Name: glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation
Uploaded: 2020-08-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation at JoVE.com

Denne forskningen ble støttet av dutch Kidney foundation (grant 14A3D104) og Nederland Organization for Scientific Research (NWO VIDI stipend: 016.156.363).

Alle dyreforsøk ble utført i henhold til retningslinjene til Dyreetikkkomiteen ved Radboud University Nijmegen.
MERK: Ubehandlede, friske villtypemus (WT) mus (n = 4) og cd44-/- (n = 4) mus ble ofret i en alder av 12-16 uker. Både mannlige og kvinnelige mus ble brukt. Alle musene var på C57Bl/6-bakgrunnen.
1. Mus nyre disseksjon
<ol><li>Ofre friske WT-mus eller genetisk endrede mus ved cervical dislokasjon.</li>
	<li>Dissekere hele musenyrene rett ett...

<ol>
	<li>Fatima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cell+activation+marker+in+early+recurrence+of+FSGS+in+the+transplant.">Parietal epithelial cell activation marker in early recurrence of FSGS in the transplant.</a> Clinical journal of the American Society of Nephrology: CJASN. 7 (11), 1852-1858 (2012).</li><li>Dijkman, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferating+cells+in+HIV+and+pamidronate-associated+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis+are+parietal+epithelial+cells.">Proliferating cells in HIV and pamidronate-associated collapsing focal segmental glomerulosclerosis are parietal epithelial cells.</a> Kidney International. 70 (2), 338-344 (2006).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+histological+patterns+in+glomerular+epithelial+cells+in+secondary+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Common histological patterns in glomerular epithelial cells in secondary focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 88 (5), 990-998 (2015).</li><li>Dijkman, H., Smeets, B., van der Laak, J., Steenbergen, E., Wetzels, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parietal+epithelial+cell+is+crucially+involved+in+human+idiopathic+focal+segmental+glomerulosclerosis.">The parietal epithelial cell is crucially involved in human idiopathic focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 68 (4), 1562-1572 (2005).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+participate+in+the+formation+of+sclerotic+lesions+in+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Parietal epithelial cells participate in the formation of sclerotic lesions in focal segmental glomerulosclerosis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 22 (7), 1262-1274 (2011).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+origin+of+glomerular+extracapillary+lesions+from+parietal+epithelial+cells.">Tracing the origin of glomerular extracapillary lesions from parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2604-2615 (2009).</li><li>Smeets, B., Moeller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+and+podocytes+in+glomerular+diseases.">Parietal epithelial cells and podocytes in glomerular diseases.</a> Seminars in Nephrology. 32 (4), 357-367 (2012).</li><li>Ryu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+leakage+through+glomerular+basement+membrane+ruptures+triggers+the+proliferation+of+parietal+epithelial+cells+and+crescent+formation+in+non-inflammatory+glomerular+injury.">Plasma leakage through glomerular basement membrane ruptures triggers the proliferation of parietal epithelial cells and crescent formation in non-inflammatory glomerular injury.</a> The Journal of Pathology. 228 (4), 482-494 (2012).</li><li>Eymael, J., Smeets, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+fate+of+the+regenerating+cells+of+the+kidney.">Origin and fate of the regenerating cells of the kidney.</a> European Journal of Pharmacology. 790, 62-73 (2016).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+progenitor+cells+contribute+to+hyperplastic+lesions+of+podocytopathies+and+crescentic+glomerulonephritis.">Renal progenitor cells contribute to hyperplastic lesions of podocytopathies and crescentic glomerulonephritis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2593-2603 (2009).</li><li>Eymael, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+is+required+for+the+pathogenesis+of+experimental+crescentic+glomerulonephritis+and+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis.">CD44 is required for the pathogenesis of experimental crescentic glomerulonephritis and collapsing focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 93 (3), 626-642 (2018).</li><li>Roeder, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+ERK1/2+increases+CD44+in+glomerular+parietal+epithelial+cells+leading+to+matrix+expansion.">Activated ERK1/2 increases CD44 in glomerular parietal epithelial cells leading to matrix expansion.</a> Kidney International. 91 (4), 896-913 (2017).</li><li>Appel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+podocytes+from+glomerular+parietal+epithelial+cells.">Recruitment of podocytes from glomerular parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (2), 333-343 (2009).</li><li>Yaoita, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visceral+epithelial+cells+in+rat+glomerular+cell+culture.">Visceral epithelial cells in rat glomerular cell culture.</a> European Journal of Cell Biology. 67 (2), 136-144 (1995).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigations+of+Glucocorticoid+Action+in+GN.">Investigations of Glucocorticoid Action in GN.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 28 (5), 1408-1420 (2017).</li><li>Ohse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+conditionally+immortalized+mouse+glomerular+parietal+epithelial+cells+in+culture.">Establishment of conditionally immortalized mouse glomerular parietal epithelial cells in culture.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 19 (10), 1879-1890 (2008).</li></ol>

Ved hjelp av protokollen som er beskrevet i denne artikkelen, kan man bruke enkeltinnkapslede glomeruli for å evaluere parietal epitelcelleproliferasjon som er en konsekvens av parietal epitelcelleaktivering. Denne ex vivo-modellen vil gjøre oss i stand til å studere i detalj de molekylære banene, som er involvert i parietal epitelcelleaktivering. Den beskrevne metoden er avhengig av det enkle konseptet med nyredisseksjon og sikting for å isolere og kultur innkapslet glomeruli og å sammenligne spredning og/eller mi...

Glomerulære sykdommer er en viktig gruppe nyresykdommer og representerer en viktig årsak til terminal nyresykdom (ESRD). Dessverre er spesifikke behandlingsalternativer begrenset og progresjon til ESRD er uunngåelig. Glomerulære sykdommer defineres av tilstedeværelsen av glomerulær skade og kan grupperes i inflammatoriske og ikke-inflammatoriske sykdommer. Selv om den første fornærmelsen er forskjellig, har nyere studier vist at en vanlig cellulær mekanisme fører til glomerulær epitelcellehyperplasi og til slutt til glomerulosklerose i alle glomerulære sykdommer, uavhengig av den underliggende årsaken1,2,3,4.
Spesielt ble det vist at glomerulosklerotiske lesjoner hovedsakelig består av aktiverte parietale epitelceller5,6. Under fysiologiske forhold er parietale epitelceller flate quiescent epitelceller som linje Bowmans kapsel av glomerulus. Imidlertid kan enhver glomerulær skade enten på grunn av genetiske mutasjoner (f.eks. podocyte spesifikke eller mitokondriecy cytopatier), betennelse eller hyperfiltrering (f.eks. forårsaket av redusert nyremasse, hypertensjon, fedme eller diabetisk mellitus) utløse aktivering av pariettale epitelceller. Aktiverte parietale epitelceller sprer seg og deponerer ekstracellulær matrise som resulterer i dannelse av cellulære halvmåne eller sklerotiske lesjoner5,,7,,8. Progresjon av disse prosessene resulterer i tap av nyrefunksjon9. Derfor er parietal epitelcelleaktivering en nøkkelfaktor i utvikling og progresjon av glomerulosklerose i både inflammatoriske og ikke-inflammatoriske glomerulære sykdommer1,2,3,4,10.
De molekylære prosessene som medierer parietal epitelcelleaktivering, er fortsatt i stor grad ukjente. Nyere studier viser at aktiverte parietale epitelceller de novo express CD44, en reseptor som er viktig for aktivering av ulike veier involvert i cellulær spredning og migrasjon. Videre ble hemming av CD44 vist å hemme parietal epitelcelleaktivering og dempe utviklingen av halvmånedannelse og glomerulosklerose i dyremodeller av inflammatoriske samt ikke-inflammatoriske glomerulære sykdommer11,12.
Som parietal epitelcelleaktivering er en nøkkelspiller for utvikling av glomerulosklerose og halvmånedannelse, kan hemming av disse cellene bremse utviklingen av glomerulære sykdommer. Belysing av de molekylære banene som driver parietal epitelcelleaktivering, kan føre til utvikling av spesifikke terapeutiske inngrep som demper dannelsen av hyperplastiske og glomerulosklerotiske lesjoner i glomerulær sykdom.
I eksperimentelle dyremodeller er det ofte vanskelig å gi bevis for en direkte effekt av et endret genuttrykk (knock-out modeller eller transgene musemodeller) eller narkotikabehandling på parietal epitelceller. I en konvensjonell knock-out mus kan de observerte in vivo-endringene forklares ved direkte endringer i parietale epitelceller. Men siden genuttrykket også endres i andre celletyper i musen, kan man ikke utelukke indirekte effekter mediert av andre celletyper. Utviklingen av betingede cre-lox mus drevet av arrangører hovedsakelig aktive i parietal epitelceller har gitt en løsning i noentilfeller 13. Likevel er betingede transgene modeller komplekse, og selv om mer betingede linjer blir tilgjengelige, er det for mange av de konvensjonelle knock-out eller transgene muselinjene ennå ikke en betinget erstatning.
For å studere de direkte effektene på parietale epitelceller, har vår gruppe utviklet en ex vivo-analyse ved hjelp av enkeltinnkapslede glomeruli isolert fra musnyrer for å måle og analysere parietal epitelcelleproliferasjon og migrasjon. Denne metoden vil gjøre oss i stand til å bestemme parietal epitelcellespesifikke effekter og å finne ansvarlige veier for parietal epitelcelleaktivering og testbehandlingsalternativer for å hemme denne aktiveringen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >24-well cell culture plate</td>
			<td >Corning Costar</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >anti-CD31</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Endothelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >chicken-anti-rat Alexa 647</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI-Fluoromount G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>Mounting medium containing DAPI</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Digital inverted light microscope</td>
			<td>Westburg, EVOS fl microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-goat Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-rabbit Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s medium&#160;</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM-MV Single Quots kit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>containing hydrocortisone, hEGF, GA-1000, FBS and BBE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Calf Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescent microscope</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >goat-anti-synaptopodin</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>Podocyte marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hanks&#39;Balanced Salt Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ImageJ software</td>
			<td >FIJI 1.51n</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >petri dish</td>
			<td >Sarstedt</td>
			<td>size 100</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-claudin1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:100)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-SSeCKS</td>
			<td>Roswell Park Comprehensive Cancer Center,Buffalo, NY, USA</td>
			<td>kindly provided by Dr. E. Gelman, Parietal epithelial cell marker</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rat-anti-CD44</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >scalpel</td>
			<td >Dahlhausen</td>
			<td>size 10</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sieves&#160;</td>
			<td >Endecotts Ltd</td>
			<td>size 300 &#181;m, 75 &#181;m, 53 &#181;m, steel</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >syringe</td>
			<td >BD Plastipak</td>
			<td>size: 20 ml</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ultra-Low Attachment Microplates&#160;</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>6-well plates</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation

Parietal epitelcelle (PEC) aktivering er en av de viktigste faktorene som er involvert i utvikling og progresjon av glomerulosklerose. Hemming av veier involvert i parietal epitelcelleaktivering kan derfor være et verktøy for å dempe utviklingen av glomerulære sykdommer. Denne artikkelen beskriver en metode for kultur og analysere parietal epitelcelleutvekst av innkapslede glomeruli isolert fra mus nyre. Etter disseksjonering av isolerte musnyrer blir vevet hakket, og glomeruli isoleres ved sikting. Innkapslede glomeruli samles, og enkeltglomeruli er kultivert i 6 dager for å oppnå glomerulær utvekst av parietale epitelceller. I løpet av denne perioden kan parietal epitelcellespredning og migrasjon analyseres ved å bestemme cellenummeret eller overflatearealet til utvoksende celler. Denne analysen kan derfor brukes som et verktøy for å studere effekten av et endret genuttrykk hos transgene- eller knockout-mus eller effekten av kulturforhold på parietal epitelcellevekstegenskaper og signalering. Ved hjelp av denne metoden kan viktige veier som er involvert i prosessen med parietal epitelcelleaktivering og følgelig i glomerulosklerose studeres.

Et systematisk diagram over metoden for å utføre den glomerulære utvekstanalysen er vist i figur 1. Figur 2A-D viser glomerulære utvekster av innkapslede glomeruli på forskjellige tidspunkter som observert ved hjelp av lysmikroskopi. Utvekster vises på dag 2, 4 og 6 (Figur 2B-D)i kultur etter glomerulus isolasjon fra mus nyre. For å bekrefte at de utvoksende c...

Watch this Scientific Journal Video about Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation at JoVE.com

Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation

Denne artikkelen beskriver en metode for å klult og analysere glomerulære parietale epitelceller utvekster av innkapslede glomeruli isolert fra mus nyre. Denne metoden kan brukes til å studere veier involvert i parietal epitelcelleproliferasjon og migrasjon.

Glomerulær utvekst som en Ex Vivo-analyse for å analysere veier involvert i parietal epitelcelleaktivering

Parietal epithelial cell (PEC) activation is one of the key factors involved in the development and progression of glomerulosclerosis. Inhibition of ...

Aktivering av parietal epitelceller er i nøkkelfaktor i utviklingen av arrvev i glomerulus av nyrene. Ved hjelp av denne metoden kan vi studere de cellulære prosessene som er involvert i denne aktiveringen, og forhåpentligvis finne behandlingsalternativer for å bremse eller til og med stoppe sykdomsprogresjon. Den største fordelen med vår teknikk er at vi bruker primære celler som vokser rett fra de isolerte glomeruli.Etter å ha frit nyrene, som beskrevet i tekstmanuskriptet, hold nyrene med kirurgiske tang og bruk et annet par tang til å trekke av nyrekapsene. Etter dette plasserer du nyrene i brønnene til en seksbrønns kulturplate som hver inneholder to milliliter HBSS og plasserer kulturplaten på is. Først overføre nyrene til en 100 millimeter Petriskål og bruke to skalpeller for å hakke dem i små biter som er omtrent en til to millimeter.Hold hakkede nyrebiter våte med HBSS. Deretter plasserer du nyrebitene på toppen av en 300 mikrometermetermimeter sil og presser nyrene gjennom silen ved hjelp av stempelet fra en 20 milliliters sprøyte. Skyll sikten gjentatte ganger med HBSS i mellom og bruk en serologisk pipette til å samle gjennomstrømningen og overføre den til en ren petriskål.Bruk en skalpell til å skrape av alt som forblir i bunnen av silen og overføre den til det innsamlede nyrehomogenatet. Skyll nyrehomogenatet gjennom en 75 og 53 mikrometer sil med HBSS. Vask deretter begge siktene med HBSS for å fjerne alle de mindre strukturene.Samle nyrestrukturer og materiale som forble i sikten ved å vaske den øvre overflaten av hver med DMEM supplert med 20% fosterkalv serum og overføre materialet til brønnene av en seks godt ultra-lav vedlegg mikroplate. Ta med mikroplaten med ultral lite vedlegg til et invertert lysmikroskop, og bruk en 20 mikroliter pipette som ble samlet inn enkelt innkapslet og eller halshugget glomeruli. Etter å ha fanget en enkelt glomerulus i pipettespissen, tilsett ferskt DMEM medium uten samlet nyremateriale i samme pipettespiss til et volum på 20 mikroliter.Overfør enkeltglomerulus med DMEM-mediet til midten av en brønn av en 24-brønncellekulturplate og inkuber ved 37 grader Celsius med 5% karbondioksid i tre timer for å tillate vedlegg av glomerulus til midten av brønnen. Etter inkubasjonen vil glomerulus bli festet til midten av brønnen. Tilsett nøye 500 mikroliter endotelbasalmediet supplert med et vekstfaktorsett og ytterligere 5% FBS og 1% penicillin og streptomycin til hver brønn.Kultur enkeltglomeruli på 37 grader Celsius med 5% karbondioksid i seks dager. Etter seks dager med inkubasjon, bruk et digitalt invertert lysmikroskop for å ta bilder og analysere den glomerulære utveksten. Ved hjelp av en bildeanalyseprogramvare bestemmer du overflatearealet av glomerulær utvekst ved å åpne en av bildefilene med en skalalinje.Tegn en rett linje på skalalinjen og klikk på Analyser, og mål deretter for å bestemme avstanden i piksler. Hvis du vil bestemme skalaen, klikker du Analyser og angi skalering og skriver inn den kjente avstanden i piksler, den kjente avstanden og lengdens enhet. Klikk Ok når du er ferdig.Klikk på Analyser og angi målinger. Deretter kontrollerer du alternativene for Område- og Visningsetikett. Klikk Ok når du er ferdig.Deretter tegner du et frihåndsvalg rundt den glomerulære utveksten. Klikk Analyser og mål for å vise en resultattabell, som inneholder overflatearealet for utvekst i den tidligere bestemte skalaen. i denne studien isoleres de glomerulære parietal epitelcelleutvekstene av innkapslede glomeruli fra musenyrer, kultivert og analyseres.Representative lysmikroskopibilder viser de glomerulære utvekstene på forskjellige tidspunkter under kulturen etter at glomerulus er isolert fra musenyrene. For å bekrefte at de voksende cellene er parietal epitelceller, er halshuggede glomeruli også isolert og kultivert i seks dager. Halshugget glomeruli viser ingen cellevekst i løpet av denne inkubasjonsperioden.Immunofluorescerende farging utføres deretter for forskjellige parietal epitelcellemarkører, fotostedsspesifikke markører, samt endotelcellemarkører. Resultatene bekrefter at de voksende cellene faktisk er parietal epitelceller. Glomeruli assosiert fra CD44 knockout mus viser et redusert antall utvoksende celler, samt et redusert overflateareal av glomerulær utvekst sammenlignet med glomeruli isolert fra villtype mus.Dette antyder en viktig rolle for CD44 i parietal epitelcelleaktivering. Ved hjelp av denne teknikken, Det er også mulig å studere effekten på narkotika på parietal epitel celle aktivering. Dette kan gjøres ved å behandle de isolerte glomeruli med stoffet du velger og å analysere forskjellene i cellevekst og cellemigrasjon.

Research

JoVE Journal

Biology

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

Kromatin Isolering av RNA Purification (kvitre)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

Rapid Genetic Analysis of epitelial-mesenchymale signaleringsprotokoll Under Hair Regeneration

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur system for å studere Thyroid Development

The thyroid is a bilobated endocrine gland localized at the base of the neck, producing the thyroid hormones T3, T4, and calcitonin. T3 and T4 are ...

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Mus Fetal Hele tarmen Kultur System for<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Manipulering av signalveier og tredimensjonale Levende Imaging av Villus Development

Most morphogenetic processes in the fetal intestine have been inferred from thin sections of fixed tissues, providing snapshots of changes over ...

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Real Time Analyse av metabolsk profil i<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mouse Tarm Crypt Organoid Cultures

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and ...

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

C-FOS Protein Immunohistologisk Detection: Et nyttig verktøy som en markør av Central Pathways involvere seg i det fysiologiske responser<em&gt; I Vivo</em&gt; og<em&gt; Ex Vivo</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

In Vitro og i Vivo tilnærminger til å bestemme Intestinal tarmepitelet permeabilitet

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

Tvunget spyttsekresjon som metode for å analysere vektor kompetanse med mygg

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...