is geschikt voor zowel mariene als zoetwatervissen.

De geschikte zoutconcentratie, het marineren van tijd en temperatuur maken de textuur kwaliteit van het product beter. De beste marinerende condities waren de volgende: de zoutconcentratie van 8% in de marinerende oplossing; marineren tijd van 2 h; en een marinerende temperatuur van 10 °C. Zie Figuur 1.
In het droogproces kunnen het uiteindelijke vochtgehalte en de droogtemperatuur de textuur en de sensorische kwaliteit beïnvloeden. De beste droogcondities waren...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of High-Quality Fermented Fish Product at JoVE.com

Preparation of High-Quality Fermented Fish Product

Het doel van het protocol is om een geïndustrialiseerde visfermentatie techniek te bieden op basis van inoculatie van Saccharomyces cerevisiae.

Bereiding van kwalitatief hoogwaardig gefermenteerd visproduct

This protocol provides a method for preparation of industrialized fermented fish product with sturgeon (Aquilaria sinensis) meat product. The procedures ...

Deze procedure produceert een hoge kwaliteit van gefermenteerde vis product met wijn aroma, en kan worden toegepast in de industrie productie. Deze techniek geeft het visproduct een aantrekkelijke uitstraling, unieke smaak, heerlijke smaak en goede textuureigenschappen. En dit product kan minstens een jaar op kamertemperatuur worden bewaard.Om met deze procedure te beginnen, ontdooien, reinigen en huidgevroren steurvlees zoals beschreven in het tekstprotocol. Snijd de vis in blokjes. Meng vervolgens de visblokjes met zes tot 12%zoutoplossing bij een verhouding van één op één bij 10 graden Celsius gedurende één tot drie uur.Zet vervolgens de gemarineerde visblokjes op een roestvrijstalen roosterplaat en droog ze zes tot tien uur met hete lucht bij een temperatuur tussen de 40 en 60 graden Celsius. Om de kruidenvloeistof te bereiden, meng kruiden, waaronder 1,2 eenheden van scallions, een eenheid gember, 0,6 eenheden steranijs, 0,6 eenheden venkel, 0,3 eenheden groene thee en 0,3 eenheden peper met 40 eenheden water. Kook gedurende een half uur, en het verzamelen van de filtraat.Om de smaakoplossing voor te bereiden, meng kruiden vloeistof, gele wijn, witte wijn, rietsuiker, mononatrium glutamaat, en azijn in de massa fracties hier getoond. Meng hierna de gedroogde visblokjes met de smaakoplossing en inent 0,4 tot 1,6% saccharomyces cerevisiae bij een verhouding van één-op-één. Verzegel het mengsel in een container en fermenteer bij een temperatuur tussen 25 en 35 graden Celsius, gedurende zes tot tien uur.Plaats de gefermenteerde visblokjes in een vacuümpakket met marine- en fermenterende oplossingen en sluit het vacuümpakket af met een vacuümsterkte van 0,085 megapascals, een afdichttijd van 3,6 seconden en een koeltijd van 5,5 seconden. Steriliseer vervolgens de verpakte visblokjes met een sterilisatietemperatuur tussen 115 en 121 graden Celsius gedurende 10 tot 20 minuten. In deze studie wordt een hoogwaardig gefermenteerd visproduct bereid.Met behulp van een geschikte zoutconcentratie, marineren tijd, en temperatuur maakt de producten textuur kwaliteit beter. De beste marinandvoorwaarden lijken een zoutconcentratie van 8% en de marinerende oplossing, een marinetijd van twee uur. En een marinerende temperatuur van 10 graden Celsius.In het droogproces kunnen het uiteindelijke vochtgehalte en de droogtemperatuur de textuur en sensorkwaliteit beïnvloeden. De beste droogomstandigheden lijken een vochtgehalte te zijn van de gedroogde visblokjes van 55% en de droogtemperatuur van 50 graden Celsius. In het fermentatieproces, de toevoeging van saccharomyces cerevisiae, de temperatuur, en de tijd alle effect van de smaak, smaak, kleur, en textuur eigenschappen van vis.De succesvolle gefermenteerde vis heeft hoge scores voor smaak, smaak, kleur en textuur, wat resulteert in harmonieuze smaak, fermentatieve geur, wijnachtige, russet kleur, helder oppervlak, karamel, en al dente textuur. De mislukte vis product heeft de lage scores voor smaak, smaak, kleur en textuur als gevolg van de slechte smaak, bitterheid, zuurheid, visteerigheid, bleke kleur, ruw oppervlak, grof mondgevoel, en verslechterde textuur. De geschikte sterilisatie en intensiteit lijkt 4,5 minuten te zijn.En een geschikte sterilisatie temperatuur lijkt te zijn 121 graden Celsius. De opslagoverwegingen worden vervolgens berekend en bepaald zoals beschreven in het tekstprotocol. En de voorspelling voor de houdbaarheid is 264 dagen bij 25 graden Celsius of 205 dagen bij 35 graden Celsius.Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk op te merken dat zowel fermentatie als de sterilisatiestappen van vitaal belang zijn voor het succes van deze techniek. Na het leren van deze procedure, kan het worden gebruikt in fermentatie van andere vissoorten. In de toekomst kan fermentatie met andere stammen worden onderzocht.Zoals lactobacillus, staphylococcus, et cetera. gebieden, zorg ervoor dat voorzorgsmaatregelen te nemen bij het steriliseren van visproducten, als extreem hoge temperatuur kan schade veroorzaken.

preparation-of-high-quality-fermented-fish-product

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications

This protocol demonstrates a simple sample preparation to reduce spatial heterogeneity in ion signals during matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) mass spectrometry. The heterogeneity of ion signals is a severe problem in MALDI, which results in poor data reproducibility and makes MALDI unsuitable for quantitative analysis. By regulating sample plate temperature during sample preparation, thermal-induced hydrodynamic flows inside droplets of sample solution are able to reduce the heterogeneity problem. A room-temperature sample preparation chamber equipped with a temperature-regulated copper base block that holds MALDI sample plates facilitates precise control of the sample drying condition. After drying of sample droplets, the temperature of sample plates is returned to room temperature and removed from the chamber for subsequent mass spectrometric analysis. The areas of samples are examined with MALDI-imaging mass spectrometry to obtain the spatial distribution of all components in the sample. In comparison with the conventional dried-droplet method that prepares samples under ambient conditions without temperature control, the samples prepared with the method demonstrated herein show significantly better spatial distribution and signal intensity. According to observations using carbohydrate and peptide samples, decreasing substrate temperature while maintaining the surroundings at ambient temperature during the drying process can effectively reduce the heterogeneity of ion signals. This method is generally applicable to various combinations of samples and matrices.

A protocol for reducing spatial heterogeneities of ion signals in MALDI mass spectrometry by regulating substrate temperature during sample drying processes is demonstrated.

Voorbereiding van de Homogene MALDI Monsters voor Quantitative Applications

This protocol demonstrates a simple sample preparation to reduce spatial heterogeneity in ion signals during matrix-assisted laser desorption/ionization ...

A Filtration-based Method of Preparing High-quality Nuclei from Cross-linked Skeletal Muscle for Chromatin Immunoprecipitation

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful method to determine protein binding to chromatin DNA. Fiber-rich skeletal muscle, however, has been a challenge for ChIP due to technical difficulty in isolation of high-quality nuclei with minimal contamination of myofibrils. Previous protocols have attempted to purify nuclei before cross-linking, which incurs the risk of altered DNA-protein interaction during the prolonged nuclei preparation process. In the current protocol, we first cross-linked the skeletal muscle tissue collected from mice, and the tissues were minced and sonicated. Since we found that ultracentrifugation was not able to separate nuclei from myofibrils using cross-linked muscle tissue, we devised a sequential filtration procedure to obtain high-quality nuclei devoid of significant myofibril contamination. We subsequently prepared chromatin by using an ultrasonicator, and ChIP assays with anti-BMAL1 antibody revealed robust circadian binding pattern of BMAL1 to target gene promoters. This filtration protocol constitutes an easily applicable method to isolate high-quality nuclei from cross-linked skeletal muscle tissue, allowing consistent sample processing for circadian and other time-sensitive studies. In combination with next-generation sequencing (NGS), our method can be deployed for various mechanistic and genomic studies focusing on skeletal muscle function.

We present a filtration-based protocol to isolate high-quality nuclei from cross-linked mouse skeletal muscle wherein we removed the need for ultracentrifugation, making it easily applicable. We show that chromatin prepared from the nuclei is suitable for chromatin immunoprecipitation and likely chromatin immunoprecipitation sequencing studies.

Een filtratie-gebaseerde methode om hoogwaardige kernen uit kruisgebonden skeletspier voor chromatine immunoprecipitatie te bereiden

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful method to determine protein binding to chromatin DNA. Fiber-rich skeletal muscle, however, has been a ...

Biosynthesis of a Flavonol from a Flavanone by Establishing a One-pot Bienzymatic Cascade

Flavonols are a major subclass of flavonoids with a variety of biological and pharmacological activities. Here, we provide a method for the in vitro enzymatic synthesis of a flavonol. In this method, Atf3h and Atfls1, two key genes in the biosynthetic pathway of the flavonols, are cloned and overexpressed in Escherichia coli. The recombinant enzymes are purified via an affinity column and then a bienzymatic cascade is established in a specific synthetic buffer. Two flavonols are synthesized in this system as examples and determined by TLC and HPLC/LC/MS analyses. The method displays obvious advantages in the derivation of flavonols over other approaches. It is time- and labor-saving and highly cost-effective. The reaction is easy to be accurately controlled and thus scaled up for mass production. The target product can be purified easily due to the simple components in the system. However, this system is usually restricted to the production of a flavonol from a flavanone.

The derivation of a flavonol is crucial for its application in healthcare and the food industry. Here, we provide a detailed protocol for the biosynthesis of a flavonol from a flavanone and discuss the crucial steps and its advantages over other approaches.

Biosynthese van een Flavonol van een Flavanone door het opzetten van een One-pot Bienzymatische Cascade

Flavonols are a major subclass of flavonoids with a variety of biological and pharmacological activities. Here, we provide a method for the in vitro ...

Obtaining High-Quality Transcriptome Data from Cereal Seeds by a Modified Method for Gene Expression Profiling

The characterization of gene expression is dependent on RNA quality. In germinating, developing and mature cereal seeds, the extraction of high-quality RNA is often hindered by high starch and sugar content. These compounds can reduce both the yield and the quality of the extracted total RNA. The deterioration in quantity and quality of total RNA can subsequently have a significant impact on the downstream transcriptomic analyses, which may not accurately reflect the spatial and/or temporal variation in the gene expression profile of the samples being tested. In this protocol, we describe an optimized method for extraction of total RNA with sufficient quantity and quality to be used for whole transcriptome analysis of cereal grains. The described method is suitable for several downstream applications used for transcriptomic profiling of developing, germinating, and mature cereal seeds. The method of transcriptome profiling using a microarray platform is shown. This method is specifically designed for gene expression profiling of cereals with described genome sequences. The detailed procedure from microarray handling to final quality control is described. This includes cDNA synthesis, cRNA labelling, microarray hybridization, slide scanning, feature extraction, and data quality validation. The data generated by this method can be used to characterize the transcriptome of cereals during germination, in various stages of grain development, or at different biotic or abiotic stress conditions. The results presented here exemplify high-quality transcriptome data amenable for downstream bioinformatics analyses, such as the determination of differentially expressed genes (DEGs), characterisation of gene regulatory networks, and conducting transcriptome-wide association study (TWAS).

A method for transcriptome profiling of cereals is presented. The microarray-based gene expression profiling starts with the isolation of high-quality total RNA from cereal grains and continues with the generation of cDNA. After cRNA labelling and microarray hybridization, recommendations are given for signal detection and quality control.

Het verkrijgen van hoogwaardige transcriptoomgegevens van graanzaden door middel van een gewijzigde methode voor genexpressieprofilering

The characterization of gene expression is dependent on RNA quality. In germinating, developing and mature cereal seeds, the extraction of high-quality ...

Single Cell Analysis Of Transcriptionally Active Alleles By Single Molecule FISH

Gene transcription is an essential process in cell biology, and allows cells to interpret and respond to internal and external cues. Traditional bulk population methods (Northern blot, PCR, and RNAseq) that measure mRNA levels lack the ability to provide information on cell-to-cell variation in responses. Precise single cell and allelic visualization and quantification is possible via single molecule RNA fluorescence in situ hybridization (smFISH). RNA-FISH is performed by hybridizing target RNAs with labeled oligonucleotide probes. These can be imaged in medium/high throughput modalities, and, through image analysis pipelines, provide quantitative data on both mature and nascent RNAs, all at the single cell level. The fixation, permeabilization, hybridization and imaging steps have been optimized in the lab over many years using the model system described herein, which results in successful and robust single cell analysis of smFISH labeling. The main goal with sample preparation and processing is to produce high quality images characterized by a high signal-to-noise ratio to reduce false positives and provide data that are more accurate. Here, we present a protocol describing the pipeline from sample preparation to data analysis in conjunction with suggestions and optimization steps to tailor to specific samples.&#160;

Single molecule RNA fluorescence in situ hybridization (smFISH) is a method to accurately quantify levels and localization of specific RNAs at the single cell level. Here, we report our validated lab protocols for wet-bench processing, imaging and image analysis for single cell quantification of specific RNAs.

Single cell analyse van transcriptioneel actieve allelen door single molecule FISH

Gene transcription is an essential process in cell biology, and allows cells to interpret and respond to internal and external cues. Traditional bulk ...

Nano-Differential Scanning Fluorimetry for Screening in Fragment-based Lead Discovery

Thermal shift assays (TSAs) examine how the melting temperature (Tm) of a target protein changes in response to changes in its environment (e.g., buffer composition). The utility of TSA, and specifically of nano-Differential Scanning Fluorimetry (nano-DSF), has been established over the years, both for finding conditions that help stabilize a specific protein and for looking at ligand binding by monitoring changes in the apparent Tm. This paper presents an efficient screening of the Diamond-SGC-iNEXT Poised (DSi-Poised) fragment library (768 compounds) by the use of nano-DSF, monitoring Tm to identify potential fragment binding. The prerequisites regarding protein quality and concentration for performing nano-DSF experiments are briefly outlined followed by a step-by-step protocol that uses a nano-liter robotic dispenser commonly used in structural biology laboratories for preparing the required samples in 96-well plates. The protocol describes how the reagent mixtures are transferred to the capillaries needed for nano-DSF measurements. In addition, this paper provides protocols to measure thermal denaturation (monitoring intrinsic tryptophan fluorescence) and aggregation (monitoring light back-scattering) and the subsequent steps for data transfer and analysis. Finally, screening experiments with three different protein targets are discussed to illustrate the use of this procedure in the context of lead discovery campaigns. The overall principle of the method described can be easily transferred to other fragment libraries or adapted to other instruments.

Monitoring changes in the melting temperature of a target protein (i.e., thermal shift assay, TSA) is an efficient method for screening fragment libraries of a few hundred compounds. We present a TSA protocol implementing robotics-assisted nano-Differential Scanning Fluorimetry (nano-DSF) for monitoring intrinsic tryptophan fluorescence and light back-scattering for fragment screening.

Nanodifferentiële scanningfluormetrie voor screening in fragmentgebaseerde looddetectie

Thermal shift assays (TSAs) examine how the melting temperature (Tm) of a target protein changes in response to changes in its environment (e.g., buffer ...

Preparation of High-Temperature Sample Grids for Cryo-EM

The sample grids for cryo-electron microscopy (cryo-EM) experiments are usually prepared at a temperature optimal for the storage of biological samples, mostly at 4 &#176;C and occasionally at room temperature. Recently, we discovered that the protein structure solved at low temperature may not be functionally relevant, particularly for proteins from thermophilic archaea. A procedure was developed to prepare protein samples at higher temperatures (up to 70 &#176;C) for cryo-EM analysis. We showed that the structures from samples prepared at higher temperatures are functionally relevant and temperature dependent. Here we describe a detailed protocol for preparing sample grids at high temperature, using 55 &#176;C as an example. The experiment made use of a vitrification apparatus modified using an additional centrifuge tube, and samples were incubated at 55 &#176;C. The detailed procedures were fine-tuned to minimize vapor condensation and obtain a thin layer of ice on the grid. Examples of successful and unsuccessful experiments are provided.

This paper provides a detailed protocol for preparing sample grids at temperatures as high as 70 &#176;C, prior to plunge freezing for cryo-EM experiments.

Voorbereiding van hoge temperatuur monsterroosters voor Cryo-EM

The sample grids for cryo-electron microscopy (cryo-EM) experiments are usually prepared at a temperature optimal for the storage of biological samples, ...

The Extraction of Liver Glycogen Molecules for Glycogen Structure Determination

Liver glycogen is a hyperbranched glucose polymer that is involved in the maintenance of blood sugar levels in animals. The properties of glycogen are influenced by its structure. Hence, a suitable extraction method that isolates representative samples of glycogen is crucial to the study of this macromolecule. Compared to other extraction methods, a method that employs a sucrose density gradient centrifugation step can minimize molecular damage. Based on this method, a recent publication describes how the density of the sucrose solution used during centrifugation was varied (30%, 50%, 72.5%) to find the most suitable concentration to extract glycogen particles of a wide variety of sizes, limiting the loss of smaller particles. A 10 min boiling step was introduced to test its ability to denature glycogen degrading enzymes, thus preserving glycogen. The lowest sucrose concentration (30%) and the addition of the boiling step were shown to extract the most representative samples of glycogen.

An optimal sucrose concentration was determined for the extraction of liver glycogen using sucrose density gradient centrifugation. The addition of a 10 min boiling step to inhibit glycogen-degrading enzymes proved beneficial.

De extractie van leverglycogeenmoleculen voor de bepaling van de glycogeenstructuur

Liver glycogen is a hyperbranched glucose polymer that is involved in the maintenance of blood sugar levels in animals. The properties of glycogen are ...

Preparation of siRNA Mixture for Mitochondrial DNA Synthesis

To begin, prepare a 140 nano molar mix of small interfering RNA or siRNA by diluting the siRNA in optimum medium. Add the five microliters of the diluted mix to the wells of a black 384 well cell culture microplate. Prepare the appropriate amount of RNAiMAX transfection reagent solution in optimum medium and add 10 microliters to each well of the 384 well plate with a reagent dispenser.

Bereiding van siRNA-mengsel voor mitochondriale DNA-synthese

Voorbereiding van elektronenmicroscopieroosters voor in situ cellulaire cryotomografie

Sample Preparation for In Situ Cryotomography of Mammalian Cells

In situ cellular cryotomography is a powerful technique for studying complex objects in their native frozen-hydrated cellular context, making it highly relevant to cellular biology and virology. The potential of combining cryotomography with other microscopy modalities makes it a perfect technique for integrative and correlative imaging. However, sample preparation for in situ cellular tomography is not straightforward, as cells do not readily attach and stretch over the electron microscopy grid. Additionally, the grids themselves are fragile and can break if handled too forcefully, resulting in the loss of imageable areas. The geometry of tissue culture dishes can also pose a challenge when manipulating the grids with tweezers. Here, we describe the tips and tricks to overcome these (and other) challenges and prepare good-quality samples for in situ cellular cryotomography and correlative imaging of adherent mammalian cells. With continued advances in cryomicroscopy technology, this technique holds enormous promise for advancing our understanding of complex biological systems.

Auteur in de schijnwerpers: Optimalisatie van rastervoorbereiding voor verbeterde cryo-elektronentomografie 

This method provides an accessible and flexible protocol for the preparation of electron microscopy (EM) grids for in situ cellular cryotomography and correlative light and electron microscopy (CLEM).

Monstervoorbereiding voor in situ cryotomografie van zoogdiercellen

In situ cellular cryotomography is a powerful technique for studying complex objects in their native frozen-hydrated cellular context, making it highly ...