Name: glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation
Uploaded: 2020-08-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation at JoVE.com

이 연구는 네덜란드 신장 재단에 의해 지원 되었다 (보조금 14A3D104) 과학적 연구를 위한 네덜란드 조직 (NWO VIDI 교부금: 016.156.363).

모든 동물 실험은 라드부드 대학 니메겐의 동물 윤리위원회의 지침에 따라 수행되었다.
참고: 치료되지 않은 건강한 야생형(WT) 마우스(n=4) 및 cd44/----(n=4) 마우스는 12-16주의 나이에 희생하였다. 남성과 여성 마우스 모두 사용 되었다. 모든 마우스는 C57Bl/6 배경에 있었다.
1. 마우스 신장 해부
<ol><li>자궁 경부 탈구에 의해 건강한 WT 마우스 또는 유전?...

<ol>
	<li>Fatima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cell+activation+marker+in+early+recurrence+of+FSGS+in+the+transplant.">Parietal epithelial cell activation marker in early recurrence of FSGS in the transplant.</a> Clinical journal of the American Society of Nephrology: CJASN. 7 (11), 1852-1858 (2012).</li><li>Dijkman, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferating+cells+in+HIV+and+pamidronate-associated+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis+are+parietal+epithelial+cells.">Proliferating cells in HIV and pamidronate-associated collapsing focal segmental glomerulosclerosis are parietal epithelial cells.</a> Kidney International. 70 (2), 338-344 (2006).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+histological+patterns+in+glomerular+epithelial+cells+in+secondary+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Common histological patterns in glomerular epithelial cells in secondary focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 88 (5), 990-998 (2015).</li><li>Dijkman, H., Smeets, B., van der Laak, J., Steenbergen, E., Wetzels, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parietal+epithelial+cell+is+crucially+involved+in+human+idiopathic+focal+segmental+glomerulosclerosis.">The parietal epithelial cell is crucially involved in human idiopathic focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 68 (4), 1562-1572 (2005).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+participate+in+the+formation+of+sclerotic+lesions+in+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Parietal epithelial cells participate in the formation of sclerotic lesions in focal segmental glomerulosclerosis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 22 (7), 1262-1274 (2011).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+origin+of+glomerular+extracapillary+lesions+from+parietal+epithelial+cells.">Tracing the origin of glomerular extracapillary lesions from parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2604-2615 (2009).</li><li>Smeets, B., Moeller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+and+podocytes+in+glomerular+diseases.">Parietal epithelial cells and podocytes in glomerular diseases.</a> Seminars in Nephrology. 32 (4), 357-367 (2012).</li><li>Ryu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+leakage+through+glomerular+basement+membrane+ruptures+triggers+the+proliferation+of+parietal+epithelial+cells+and+crescent+formation+in+non-inflammatory+glomerular+injury.">Plasma leakage through glomerular basement membrane ruptures triggers the proliferation of parietal epithelial cells and crescent formation in non-inflammatory glomerular injury.</a> The Journal of Pathology. 228 (4), 482-494 (2012).</li><li>Eymael, J., Smeets, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+fate+of+the+regenerating+cells+of+the+kidney.">Origin and fate of the regenerating cells of the kidney.</a> European Journal of Pharmacology. 790, 62-73 (2016).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+progenitor+cells+contribute+to+hyperplastic+lesions+of+podocytopathies+and+crescentic+glomerulonephritis.">Renal progenitor cells contribute to hyperplastic lesions of podocytopathies and crescentic glomerulonephritis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2593-2603 (2009).</li><li>Eymael, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+is+required+for+the+pathogenesis+of+experimental+crescentic+glomerulonephritis+and+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis.">CD44 is required for the pathogenesis of experimental crescentic glomerulonephritis and collapsing focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 93 (3), 626-642 (2018).</li><li>Roeder, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+ERK1/2+increases+CD44+in+glomerular+parietal+epithelial+cells+leading+to+matrix+expansion.">Activated ERK1/2 increases CD44 in glomerular parietal epithelial cells leading to matrix expansion.</a> Kidney International. 91 (4), 896-913 (2017).</li><li>Appel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+podocytes+from+glomerular+parietal+epithelial+cells.">Recruitment of podocytes from glomerular parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (2), 333-343 (2009).</li><li>Yaoita, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visceral+epithelial+cells+in+rat+glomerular+cell+culture.">Visceral epithelial cells in rat glomerular cell culture.</a> European Journal of Cell Biology. 67 (2), 136-144 (1995).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigations+of+Glucocorticoid+Action+in+GN.">Investigations of Glucocorticoid Action in GN.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 28 (5), 1408-1420 (2017).</li><li>Ohse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+conditionally+immortalized+mouse+glomerular+parietal+epithelial+cells+in+culture.">Establishment of conditionally immortalized mouse glomerular parietal epithelial cells in culture.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 19 (10), 1879-1890 (2008).</li></ol>

이 문서에 설명된 프로토콜을 사용하여, 하나는 정수리 상피 세포 활성화의 결과인 정수리 상피 세포 증식을 평가하기 위하여 단 하나 캡슐화된 구체를 사용할 수 있습니다. 이 전 생체 내 모델은 우리가 정수리 상피 세포 활성화에 관여하는 분자 경로를 자세히 연구 할 수 있게 합니다. 설명된 방법은 신장 해부및 체질의 간단한 개념에 의존하여 탈구를 분리하고 배양하고 상이한 실험 조건 하에?...

구체 질환은 신장 질환의 중요한 그룹이며 말기 신장 질환 (ESRD)의 주요 원인을 나타냅니다. 불행히도, 특정 치료 옵션은 제한적이며 ESRD로의 진행은 불가피합니다. 구체 질환은 사구체 손상의 존재에 의해 정의되며 염증 성 및 비 염증 성 질환으로 그룹화 될 수 있습니다. 초기 모욕은 다르지만, 최근 연구에 따르면 일반적인 세포 메커니즘은 사구성 상피 세포 증식으로 이어지며 궁극적으로 모든 사구형 질환에서 사구체 경화증으로 이어지며 근본 원인11,2,,3,,4에관계없이.
구체적으로, 구체류경화성 병변은 주로 활성화된 정수리 성 상피 세포5,,6로구성된 것으로 나타났다. 생리학적 조건하에서, 정수리 상피 세포는 구체의 Bowman의 캡슐을 줄 이는 평평한 정지 상피 세포입니다. 그러나, 유전적 돌연변이(예를 들어, 포도세포 특이적 또는 미토콘드리아 세포병리학), 염증 또는 과여과(예를 들어, 신장 질량 감소, 고혈압, 비만 또는 당뇨병 성 멜리터스)으로 인한 모든 구체 손상은 정수리 세포의 활성화를 시작할 수 있다. 활성화된 정수리 상피 세포는 세포 초승달 또는 경화 병변의 형성을 초래하는 세포외 매트릭스를 증식하고 증착하고예금5,,7,,8. 이러한 프로세스의 진행은 신장 기능9의손실을 초래한다. 따라서, 정수리 상피 세포 활성화는 염증성 및 비염증성 구엽기 질환1,,2,,3,,4,,10모두에서 사구체 경화증의 발달 및 진행에 중요한 요소입니다.
정수리 상피 세포 활성화를 중재하는 분자 과정은 여전히 크게 알려지지 않았습니다. 최근 연구에 따르면 활성화된 정수리 상피 세포 드 노보 익스프레스 CD44, 세포 증식 및 마이그레이션에 관여하는 다른 경로의 활성화에 중요한 수용체. 더욱이, CD44의 억제는 정수리 상피 세포 활성화를 억제하고 염증성 뿐만 아니라 비염증성 구엽기질환(11,,12)의동물 모델에서 초승달 형성 및 구종증의 진행을 감쇠시키는 것으로 나타났다.
정수리 상피 세포 활성화는 사구체 경화증과 초승달 형성의 발달을위한 핵심 플레이어이기 때문에, 이 세포의 억제는 사구형 질병의 진행을 감속할 수 있었습니다. 정수리 상피 세포 활성화를 구동 하는 분자 경로의 용해성 구엽 질환에서 초플라스틱 및 구체 성 병 변의 형성을 감쇠 특정 치료 개입의 개발로 이어질 수 있습니다.
실험적인 동물 모델에서는, 정수리 상피 세포에 변경된 유전자 발현(녹아웃 모델 또는 형질전환 마우스 모형) 또는 약물 치료의 직접적인 효력에 대한 증거를 제공하기가 빈번하게 어렵습니다. 기존의 녹아웃 마우스에서 생체 내에서 관찰된 생체 내 변화는 정수리 상피 세포의 직접적인 변화에 의해 설명될 수 있다. 그러나, 유전자 발현은 마우스 내의 다른 세포 유형에서도 변경되기 때문에, 다른 세포 유형에 의해 매개되는 간접적인 효력을 배제할 수 없다. 정수리 상피 세포에서 주로 활성 프로모터에 의해 구동 조건부 cre-lox 마우스의 개발은 어떤 경우에는 용액을 제공하고있다 13. 그럼에도 불구하고 조건부 형질 전환 모델은 복잡하고 더 많은 조건부 라인을 사용할 수 있지만, 기존의 녹아웃 또는 형질전환 마우스 라인의 많은 경우 아직 조건부 대체가 없습니다.
정수리 상피 세포에 대한 직접적인 효과를 연구하기 위해 우리 그룹은 정수리 상피 세포 증식 및 이동을 측정하고 분석하기 위해 마우스 신장에서 분리 된 단일 캡슐형 사구를 사용하여 전 생체 분석기를 개발했습니다. 이 방법은 정수리 상피 세포 특정 효과를 결정하고 정수리 상피 세포 활성화 및 테스트 치료 옵션에 대한 책임있는 경로를 찾을 수 있게 해 주어 이 활성화를 억제할 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >24-well cell culture plate</td>
			<td >Corning Costar</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >anti-CD31</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Endothelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >chicken-anti-rat Alexa 647</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI-Fluoromount G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>Mounting medium containing DAPI</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Digital inverted light microscope</td>
			<td>Westburg, EVOS fl microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-goat Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-rabbit Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s medium&#160;</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM-MV Single Quots kit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>containing hydrocortisone, hEGF, GA-1000, FBS and BBE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Calf Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescent microscope</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >goat-anti-synaptopodin</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>Podocyte marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hanks&#39;Balanced Salt Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ImageJ software</td>
			<td >FIJI 1.51n</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >petri dish</td>
			<td >Sarstedt</td>
			<td>size 100</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-claudin1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:100)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-SSeCKS</td>
			<td>Roswell Park Comprehensive Cancer Center,Buffalo, NY, USA</td>
			<td>kindly provided by Dr. E. Gelman, Parietal epithelial cell marker</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rat-anti-CD44</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >scalpel</td>
			<td >Dahlhausen</td>
			<td>size 10</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sieves&#160;</td>
			<td >Endecotts Ltd</td>
			<td>size 300 &#181;m, 75 &#181;m, 53 &#181;m, steel</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >syringe</td>
			<td >BD Plastipak</td>
			<td>size: 20 ml</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ultra-Low Attachment Microplates&#160;</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>6-well plates</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation

정수리 상피 세포 (PEC) 활성화는 글로메룰로오스 경화증의 개발 및 진행에 관여하는 주요 요인 중 하나입니다. 따라서 정수리 상피 세포 활성화에 관여하는 통로의 억제는 구엽 질병의 진행을 감쇠하는 도구가 될 수 있습니다. 이 문서에서는 마우스 신장으로부터 분리된 캡슐화된 사구류의 정수리 상피 세포 내 성장을 배양하고 분석하는 방법을 설명합니다. 고립 된 마우스 신장을 해부 한 후, 조직은 다진, 그리고 사구는 체질에 의해 격리된다. 캡슐화된 사구는 수집되고, 단일 사구는 정수리 상피 세포의 구체 배설물 성장을 얻기 위해 6 일 동안 배양된다. 이 기간 동안, 정수리 상피 세포 증식 및 이동은 세포 수 또는 성장하는 세포의 표면적을 결정함으로써 분석될 수 있다. 이 분석은 그러므로 형질 전환기 또는 녹아웃 마우스에 있는 변경한 유전자 발현의 효력 또는 정수리 상피 세포 성장 특성 및 신호에 배양 조건의 효력을 연구하기 위하여 공구로 이용될 수 있습니다. 이 방법을 사용하여, 정수리 상피 세포 활성화 과정에 관여 하고 결과적으로 구체 로메로클로증에서 관련 된 중요 한 경로 연구 될 수 있다.

구체 아웃성장 분석법을 수행하는 방법의 체계적인 다이어그램이 도 1에도시된다. 도 2A-D는 광 현미경을 사용하여 관찰된 바와 같이 다른 시점에서 캡슐화된 사구체의 사구체 의 성장을 나타낸다. 외성장은 마우스 신장으로부터 의자간 후 배양에서 2일, 4일 및 6일째(도2B-D)로나타...

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Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation

이 문서는 마우스 신장에서 분리된 캡슐화된 사구체 사구류의 구체 정수리 세포 성장을 배양하고 분석하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 정수리 상피 세포 증식 및 마이그레이션에 관여하는 경로를 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

정수리 상피 세포 활성화에 관여하는 통로를 분석하는 전 비보 분석으로 구체 아웃스승

Parietal epithelial cell (PEC) activation is one of the key factors involved in the development and progression of glomerulosclerosis. Inhibition of ...

정수리 상피 세포의 활성화는 신장의 구체에 있는 흉터 조직의 발달에 있는 중요한 요인에 있습니다. 이 방법을 사용하여, 우리는 이 활성화에 관련되었던 세포 프로세스를 공부하고 잘하면 질병 진행을 늦추거나 조차 중단하는 처리 선택권을 찾아볼 수 있습니다. 우리의 기술의 주요 장점은 우리가 고립 된 사구에서 바로 성장하는 1 차 세포를 사용하는 것입니다.신장을 해방 한 후, 텍스트 원고에 설명 된 바와 같이, 수술 집게와 신장을 잡고 신장 캡슐을 당겨 집게의 또 다른 쌍을 사용합니다. 그 후, 각각 HBSS의 두 밀리리터를 포함하는 여섯 개의 잘 문화 판의 우물에 신장을 배치하고 얼음에 문화 판을 배치합니다. 첫째, 신장을 100mm 페트리 접시로 옮기고 두 개의 메스를 사용하여 약 1~ 2밀리미터의 작은 조각으로 다진다.다진 신장 조각을 HBSS로 젖게 하십시오. 다음으로, 신장 조각을 300 마이크로미터 금속 체 위에 놓고 20 밀리리터 주사기의 플런저를 사용하여 체를 통해 신장을 누릅니다. 반복적으로 사이에 HBSS로 체를 헹이고 흐름을 수집하고 깨끗한 페트리 접시로 전송하는 세로지학적 파이펫을 사용합니다.메스를 사용하여 체 바닥에 남아있는 모든 것을 긁어 수집 된 신장 균질로 옮긴다. HBSS로 75 및 53 마이크로미터 체로 신장 균모를 헹구는 다. 그런 다음 두 체를 HBSS로 세척하여 모든 작은 구조를 제거합니다.20%의 태아 종아리 혈청을 보충한 DMEM으로 각각의 상부 표면을 세척하여 체에 남아 있는 신장 구조와 물질을 수집하고 6개의 매우 낮은 부착 마이크로플레이트의 우물로 재료를 옮기시다. 초저 부착 마이크로플레이트를 거꾸로 된 빛 현미경으로 가져와서 캡슐화되거나 캡슐화된 글로메룰리를 수집한 20 마이크로리터 파이펫을 사용하십시오. 파이펫 팁에 단일 구체를 잡은 후, 20 마이크로 리터의 부피에 동일한 파이펫 팁에 수집 된 신장 물질없이 신선한 DMEM 배지를 추가합니다.DMEM 배지를 가진 단일 구엽물을 24개의 잘 된 세포 배양 판의 중심으로 옮기고 3시간 동안 5%의 이산화탄소로 37도에서 배양하여 음의 중심에 구생물을 부착할 수 있도록 한다. 인큐베이션 후, 사구체는 우물의 중앙에 부착됩니다. 신중하게 추가 500 내피 성 기초 매체의 마이크로 리터 성장 인자 키트와 추가 5% FBS와 1% 페니실린과 연쇄 절제술각 각 우물에 보충.6일 동안 이산화탄소5%를 기록하며 섭씨 37도에서 단일 구사체를 배양합니다. 6일 간의 배양 후 디지털 반전 광 현미경을 사용하여 이미지를 찍고 구체 배기 성장을 분석합니다. 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 배율 막대가 있는 이미지 파일 중 하나를 열어 구사물 확장의 표면적을 결정합니다.축척 막대에 직선을 그리고 분석(Analyze)을 클릭한 다음 측정하여 픽셀의 거리를 결정합니다. 축척을 확인하려면 확장성 분석 및 설정을 클릭하고 알려진 거리 픽셀, 알려진 거리 및 길이 단위의 입력을 클릭합니다. 완료되면 확인을 클릭합니다.측정 분석 및 설정을 클릭합니다. 그런 다음 영역 및 표시 레이블에 대한 옵션을 확인합니다. 완료되면 확인을 클릭합니다.다음으로, 구체 아웃스주위에 프리핸드 셀렉션을 그립니다. 분석 및 측정을 클릭하여 이전 결정된 축척에서 아웃성장의 표면적을 포함하는 결과 테이블을 표시합니다. 이 연구에서는 캡슐화된 사구체 세포의 구체 상피 세포 가 생후로 마우스 신장으로부터 분리되고 배양되고 분석됩니다.대표적인 광 현미경 이미지는 사구체가 마우스 신장으로부터 분리된 후 배양 중 다른 시점에서 사구체 의 성장을 보여준다. 확장되는 세포가 정수리 상피 세포임을 확인하기 위해, 탈캡슐화된 구엽기는 6일 동안 격리되고 배양된다. 탈캡슐화된 사구는 이 잠복기 동안 세포 밖으로 성장을 나타내지 않습니다.면역형성 염색은 상이한 정수리 상피 세포 마커, 사진 부위 특이적 마커 및 내피 세포 마커를 위해 수행됩니다. 결과는 성장하는 세포가 실제로 정수리 상피 세포임을 확인합니다. CD44 녹아웃 마우스로부터 연관된 글로메룰리는 야생형 마우스로부터 분리된 사구체에 비해 구체 아웃성장의 표면적뿐만 아니라 성장하는 세포의 수가 감소하는 것을 나타낸다.이것은 정수리 상피 세포 활성화에 있는 CD44를 위한 중요한 역할을 건의합니다. 이 기술을 사용 하 여, 그것은 또한 정 수리 상피 세포 활성화에 약물에 미치는 영향을 공부 하는 것이 가능. 이것은 당신의 선택의 약으로 고립된 glomeruli를 취급하고 세포 성장 및 세포 이동에 있는 다름을 분석하기 위하여 행해질 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

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Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

연구

생물학

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

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시토크롬의 세포질 Microinjection 의한 Apoptosis의 활성화 C</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

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RNA 정제에 의한 염색질 절연 (처프)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

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The thyroid is a bilobated endocrine gland localized at the base of the neck, producing the thyroid hormones T3, T4, and calcitonin. T3 and T4 are ...

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에 대한 마우스 태아의 전체 소장 문화 시스템<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 신호 전달 경로와 융모 개발의 3 차원 라이브 영상의 조작

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Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

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은 C-FOS 단백질 면역 조직 검색 : 특정 생리적 반응에 관여 중앙 진학의 마커로서 유용한 도구<em&gt; 생체</em&gt; 및<em&gt; 전의 VIVO</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

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Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

모기의 벡터 역량을 분석 하는 방법으로 타 액 분 비를 강제

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...