Name: multi-fiber photometry to record neural activity in freely-moving animals
Uploaded: 2019-10-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals at JoVE.com

이 작품은 캐나다의 자연 과학 및 공학 연구위원회 (NSERC : RGPIN-2017-06131)에서 C.P. C. C. P.에 대한 보조금에 의해 지원되었다 FRSQ 체르쉐르 부르시에입니다. 우리는 또한 이 연구 결과에 사용된 바이러스 성 벡터의 생산을 위한 Plateforme d'Outils Moléculaires (https://www.neurophotonics.ca/fr/pom)에게 감사합니다.

모든 실험은 캘리포니아 대학, 샌디에고, 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 캐나다 가이드의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 따라 수행되었으며 라발 대학 동물 보호대학의 승인을 받았습니다. 위원회.
1. CMOS (보완 금속 산화물 반도체) 카메라와 개별 또는 분기 패치 코드 사이의 광학 경로 정렬
<ol><li>5축 변환기의 모든 나사를 느슨하게 합니다(11, 그림 2</s...

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	<li>Gunaydin, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+Neural+Projection+Dynamics+Underlying+Social+Behavior.">Natural Neural Projection Dynamics Underlying Social Behavior.</a> Cell. 157 (7), 1535-1551 (2014).</li><li>Proulx, C. 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W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Neural+Circuit+Mechanism+for+Encoding+Aversive+Stimuli+in+the+Mesolimbic+Dopamine+System.">A Neural Circuit Mechanism for Encoding Aversive Stimuli in the Mesolimbic Dopamine System.</a> Neuron. 101 (1), 133-151 (2018).</li><li>Lerner, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intact-Brain+Analyses+Reveal+Distinct+Information+Carried+by+SNc+Dopamine+Subcircuits.">Intact-Brain Analyses Reveal Distinct Information Carried by SNc Dopamine Subcircuits.</a> Cell. 162 (3), 635-647 (2015).</li><li>Calipari, E. 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H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+Hypothalamic+Network+Dynamics+for+Appetitive+and+Consummatory+Behaviors.">Visualizing Hypothalamic Network Dynamics for Appetitive and Consummatory Behaviors.</a> Cell. 160 (3), 516-527 (2014).</li></ol>

섬유 광도계는 연구원이 자유롭게 움직이는 동물에 있는 정의된 신경 인구에서 벌크 칼슘 역학을 기록할 수 있는 접근접근접근입니다. 이 방법은 강제 수영 테스트2,공포 조절18,사회적 상호 작용1,4및 기타7과같은 "운동 무거운"작업을 포함하여 다양한 행동 테스트와 결합 될 수있습니다. <su...

동물의 행동의 특정 측면과 신경 반응을 상관 시키는 능력은 특정 신경 세포 의 특정 그룹 지시 또는 행동 또는 자극에 응답에 재생 하는 역할을 이해 하는 데 중요 하다. 동물 행동의 복잡성을 감안할 때, 가장 간단한 행동에도 영향을 미칠 수있는 수많은 내부 상태와 외부 자극을 감안할 때, 단일 시험 해상도로 신호를 기록하면 연구원이 이를 극복하는 데 필요한 도구를 갖추게됩니다. 제한.
섬유 광도계는 다른 생체 내 기록 기술과 비교하여 상대적으로 단순성, 높은 신호 대 잡음 비율 및 다양한 기록 능력 으로 인해 시스템 신경 과학 분야의 많은 연구자들이 선택하는 기술이 되었습니다. 행동 패러다임1,2,3,4,5,6,7,8. 기존의 전기 생리학적 방법과 는 달리, 광도측정은 유전자 부호가 코딩된 칼슘 지표(GECIs, GCaMP 계열)와 함께 가장 일반적으로 사용되는 광학접근법9. GECIs는 칼슘에 결합되어 있는지 여부에 따라 형광 능력을 변경합니다. 뉴런의 칼슘 의 내부 농도는 매우 엄격하게 조절되고 전압 게이트 칼슘 채널이 열리기 때문에 뉴런이 작용 전위를 발사할 때, 내부 칼슘 농도가 일시적으로 증가하여 일시적인 증가를 초래합니다. 형광에 GECI의 능력, 신경발사에대한 좋은 프록시가 될 수 있습니다 9 .
광섬유 광도 측정을 사용하면 여기 광이 얇고 다중 모드 광섬유를 뇌로 향하며 방출 신호가 동일한 섬유를 통해 다시 수집됩니다. 이러한 광섬유는 가볍고 구부릴 수 있기 때문에 동물이 크게 방해받지 않고 움직일 수 있으므로 이 기술은 다양한 행동 테스트 및 조건과 호환됩니다. 전체 내부 반사를 유지할 수 있는 반경을 초과하는 광섬유 패치 코드의 빠른 움직임이나 굽힘과 같은 일부 조건은 신호 아티팩트를 유발할 수 있습니다. 소음의 신호를 모호하게 하기 위해 "isosbestic 지점"으로 알려진 GCaMP의 속성을 악용할 수 있습니다. 간단히 말해서, GCaMP를 사용하면 여기 빛의 파장이 왼쪽으로 이동함에 따라 칼슘 결합 상태에서의 방출이 감소하고 칼슘 언바운드 상태에서의 방출이 소폭 증가합니다. 이 두 방출의 상대강도가 동일한 지점을 isosbestic 점이라고 합니다. 이 시점에서 GCaMP가 흥분되면 방출은 내부 칼슘 농도의 변화에 의해 영향을받지 않으며 신호의 차이는 광섬유 패치 코드의 과감 또는 신경 조직의 움직임으로 인한 신호감 쇠약으로 인해 가장 빈번합니다. 이식된 섬유에 상대적입니다.
단일 단위 전기 생리학은 단일 셀 및 단일 스파이크 레벨 해상도로 인해 생체 내에서 자유롭게 움직이는 기록의 금 본위제입니다. 그러나, 기록되는 세포의 분자 동일을 찾아내기 어려울 수 있고, 사후 분석은 아주 힘들 수 있습니다. 섬유 광도측정은 단세포 분해능이 없지만, 연구자들은 전통적인 기술로는 해결할 수 없는 질문을 할 수 있습니다. 바이러스 성 전략을 형질전환 동물과 결합하여 GECIs의 발현은 축축한에서 직접 칼슘 신호를 모니터링하여 수행 할 수있는 인구 또는 투영 정의 신경 활동을 기록하기 위해 유전적으로 정의 된 신경 유형으로 지시 될 수 있습니다. 터미널10,11. 더욱이, 다중 광섬유 캐뉼라를 이식함으로써, 동일한 동물12,13에서여러 뇌 영역 및 경로로부터의 신경 활동을 동시에 모니터링할 수 있다.
이 원고에서는 단일 및 다중 섬유 광도 측정기, 칼슘 독립적 인 아티팩트를 수정하는 방법 및 모노 및 이중 색상 기록을 수행하는 방법을 자세히 설명합니다. 또한 질문할 수 있는 질문 유형과 증가하는 복잡성 수준에 대한 예제도 제공합니다(그림 1참조). 이 프로토콜에 자세히 설명된 다중 섬유 기록을 위한 광섬유 광도계 설정은 https://sites.google.com/view/multifp/hardware 있는 재료 목록을 사용하여 구축할 수있습니다(그림 2).
GCaMP6 또는 그 변이체에서 칼슘 독립적 및 칼슘 의존형 형광 방출을 위해 410 nm 및 470 nm 여기 파장 모두에 시스템을 장착하는 것이 필수적입니다. 사용자 정의 구축 설정또는 시스템을 실행할 수있는 소프트웨어가없는 경우, 무료 오픈 소스 프로그램 Bonsai (http://www.open-ephys.org/bonsai/)를 사용할 수 있습니다. 대안적으로, 광섬유 광도측정은 MATLAB(예를 들어, https://github.com/deisseroth-lab/multifiber)12 또는 다른 프로그래밍 언어14를통해 실행될 수 있다. 시스템의 소프트웨어 및 하드웨어는 410 nm 및 470 nm LED와 카메라, 이미지 추출(그림 2)및 관심 영역 (ROI)의 평균 형광 강도를 모두 조작 할 수 있어야합니다. 이미지를 볼 수 있습니다. 출력은 패치 코드의 각 섬유에서 470 nm 및 410 nm LED로 기록된 평균 강도 값의 테이블이어야 합니다. 다중 섬유 실험을 수행할 때, 400 μm 번들 섬유는 마우스의 움직임을 제한할 수 있다. 이러한 경우 유연성을 제공하는 200 μm 패치 코드를 사용하는 것이 좋습니다. 또한 마우스의 훈련 중에 더 작은 더미 케이블을 사용할 수도 있습니다.
광섬유 광도 측정을 획득하는 동안 관심 있는 이벤트에 대한 시간 포인트를 추출하는 것이 중요합니다. 시스템이 특정 이벤트에 대해 TTL을 통합하는 기본 제공 시스템을 쉽게 제공하지 않는 경우, 다른 전략은 실험 중에 특정 시간 및 이벤트에 맞게 기록된 개별 타임포인트에 타임스탬프를 할당하는 것입니다. 타임 스탬프는 컴퓨터 시계를 사용하여 수행 할 수 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1/4&#34;-20 Stainless Steel Cap Screw, 1&#34; Long</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SH25S100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4&#34;-20 Stainless Steel Cap Screw, 1/2&#34; Long</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SH25S050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4&#34;-20 Stainless Steel Cap Screw, 3/8&#34; Long</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SH25S038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;m, 0.50 NA, SMA-SMA Fiber Patch Cable</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>M59L01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12.7 mm Optical Post</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>TR30/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12.7 mm Pedestal Post Holder</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>PH20EM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 V, 2.4 A Power Supply Unit with 3.5 mm Jack Connector for T-Cube</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>KPS101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x objective</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>RMS20X</td>
			<td>#10 in Figure 2, #11 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 mm Cage Cube with Dichroic Filter Mount</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>CM1-DCH/M</td>
			<td>#8-9 in Figure 2, #8-10 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>405 nm LED</td>
			<td>Doric Lenses</td>
			<td>CLED_405</td>
			<td>#2 in Figure 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>410 nm bandpass filter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FB410-10</td>
			<td>#5 in Figure 2; #7 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>465 nm. LED</td>
			<td>Doric Lenses</td>
			<td>CLED_465</td>
			<td>#1 in Figure 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>470 nm bandpass filter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FB470-10</td>
			<td>#4 in Figure 2; #6 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>560 nm bandpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-560/14-25</td>
			<td>#5 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>560 nm LED</td>
			<td>Doric Lenses</td>
			<td>CLED_560</td>
			<td>#1 in Figure 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-axis kinematic Mount</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>K5X1</td>
			<td>#11 in Figure 2, #12 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Achromatic Doublet</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AC254-035-A-ML</td>
			<td>#7 in Figure 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adaptor for 405 collimator</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AD11F</td>
			<td>#3 in Figure 2; #4 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adaptor for ajustable collimator</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AD127-F</td>
			<td>#3 in Figure 2; #4 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum Breadboard</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>MB1824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamping Fork</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>CF125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cube connector</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>CM1-CC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual 493/574 dichroic</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF493/574-Di01-25x36</td>
			<td>#10 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emission filter for GCaMP6</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-535/22-25</td>
			<td>#6 in Figure 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enclosure with Black Hardboard Panels</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>XE25C9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Externally SM1-Threaded End Cap for Machining</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1CP2M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast-change SM1 Lens Tube Filter Holder</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1QP</td>
			<td>#4-6 in Figure 2, #5-7 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixed Collimator for 405 nm light</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>F671SMA-405</td>
			<td>#3 in Figure 2; #4 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixed collimator for 470 and 560 nm light</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>F240SMA-532</td>
			<td>#3 in Figure 2; #4 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Green emission filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-520/35-25</td>
			<td>In light beam splitter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Resolution USB 3.0 CMOS Camera</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>DCC3260M</td>
			<td>#13 in Figure 2, #15 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light beam splitter</td>
			<td>Neurophotometrics</td>
			<td>SPLIT</td>
			<td>#14 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Longpass Dichroic Mirror, 425 nm Cutoff</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>DMLP425R</td>
			<td>#8 in Figure 2, #9 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Longpass Dichroic Mirror, 495 nm Cutoff</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF495-Di03</td>
			<td>#9 in Figure 2, #8 in Figure 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metabond dental cement</td>
			<td>C&#38;B</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M8 - M8 cable</td>
			<td>Doric Lenses</td>
			<td>Cable_M8-M8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optic fiber cannulas</td>
			<td>Doric Lenses</td>
			<td></td>
			<td>Need to specify that these will be used to photometry experiments requiring low autofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optic fiber Patchcords</td>
			<td>Doric Lenses</td>
			<td></td>
			<td>Need to specify that these will be used to photometry experiments requiring low autofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red emission filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-600/37-25</td>
			<td>In light beam splitter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 LabJack</td>
			<td>LabJack</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-cube LED Driver</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>LEDD1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB 3.0 I/O Cable, Hirose 25, for DCC3240</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>CAB-DCU-T3</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

multi-fiber photometry to record neural activity in freely-moving animals

자유롭게 움직이는 동물에서 뉴런 그룹의 활동을 기록하는 것은 어려운 일입니다. 더욱이, 두뇌는 더 작고 더 작은 기능 적인 하위 그룹으로 해부되기 때문에, 뉴런의 투영 및/또는 유전적으로 정의된 하위 집단에서 기록하는 것이 가장 중요하게 됩니다. 섬유 광도 측정은 이러한 문제를 극복할 수 있는 접근가능하고 강력한 접근 방식입니다. 광학 및 유전 적 방법론을 결합하여, 신경 활동은 쉽게 측정 할 수있는 광학 신호로 신경 활동을 변환 유전자 부호 칼슘 지표를 표현하여 깊은 뇌 구조에서 측정 할 수 있습니다. 현재 프로토콜은 다중 섬유 광도 계열 시스템의 구성 요소, 빛을 전달하고 수집하는 깊은 뇌 구조에 액세스하는 방법, 모션 아티팩트를 설명하는 방법, 형광 신호를 처리하고 분석하는 방법을 자세히 설명합니다. 이 프로토콜은 단일 또는 다중 이식된 광섬유에서 단일 및 이중 컬러 이미징을 수행할 때 실험적 고려 사항을 자세히 설명합니다.

행동 반응의 신경 상관 관계는 다양한 요인에 따라 달라질 수 있습니다. 이 예에서는, 우리는 외측 하베눌라(LHb)에서 종결되는 측면 시상하부 영역(LHA)으로부터 축삭 말단의 활성을 측정하기 위해 생체 내 섬유 광측측정을 사용했다. 야생형 마우스는 LHA에서 GCaMP6s(AAV-hSyn-GCaMP6s)를 인코딩하는 아데노 관련 바이러스(AAV)를 주입하고 광섬유를 LHb 바로 위에 팁으로 이식하였다(도4</strong...

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Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

이 프로토콜은 다중 섬유 광도 측정 기록을 구현하고 수행하는 방법, 칼슘 독립적 인 아티팩트를 수정하는 방법 및 이중 색상 광도계 이미징에 대한 중요한 고려 사항을 자세히 설명합니다.

자유롭게 움직이는 동물의 신경 활동을 기록하는 다중 섬유 광도 측정법

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

섬유 광측정 CSOM 이미징은 유전적으로 인코딩된 사용자 지정 표시기와 광섬유를 결합하여 자유롭게 움직이는 동물의 신경 활동을 모니터링합니다. 어떤 신경의 특정 그룹 감독 또는 행동 또는 자극에 응답에서 재생 하는 방법을 이해 하는 것이 중요 하다. 이 기술은 그들의 연결 또는 유전 단면도에 의해 정의된 특정 두뇌 지구에서 기록하는 접근가능한 쪽입니다, 노이즈에 신호를 분리하기 위하여 통제에 내장된.프로세서를 시연하는 것은 내 실험실대학원생인 에카테리나 화성노바입니다. 먼저 5축 변환기의 모든 나사를 느슨하게 합니다. 패치 코드에 5축 변환기에 부착된 어댑터에 나사를 고정합니다.그런 다음 470 나노미터 의 발광광을 저전력으로 켜고 섬유의 끝을 자동 형광 플라스틱 슬라이드를 가리킵니다. 라이브 모드에서 무료 금속 산화물 반도체 또는 CMOS 카메라의 다음 기록. 게인을 늘리거나 목표의 초점에 이미지가 표시될 때까지 조회 테이블을 조정합니다.470 나노미터 광이 카메라에서 이미지를 해결할 수 있을 때까지 패치 코드의 SMA 또는 FC 끝의 섬유를 중심으로 하는 것을 목표로 5축 번역기를 진행합니다. 마지막으로 이미지가 중심이 되고 잘 해결될 때까지 X 및 Y 축을 조정합니다. 패치 코드의 바리올 끝에서 방출되는 빛을 시각화하여 등위축원으로 표시되어야 합니다.섬유를 더 잘 시각화하기 위해 모든 여기 라이트를 켜서 시작합니다. 그리고 픽셀이 포화되지 않고 섬유의 선명한 이미지가 존재되도록 카메라 이득을 조정합니다. 그런 다음 예비 이미지를 가져 가라.관심 영역 또는 섬유 주위에 ROIS를 그립니다. 그리고 기록 하는 동안 평균 강도 값의 측정을 위해 그들을 유지 합니다. 여러 섬유 레코딩의 경우 모든 섬유의 라이브 레코딩으로 독립적으로 테스트합니다.광원쪽으로 하나의 섬유를 가리키고 손가락으로 누릅니다. 채널의 변동을 관찰합니다. 그런 다음 섬유 의 끝에 컬러 테이프를 적용하여 어떤 섬유에 해당하는 ROI에 해당하는 라벨을 부착합니다.마지막으로 스탠드, 클램프 및 홀더를 사용하여 경기장 위에 패치 코드를 걸어 서 녹음 영역을 설정합니다. 마지막으로, 동물이 섬유의 길이에 의해 움직임에 제한되지 않고 자유롭게 전체 경기장 전체에 걸쳐 이동할 수 있는지 확인하십시오. 먼저 패치 코드의 섬유의 단부 끝을 눈으로 검사하고 미니 섬유 현미경으로 검사합니다.섬유표면이 긁힌 경우 섬유 연마 필름을 사용하여 섬유질을 미세한 모래로 재연마합니다. 그런 다음 70 %에탄올과 면 팁 어플리케이터로 패치 코드의 단부 끝을 청소하십시오. 70%에탄올과 면 팁 어플리케이터를 사용하여 광섬유 캐뉼라를 청소하십시오.검은 수축 튜브로 덮인 세라믹 스플릿 슬리브를 사용하여 패치 코드의 바리올 끝을 이식된 섬유에 연결합니다. 연결 중에 소매가 꽉 되어 있는지 확인합니다. 동물이 몇 분 동안 회복하도록 허용하십시오.그런 다음 광학 신호 녹음을 시작하고 실험을 실행합니다. 녹화하는 동안 품질 녹음을 보장하기 위해 라이브 추적에주의 깊게 주의하십시오. 그리고 슬리브가 충분히 단단하지 않다는 것을 나타내는 신호의 점프를 조심하십시오.이중 색 레코딩의 경우, 적색 형광 칼슘 센서와 적절한 이색 거울 및 필터를 자극하기 위해 광측정 시스템에 516 나노미터 LED를 추가합니다. 그런 다음 목표와 CMOS 카메라 사이에 이미지 스플리터를 추가하여 녹색 및 빨간색 방출 파 길이를 분리합니다. 마지막으로, 빨간색과 녹색의 모든 섬유 주위에 ROIS를 그립니다.해당 섬유 및 채널로 각 ROI를 명확하게 식별해야 합니다. 470 나노미터 및 560 나노미터 LED로 동시 여기를 트리거하고 410 나노미터 LED로 대체합니다. 결과는, 측정된 형광이 LHA-LHB 통로의 활성화를 가진 마우스를 위한 공기 퍼프의 투여와 동시에 현저하게 증가하였다.그러나, 녹색 형광 단백질 또는 GFP를 발현하는 마우스에서는, 공기 퍼프의 투여 중에 신호의 변화가 검출되지 않았다. 이 기술은 연구원이 다른 두뇌 지구에 있는 세포의 특정 모형에서 합리적으로 기록하는 것을 허용합니다. 동물이 자유롭게 행동하는 동안.이것은 행동과 관련있는 이 두뇌 지구의 기능을 해부하는 기능을 추가합니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

High-density EEG Recordings of the Freely Moving Mice using Polyimide-based Microelectrode

Polyimide 기반 Microelectrode를 사용하여 자유롭게 이동 마우스의 고밀도 뇌파 레코딩

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a ...

연구

신경과학

Design and Assembly of an Ultra-light Motorized Microdrive for Chronic Neural Recordings in Small Animals

작은 동물의 만성 신경 레코딩을위한 초경량 동력 Microdrive의 설계 및 조립

The ability to chronically record from populations of neurons in freely behaving animals has proven an invaluable tool for dissecting the function of ...

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust (Schistocerca Americana) Olfactory Circuits

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust Schistocerca Americana Olfactory Circuits

메뚜기에 신경 활동을 특성화하기 위해 다중 단위 기록 방법 (<em&gt; Schistocerca 아메리카나</em&gt;) 강한 회로

Detection and interpretation of olfactory cues are critical for the survival  of many organisms. Remarkably, species across phyla have strikingly similar ...

Recording Single Neurons' Action Potentials from Freely Moving Pigeons Across Three Stages of Learning

자유롭게 학습의 세 단계에 걸쳐 비둘기를 이동에서 단일 신경 세포 &#39;활동 전위를 기록

While the subject of learning has attracted immense interest from both behavioral and neural scientists, only relatively few investigators have observed ...

Neural Activity Propagation in an Unfolded Hippocampal Preparation with a Penetrating Micro-electrode Array

관통 마이크로 전극 배열을 펼친 해마 준비에 신경 활동 전파

This protocol describes a method for preparing a new in vitro flat hippocampus preparation combined with a micro-machined array to map neural activity in ...

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees (Bombus terrestris)

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees Bombus terrestris

소설 행동 분석은 (엉망으로 꿀벌을 자유롭게 이동 개인의 미각 응답을 조사하기<em&gt; 뒤의 terrestris</em&gt;)

Generalist pollinators like the buff-tailed bumble bee, Bombus terrestris, encounter both nutrients and toxins in the floral nectar they collect from ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

새로운 방법으로 자유롭게 움직이는 신생아 쥐의 뇌파 기록

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Simultaneous Recordings of Cortical Local Field Potentials, Electrocardiogram, Electromyogram, and Breathing Rhythm from a Freely Moving Rat

대뇌 피 질의 로컬 필드 전위, 심전도, 치십시오, 그리고 자유롭게 움직이는 쥐에서 리듬 호흡의 동시 녹음

Monitoring the physiological dynamics of the brain and peripheral tissues is necessary for addressing a number of questions about how the brain controls ...

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets

자유롭게 이동 Piglets에서 비 침 투 적인 뇌 파 기록

The method allows the recording of high-quality electroencephalograms (EEGs) from freely moving piglets directly in the pigpen. We use a one-channel ...

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

자유롭게 이동 하는 쥐에서 뇌 파 기록 하는 동안 흥분 성의 아미노산의 Microdialysis

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...