Name: glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation
Uploaded: 2020-08-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי קרן כליות הולנדית (גרנט 14A3D104) ואת הארגון הולנד למחקר מדעי (NWO VIDI מענק: 016.156.363).

כל ניסויי החיות בוצעו על פי ההנחיות של ועדת האתיקה לבעלי חיים של אוניברסיטת רדבעוד בניימכן.
הערה: עכברים שאינם מטופלות, מסוג פראי בריא (n = 4) ו -cd44-/- (n = 4) הוקריבו בגיל 12 עד 16 שבועות. שימשו את שני העכברים הזכריים והנקביים. כל העכברים היו על הרקע C57Bl/6.
1. ניתוח כלי?...

<ol>
	<li>Fatima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cell+activation+marker+in+early+recurrence+of+FSGS+in+the+transplant.">Parietal epithelial cell activation marker in early recurrence of FSGS in the transplant.</a> Clinical journal of the American Society of Nephrology: CJASN. 7 (11), 1852-1858 (2012).</li><li>Dijkman, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferating+cells+in+HIV+and+pamidronate-associated+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis+are+parietal+epithelial+cells.">Proliferating cells in HIV and pamidronate-associated collapsing focal segmental glomerulosclerosis are parietal epithelial cells.</a> Kidney International. 70 (2), 338-344 (2006).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+histological+patterns+in+glomerular+epithelial+cells+in+secondary+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Common histological patterns in glomerular epithelial cells in secondary focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 88 (5), 990-998 (2015).</li><li>Dijkman, H., Smeets, B., van der Laak, J., Steenbergen, E., Wetzels, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parietal+epithelial+cell+is+crucially+involved+in+human+idiopathic+focal+segmental+glomerulosclerosis.">The parietal epithelial cell is crucially involved in human idiopathic focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 68 (4), 1562-1572 (2005).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+participate+in+the+formation+of+sclerotic+lesions+in+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Parietal epithelial cells participate in the formation of sclerotic lesions in focal segmental glomerulosclerosis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 22 (7), 1262-1274 (2011).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+origin+of+glomerular+extracapillary+lesions+from+parietal+epithelial+cells.">Tracing the origin of glomerular extracapillary lesions from parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2604-2615 (2009).</li><li>Smeets, B., Moeller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+and+podocytes+in+glomerular+diseases.">Parietal epithelial cells and podocytes in glomerular diseases.</a> Seminars in Nephrology. 32 (4), 357-367 (2012).</li><li>Ryu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+leakage+through+glomerular+basement+membrane+ruptures+triggers+the+proliferation+of+parietal+epithelial+cells+and+crescent+formation+in+non-inflammatory+glomerular+injury.">Plasma leakage through glomerular basement membrane ruptures triggers the proliferation of parietal epithelial cells and crescent formation in non-inflammatory glomerular injury.</a> The Journal of Pathology. 228 (4), 482-494 (2012).</li><li>Eymael, J., Smeets, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+fate+of+the+regenerating+cells+of+the+kidney.">Origin and fate of the regenerating cells of the kidney.</a> European Journal of Pharmacology. 790, 62-73 (2016).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+progenitor+cells+contribute+to+hyperplastic+lesions+of+podocytopathies+and+crescentic+glomerulonephritis.">Renal progenitor cells contribute to hyperplastic lesions of podocytopathies and crescentic glomerulonephritis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2593-2603 (2009).</li><li>Eymael, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+is+required+for+the+pathogenesis+of+experimental+crescentic+glomerulonephritis+and+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis.">CD44 is required for the pathogenesis of experimental crescentic glomerulonephritis and collapsing focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 93 (3), 626-642 (2018).</li><li>Roeder, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+ERK1/2+increases+CD44+in+glomerular+parietal+epithelial+cells+leading+to+matrix+expansion.">Activated ERK1/2 increases CD44 in glomerular parietal epithelial cells leading to matrix expansion.</a> Kidney International. 91 (4), 896-913 (2017).</li><li>Appel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+podocytes+from+glomerular+parietal+epithelial+cells.">Recruitment of podocytes from glomerular parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (2), 333-343 (2009).</li><li>Yaoita, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visceral+epithelial+cells+in+rat+glomerular+cell+culture.">Visceral epithelial cells in rat glomerular cell culture.</a> European Journal of Cell Biology. 67 (2), 136-144 (1995).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigations+of+Glucocorticoid+Action+in+GN.">Investigations of Glucocorticoid Action in GN.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 28 (5), 1408-1420 (2017).</li><li>Ohse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+conditionally+immortalized+mouse+glomerular+parietal+epithelial+cells+in+culture.">Establishment of conditionally immortalized mouse glomerular parietal epithelial cells in culture.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 19 (10), 1879-1890 (2008).</li></ol>

באמצעות הפרוטוקול המתואר במאמר זה, ניתן להשתמש באחד לפקולי שעברו שימוש בודד כדי להעריך את התפשטות התא אפיתל הקודקוד שהיא תוצאה של הפעלת תא אפיתל הקודקוד. זה מודל vivo ex יאפשר לנו ללמוד בפירוט מסלולים מולקולריים, אשר מעורבים ההפעלה התא אפיתל הקודקוד. השיטה המתוארת מתבססת על המושג הפשוט של ני?...

מחלות פקבוליות הם קבוצה חשובה של הפרעות כליות ומייצגים הגורם העיקרי של מחלת כליות בשלב הסיום (ESRD). למרבה הצער, אפשרויות טיפול ספציפיות מוגבלות התקדמות כדי ESRD הוא בלתי נמנע. מחלות פקפיות מוגדרות על ידי נוכחות של פציעה פקפיות וניתן לקבץ במחלות דלקתיות ושאינן דלקתיות. למרות העלבון הראשוני הוא שונה, מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי מנגנון הסלולר המשותף מוביל היפרפלזיה תאית האפיתל התאים ובסופו של דבר כדי גלולוולוטרשת בכל מחלות פקאיות, ללא קשר לגורם הבסיסי1,2,3,4.
באופן ספציפי, זה הוכח כי נגעים גלובליים מורכבים בעיקר של הפעלת תאים אפיתל הקודקוד5,6. התאים האפיתל הם שטוחים בתאים. שעומדים בתור הקפסולה של באומן עם זאת, כל פציעה גלובציט או בגלל מוטציות גנטיות (למשל, מסוים או cytopathies ספציפי או מיטוכונדריאלי), דלקת או היפרסינון (למשל, נגרמת על ידי מסה כליות מופחתת, יתר לחץ דם, השמנה או סוכרת) יכול להפעיל את ההפעלה של תאים אפיתל הקודקוד. תאי אפיתל הופעל הקודקוד מתרבים הפקדה לחילוץ מטריקס אשר תוצאות היווצרות של crescents סלולריים או נגעים מאוים5,7,8. ההתקדמות של תהליכים אלה גורמת לאובדן תפקוד הכליות9. לכן, ההפעלה תא אפיתל הקודקוד הוא גורם מפתח בפיתוח והתקדמות של טרשת נפוצה במחלות פקפיות דלקתיות ולא דלקתיות,1,2,3,4,10.
התהליכים המולקולריים של הפעלת תאי האפיתל הקודקודית עדיין אינם ידועים ברובו. מחקרים שנעשו לאחרונה מראים כי הופעל תאים אפיתל הקודקוד דה נובו אקספרס CD44, קולטן כי חשוב להפעלת מסלולים שונים המעורבים התפשטות הסלולר והגירה. יתר על כן, עיכוב של CD44 הוכח לעכב את ההפעלה תא אפיתל הקודקוד והחליש את ההתקדמות של היווצרות הסהר לבין טרשת נפוצה במודלים של בעלי חיים של דלקת, כמו גם מחלות פקפיות דלקתיות לא דלקתית11,12.
כמו ההפעלה תא האפיתל הקודקוד הוא נגן מפתח לפיתוח של טרשת נפוצה והיווצרות הסהר, עיכוב של תאים אלה יכול להאט את ההתקדמות של מחלות פקפיות. ההסבר של מסלולים מולקולריים הנהיגה הקודקודית התא ההפעלה עלולה להוביל לפיתוח של התערבויות טיפוליות ספציפיות כי החליש את היווצרות של הנגעים hyperplastic ו גלובאפיללותטיות במחלות פקפיות.
בדגמי בעלי חיים ניסיוניים, קשה לעתים קרובות לספק ראיות להשפעה ישירה של ביטוי גנטי משתנה (מודלים של מודלים או העכבר הטרנסגניים) או טיפול תרופתי בתאי האפיתל הקודקודית. בתוך העכבר הרגיל להוריד את הנצפים שינויים vivo עשוי להיות מוסבר על ידי שינויים ישירים בתאי אפיתל הקודקוד. עם זאת, מאחר שביטוי הגנים משתנה גם בסוגי תאים אחרים בתוך העכבר, אין אפשרות לכלול אפקטים עקיפים המתווכת על-ידי סוגי תאים אחרים. התפתחות של עכברים מותנה -לקס מונע על ידי יזמים פעילים בעיקר בתאי אפיתל הקודקוד סיפק פתרון במקרים מסוימים13. עם זאת, מודלים טרנסגניים מותנים הם מורכבים ולמרות שקווים מותנים יותר הופכים לזמינים, עבור רבים מקווי העכבר הרגילים או הטרנסגניים, אין עדיין תחליף מותנה.
כדי ללמוד את ההשפעות הישירות על התאים האפיתל הקודקודית, הקבוצה שלנו פיתחה שיטת vivo ex באמצעות בודד כדורית לשעבר מבודדים מכליות העכבר כדי למדוד ולנתח את התפשטות התא אפיתל הקודקוד והגירה. שיטה זו תאפשר לנו לקבוע הקודקודית תא האפיתל אפקטים ספציפיים כדי למצוא מסלולים אחראיים ההפעלה התא אפיתל הקודקוד ולבדוק אפשרויות טיפול כדי לעכב את ההפעלה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >24-well cell culture plate</td>
			<td >Corning Costar</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >anti-CD31</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Endothelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >chicken-anti-rat Alexa 647</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI-Fluoromount G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>Mounting medium containing DAPI</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Digital inverted light microscope</td>
			<td>Westburg, EVOS fl microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-goat Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-rabbit Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s medium&#160;</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM-MV Single Quots kit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>containing hydrocortisone, hEGF, GA-1000, FBS and BBE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Calf Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescent microscope</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >goat-anti-synaptopodin</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>Podocyte marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hanks&#39;Balanced Salt Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ImageJ software</td>
			<td >FIJI 1.51n</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >petri dish</td>
			<td >Sarstedt</td>
			<td>size 100</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-claudin1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:100)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-SSeCKS</td>
			<td>Roswell Park Comprehensive Cancer Center,Buffalo, NY, USA</td>
			<td>kindly provided by Dr. E. Gelman, Parietal epithelial cell marker</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rat-anti-CD44</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >scalpel</td>
			<td >Dahlhausen</td>
			<td>size 10</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sieves&#160;</td>
			<td >Endecotts Ltd</td>
			<td>size 300 &#181;m, 75 &#181;m, 53 &#181;m, steel</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >syringe</td>
			<td >BD Plastipak</td>
			<td>size: 20 ml</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ultra-Low Attachment Microplates&#160;</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>6-well plates</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation

תא האפיתל הקודקוד (הפעלה) הוא אחד הגורמים העיקריים המעורבים בפיתוח והתקדמות של טרשת נפוצה. עיכוב של מסלולים המעורבים ההפעלה התא אפיתל הקודקוד יכול אפוא להיות כלי כדי להחליש את ההתקדמות של מחלות פקפיות. מאמר זה מתאר שיטה לתרבות ולנתח את הצמיחה של תא אפיתל הקודקוד של פקולי כדורית מבודדים מכליה העכבר. לאחר ניתוח כליות מבודדות של העכבר, הרקמה היא כתוש, ו גלואראולי מבודדים על ידי ניפוי. פקאולי באנקפסולציה נאספים, ו פקולי בודד הם מתורבתים עבור 6 ימים כדי לקבל את הצמיחה של התאים הקודקודית של תאי אפיתל. במהלך תקופה זו, התפשטות הדופן הקודקודית והגירה ניתן לנתח על ידי קביעת מספר התא או שטח המשטח של תאים מתרחב. לפיכך, ניתן להשתמש באפשרות זו ככלי לחקר ההשפעות של ביטוי גנטי משתנה בטרנסגניים-או בעכברים או בהשפעות של תנאי התרבות על מאפייני הצמיחה של תאים אפיתל הקודקוד ואיתות. באמצעות שיטה זו, מסלולים חשובים המעורבים בתהליך של הפעלת תא אפיתל הקודקוד וכתוצאה מכך ניתן ללמוד טרשת נפוצה.

דיאגרמה שיטתית של השיטה לביצוע שיטת הגדילה הבין-מרבית מוצגת באיור 1. איור 2א-ד מציג את הגידולים המגלוניים של פקולי האנקפסולציה בנקודות זמן שונות כפי שנצפתה באמצעות מיקרוסקופ אור. גידולים החוצה מוצגים ביום 2, 4 ו 6 (איור 2</...

Watch this Scientific Journal Video about Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation at JoVE.com

Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation

מאמר זה מתאר שיטה עבור culturing וניתוח החוצה הקודקוד הקודקודית תא האפיתל של פקולי כדורית מבודדים מכליה העכבר. שיטה זו יכולה לשמש לחקר מסלולים המעורבים התפשטות התא הקודקודית והגירה.

בלתי מימדית כמו לשעבר שיטת Vivo לנתח מסלולים מעורב הקודקוד הקודקודית התא ההפעלה

Parietal epithelial cell (PEC) activation is one of the key factors involved in the development and progression of glomerulosclerosis. Inhibition of ...

הפעלה של תאי אפיתל קודקודית היא גורם מפתח בהתפתחות של רקמת צלקת בגלומרולוס של הכליה. באמצעות שיטה זו, אנו יכולים ללמוד את התהליכים התאיים המעורבים בהפעלה זו ובתקווה למצוא אפשרויות טיפול כדי להאט או אפילו לעצור את התקדמות המחלה. היתרון העיקרי של הטכניקה שלנו הוא שאנו משתמשים בתאים ראשוניים הגדלים היישר מהגלומרולי המבודד.לאחר לשחרר את הכליות, כפי שמתואר בכתב היד טקסט, להחזיק את הכליה עם מדפים כירורגיים ולהשתמש זוג אחר של מעצורים כדי למשוך את כמוסות הכליה. לאחר מכן, מניחים את הכליות לתוך בארות של צלחת תרבות שש היטב כי כל מכילים שני מיליליטר של HBSS ולה מניחים את צלחת התרבות על קרח. ראשית, להעביר את הכליות לצלחת פטרי 100 מילימטר ולהשתמש בשני אזמלים כדי לטחון אותם לחתיכות קטנות כי הם כאחד עד שני מילימטרים.שמור את חתיכות הכליה טחון רטוב עם HBSS. לאחר מכן, מניחים את חתיכות הכליה על גבי מסננים מתכת 300 מיקרומטר ולחץ על הכליה דרך המזרק באמצעות הבוכנה ממזרק 20 מיליליטר. שטפו שוב ושוב את המסמר עם HBSS בין לבין ולהשתמש פיפטה סרולוגית כדי לאסוף את הזרימה דרך ולהעביר אותו לצלחת פטרי נקייה.השתמש אזמל כדי לגרד את כל מה שנשאר בתחתית המסורה ולהעביר אותו הומוגניט הכליה שנאסף. לשטוף את הומוגנית הכליות דרך מסמרוז 75 ו 53 מיקרומטר עם HBSS. לאחר מכן, לשטוף את שני הסנובים עם HBSS כדי להסיר את כל המבנים הקטנים יותר.לאסוף את מבני הכליות והחומר שנותרו בסובס על ידי שטיפת המשטח העליון של כל אחד עם DMEM בתוספת 20% סרום עגל עוברי ולהעביר את החומר ל הבאר של שישה מיקרופלסטיק מצורף אולטרה נמוך היטב. הביאו את המיקרופלאט עם ההחזקה האולטרה-נמוכה למיקרוסקופ אור הפוך והשתמשו בפיפטה של 20 מיקרוליטר שלקחה לאסוף אנקפסולציה אחת או גלומרולי ערוף. לאחר תפיסת גלומרולוס יחיד בקצה פיפטה, מוסיפים מדיום DMEM טרי ללא חומר כליות שנאסף לאותו קצה פיפטה לנפח של 20 מיקרוליטרים.מעבירים את הגלומרולוס הבודד עם מדיום ה-DMEM למרכז באר של 24 צלחות תרבות תאים היטב ודגירה ב-37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו-חמצני למשך שלוש שעות כדי לאפשר חיבור של הגלומרולוס למרכז הבאר. לאחר הדגירה, הגלומרולוס יצורף למרכז ה... הוסיפו בזהירות 500 מיקרוליטרים של מדיום בזל אנדותל בתוספת ערכת גורם גדילה ו-5%FBS נוספים ו-1%פניצילין וסטרפטומיצין לכל באר.תרבות גלומרולי יחיד ב 37 מעלות צלזיוס עם 5%פחמן דו חמצני במשך שישה ימים. לאחר שישה ימים של דגירה, השתמש במיקרוסקופ אור הפוך דיגיטלי כדי לצלם תמונות ולנתח את ההתגלות. באמצעות תוכנה לניתוח תמונה, לקבוע את שטח הפנים של תפוגה גלומרולרית על ידי פתיחת אחד מקבצי התמונה עם סרגל קנה מידה.צייר קו ישר על סרגל קנה המידה ולחץ על נתח ולאחר מכן למדוד כדי לקבוע את המרחק בפיקסלים. כדי לקבוע את קנה המידה, לחץ על נתח והגדר קנה מידה והקלט את המרחק הידוע בפיקסלים, המרחק הידוע ו יחידת האורך. לחץ על אישור כאשר תסיים.לחץ על נתח והגדר מדידות. לאחר מכן, בדוק את האפשרויות עבור אזור ותווית תצוגה. לחץ על אישור כאשר תסיים.לאחר מכן, צייר בחירה ביד חופשית סביב ההתגלות. לחץ על נתח ולמדוד כדי להציג טבלת תוצאות, המכילה את שטח הפנים של אורך חוץ בקנה המידה שנקבע קודם לכן. במחקר זה, תא אפיתל glomerular אפיתל נוצרים של glomeruli encapsulated מבודדים מכליות העכבר, מתורבת, ונותחו.תמונות מיקרוסקופיות אור נציג להראות את ההתרחקויות גלומרולרי בנקודות זמן שונות במהלך התרבות לאחר glomerulus מבודדים מכליות העכבר. על מנת לאמת כי התאים מגודלים הם תאי אפיתל קודקודיים, גלומרולי ערוף הם גם מבודדים ותרבתיים במשך שישה ימים. גלומרולי ערוף לא מראה שום תנובה תא במהלך תקופת דגירה זו.כתמים Immunofluorescent מבוצעת לאחר מכן עבור סמני תא אפיתל קוקודיים שונים, סמנים ספציפיים לאתר צילום, כמו גם סמני תא אנדותל. התוצאות מאמתות כי התאים הגדולים, אכן, הם תאי אפיתל קודקודיים. Glomeruli הקשורים עכברי נוקאאוט CD44 להראות מספר ירד של תאים צומחים, כמו גם שטח פנים ירד של צומח גלומרולרי לעומת glomeruli מבודד עכברים מסוג בר.זה מרמז על תפקיד חשוב עבור CD44 בהפעלת תא אפיתל קודקודי. באמצעות טכניקה זו, ניתן גם ללמוד את ההשפעות על תרופות על הפעלת תא אפיתל קודקודית. זה יכול להיעשות על ידי טיפול glomeruli מבודד עם התרופה על פי בחירתך כדי לנתח את ההבדלים בצמיחת תאים הגירת תאים.

Research

JoVE Journal

Biology

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo התרבות של האדם תאים ראשוניים החצוצרה אפיתל

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

הפעלה של אפופטוזיס על ידי Microinjection cytoplasmic של ציטוכרום ג</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

בידוד הכרומטין על ידי טיהור RNA (ציוץ)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

ניתוח גנטי מהיר של איתות אפיתל-mesenchymal במהלך התחדשות שיער

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

<em&gt; Ex vivo</em&gt; מערכת תרבות ללמוד התפתחות בלוטת התריס

The thyroid is a bilobated endocrine gland localized at the base of the neck, producing the thyroid hormones T3, T4, and calcitonin. T3 and T4 are ...

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

מערכת תרבות עכבר העוברי שלם מעי ל<em&gt; Ex Vivo</em&gt; מניפולציה של מסלולי איתות והדמית חיה תלת ממדית של פיתוח שליה

Most morphogenetic processes in the fetal intestine have been inferred from thin sections of fixed tissues, providing snapshots of changes over ...

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

אמיתי ניתוח זמן של פרופיל המטבולי ב<em&gt; Ex Vivo</em&gt; תרבויות עכבר המעיים קריפטה Organoid

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and ...

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

חלבון C-FOS איתור immunohistological: כלי שימושי כסמן של מסלולים מרכזיים המעורבים בתגובות פיסיולוגיות ספציפיות<em&gt; In vivo</em&gt; ו<em&gt; Ex Vivo</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

במבחנה , גישות In Vivo כדי לקבוע חדירות תאים אפיתל המעי

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

הכריחו ריור כשיטה לנתח מיומנות וקטור של יתושים

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...