Name: glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation
Uploaded: 2020-08-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation at JoVE.com

وقد تم دعم هذا البحث من قبل مؤسسة الكلى الهولندية (منحة 14A3D104) والمنظمة الهولندية للبحث العلمي (منحة NWO VIDI: 016.156.363).

تم إجراء جميع التجارب الحيوانية وفقا للمبادئ التوجيهية للجنة أخلاقيات الحيوان في جامعة رادبود نيميغن.
ملاحظة: تم التضحية بالفئران غير المعالجة والصحية من النوع البري (WT) (n = 4) وcd44-/- (n = 4) الفئران في عمر 12-16 أسبوعاً. واستخدمت الفئران الذكور والإناث على حد سواء. كانت جميع ال...

<ol>
	<li>Fatima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cell+activation+marker+in+early+recurrence+of+FSGS+in+the+transplant.">Parietal epithelial cell activation marker in early recurrence of FSGS in the transplant.</a> Clinical journal of the American Society of Nephrology: CJASN. 7 (11), 1852-1858 (2012).</li><li>Dijkman, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferating+cells+in+HIV+and+pamidronate-associated+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis+are+parietal+epithelial+cells.">Proliferating cells in HIV and pamidronate-associated collapsing focal segmental glomerulosclerosis are parietal epithelial cells.</a> Kidney International. 70 (2), 338-344 (2006).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+histological+patterns+in+glomerular+epithelial+cells+in+secondary+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Common histological patterns in glomerular epithelial cells in secondary focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 88 (5), 990-998 (2015).</li><li>Dijkman, H., Smeets, B., van der Laak, J., Steenbergen, E., Wetzels, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parietal+epithelial+cell+is+crucially+involved+in+human+idiopathic+focal+segmental+glomerulosclerosis.">The parietal epithelial cell is crucially involved in human idiopathic focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 68 (4), 1562-1572 (2005).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+participate+in+the+formation+of+sclerotic+lesions+in+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Parietal epithelial cells participate in the formation of sclerotic lesions in focal segmental glomerulosclerosis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 22 (7), 1262-1274 (2011).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+origin+of+glomerular+extracapillary+lesions+from+parietal+epithelial+cells.">Tracing the origin of glomerular extracapillary lesions from parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2604-2615 (2009).</li><li>Smeets, B., Moeller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+and+podocytes+in+glomerular+diseases.">Parietal epithelial cells and podocytes in glomerular diseases.</a> Seminars in Nephrology. 32 (4), 357-367 (2012).</li><li>Ryu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+leakage+through+glomerular+basement+membrane+ruptures+triggers+the+proliferation+of+parietal+epithelial+cells+and+crescent+formation+in+non-inflammatory+glomerular+injury.">Plasma leakage through glomerular basement membrane ruptures triggers the proliferation of parietal epithelial cells and crescent formation in non-inflammatory glomerular injury.</a> The Journal of Pathology. 228 (4), 482-494 (2012).</li><li>Eymael, J., Smeets, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+fate+of+the+regenerating+cells+of+the+kidney.">Origin and fate of the regenerating cells of the kidney.</a> European Journal of Pharmacology. 790, 62-73 (2016).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+progenitor+cells+contribute+to+hyperplastic+lesions+of+podocytopathies+and+crescentic+glomerulonephritis.">Renal progenitor cells contribute to hyperplastic lesions of podocytopathies and crescentic glomerulonephritis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2593-2603 (2009).</li><li>Eymael, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+is+required+for+the+pathogenesis+of+experimental+crescentic+glomerulonephritis+and+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis.">CD44 is required for the pathogenesis of experimental crescentic glomerulonephritis and collapsing focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 93 (3), 626-642 (2018).</li><li>Roeder, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+ERK1/2+increases+CD44+in+glomerular+parietal+epithelial+cells+leading+to+matrix+expansion.">Activated ERK1/2 increases CD44 in glomerular parietal epithelial cells leading to matrix expansion.</a> Kidney International. 91 (4), 896-913 (2017).</li><li>Appel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+podocytes+from+glomerular+parietal+epithelial+cells.">Recruitment of podocytes from glomerular parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (2), 333-343 (2009).</li><li>Yaoita, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visceral+epithelial+cells+in+rat+glomerular+cell+culture.">Visceral epithelial cells in rat glomerular cell culture.</a> European Journal of Cell Biology. 67 (2), 136-144 (1995).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigations+of+Glucocorticoid+Action+in+GN.">Investigations of Glucocorticoid Action in GN.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 28 (5), 1408-1420 (2017).</li><li>Ohse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+conditionally+immortalized+mouse+glomerular+parietal+epithelial+cells+in+culture.">Establishment of conditionally immortalized mouse glomerular parietal epithelial cells in culture.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 19 (10), 1879-1890 (2008).</li></ol>

باستخدام البروتوكول الموضح في هذه المقالة، يمكن للمرء استخدام كبيبات مغلفة واحدة لتقييم انتشار الخلايا الظهارية الجدارية التي هي نتيجة لتنشيط خلية الظهارية الجدارية. هذا النموذج السابق vivo سوف تمكننا من دراسة مفصلة المسارات الجزيئية، والتي تشارك في تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية. تعتم...

الأمراض الكبوية هي مجموعة هامة من اضطرابات الكلى وتمثل سببا رئيسيا للمرض الكلوي المرحلة النهائية (ESRD). لسوء الحظ، خيارات العلاج المحددة محدودة والتقدم إلى ESRD أمر لا مفر منه. يتم تعريف الأمراض الكبوية من خلال وجود إصابة glomerular ويمكن تجميعها في الأمراض الالتهابية وغير الالتهابية. على الرغم من أن الإهانة الأولية مختلفة ، فقد أظهرت الدراسات الحديثة أن الآلية الخلوية الشائعة تؤدي إلى تضخم الخلايا الظهارية الكبيّة وفي النهاية إلى تصلب الكبيات في جميع الأمراض الكبيات ، بغض النظر عن السبب الأساسي1،2،3،4.
على وجه التحديد، فقد تبين أن الآفات الكبيبية تتكون أساسا من الخلايا الظهارية الجدارية تنشيط5،6. في ظل الظروف الفسيولوجية ، تكون الخلايا الظهارية الجدارية خلايا ظهارية مسطحة هادئة تصطف كبسولة بومان من الجلجوميول. ومع ذلك، فإن أي إصابة الكبيّة إما بسبب الطفرات الوراثية (على سبيل المثال، podocyte محددة أو اعتلالات الميتوكوندريا)، أو الالتهاب أو فرط الترشيح (على سبيل المثال، الناجم عن انخفاض كتلة الكلى، وارتفاع ضغط الدم، والسمنة أو داء السكري) يمكن أن تؤدي إلى تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية. تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية تتكاثر و تودع مصفوفة خارج الخلية مما يؤدي إلى تكوين الهلال الخلوي أو الآفات الصلبة5,7,8. يؤدي تطور هذه العمليات إلى فقدان وظائف الكلى9. ولذلك، تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية هو عامل رئيسي في تطور وتطور glomerulosclerosis في كل من الأمراض الكبياتية الالتهابية وغير الالتهابية1،2،3،4،10.
والعمليات الجزيئية التي تتوسط في تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية لا تزال غير معروفة إلى حد كبير. وتظهر الدراسات الحديثة أن تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية دي نوفو أعرب CD44, مستقبلات التي هي مهمة لتفعيل مسارات مختلفة تشارك في انتشار الخلوية والهجرة. وعلاوة على ذلك، تم إظهار تثبيط CD44 لمنع تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية و الحد من تطور تشكيل الهلال و glomerulosclerosis في النماذج الحيوانية من الأمراض الكبيبية غير الالتهابية وكذلك11،12.
كما تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية هو لاعب رئيسي لتطوير glomerulosclerosis وتشكيل الهلال، تثبيط هذه الخلايا يمكن أن تبطئ تطور الأمراض الكبيات. قد يؤدي توضيح المسارات الجزيئية التي تقود تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية إلى تطوير تدخلات علاجية محددة تُعَطَّن تكوين الآفات الخافتة بالضمير الكيسي وتكبيبات الدم في الأمراض الكبيات.
في النماذج الحيوانية التجريبية، من الصعب في كثير من الأحيان تقديم أدلة على التأثير المباشر للتعبير الجيني المتغير (نماذج الماوس الناتجة عن الماوس أو نماذج الماوس المعدلة وراثيا) أو العلاج من المخدرات على الخلايا الظهارية الجدارية. في الماوس خروج المغلوب التقليدية لوحظ في التغيرات الجسمية يمكن تفسيرها من خلال التغيرات المباشرة في الخلايا الظهارية الجدارية. ومع ذلك، بما أن التعبير الجيني قد تغير أيضاً في أنواع الخلايا الأخرى داخل الماوس، فلا يمكن استبعاد الآثار غير المباشرة التي تتوسط فيها أنواع الخلايا الأخرى. وقد وفرت تطوير الفئران كري لوكس المشروطة التي يقودها المروجين النشطة أساسا في الخلايا الظهارية الجداري حلا في بعض الحالات13. ومع ذلك، فإن النماذج المعدلة وراثيا المشروطة معقدة، وعلى الرغم من أن هناك خطوطا أكثر مشروطا تصبح متاحة، فإن العديد من خطوط الماوس التقليدية أو الماوس المعدلة وراثيا لا يوجد بعد بديل مشروط.
لدراسة الآثار المباشرة على الخلايا الظهارية الجدارية، وقد وضعت مجموعتنا مقايسة الجسم الحي السابق باستخدام كبيبات مغلفة واحدة معزولة عن الكلى الماوس لقياس وتحليل انتشار الخلايا الظهارية الجدارية والهجرة. هذه الطريقة سوف تمكننا من تحديد الآثار الخاصة بالخلايا الظهارية الجدارية والعثور على مسارات مسؤولة لتنشيط الخلايا الظهارية الجدارية وخيارات العلاج الاختبار لمنع هذا التنشيط.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >24-well cell culture plate</td>
			<td >Corning Costar</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >anti-CD31</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Endothelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >chicken-anti-rat Alexa 647</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI-Fluoromount G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>Mounting medium containing DAPI</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Digital inverted light microscope</td>
			<td>Westburg, EVOS fl microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-goat Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-rabbit Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s medium&#160;</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM-MV Single Quots kit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>containing hydrocortisone, hEGF, GA-1000, FBS and BBE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Calf Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescent microscope</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >goat-anti-synaptopodin</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>Podocyte marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hanks&#39;Balanced Salt Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ImageJ software</td>
			<td >FIJI 1.51n</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >petri dish</td>
			<td >Sarstedt</td>
			<td>size 100</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-claudin1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:100)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-SSeCKS</td>
			<td>Roswell Park Comprehensive Cancer Center,Buffalo, NY, USA</td>
			<td>kindly provided by Dr. E. Gelman, Parietal epithelial cell marker</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rat-anti-CD44</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >scalpel</td>
			<td >Dahlhausen</td>
			<td>size 10</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sieves&#160;</td>
			<td >Endecotts Ltd</td>
			<td>size 300 &#181;m, 75 &#181;m, 53 &#181;m, steel</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >syringe</td>
			<td >BD Plastipak</td>
			<td>size: 20 ml</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ultra-Low Attachment Microplates&#160;</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>6-well plates</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation

تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية (PEC) هو أحد العوامل الرئيسية التي تشارك في تطوير وتطور تصلب الكبيمرتولوس. وبالتالي فإن تثبيط المسارات التي تشارك في تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية يمكن أن يكون أداة لتكبيل تطور الأمراض الكبية. توضح هذه المقالة طريقة للثقافة وتحليل الخلايا الظهارية الجدارية خارج من كبيبات مغلفة معزولة من الكلى الماوس. بعد تشريح الكلى الماوس المعزولة ، يتم سلخ الأنسجة ، ويتم عزل الجلاميرولي عن طريق الغربلة. يتم جمع glomeruli مغلفة، ويتم استزراع glomeruli واحد لمدة 6 أيام للحصول على الخروج الكبيّة من الخلايا الظهارية الجدارية. خلال هذه الفترة، يمكن تحليل انتشار الخلايا الظهارية الجدارية والهجرة عن طريق تحديد عدد الخلايا أو المساحة السطحية للخلايا التي تتكاثر. وبالتالي يمكن استخدام هذا الفحص كأداة لدراسة آثار التعبير الجيني المتغير في الفئران المعدلة وراثيا أو خروج المغلوب أو آثار ظروف الثقافة على خصائص نمو الخلايا الظهارية الجدارية والإشارة. باستخدام هذه الطريقة ، يمكن دراسة مسارات مهمة تشارك في عملية تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية وبالتالي في glomerulosclerosis.

يتم عرض مخطط منهجي لطريقة تنفيذ مقايسة النمو الكبي في الشكل 1. ويبين الشكل 2A-D النمو الكبيبي من الكبيبات المغلفة في نقاط زمنية مختلفة كما لوحظ باستخدام المجهر الخفيف. وتظهر outgrowths في اليوم 2 و 4 و 6(الشكل 2B-D)ف?...

Watch this Scientific Journal Video about Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation at JoVE.com

Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation

توضح هذه المقالة طريقة لاستزراع وتحليل الخلايا الظهارية الكبيبية خارج الخلايا المغلفة من glomeruli معزولة عن الكلى الماوس. ويمكن استخدام هذه الطريقة لدراسة المسارات التي ينطوي عليها انتشار الخلايا الظهارية الجدارية والهجرة.

Glomerular Outgrowth كما مُجرا السابق Vivo لتحليل المسارات المشاركة في تنشيط الخلية الظهارية Parietal

Parietal epithelial cell (PEC) activation is one of the key factors involved in the development and progression of glomerulosclerosis. Inhibition of ...

تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية هو في العامل الرئيسي في تطوير ندبا في كبيبات الكلى. باستخدام هذه الطريقة، يمكننا دراسة العمليات الخلوية المشاركة في هذا التنشيط ونأمل أن نجد خيارات العلاج لإبطاء أو حتى وقف تطور المرض. الميزة الرئيسية لتقنيتنا هي أننا نستخدم الخلايا الأولية التي تنمو مباشرة من الكبيبات المعزولة.بعد تحرير الكلى، كما هو موضح في المخطوطة النص، عقد الكلى مع ملقط الجراحية واستخدام زوج آخر من ملقط لسحب قبالة كبسولات الكلى. بعد ذلك، ضع الكلى في آبار لوحة ثقافة ستة بئر تحتوي كل منها على ملليلترين من HBSS ووضع لوحة الثقافة على الجليد. أولاً، نقل الكلى إلى طبق بيتري 100 ملليمتر واستخدام مشرطين لتلفرها إلى قطع صغيرة تكون حوالي ملليمترين.الحفاظ على قطع الكلى المفروم الرطب مع HBSS. بعد ذلك، ضع قطع الكلى على رأس منخل معدني 300 ميكرومتر واضغط على الكلية من خلال المنخل باستخدام المكبس من حقنة 20 ملليلتر. شطف مرارا وتكرارا منخل مع HBSS في ما بين واستخدام ماصة المصلية لجمع تدفق من خلال ونقلها إلى طبق بيتري نظيفة.استخدام مشرط لكشط قبالة كل ما تبقى في الجزء السفلي من الغربال ونقلها إلى تجانس الكلى التي تم جمعها. شطف تجانس الكلى من خلال منخل 75 و 53 ميكرومتر مع HBSS. ثم، غسل كل من الغربل مع HBSS لإزالة كل من الهياكل الصغيرة.جمع هياكل الكلى والمواد التي بقيت في الغربال عن طريق غسل السطح العلوي من كل مع DMEM تكمل مع مصل عجل الجنين 20٪ ونقل المواد إلى آبار من ستة مرفقات منخفضة جداً microplate. جلب microplate مرفق منخفضة للغاية إلى مجهر ضوء مقلوب واستخدام ماصة 20 ميكروليت استغرق جمع واحد مغلفة وcroscapulated glomeruli. بعد اصطياد كبيبات واحدة في طرف ماصات، إضافة جديدة DMEM المتوسطة دون جمع مواد الكلى في نفس تلميح ماصة إلى حجم 20 ميكرولترات.نقل الكبيبات واحد مع متوسطة DMEM إلى مركز بئر من 24 جيدا خلية لوحة الثقافة واحتضان في 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ثلاث ساعات للسماح بتعلق من الكبيبات إلى مركز البئر. بعد الحضانة، سيتم إرفاق الكبيات إلى مركز البئر. إضافة بعناية 500 ميكرولتررس من وسط القاعية القاعدية تكملها مع مجموعة عامل النمو و5٪ إضافية FBS و 1٪ البنسلين وstreptomycin لكل بئر.ثقافة [كبيبرولي] وحيدة في 37 درجات مئويّة مع 5٪ ثاني أكسيد كربون لستّة أيام. بعد ستة أيام من الحضانة، استخدم مجهرًا رقميًا مقلوبًا للضوء لالتقاط الصور وتحليل النمو الكببي. باستخدام برنامج تحليل الصور، حدد مساحة السطح من النمو الكبيائي عن طريق فتح أحد ملفات الصور مع شريط مقياس.رسم خط مستقيم على شريط مقياس وانقر على تحليل، ثم قياس لتحديد المسافة بالبكسل. لتحديد المقياس، انقر فوق تحليل وتعيين مقياس وإدخال المسافة المعروفة بالبكسل، والمسافة المعروفة، ووحدة الطول. انقر على "حسناً" عند الانتهاء.انقر على تحليل وتعيين القياسات. ثم، تحقق من الخيارات الخاصة بتسمية المنطقة والعرض. انقر على "حسناً" عند الانتهاء.بعد ذلك ، رسم اختيار حر حول outgrowth الكبيات. انقر فوق تحليل وقياس لعرض جدول نتائج، والذي يحتوي على مساحة سطح النمو في المقياس المحدد سابقًا. في هذه الدراسة، يتم عزل الخلايا الظهارية الجدارية الكبيائية خارج الخلايا من glomeruli مغلفة من الكلى الماوس، مثقف، وتحليلها.تظهر صور المجهر الضوئي التمثيلية النمو الكبيائي في نقاط زمنية مختلفة أثناء الثقافة بعد عزل الكبيّة عن كلى الماوس. من أجل التحقق من أن الخلايا التي تتفوق هي الخلايا الظهارية الجدارية ، يتم عزل الكبيبات المزيلة أيضًا وتنميتها لمدة ستة أيام. الكبيبات المُفكّرة تظهر لا تَنَمَّ خلية خلال فترة الحضانة هذه.ثم يتم تنفيذ تلطيخ الفلورسنت لعلامات الخلايا الظهارية الجدارية المختلفة ، وعلامات موقع الصور الخاصة ، وكذلك علامات الخلايا البطانية. النتائج التحقق من صحة أن الخلايا التي تتفوق، في الواقع، هي الخلايا الظهارية الجدارية. Glomeruli المرتبطة من فئران خروج المغلوب CD44 تظهر انخفاضا في عدد الخلايا التي تتفوق، فضلا عن انخفاض مساحة السطح من خارج كبيبة مقارنة مع كبيبات معزولة عن الفئران من النوع البرية.وهذا يشير إلى دور مهم لـ CD44 في تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية. باستخدام هذه التقنية، من الممكن أيضًا دراسة التأثيرات على الأدوية على تنشيط الخلايا الظهارية الجدارية. ويمكن القيام بذلك عن طريق علاج الكبيبات المعزولة مع الدواء الذي تختاره وتحليل الاختلافات في نمو الخلايا والهجرة الخلية.

Research

JoVE Journal

Biology

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

الثقافة السابقين فيفو من خلايا الإنسان الأولية قناة فالوب طلائي

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

تفعيل موت الخلايا المبرمج من قبل Microinjection هيولي من السيتوكروم ج</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

لونين عزل من قبل تنقية الحمض النووي الريبي (السقسقة)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

تحليل سريع لالوراثية طلائي-الوسيطة اشارة خلال تجديد الشعر

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

و<em&gt; خارج الحي</em&gt; نظام الثقافة لدراسة التنمية الغدة الدرقية

The thyroid is a bilobated endocrine gland localized at the base of the neck, producing the thyroid hormones T3, T4, and calcitonin. T3 and T4 are ...

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

نظام الثقافة الماوس الجنين الأمعاء الجامعة ل<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; التلاعب في مسارات إشارات وتصوير لايف ثلاثي الأبعاد التنمية الزغبة

Most morphogenetic processes in the fetal intestine have been inferred from thin sections of fixed tissues, providing snapshots of changes over ...

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

تحليل الوقت الحقيقي ايض الملف في<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الثقافات ماوس المعوية سرداب عضي

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and ...

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

بروتين ج-FOS كشف Immunohistological: أداة مفيدة كعلامة للممرات الوسطى تشارك في الاستجابات الفسيولوجية محددة<em&gt; في فيفو</em&gt; و<em&gt; فيفو السابقين</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

في المختبر و في فيفو النهج لتحديد نفاذية الخلايا الظهارية المعوية

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

أجبر اللعاب كأسلوب لتحليل اختصاص البعوض ناقل

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...