Name: preparation of high-quality fermented fish product
Uploaded: 2019-08-23T15:00:00
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Questa ricerca è stata sostenuta finanziariamente dal fondo stanziato per il Jiangsu Natural Science Fund (BK20170185), Project from Jiangsu Fisheries Administrator (Y2017-30), National Natural Science Foundation of China (NFSC31801575), China Agricultures Research (CARS-45-26), il programma nazionale di disciplina di prima classe di Scienze e Tecnologie Alimentari (JUFSTR20180201) e il Programma Post-dottorato Yi Tong-Jiangsu.

1. Preparazione del campione
<ol><li>Scongelare la carne di storione congelata sotto acqua corrente al di sotto dei 20 gradi centigradi. Quindi, pulire, pelle fuori e tagliare il pesce a cubetti (2 cm - 2 cm - 1,5 cm). NOTA: La materia prima potrebbe essere carne di storione fresca o congelata.</li>
	<li>Mescolare i cubetti di pesce con 6-12% (w/v) soluzione di sale ad una velocità di 1:1 (massa del cubo di pesce per il volume della soluzione), a 10 gradi centigradi per 1-3 h.</li>
	<li>Mettete i cubetti di pesce m...

<ol>
	<li>Riebroy, S., Benjakul, S., Visessanguan, W., Tanaka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+during+fermentation+and+properties+of+som-fug+produced+from+different+marine+fish.">Changes during fermentation and properties of som-fug produced from different marine fish.</a> Journal of Food Processing and Preservation. 31 (6), 751-770 (2007).</li><li>Xu, Y., Xia, W., Yang, F., Jinmoon, K., Nie, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+fermentation+temperature+on+the+microbial+and+physicochemical+properties+of+silver+carp+sausages+inoculated+with+Pediococcus+pentosaceus.">Effect of fermentation temperature on the microbial and physicochemical properties of silver carp sausages inoculated with Pediococcus pentosaceus.</a> Food Chemistry. 118 (3), 512-518 (2010).</li><li>Cano-Garcia, L., Flores, M., Belloch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+and+aromatic+potential+of+Debaryomyces+hansenii+strains+isolated+from+naturally+fermented+sausages.">Molecular characterization and aromatic potential of Debaryomyces hansenii strains isolated from naturally fermented sausages.</a> Food Research International. 52 (1), 42-49 (2013).</li><li>Chen, Q., Liu, Q., Sun, Q., Kong, B., Xiong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flavour+formation+from+hydrolysis+of+pork+sarcoplasmic+protein+extract+by+a+unique+LAB+culture+isolated+from+Harbin+dry+sausage.">Flavour formation from hydrolysis of pork sarcoplasmic protein extract by a unique LAB culture isolated from Harbin dry sausage.</a> Meat Science. 100, 110-117 (2015).</li><li>Saithong, P., Panthavee, W., Boonyaratanakornkit, M., Sikkhamondhol, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+starter+culture+of+lactic+acid+bacteria+in+plaa-som,+a+Thai+fermented+fish.">Use of a starter culture of lactic acid bacteria in plaa-som, a Thai fermented fish.</a> Journal of Bioscience &amp; Bioengineering. 110 (5), 553-557 (2010).</li><li>Zeng, X., Xia, W., Jiang, Q., Guan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+Sensory+Characteristics+of+Whole+Carp+Inoculated+With+Autochthonous+Starter+Cultures.">Biochemical and Sensory Characteristics of Whole Carp Inoculated With Autochthonous Starter Cultures.</a> Journal of Aquatic Food Product Technology. 24 (1), 52-67 (2015).</li><li>Casaburi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+sensory+characteristics+of+traditional+fermented+sausages+of+Vallo+di+Diano+(Southern+Italy)+as+affected+by+the+use+of+starter+cultures.">Biochemical and sensory characteristics of traditional fermented sausages of Vallo di Diano (Southern Italy) as affected by the use of starter cultures.</a> Meat Science. 76 (2), 295-307 (2007).</li><li>Gao, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+autochthonous+starter+cultures+on+the+volatile+flavour+compounds+of+Chinese+traditional+fermented+fish+(Suan+yu).">Effect of autochthonous starter cultures on the volatile flavour compounds of Chinese traditional fermented fish (Suan yu).</a> International Journal of Food Science and Technology. 51 (7), 1630-1637 (2016).</li><li>Zeng, X. F., Xia, W. S., Jiang, Q. X., Xu, Y. S., Fan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+Mixed+Starter+Cultures+to+Flavor+Profile+of+Suanyu+-+A+Traditional+Chinese+Low-Salt+Fermented+Whole+Fish.">Contribution of Mixed Starter Cultures to Flavor Profile of Suanyu - A Traditional Chinese Low-Salt Fermented Whole Fish.</a> Journal of Food Processing and Preservation. 41 (5), 15 (2017).</li><li>Anihouvi, V. B., Sakyi-Dawson, E., Ayernor, G. S., Hounhouigan, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiological+changes+in+naturally+fermented+cassava+fish+(Pseudotolithus+sp.)+for+lanhouin+production.">Microbiological changes in naturally fermented cassava fish (Pseudotolithus sp.) for lanhouin production.</a> International Journal of Food Microbiology. 116 (2), 287-291 (2007).</li><li>Corral, S., Salvador, A., Flores, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salt+reduction+in+slow+fermented+sausages+affects+the+generation+of+aroma+active+compounds.">Salt reduction in slow fermented sausages affects the generation of aroma active compounds.</a> Meat Science. 93 (3), 776-785 (2013).</li><li>Wang, W., Xia, W., Pei, G., Xu, Y., Jiang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+during+fermentation+of+Suanyu+as+a+traditional+fermented+fish+product+of+China.">Proteolysis during fermentation of Suanyu as a traditional fermented fish product of China.</a> International Journal of Food Properties. 20 (90), 29-38 (2017).</li><li>Coventry, M. J., Hickey, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+spices+and+manganese+on+meat+starter+culture+activity.">The effect of spices and manganese on meat starter culture activity.</a> Meat Science. 33 (3), 391-399 (1993).</li><li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+on+quality+characteristics+of+pickled+and+fermented+sturgeon+(Acipenser+sinensis)+meat+in+retort+cooking.">Comparative study on quality characteristics of pickled and fermented sturgeon (Acipenser sinensis) meat in retort cooking.</a> International Journal of Food Science &amp; Technology. , (2019).</li><li>Mendonca, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+yeast+flora+in+artisanal+country+style+and+industrial;dry+cured+sausage+(yeast+in+fermented+sausage).">Dynamics of the yeast flora in artisanal country style and industrial;dry cured sausage (yeast in fermented sausage).</a> Food Control. 29 (1), 143-148 (2013).</li><li>Zeng, X. F., Xia, W. S., Jiang, Q. X., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+autochthonous+starter+cultures+on+microbiological+and+physico-chemical+characteristics+of+Suan+yu,+a+traditional+Chinese+low+salt+fermented+fish.">Effect of autochthonous starter cultures on microbiological and physico-chemical characteristics of Suan yu, a traditional Chinese low salt fermented fish.</a> Food Control. 33 (2), 344-351 (2013).</li><li>Gao, P., Jiang, Q., Xu, Y., Xia, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esterase+activities+of+autochthonous+starter+cultures+to+increase+volatile+flavor+compounds+in+Chinese+traditional+fermented+fish+(Suan+yu).">Esterase activities of autochthonous starter cultures to increase volatile flavor compounds in Chinese traditional fermented fish (Suan yu).</a> International Journal of Food Properties. 20 (1), 663-672 (2017).</li><li>Wahyuni, S., Holilah, , Asranudin, , Noviyanti, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+shelf+life+of+wikau+maombo+brownies+cake+using+Accelerated+Shelf+Life+Testing+(ASLT)+method+with+Arrhenius+model.">Estimation of shelf life of wikau maombo brownies cake using Accelerated Shelf Life Testing (ASLT) method with Arrhenius model.</a> IOP Conference Series Earth and Environmental Science. 122 (1), 12-22 (2018).</li><li>Zeng, X. F., Xia, W. S., Jiang, Q. X., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+and+microbial+properties+of+Chinese+traditional+low-salt+fermented+whole+fish+product+Suan+yu.">Chemical and microbial properties of Chinese traditional low-salt fermented whole fish product Suan yu.</a> Food Control. 30 (2), 590-595 (2013).</li><li>Yu, D., Jiang, Q., Xu, Y., Xia, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+shelf+life+extension+of+refrigerated+grass+carp+(Ctenopharyngodon+idellus)+fillets+by+chitosan+coating+combined+with+glycerol+monolaurate.">The shelf life extension of refrigerated grass carp (Ctenopharyngodon idellus) fillets by chitosan coating combined with glycerol monolaurate.</a> International Journal of Biological Macromolecules. 101, 448-454 (2017).</li><li>Czerner, M., Tomas, M. C., Yeannes, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ripening+of+salted+anchovy+(Engraulis+anchoita):+development+of+lipid+oxidation,+colour+and+other+sensorial+characteristics.">Ripening of salted anchovy (Engraulis anchoita): development of lipid oxidation, colour and other sensorial characteristics.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 91 (4), 609-615 (2011).</li></ol>

In questo studio, viene fornita una nuova tecnica per la produzione di prodotti di pesce fermentati di alta qualità con aroma di vino e test per le proprietà sensoriali. I processi chiave di questa tecnica sono la marinatura, l'essiccazione, la fermentazione e la sterilizzazione. Nel processo di marinatura, la concentrazione di sale, la temperatura e il tempo influenzano tutte le proprietà strutturali del pesce. La durezza e la masticazione del prodotto aumentano gradualmente con l'aumento della concentrazione di sale...

L'attuale prodotto commerciale marinato in Cina ha il problema del gusto salato pesante, dell'aroma insufficiente del vino, della scarsa elasticità e del colore pallido, che riduce l'accettabilità per i consumatori. Pertanto, una nuova tecnica per un prodotto di carne di pesce di alta qualità con aroma di vino deve essere creata e ottimizzata.
Negli ultimi anni, l'applicazione di moderne tecniche di fermentazione nella carne e nel pesce ha attirato l'attenzione di sempre più ricercatori1,2,3,4. Con l'inoculazione delle colture di avviamento nella carne e nel pesce, la sicurezza alimentare è stata migliorata, il tempo di trasformazione è stato ridotto; e le proprietà sensoriali del prodotto sono state modificate. Saithong et al.5 batteri lattobacillus isolati (LAB) da plaa-som naturale e utilizzato questo LAB come coltura di antipasto, che ha indotto alta acidità e soppresso batteri patogeni. Secondo la zonto6, l'inoculazione con le colture di avviamento autoctonosi ha ridotto i tempi di fermentazione e migliorato le proprietà sensoriali dei campioni. Casaburi et al.7 ha affermato che l'uso di colture di antipasto microbico influenza lo sviluppo dell'aroma nelle carni fermentate. In queste colture di avviamento, S. cerevisiae potrebbe produrre aroma di vino dalla fermentazione alcolica e potrebbe anche dare al prodotto altre qualità organolettiche migliorate. Pertanto, S. cerevisiae è una cultura di avviamento adatto per i prodotti di aroma di vino8,9,10 e prodotto di pesce aroma di vino potrebbe essere fatto da S. cerevisiae.
Nel processo di produzione di prodotti ittici color vino-aroma, la consistenza di carne e pesce potrebbe essere influenzata dal contenuto di sale, contenuto di acqua, pH, denaturazione delle proteine, ecc. Pertanto, la marinatura, l'essiccazione, la fermentazione e la sterilizzazione potrebbero influenzare le caratteristiche della texture. La formazione di sapore e gusto è complicata ed è principalmente influenzata dalla marinazione e dalla fermentazione, perché è altamente correlata all'idrolisi di carboidrati, proteine e lipidi, e lieve ossidazione dei lipidi11,12. Potrebbe anche essere influenzato dall'aggiunta di spezie13. Per lo sviluppo del colore, si verifica una reazione Maillard che è coinvolto nel processo di fermentazione e sterilizzazione10.
Questo articolo potrebbe fornire supporto tecnico per l'industrializzazione del prodotto ittico fermentato con aroma di vino, che è di grande importanza per lo sviluppo dell'industria della trasformazione del pesce. Questa tecnica potrebbe migliorare il gusto del prodotto da una maggiore proteolisi (aminoacidi più liberi e peptidi TCA-soluble), modificare il sapore principalmente da alcoli (etanolo, 1-octen-3-ol, 2-metil-1-propanol e 3-methyl-1-butanol), esteri (acetato etilico) e aldeidi (nonanale, 3-metilbutanal e benzaldeide), aumentare la sensazione di bocca da maggiore durezza, elasticità, gommosità e masticabilità, e dare più attraente colore ruggine da e una superficie luminosa14. Dà anche comodità ai consumatori perché il prodotto può essere conservato a temperatura ambiente. Come descritto da altri studi precedenti15,16,17, fermentazione con S. cerevisiae è stato anche dimostrato di migliorare significativamente le qualità organolettiche in altri prodotti a base di carne o pesce.
Vale la pena notare che il protocollo introdotto potrebbe essere applicato anche in altre specie di pesci, come carpe erba, carpe d'argento, carpe nere, carpe bighead, merluzzo, salmone, ecc. Per l'alta qualità dei prodotti ittici, si dovrebbe usare pesce senza trasformazione, come il pesce fresco, il pesce nel ghiaccio o il pesce congelato conservato per meno di 1 anno. Inoltre, poiché è preferibile un'ossidazione lieve dei lipidi, mentre l'ossidazione dei lipidi porta un'estesa ossidazione lipida, si consiglia pesce con meno grasso o pesce scremato.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,4,6-trimethylpyridine</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.</td>
			<td>Purity 98%</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colorimeter</td>
			<td>Hunterlab</td>
			<td>UltraScan Pro1166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DB-WAX column</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>30 m &#215; 0.25 mm &#215; 0.25&#956;m</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital pH meter</td>
			<td>Mettler toledo Instrument (Shanghai) Co., Ltd.</td>
			<td>DELTA-320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drying oven</td>
			<td>Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>DHG-9070A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen sturgeon</td>
			<td>Huada Marine Industry Group Co., Ltd</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatograph-mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>TSQ Quantum XLS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidities incubator</td>
			<td>Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>LHS-250HC-II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharomyces cerevisiae</td>
			<td>Angel Yeast Co., Ltd</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spices</td>
			<td>Auchan Supermarket</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilization pot</td>
			<td>Longqiang Machinery Technology Co., Ltd.</td>
			<td>RHS-03-700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supelco</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>65&#956;m, PDMS/DVB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Texture analyzer</td>
			<td>Stable Micro Systems, Ltd.</td>
			<td>TA-XT2i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum package machine</td>
			<td>Quanzhou Yiminxin Electromechanical Co., Ltd.</td>
			<td>YMX-958-10L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of high-quality fermented fish product

Questo protocollo fornisce un metodo per la preparazione di prodotto di pesce fermentato industrializzato con storione (Aquilaria sinensis) prodotto di carne. Le procedure erano: (1) pretrattamento dello storione d'allevamento, tra cui decapitazione, eviscerazione, sfaldatura, pulizia e taglio; 2 cubetti di pesce marinanti in 6-12% (w/v) soluzione di sale (1:1, massa del cubo di pesce al volume della soluzione); (3) essiccare cubetti di pesce ad un contenuto d'acqua del 50-60% con aria calda (40-60 gradi centigradi) o sottovuoto; (4) fermentazione che coinvolge cubetti di pesce inoculanti con 0,4-1,6% (w/w) S. cerevisiae in soluzione di pesce a cubetti e fermentazione a 25-35 gradi centigradi per 6-10 h; (5) sigillare i cubetti di pesce in confezioni sottovuoto con soluzioni di marinatura e fermentazione; 6 sterilizzazione a 115-121 gradi centigradi per 10-20 min. Il prodotto di carne di storione preparato con questo metodo ha un gusto delizioso che è morbido e denso, ha vari tipi e grandi quantità di composti di sapore volatile come alcolti ed esteri che potrebbero mascherare l'odore di muffa e sgradevole dai pesci, ha sale moderato contenuto, ma buone proprietà di texture come alta elasticità, gommosità e masticabilità, e ha un colore ruggine brillante e un aspetto attraente. Questa nuova tecnica potrebbe essere applicata anche nella lavorazione di altri pesci per fornire convenienti snack a base di pesce che potrebbero essere conservati a temperatura ambiente. È adatto sia per i pesci marini che per i pesci d'acqua dolce.

La concentrazione di sale, il tempo di marinazione e la temperatura adatti rendono migliore la qualità strutturale del prodotto. Le migliori condizioni di marinatura sono state le seguenti: la concentrazione di sale dell'8% nella soluzione di marinatura; tempo di marinatura di 2 h; temperatura di marinatura di 10 gradi centigradi. Vedere La Figura 1.
Nel processo di essiccazione, il contenuto finale di umidità e la temperatura di essiccazione potrebbero influenz...

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Preparation of High-Quality Fermented Fish Product

L'obiettivo del protocollo è quello di fornire una tecnica di fermentazione del pesce industrializzata basata sull'inoculazione di Saccharomyces cerevisiae.

Preparazione di prodotti di pesce fermentato di alta qualità

This protocol provides a method for preparation of industrialized fermented fish product with sturgeon (Aquilaria sinensis) meat product. The procedures ...

Questa procedura produce un prodotto ittico fermentato di alta qualità con aroma di vino e potrebbe essere applicata nella produzione industriale. Questa tecnica conferisce al prodotto ittico un aspetto attraente, un sapore unico, un gusto delizioso e buone proprietà di consistenza. E questo prodotto può essere conservato a temperatura ambiente per almeno un anno.Per iniziare questa procedura, scongelare, pulire e pelle la carne di storione congelata come delineato nel protocollo di testo. Tagliare il pesce a cubetti. Quindi, mescolare i cubetti di pesce con una soluzione di sale dal 6 al 12% con un rapporto uno a uno a 10 gradi Celsius per una o tre ore.Quindi, mettere i cubetti di pesce marinati su una piastra di grigliatura in acciaio inossidabile e asciugarli con aria calda a una temperatura compresa tra 40 e 60 gradi Celsius per sei-10 ore. Per preparare il liquido speziato, mescolare le spezie tra cui 1,2 unità di scalogno, un'unità di zenzero, 0,6 unità di anice stellato, 0,6 unità di finocchio, 0,3 unità di tè verde e 0,3 unità di pepe con 40 unità di acqua. Far bollire per mezz'ora e raccogliere il filtrato.Per preparare la soluzione aromatica, mescolare spezie liquide, vino giallo, vino bianco, zucchero di canna, glutammato monosodico e aceto nelle frazioni di massa mostrate qui. Successivamente, mescolare i cubetti di pesce essiccato con la soluzione aromatica, inoculando da 0,4 a 1,6% saccharomyces cerevisiae con un rapporto uno a uno. Sigillare la miscela in un contenitore e fermentare a una temperatura compresa tra 25 e 35 gradi Celsius, per sei-10 ore.Mettere i cubetti di pesce fermentato in un pacchetto sottovuoto con soluzioni di marinatura e fermentazione e sigillare il pacchetto sottovuoto con una resistenza al vuoto di 0,085 megapascal, un tempo di tenuta di 3,6 secondi e un tempo di raffreddamento di 5,5 secondi. Quindi sterilizzare i cubetti di pesce imballati utilizzando una temperatura di sterilizzazione compresa tra 115 e 121 gradi Celsius per 10-20 minuti. In questo studio viene preparato un prodotto ittico fermentato di alta qualità.L'utilizzo di un'adeguata concentrazione di sale, tempo di marinatura e temperatura rende i prodotti di qualità strutturale migliore. Le migliori condizioni di marinatura sembrano essere una concentrazione di sale dell'8%E la soluzione marinatura, un tempo di marinatura di due ore. E una temperatura di marinatura di 10 gradi Celsius.Nel processo di essiccazione, il contenuto finale di umidità e la temperatura di asciugatura possono influenzare la consistenza e la qualità del sensore. Le migliori condizioni di essiccazione sembrano essere un contenuto di umidità dei cubetti di pesce essiccato del 55% e una temperatura di essiccazione di 50 gradi Celsius. Nel processo di fermentazione, l'aggiunta di saccharomyces cerevisiae, la temperatura e il tempo tutti hanno effetto sulle proprietà di gusto, sapore, colore e consistenza del pesce.Il pesce fermentato di successo ha punteggi elevati per gusto, sapore, colore e consistenza, con conseguente gusto armonioso, fragranza fermentativa, vinoso, colore ruggine, superficie brillante, caramello e consistenza al dente. Il prodotto ittico fallito ha i punteggi bassi per gusto, sapore, colore e consistenza con conseguente cattivo gusto, amarezza, acidità, pesca, colore pallido, superficie ruvida, sensazione di bocca grossolana e consistenza deteriorata. L'adeguata sterilizzazione e intensità sembra essere di 4,5 minuti.E una temperatura di sterilizzazione adeguata sembra essere di 121 gradi Celsius. Le considerazioni sull'archiviazione vengono quindi calcolate e determinate come indicato nel protocollo di testo. E la previsione per la durata di conservazione è di 264 giorni a 25 gradi Celsius o 205 giorni a 35 gradi Celsius.Quando si esegue questa procedura, è importante notare che sia la fermentazione che le fasi di sterilizzazione sono vitali per il successo di questa tecnica. Dopo aver appreso questa procedura, può essere utilizzato nella fermentazione di altre specie ittiche. In futuro, la fermentazione con altri ceppi potrebbe essere studiata.Come lactobacillus, staphylococcus, eccetera. regioni, assicurarsi di prendere precauzioni durante la sterilizzazione dei prodotti ittici, poiché temperature estremamente elevate potrebbero causare danni.

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Research

JoVE Journal

Biochemistry

Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications

This protocol demonstrates a simple sample preparation to reduce spatial heterogeneity in ion signals during matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) mass spectrometry. The heterogeneity of ion signals is a severe problem in MALDI, which results in poor data reproducibility and makes MALDI unsuitable for quantitative analysis. By regulating sample plate temperature during sample preparation, thermal-induced hydrodynamic flows inside droplets of sample solution are able to reduce the heterogeneity problem. A room-temperature sample preparation chamber equipped with a temperature-regulated copper base block that holds MALDI sample plates facilitates precise control of the sample drying condition. After drying of sample droplets, the temperature of sample plates is returned to room temperature and removed from the chamber for subsequent mass spectrometric analysis. The areas of samples are examined with MALDI-imaging mass spectrometry to obtain the spatial distribution of all components in the sample. In comparison with the conventional dried-droplet method that prepares samples under ambient conditions without temperature control, the samples prepared with the method demonstrated herein show significantly better spatial distribution and signal intensity. According to observations using carbohydrate and peptide samples, decreasing substrate temperature while maintaining the surroundings at ambient temperature during the drying process can effectively reduce the heterogeneity of ion signals. This method is generally applicable to various combinations of samples and matrices.

A protocol for reducing spatial heterogeneities of ion signals in MALDI mass spectrometry by regulating substrate temperature during sample drying processes is demonstrated.

Preparazione dei campioni MALDI omogenei per applicazioni quantitative

This protocol demonstrates a simple sample preparation to reduce spatial heterogeneity in ion signals during matrix-assisted laser desorption/ionization ...

Ricerca

Biochimica

A Filtration-based Method of Preparing High-quality Nuclei from Cross-linked Skeletal Muscle for Chromatin Immunoprecipitation

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful method to determine protein binding to chromatin DNA. Fiber-rich skeletal muscle, however, has been a challenge for ChIP due to technical difficulty in isolation of high-quality nuclei with minimal contamination of myofibrils. Previous protocols have attempted to purify nuclei before cross-linking, which incurs the risk of altered DNA-protein interaction during the prolonged nuclei preparation process. In the current protocol, we first cross-linked the skeletal muscle tissue collected from mice, and the tissues were minced and sonicated. Since we found that ultracentrifugation was not able to separate nuclei from myofibrils using cross-linked muscle tissue, we devised a sequential filtration procedure to obtain high-quality nuclei devoid of significant myofibril contamination. We subsequently prepared chromatin by using an ultrasonicator, and ChIP assays with anti-BMAL1 antibody revealed robust circadian binding pattern of BMAL1 to target gene promoters. This filtration protocol constitutes an easily applicable method to isolate high-quality nuclei from cross-linked skeletal muscle tissue, allowing consistent sample processing for circadian and other time-sensitive studies. In combination with next-generation sequencing (NGS), our method can be deployed for various mechanistic and genomic studies focusing on skeletal muscle function.

We present a filtration-based protocol to isolate high-quality nuclei from cross-linked mouse skeletal muscle wherein we removed the need for ultracentrifugation, making it easily applicable. We show that chromatin prepared from the nuclei is suitable for chromatin immunoprecipitation and likely chromatin immunoprecipitation sequencing studies.

Un metodo basato sulla filtrazione per preparare nuclei di alta qualità dal muscolo scheletrico incrociato per l&#39;immunoprecipitazione cromatina

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful method to determine protein binding to chromatin DNA. Fiber-rich skeletal muscle, however, has been a ...

Biosynthesis of a Flavonol from a Flavanone by Establishing a One-pot Bienzymatic Cascade

Flavonols are a major subclass of flavonoids with a variety of biological and pharmacological activities. Here, we provide a method for the in vitro enzymatic synthesis of a flavonol. In this method, Atf3h and Atfls1, two key genes in the biosynthetic pathway of the flavonols, are cloned and overexpressed in Escherichia coli. The recombinant enzymes are purified via an affinity column and then a bienzymatic cascade is established in a specific synthetic buffer. Two flavonols are synthesized in this system as examples and determined by TLC and HPLC/LC/MS analyses. The method displays obvious advantages in the derivation of flavonols over other approaches. It is time- and labor-saving and highly cost-effective. The reaction is easy to be accurately controlled and thus scaled up for mass production. The target product can be purified easily due to the simple components in the system. However, this system is usually restricted to the production of a flavonol from a flavanone.

The derivation of a flavonol is crucial for its application in healthcare and the food industry. Here, we provide a detailed protocol for the biosynthesis of a flavonol from a flavanone and discuss the crucial steps and its advantages over other approaches.

Biosintesi di un flavonolo da un Flavanone stabilendo una cascata bienzimatica a un vaso

Flavonols are a major subclass of flavonoids with a variety of biological and pharmacological activities. Here, we provide a method for the in vitro ...

Obtaining High-Quality Transcriptome Data from Cereal Seeds by a Modified Method for Gene Expression Profiling

The characterization of gene expression is dependent on RNA quality. In germinating, developing and mature cereal seeds, the extraction of high-quality RNA is often hindered by high starch and sugar content. These compounds can reduce both the yield and the quality of the extracted total RNA. The deterioration in quantity and quality of total RNA can subsequently have a significant impact on the downstream transcriptomic analyses, which may not accurately reflect the spatial and/or temporal variation in the gene expression profile of the samples being tested. In this protocol, we describe an optimized method for extraction of total RNA with sufficient quantity and quality to be used for whole transcriptome analysis of cereal grains. The described method is suitable for several downstream applications used for transcriptomic profiling of developing, germinating, and mature cereal seeds. The method of transcriptome profiling using a microarray platform is shown. This method is specifically designed for gene expression profiling of cereals with described genome sequences. The detailed procedure from microarray handling to final quality control is described. This includes cDNA synthesis, cRNA labelling, microarray hybridization, slide scanning, feature extraction, and data quality validation. The data generated by this method can be used to characterize the transcriptome of cereals during germination, in various stages of grain development, or at different biotic or abiotic stress conditions. The results presented here exemplify high-quality transcriptome data amenable for downstream bioinformatics analyses, such as the determination of differentially expressed genes (DEGs), characterisation of gene regulatory networks, and conducting transcriptome-wide association study (TWAS).

A method for transcriptome profiling of cereals is presented. The microarray-based gene expression profiling starts with the isolation of high-quality total RNA from cereal grains and continues with the generation of cDNA. After cRNA labelling and microarray hybridization, recommendations are given for signal detection and quality control.

Ottenere dati trascrittomi di alta qualità dai semi di cereali con un metodo modificato per la profilazione dell'espressione genica

The characterization of gene expression is dependent on RNA quality. In germinating, developing and mature cereal seeds, the extraction of high-quality ...

Single Cell Analysis Of Transcriptionally Active Alleles By Single Molecule FISH

Gene transcription is an essential process in cell biology, and allows cells to interpret and respond to internal and external cues. Traditional bulk population methods (Northern blot, PCR, and RNAseq) that measure mRNA levels lack the ability to provide information on cell-to-cell variation in responses. Precise single cell and allelic visualization and quantification is possible via single molecule RNA fluorescence in situ hybridization (smFISH). RNA-FISH is performed by hybridizing target RNAs with labeled oligonucleotide probes. These can be imaged in medium/high throughput modalities, and, through image analysis pipelines, provide quantitative data on both mature and nascent RNAs, all at the single cell level. The fixation, permeabilization, hybridization and imaging steps have been optimized in the lab over many years using the model system described herein, which results in successful and robust single cell analysis of smFISH labeling. The main goal with sample preparation and processing is to produce high quality images characterized by a high signal-to-noise ratio to reduce false positives and provide data that are more accurate. Here, we present a protocol describing the pipeline from sample preparation to data analysis in conjunction with suggestions and optimization steps to tailor to specific samples.&#160;

Single molecule RNA fluorescence in situ hybridization (smFISH) is a method to accurately quantify levels and localization of specific RNAs at the single cell level. Here, we report our validated lab protocols for wet-bench processing, imaging and image analysis for single cell quantification of specific RNAs.

Analisi a singola cellula di alleli trascrizionalmente attivi mediante FISH a singola molecola

Gene transcription is an essential process in cell biology, and allows cells to interpret and respond to internal and external cues. Traditional bulk ...

Nano-Differential Scanning Fluorimetry for Screening in Fragment-based Lead Discovery

Thermal shift assays (TSAs) examine how the melting temperature (Tm) of a target protein changes in response to changes in its environment (e.g., buffer composition). The utility of TSA, and specifically of nano-Differential Scanning Fluorimetry (nano-DSF), has been established over the years, both for finding conditions that help stabilize a specific protein and for looking at ligand binding by monitoring changes in the apparent Tm. This paper presents an efficient screening of the Diamond-SGC-iNEXT Poised (DSi-Poised) fragment library (768 compounds) by the use of nano-DSF, monitoring Tm to identify potential fragment binding. The prerequisites regarding protein quality and concentration for performing nano-DSF experiments are briefly outlined followed by a step-by-step protocol that uses a nano-liter robotic dispenser commonly used in structural biology laboratories for preparing the required samples in 96-well plates. The protocol describes how the reagent mixtures are transferred to the capillaries needed for nano-DSF measurements. In addition, this paper provides protocols to measure thermal denaturation (monitoring intrinsic tryptophan fluorescence) and aggregation (monitoring light back-scattering) and the subsequent steps for data transfer and analysis. Finally, screening experiments with three different protein targets are discussed to illustrate the use of this procedure in the context of lead discovery campaigns. The overall principle of the method described can be easily transferred to other fragment libraries or adapted to other instruments.

Monitoring changes in the melting temperature of a target protein (i.e., thermal shift assay, TSA) is an efficient method for screening fragment libraries of a few hundred compounds. We present a TSA protocol implementing robotics-assisted nano-Differential Scanning Fluorimetry (nano-DSF) for monitoring intrinsic tryptophan fluorescence and light back-scattering for fragment screening.

Fluorimetria a scansione nano-differenziale per lo screening nella scoperta di piombo basata su frammenti

Thermal shift assays (TSAs) examine how the melting temperature (Tm) of a target protein changes in response to changes in its environment (e.g., buffer ...

Preparation of High-Temperature Sample Grids for Cryo-EM

The sample grids for cryo-electron microscopy (cryo-EM) experiments are usually prepared at a temperature optimal for the storage of biological samples, mostly at 4 &#176;C and occasionally at room temperature. Recently, we discovered that the protein structure solved at low temperature may not be functionally relevant, particularly for proteins from thermophilic archaea. A procedure was developed to prepare protein samples at higher temperatures (up to 70 &#176;C) for cryo-EM analysis. We showed that the structures from samples prepared at higher temperatures are functionally relevant and temperature dependent. Here we describe a detailed protocol for preparing sample grids at high temperature, using 55 &#176;C as an example. The experiment made use of a vitrification apparatus modified using an additional centrifuge tube, and samples were incubated at 55 &#176;C. The detailed procedures were fine-tuned to minimize vapor condensation and obtain a thin layer of ice on the grid. Examples of successful and unsuccessful experiments are provided.

This paper provides a detailed protocol for preparing sample grids at temperatures as high as 70 &#176;C, prior to plunge freezing for cryo-EM experiments.

Preparazione di griglie di campionamento ad alta temperatura per crio-EM

The sample grids for cryo-electron microscopy (cryo-EM) experiments are usually prepared at a temperature optimal for the storage of biological samples, ...

The Extraction of Liver Glycogen Molecules for Glycogen Structure Determination

Liver glycogen is a hyperbranched glucose polymer that is involved in the maintenance of blood sugar levels in animals. The properties of glycogen are influenced by its structure. Hence, a suitable extraction method that isolates representative samples of glycogen is crucial to the study of this macromolecule. Compared to other extraction methods, a method that employs a sucrose density gradient centrifugation step can minimize molecular damage. Based on this method, a recent publication describes how the density of the sucrose solution used during centrifugation was varied (30%, 50%, 72.5%) to find the most suitable concentration to extract glycogen particles of a wide variety of sizes, limiting the loss of smaller particles. A 10 min boiling step was introduced to test its ability to denature glycogen degrading enzymes, thus preserving glycogen. The lowest sucrose concentration (30%) and the addition of the boiling step were shown to extract the most representative samples of glycogen.

An optimal sucrose concentration was determined for the extraction of liver glycogen using sucrose density gradient centrifugation. The addition of a 10 min boiling step to inhibit glycogen-degrading enzymes proved beneficial.

L'estrazione di molecole di glicogeno epatico per la determinazione della struttura del glicogeno

Liver glycogen is a hyperbranched glucose polymer that is involved in the maintenance of blood sugar levels in animals. The properties of glycogen are ...

Preparation of siRNA Mixture for Mitochondrial DNA Synthesis

To begin, prepare a 140 nano molar mix of small interfering RNA or siRNA by diluting the siRNA in optimum medium. Add the five microliters of the diluted mix to the wells of a black 384 well cell culture microplate. Prepare the appropriate amount of RNAiMAX transfection reagent solution in optimum medium and add 10 microliters to each well of the 384 well plate with a reagent dispenser.

Preparazione della miscela di siRNA per la sintesi del DNA mitocondriale

Preparazione di griglie di microscopia elettronica per criotomografia cellulare in situ

Sample Preparation for In Situ Cryotomography of Mammalian Cells

In situ cellular cryotomography is a powerful technique for studying complex objects in their native frozen-hydrated cellular context, making it highly relevant to cellular biology and virology. The potential of combining cryotomography with other microscopy modalities makes it a perfect technique for integrative and correlative imaging. However, sample preparation for in situ cellular tomography is not straightforward, as cells do not readily attach and stretch over the electron microscopy grid. Additionally, the grids themselves are fragile and can break if handled too forcefully, resulting in the loss of imageable areas. The geometry of tissue culture dishes can also pose a challenge when manipulating the grids with tweezers. Here, we describe the tips and tricks to overcome these (and other) challenges and prepare good-quality samples for in situ cellular cryotomography and correlative imaging of adherent mammalian cells. With continued advances in cryomicroscopy technology, this technique holds enormous promise for advancing our understanding of complex biological systems.

Autore in primo piano: Ottimizzazione della preparazione della griglia per la tomografia crioelettronica avanzata 

This method provides an accessible and flexible protocol for the preparation of electron microscopy (EM) grids for in situ cellular cryotomography and correlative light and electron microscopy (CLEM).

Preparazione del campione per la criotomografia in situ di cellule di mammifero

In situ cellular cryotomography is a powerful technique for studying complex objects in their native frozen-hydrated cellular context, making it highly ...