Name: experimental approach to examine leptin signaling in the carotid bodies and its effects on control of breathing
Uploaded: 2019-10-25T13:30:00
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R01HL138932, RO1HL133100, RO1HL128970, AHACDA34700025

Todos los protocolos experimentales han sido aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (MO18M211).
1. Infusión de leptina
NOTA: Con el fin de examinar el efecto de la leptina en la respiración, infundemos leptina por vía subcutánea en ratones C57BL/6J magros por una bomba osmótica para elevar los niveles de leptina circulante a los observados en ratones obesos.
<ol><li>
Preparación de la bomba osmótica</str...

<ol>
	<li>O'donnell, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+prevents+respiratory+depression+in+obesity.">Leptin prevents respiratory depression in obesity.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 159, 1477-1484 (1999).</li><li>Polotsky, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+gender+exacerbates+respiratory+depression+in+leptin-deficient+obesity.">Female gender exacerbates respiratory depression in leptin-deficient obesity.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 164, 1470-1475 (2001).</li><li>Bassi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+leptin+replacement+enhances+chemorespiratory+responses+in+leptin-deficient+mice+independent+of+changes+in+body+weight.">Central leptin replacement enhances chemorespiratory responses in leptin-deficient mice independent of changes in body weight.</a> Pflu&#776;gers Archiv: European Journal of Physiology. 464, 145-153 (2012).</li><li>Inyushkina, E. M., Merkulova, N. A., Inyushkin, A. 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V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+immunoreactive-leptin+concentrations+in+normal-weight+and+obese+humans.">Serum immunoreactive-leptin concentrations in normal-weight and obese humans.</a> New England Journal of Medicine. 334, 292-295 (1996).</li><li>Maffei, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+levels+in+human+and+rodent:+measurement+of+plasma+leptin+and+ob+RNA+in+obese+and+weight-reduced+subjects.">Leptin levels in human and rodent: measurement of plasma leptin and ob RNA in obese and weight-reduced subjects.</a> Nature Medicine. 1, 1155-1161 (1995).</li><li>Phipps, P. R., Starritt, E., Caterson, I., Grunstein, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+serum+leptin+with+hypoventilation+in+human+obesity.">Association of serum leptin with hypoventilation in human obesity.</a> Thorax. 57, 75-76 (2002).</li><li>Berger, S., Polotsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+and+Leptin+Resistance+in+the+Pathogenesis+of+Obstructive+Sleep+Apnea:+A+Possible+Link+to+Oxidative+Stress+and+Cardiovascular+Complications.">Leptin and Leptin Resistance in the Pathogenesis of Obstructive Sleep Apnea: A Possible Link to Oxidative Stress and Cardiovascular Complications.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2018, 5137947 (2018).</li><li>Ribeiro, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+blunts+the+effects+of+leptin+on+ventilation+and+on+carotid+body+activity.">High fat diet blunts the effects of leptin on ventilation and on carotid body activity.</a> The Journal of Physiology. 96, 3187-3199 (2018).</li><li>Yuan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+signaling+in+the+carotid+body+regulates+a+hypoxic+ventilatory+response+through+altering+TASK+channel+expression.">Leptin signaling in the carotid body regulates a hypoxic ventilatory response through altering TASK channel expression.</a> Frontiers in Physiology. 9, 249 (2018).</li><li>Caballero-Eraso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+acts+in+the+carotid+bodies+to+increase+minute+ventilation+during+wakefulness+and+sleep+and+augment+the+hypoxic+ventilatory+response.">Leptin acts in the carotid bodies to increase minute ventilation during wakefulness and sleep and augment the hypoxic ventilatory response.</a> The Journal of Physiology. 591, 151-172 (2018).</li><li>Jun, J. C., Shin, M. K., Yao, Q., Devera, R., Fonti-Bevans, S., Polotsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermoneutrality+modifies+the+impact+of+hypoxia+on+lipid+metabolism.">Thermoneutrality modifies the impact of hypoxia on lipid metabolism.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 304, 424-435 (2012).</li><li>Polotsky, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+interrupted+leptin+pathways+on+ventilatory+control.">Impact of interrupted leptin pathways on ventilatory control.</a> Journal of Applied Physiology. 96, 991-998 (2004).</li><li>Pho, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+leptin+replacement+on+sleep-disordered+breathing+in+the+leptin-deficient+ob/ob+mouse.">The effect of leptin replacement on sleep-disordered breathing in the leptin-deficient ob/ob mouse.</a> Journal of Applied Physiology. 120, 78-86 (2016).</li><li>Hernandez, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+whole+body+plethysmography+system+for+the+continuous+characterization+of+sleep+and+breathing+in+a+mouse.">Novel whole body plethysmography system for the continuous characterization of sleep and breathing in a mouse.</a> Journal of Applied Physiology. 112, 671-680 (2012).</li><li>Powell, F. L., Milsom, W. K., Mitchell, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+domains+of+the+hypoxic+ventilatory+response.">Time domains of the hypoxic ventilatory response.</a> Respiration Physiology. 112, 123-134 (1998).</li><li>Drorbaugh, J. E., Fenn, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+barometric+method+for+measuring+ventilation+in+newborn+infants.">A barometric method for measuring ventilation in newborn infants.</a> Pediatrics. 16, 81-87 (1955).</li><li>Duffin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+ventilatory+response+to+hypoxia.">Measuring the ventilatory response to hypoxia.</a> The Journal of Physiology. 587, 285-293 (2007).</li><li>Teppema, L. J., Dahan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ventilatory+Response+to+Hypoxia+in+Mammals:+Mechanisms,+Measurement,+and+Analysis.">The Ventilatory Response to Hypoxia in Mammals: Mechanisms, Measurement, and Analysis.</a> Physiological Reviews. 90, 675-754 (2010).</li><li>Nurse, C. A., Fearon, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carotid+body+chemoreceptors+in+dissociated+cell+culture.">Carotid body chemoreceptors in dissociated cell culture.</a> Microscopy Research and Technique. 59, 249-255 (2002).</li><li>Kumar, P., Prabhakar, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+chemoreceptors:+function+and+plasticity+of+the+carotid+body.">Peripheral chemoreceptors: function and plasticity of the carotid body.</a> Comprehensive Physiology. 2, 141-219 (2012).</li><li>Roux, J. C., Peyronnet, J., Pascual, O., Dalmaz, Y., Pequignot, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+and+central+neurochemical+reorganisation+of+O2+chemoreflex+after+carotid+sinus+nerve+transection+in+rat.">Ventilatory and central neurochemical reorganisation of O2 chemoreflex after carotid sinus nerve transection in rat.</a> The Journal of Physiology. 522, 493-501 (2000).</li></ol>

El enfoque principal de nuestro estudio fue examinar los efectos respiratorios de la señalización de la leptina en el CB. Se han desarrollado varios protocolos para evaluar el papel de la leptina de manera mecanicista. En primer lugar, se analizó la contribución específica de CB al HVR mediante una cuantificación cuidadosa de la HVR durante los primeros 2 minutos de exposición hipoxica. En segundo lugar, la pertinencia de la cooperación técnica en la regulación ascendente mediada por la leptina del control de l...

Un adipocitos produjo leptina hormona actúa en el hipotálamo para suprimir la ingesta de alimentos y aumentar la tasa metabólica. Los estudios realizados en nuestro laboratorio1,2 y por otros investigadores3,4 mostraron que la leptina aumenta la respuesta ventilatoria hipercapnica (HVR) previniendo la hipoventilación por obesidad en la leptina obesidad deficiente. Sin embargo, la mayoría de los individuos obesenes tienen altos niveles de leptina plasmática y demuestran resistencia a los efectos metabólicos y respiratorios de la hormona5,6,7,8. La resistencia a la leptina es multifactorial, pero la permeabilidad limitada de la barrera hematoencefálica (BBB) a la leptina juega un papel importante. Proponemos que la leptina actúe por debajo de BBB en un órgano clave de sensibilidad hipóxica periférica, los cuerpos carótidos (CB), para defender la respiración en individuos obesos. Los OC expresan la larga isoforma funcional del receptor de leptina, LepRb, pero el papel de LA CB en los efectos respiratorios de la leptina no ha sido suficientemente aclarado9,10.
El objetivo de nuestro método era examinar el efecto de la señalización de la leptina en el CB en el HVR. Nuestra justificación era realizar (a) la pérdida de experimentos de función infundiendo leptina en ratones con cuerpos carótidos intactos y cuerpos carótidos denervados seguidos de mediciones de HVR; (b) ganancia de experimentos de función en ratones db/db carentes de LepRb, en el que medimos el HVR al inicio y después de la expresión de LepRb exclusivamente en CB. La ventaja de nuestras técnicas fue que realizamos todos nuestros experimentos en ratones sin restricciones sin restricciones durante el sueño y la vigilia. Investigadores anteriores realizaron sus experimentos bajo anestesia9 o no midieron los efectos de la leptina durante el sueño10. Además, nuestro estudio es el primero en utilizar un enfoque único de ganancia de función con la expresión lepRb selectiva en CB descrito anteriormente.
En el contexto amplio, nuestro enfoque puede generalizarse a otros receptores expresados en CB y su papel en la sensibilidad hipoxica. Los investigadores pueden infundir un ligando a un receptor de interés y medir el HVR al inicio y después de la denervación del CB. Como enfoque complementario, un receptor de interés se puede sobreexpresar en las mediciones de CB y HVR se puede realizar antes y después de la sobreexpresión utilizando nuestra tecnología descrita en este manuscrito.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1ml Insulin Syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x PBS (pH 7.4)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>500 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-Lacz</td>
			<td>Dr. Christopher Rhodes (University of Chicago)</td>
			<td></td>
			<td>1x1010 pfu/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-LepRb-GFP</td>
			<td>Vector Biolabs</td>
			<td>ADV-263380</td>
			<td>2-5x1010 pfu/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic cart</td>
			<td>Atlantic Biomedical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Purdue Products Ltd.</td>
			<td>12496-0757-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Buprenex)</td>
			<td>Reckitt Benckiser Healthcare Ltd.</td>
			<td>12496-0757-5</td>
			<td>0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6J</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td>Mice Strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Gauze Sponges</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>db/db</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>000697</td>
			<td>Mice Strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>502017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Chart</td>
			<td>Data Science International (DSI)</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Spring Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>14124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Ox Plus</td>
			<td>STARR Life Sciences Corp.</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Ox Plus Collar Sensor</td>
			<td>STARR Life Sciences Corp.</td>
			<td>015022-2</td>
			<td>Medium Collar Clip Special 7&#8221;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Whole Body Plethysmography Chamber</td>
			<td>Data Science International (DSI)</td>
			<td>PLY3211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ohio Care Plus Incubator</td>
			<td>Ohmeda</td>
			<td>HCHD000173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>501753-G</td>
			<td>Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmotic Pump</td>
			<td>Alzet</td>
			<td>1003D</td>
			<td>1ul per hour, 3 days</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse Leptin protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>498-OB-05M</td>
			<td>5mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>RICCA Chemical</td>
			<td>7210-16</td>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Suture</td>
			<td>DemeTech</td>
			<td>DT-639-1</td>
			<td>Silk, size 6-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td>Innovative Calibration Solutions (INNOCAL)</td>
			<td>EW 20250-91</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental approach to examine leptin signaling in the carotid bodies and its effects on control of breathing

Una leptina hormonal producida por adipocitos es un potente estimulante respiratorio, que puede desempeñar un papel importante en la defensa de la función respiratoria en la obesidad. Los cuerpos carótidos (CB), un órgano clave de sensibilidad hipóxitica periférica, expresan la larga isoforma funcional del receptor de leptina (LepRb), pero el papel de la señalización de la leptina en el control de la respiración no ha sido completamente aclarado. Examinamos la respuesta ventilatoria hipoxica (HVR) (1) en ratones C57BL/6J antes y después de la perfusión de leptina al inicio y después de la denervación del CB; (2) en ratones db/db con deficiencia de LepRben línea de base y después de la sobreexpresión de LepRb en los C. En ratones C57BL/6J, el aumento de la leptina en la HVR y los efectos de la leptina en la RVR fueron abolidos por la denervación del CB. En ratones db/db, la expresión LepRb en CB aumentó el HVR. Por lo tanto, llegamos a la conclusión de que la leptina actúa en CB para aumentar las respuestas a la hipoxia.

La perfusión continua de leptina aumentó significativamente la HVR en ratones C57BL/6J magros de 0,23 a 0,31 ml/min/g/FiO2 (P < 0,001, Figura 2)11. El CSND abolió el aumento inducido por la leptina en la VRH(Figura 2),mientras que no se observaron efectos atenuantes del CSND en la VRH en el grupo de cirugía falsa después de la perfusión de leptina.
La expresión LepRb en el CB de los...

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Experimental Approach to Examine Leptin Signaling in the Carotid Bodies and its Effects on Control of Breathing

Nuestro estudio se centra en los efectos de la señalización de la leptina en el cuerpo carótido (CB) en la respuesta ventilatoria hipoxica (HVR). Realizamos experimentos de "pérdida de función" que miden el efecto de la leptina en la rred hVR después de experimentos de denervación y "ganancia de función" que miden la HVR después de una sobreexpresión del receptor de leptina en CB.

Enfoque Experimental para Examinar la Señalización de la leptina en los cuerpos carótidos y sus efectos en el control de la respiración

An adipocyte-produced hormone leptin is a potent respiratory stimulant, which may play an important role in defending respiratory function in obesity. The ...

Nuestro protocolo se puede utilizar para examinar los efectos respiratorios de la leptina en el cuerpo carótido en el control respiratorio quimiorrestos periférico, y las respuestas fisiológicas a la hipoxia. También podemos evaluar los efectos de la pérdida y ganancia de la función corporal carótida utilizando la denervación quirúrgica y química y la transfección de adenovirus respectivamente. Antes de comenzar el procedimiento, mida la temperatura dentro de una cámara de plastemagrofia de cuerpo entero hecha a medida, y mida la humedad relativa del laboratorio.A continuación, mida el peso corporal y la temperatura rectal del ratón experimental. Coloque el ratón dentro de la cámara y coloque un collar oxímetro alrededor del cuello afeitado del animal. Y asegúrese de sellar completamente la cámara para evitar fugas de aire.Espere aproximadamente 30 minutos hasta que el ratón esté en silencio y la cámara esté a un volumen constante. Antes de comenzar a registrar las señales respiratorias y la saturación periférica de oxígeno en la normoxia. Después de 20 minutos de normoxia, exponga al animal a un flujo de gas mixto constante de 10% de oxígeno y 3%dióxido de carbono.Y comienza a registrar el primer ciclo de hipoxia aguda en señales respiratorias y saturación periférica de oxígeno. Durante los primeros 30 segundos de hipoxia, abra los dos pequeños puertos laterales en la base de la cámara para permitir el enchufón de los gases de mezcla. Después de los 30 segundos iniciales, cierre uno de los pequeños puertos laterales de la cámara y continúe registrando una hipoxia constante al 10% de la fracción de oxígeno inspirado durante cinco minutos.Al final del tratamiento con hipoxia, cambie la fuente de flujo para volver a exponer el ratón al aire ambiente y permita que el animal se recupere en la normoxia durante al menos 30 minutos antes de comenzar el siguiente análisis. Al final del experimento, conecte una jeringa en uno de los pequeños puertos laterales en la base de la cámara e inyecte un mililitro de aire de la habitación en toda la cámara de pletimografía de sangre tres veces para calibrar la cámara. Después del tercer lavado, mida la temperatura en la cámara con el animal todavía dentro y la cámara todavía cerrada.A continuación, abra la cámara y mida la temperatura rectal del ratón antes de devolver el animal a su jaula de origen. Para la denervación quirúrgica del nervio sinusal carótido, administrar analgesia al ratón anestesiado, y eliminar el vello en la región ventral del cuello. Desinfectar la piel expuesta con Betadina y alcohol y aplicar ung ón en los ojos del animal.Después de hacer una incisión de línea media, retire los tejidos conectivos y adiposos para exponer la bifurcación de las arterias carótidas comunes e identifique el nervio hipoglosal. Levante el nervio hipoglossal para exponer el nervio glosofaríngeo inmediatamente debajo y use tijeras de micro-resortes para diseccionar bilateralmente los nervios del seno carótido. Cuando los cuerpos carótidos hayan sido expuestos, suspenda suavemente un microlitro del adenovirus apropiado en cuatro microlitros de matriz líquida de Matrigel sobre hielo, por lado, y aplique cinco microlitros de la suspensión viral a la zona del cuerpo carótida bilateralmente.Espere de dos a tres minutos hasta que la matriz líquida de Matrigel se haya solidificado antes de cerrar la incisión con sutura de seda 6-0 y administrar un mililitro de solución salina normal por vía subcutánea. A continuación, albergar el ratón en una cámara de recuperación con supervisión hasta la recumbencia esternal antes de devolver al animal a su jaula de origen. La infusión continua de leptina aumenta significativamente la respuesta ventilatorio hipoxica en ratones magros C57BL/6, mientras que la disección del nervio sinusal carótida abolió este aumento inducido por la leptina.Como era de esperar, no se observan efectos atenuantes de la disección del nervio sinusal carótido en la respuesta ventilatorio hipoxica en el grupo de cirugía falsa después de la perfusión de leptina. La inducción del receptor de leptina expresión isoforma larga en los cuerpos carótidos de receptor de leptina largo isóleo obeso obeso db/db resulta en un aumento significativo en la respuesta ventilatoria hipoxica. Mientras que después de la transfección con el adenovirus de Control LacZ, no se observa ningún cambio.Estas técnicas permiten el análisis del papel de los cuerpos carótidos en el chemoreflex periférico y los efectos de la leptina en los cuerpos carótidos en el control de la respiración.

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