Name: glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation
Uploaded: 2020-08-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation at JoVE.com

Esta investigación fue apoyada por la Fundación Riñón Holandesa (concesión 14A3D104) y la Organización Neerlandesa para la Investigación Científica (subvención NWO VIDI: 016.156.363).

Todos los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices del Comité de Etica Animal de la Universidad Radboud Nijmegen.
NOTA: Los ratones no tratados de tipo salvaje sano (WT) (n.o 4) y los ratones cd44-/- (n x 4) fueron sacrificados a la edad de 12 a 16 semanas. Se utilizaron ratones machos y hembras. Todos los ratones estaban en el fondo C57Bl/6.
1. Disección renal de ratón
<ol><li>Sacrificar ratones WT sanos o ratones genéti...

<ol>
	<li>Fatima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cell+activation+marker+in+early+recurrence+of+FSGS+in+the+transplant.">Parietal epithelial cell activation marker in early recurrence of FSGS in the transplant.</a> Clinical journal of the American Society of Nephrology: CJASN. 7 (11), 1852-1858 (2012).</li><li>Dijkman, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferating+cells+in+HIV+and+pamidronate-associated+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis+are+parietal+epithelial+cells.">Proliferating cells in HIV and pamidronate-associated collapsing focal segmental glomerulosclerosis are parietal epithelial cells.</a> Kidney International. 70 (2), 338-344 (2006).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+histological+patterns+in+glomerular+epithelial+cells+in+secondary+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Common histological patterns in glomerular epithelial cells in secondary focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 88 (5), 990-998 (2015).</li><li>Dijkman, H., Smeets, B., van der Laak, J., Steenbergen, E., Wetzels, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parietal+epithelial+cell+is+crucially+involved+in+human+idiopathic+focal+segmental+glomerulosclerosis.">The parietal epithelial cell is crucially involved in human idiopathic focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 68 (4), 1562-1572 (2005).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+participate+in+the+formation+of+sclerotic+lesions+in+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Parietal epithelial cells participate in the formation of sclerotic lesions in focal segmental glomerulosclerosis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 22 (7), 1262-1274 (2011).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+origin+of+glomerular+extracapillary+lesions+from+parietal+epithelial+cells.">Tracing the origin of glomerular extracapillary lesions from parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2604-2615 (2009).</li><li>Smeets, B., Moeller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+and+podocytes+in+glomerular+diseases.">Parietal epithelial cells and podocytes in glomerular diseases.</a> Seminars in Nephrology. 32 (4), 357-367 (2012).</li><li>Ryu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+leakage+through+glomerular+basement+membrane+ruptures+triggers+the+proliferation+of+parietal+epithelial+cells+and+crescent+formation+in+non-inflammatory+glomerular+injury.">Plasma leakage through glomerular basement membrane ruptures triggers the proliferation of parietal epithelial cells and crescent formation in non-inflammatory glomerular injury.</a> The Journal of Pathology. 228 (4), 482-494 (2012).</li><li>Eymael, J., Smeets, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+fate+of+the+regenerating+cells+of+the+kidney.">Origin and fate of the regenerating cells of the kidney.</a> European Journal of Pharmacology. 790, 62-73 (2016).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+progenitor+cells+contribute+to+hyperplastic+lesions+of+podocytopathies+and+crescentic+glomerulonephritis.">Renal progenitor cells contribute to hyperplastic lesions of podocytopathies and crescentic glomerulonephritis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2593-2603 (2009).</li><li>Eymael, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+is+required+for+the+pathogenesis+of+experimental+crescentic+glomerulonephritis+and+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis.">CD44 is required for the pathogenesis of experimental crescentic glomerulonephritis and collapsing focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 93 (3), 626-642 (2018).</li><li>Roeder, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+ERK1/2+increases+CD44+in+glomerular+parietal+epithelial+cells+leading+to+matrix+expansion.">Activated ERK1/2 increases CD44 in glomerular parietal epithelial cells leading to matrix expansion.</a> Kidney International. 91 (4), 896-913 (2017).</li><li>Appel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+podocytes+from+glomerular+parietal+epithelial+cells.">Recruitment of podocytes from glomerular parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (2), 333-343 (2009).</li><li>Yaoita, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visceral+epithelial+cells+in+rat+glomerular+cell+culture.">Visceral epithelial cells in rat glomerular cell culture.</a> European Journal of Cell Biology. 67 (2), 136-144 (1995).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigations+of+Glucocorticoid+Action+in+GN.">Investigations of Glucocorticoid Action in GN.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 28 (5), 1408-1420 (2017).</li><li>Ohse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+conditionally+immortalized+mouse+glomerular+parietal+epithelial+cells+in+culture.">Establishment of conditionally immortalized mouse glomerular parietal epithelial cells in culture.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 19 (10), 1879-1890 (2008).</li></ol>

Usando el protocolo descrito en este artículo, se puede utilizar glomérulos encapsulados individuales para evaluar la proliferación de células epiteliales parietales que es una consecuencia de la activación de células epiteliales parietales. Este modelo ex vivo nos permitirá estudiar en detalle las vías moleculares, que intervienen en la activación de células epiteliales parietales. El método descrito se basa en el concepto simple de disección renal y tamizado para aislar y cultivar glomérulos encapsulados y...

Las enfermedades glomerulares son un grupo importante de trastornos renales y representan una de las principales causas de la enfermedad renal terminal(ESRD). Desafortunadamente, las opciones de tratamiento específicas son limitadas y la progresión a la ESRD es inevitable. Las enfermedades glomerulares se definen por la presencia de lesiones glomerulares y pueden agruparse en enfermedades inflamatorias y no inflamatorias. Aunque el insulto inicial es diferente, estudios recientes han demostrado que un mecanismo celular común conduce a la hiperplasia celular epitelial glomerular y, en última instancia, a la glomerulosclerosis en todas las enfermedades glomerulares, independientemente de la causa subyacente1,,2,,3,4.
Específicamente, se demostró que las lesiones glomeruloscleróticas se componen principalmente de células epiteliales parietales activadas5,6. En condiciones fisiológicas, las células epiteliales parietales son células epiteliales en reposo planas que recubren la cápsula del Bowman del glomerulo. Sin embargo, cualquier lesión glomerular ya sea debido a mutaciones genéticas (por ejemplo, citopatías de podocitos específicos o mitocondriales), inflamación o hiperfiltración (por ejemplo, causada por la reducción de la masa renal, hipertensión, obesidad o mellitus diabético) puede desencadenar la activación de células epiteliales parietales. Las células epiteliales parietales activadas proliferan y depositan matriz extracelular que resulta en la formación de media lunas celulares o lesiones escleróticas5,7,8. La progresión de estos procesos da lugar a la pérdida de la función renal9. Por lo tanto, la activación celular epitelial parietal es un factor clave en el desarrollo y progresión de la glomerulosclerosis tanto en enfermedades glomerulares inflamatorias como no inflamatorias1,,2,,3,,4,,10.
Los procesos moleculares que median la activación de células epiteliales parietales son aún desconocidos en gran medida. Estudios recientes muestran que las células epiteliales parietales activadas de novo express CD44, un receptor que es importante para la activación de diferentes vías implicadas en la proliferación celular y la migración. Además, se demostró que la inhibición de CD44 inhibe la activación de células epiteliales parietales y atenúa la progresión de la formación de media luna y la glomerulosclerosis en modelos animales de enfermedades glomerulares inflamatorias y no inflamatorias11,12.
Como la activación de células epiteliales parietales es un actor clave para el desarrollo de la glomerulosclerosis y la formación de media luna, la inhibición de estas células podría ralentizar la progresión de las enfermedades glomerulares. La elucidación de las vías moleculares que impulsan la activación celular epitelial parietal puede conducir al desarrollo de intervenciones terapéuticas específicas que atenúen la formación de lesiones hiperplásicas y glomeruloscleróticas en la enfermedad glomerular.
En modelos animales experimentales, con frecuencia es difícil proporcionar evidencia para un efecto directo de una expresión génica alterada (modelos de eliminación o modelos de ratón transgénicos) o tratamiento farmacológico en las células epiteliales parietales. En un ratón noqueado convencional, los cambios in vivo observados podrían explicarse por cambios directos en las células epiteliales parietales. Sin embargo, dado que la expresión génica también se altera en otros tipos de células dentro del ratón, no se pueden excluir los efectos indirectos mediados por otros tipos de células. El desarrollo de ratones cre-lox condicionales impulsados por promotores principalmente activos en células epiteliales parietales ha proporcionado una solución en algunos casos13. Sin embargo, los modelos transgénicos condicionales son complejos y aunque hay más líneas condicionales disponibles, para muchas de las líneas convencionales de ratón noqueado o transgénico aún no hay un sustituto condicional.
Para estudiar los efectos directos sobre las células epiteliales parietales, nuestro grupo ha desarrollado un ensayo ex vivo utilizando glomérulos encapsulados aislados de los riñones de ratón para medir y analizar la proliferación y migración de células epiteliales parietales. Este método nos permitirá determinar los efectos específicos de las células epiteliales parietales y encontrar vías responsables para la activación de células epiteliales parietales y probar opciones de tratamiento para inhibir esta activación.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >24-well cell culture plate</td>
			<td >Corning Costar</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >anti-CD31</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Endothelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >chicken-anti-rat Alexa 647</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI-Fluoromount G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>Mounting medium containing DAPI</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Digital inverted light microscope</td>
			<td>Westburg, EVOS fl microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-goat Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-rabbit Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s medium&#160;</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM-MV Single Quots kit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>containing hydrocortisone, hEGF, GA-1000, FBS and BBE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Calf Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescent microscope</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >goat-anti-synaptopodin</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>Podocyte marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hanks&#39;Balanced Salt Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ImageJ software</td>
			<td >FIJI 1.51n</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >petri dish</td>
			<td >Sarstedt</td>
			<td>size 100</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-claudin1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:100)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-SSeCKS</td>
			<td>Roswell Park Comprehensive Cancer Center,Buffalo, NY, USA</td>
			<td>kindly provided by Dr. E. Gelman, Parietal epithelial cell marker</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rat-anti-CD44</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >scalpel</td>
			<td >Dahlhausen</td>
			<td>size 10</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sieves&#160;</td>
			<td >Endecotts Ltd</td>
			<td>size 300 &#181;m, 75 &#181;m, 53 &#181;m, steel</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >syringe</td>
			<td >BD Plastipak</td>
			<td>size: 20 ml</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ultra-Low Attachment Microplates&#160;</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>6-well plates</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation

La activación de la célula epitelial parietal (PEC) es uno de los factores clave involucrados en el desarrollo y progresión de la glomerulosclerosis. Por lo tanto, la inhibición de las vías implicadas en la activación de células epiteliales parietales podría ser una herramienta para atenuar la progresión de las enfermedades glomerulares. Este artículo describe un método para cultivar y analizar el crecimiento de células epiteliales parietales de glomérulos encapsulados aislados del riñón de ratón. Después de diseccionar los riñones aislados de ratón, el tejido se pica, y los glomérulos se aíslan por tamizado. Se recogen glomérulos encapsulados, y se cultivan 6 días para obtener el crecimiento glomerular de células epiteliales parietales. Durante este período, la proliferación y migración de células epiteliales parietales se puede analizar determinando el número de célula o el área de superficie de las células que crecen. Por lo tanto, este ensayo puede utilizarse como herramienta para estudiar los efectos de una expresión génica alterada en ratones transgénicos o noqueadores o los efectos de las condiciones de cultivo en las características de crecimiento y señalización de células epiteliales parietales. Utilizando este método, se pueden estudiar vías importantes implicadas en el proceso de activación celular epitelial parietal y, en consecuencia, en la glomerulosclerosis.

En la Figura 1se muestra un diagrama sistemático del método para realizar el ensayo de crecimiento glomerular. La Figura 2A-D muestra los crecimientos glomerulares de glomérulos encapsulados en diferentes puntos de tiempo como se observa mediante microscopía de luz. Los crecimientos se muestran en los días 2, 4 y 6(Figura 2B-D) en el cultivo después del aislami...

Watch this Scientific Journal Video about Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation at JoVE.com

Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation

Este artículo describe un método para cultivar y analizar los crecimientos de células epiteliales parietales glollares de glomérulos encapsulados aislados del riñón de ratón. Este método se puede utilizar para estudiar las vías implicadas en la proliferación y migración de células epiteliales parietales.

Crecimiento glomerular como ensayo ex vivo para analizar las rutas involucradas en la activación de células epiteliales parietales

Parietal epithelial cell (PEC) activation is one of the key factors involved in the development and progression of glomerulosclerosis. Inhibition of ...

La activación de las células epiteliales parietales es un factor clave en el desarrollo de tejido cicatricial en el glomérulo del riñón. Usando este método, podemos estudiar los procesos celulares involucrados en esta activación y, con suerte, encontrar opciones de tratamiento para ralentizar o incluso detener la progresión de la enfermedad. La principal ventaja de nuestra técnica es que utilizamos células primarias que crecen directamente de los glomérulos aislados.Después de liberar los riñones, como se describe en el manuscrito de texto, sostenga el riñón con los fórceps quirúrgicos y use otro par de fórceps para extraer las cápsulas renales. Después de esto, coloque los riñones en los pozos de una placa de cultivo de seis pozos que contengan dos mililitros de HBSS y coloque la placa de cultivo sobre hielo. Primero, transfiera los riñones a una placa Petri de 100 milímetros y use dos bisturíes para picarlos en trozos pequeños que son aproximadamente de uno a dos milímetros.Mantenga las piezas renales picadas húmedas con HBSS. A continuación, coloque las piezas renales encima de un tamiz metálico de 300 micrómetros y presione el riñón a través del tamiz utilizando el émbolo de una jeringa de 20 mililitros. Enjuague repetidamente el tamiz con HBSS en el medio y utilice una pipeta serológica para recoger el flujo y transferirlo a un plato limpio de Petri.Usa un bisturí para raspar todo lo que queda en la parte inferior del tamiz y transferirlo al homogenenato renal recogido. Enjuague el homogeneizar del riñón a través de un tamiz de 75 y 53 micrómetros con HBSS. A continuación, lave ambos tamices con HBSS para eliminar todas las estructuras más pequeñas.Recoger las estructuras renales y el material que quedaba en los tamices lavando la superficie superior de cada uno con DMEM complementado con 20%suero de ternero fetal y transferir el material a los pozos de una microplaca de unión ultra-baja de seis pozos. Lleve la microplaca de unión ultrabajo a un microscopio de luz invertido y utilice una pipeta de 20 microlitros que se tomó para recoger glomérulos encapsulados o decapsulados. Después de atrapar un solo glomerulo en la punta de la pipeta, agregue un medio DMEM fresco sin material renal recogido en la misma punta de pipeta a un volumen de 20 microlitros.Transfiera el glomerós único con el medio DMEM al centro de un pozo de una placa de cultivo celular de 24 pozos e incubar a 37 grados centígrados con un 5% de dióxido de carbono durante tres horas para permitir la fijación del glomerós al centro del pozo. Después de la incubación, el glomérulo se unirá al centro del pozo. Añadir cuidadosamente 500 microlitros de medio basal endotelial complementado con un kit de factor de crecimiento y un adicional 5%FBS y 1%penicilina y estreptomicina a cada pozo.Cultiva los glomérulos individuales a 37 grados centígrados con un 5% de dióxido de carbono durante seis días. Después de seis días de incubación, utilice un microscopio de luz digital invertido para tomar imágenes y analizar el crecimiento glomerular. Con un software de análisis de imágenes, determine el área de superficie del crecimiento glomerular abriendo uno de los archivos de imagen con una barra de escala.Dibuje una línea recta en la barra de escala y haga clic en Analizar y, a continuación, mida para determinar la distancia en píxeles. Para determinar la escala, haga clic en Analizar y establecer escala e introduzca la distancia conocida en píxeles, la distancia conocida y la unidad de longitud. Haga clic en Aceptar cuando haya terminado.Haga clic en Analizar y establecer medidas. A continuación, compruebe las opciones de Etiqueta de visualización y área. Haga clic en Aceptar cuando haya terminado.A continuación, dibuje una selección a mano alzada alrededor del crecimiento glomerular. Haga clic en Analizar y medir para mostrar una tabla de resultados, que contiene el área de superficie de crecimiento en la escala determinada anteriormente. en este estudio, los crecimientos de células epiteliales parietales glomerulares de glomérulos encapsulados se aíslan de los riñones de ratón, se cultivan y se analizan.Las imágenes representativas de microscopía de luz muestran los crecimientos glomerulares en diferentes puntos de tiempo durante el cultivo después de que el glosulo está aislado de los riñones del ratón. Con el fin de validar que las células que crecen son células epiteliales parietales, los glomérulos decapsulados también se aíslan y se cultivan durante seis días. Los glomérulos decapsulados no muestran crecimiento celular durante este período de incubación.A continuación, se realiza tinción inmunofluorescente para diferentes marcadores de células epiteliales parietales, marcadores específicos del sitio fotográfico, así como marcadores de células endoteliales. Los resultados validan que las células que crecen, de hecho, son células epiteliales parietales. Los glomérulos asociados a los ratones noqueadores CD44 muestran una disminución del número de células que crecen, así como una disminución del área superficial del crecimiento glomerular en comparación con los glomérulos aislados de ratones de tipo salvaje.Esto sugiere un papel importante para CD44 en la activación de células epiteliales parietales. Usando esta técnica, también es posible estudiar los efectos sobre los fármacos en la activación de células epiteliales parietales. Esto se puede hacer mediante el tratamiento de los glomérulos aislados con el fármaco de su elección y para analizar las diferencias en el crecimiento celular y la migración celular.

Research

JoVE Journal

Biology

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Cultura de células humanas primarias epiteliales del tubo de Falopio

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Investigación

Biología

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

La activación de la apoptosis mediante microinyección citoplasmática del citocromo C</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

Aislamiento de la cromatina mediante la purificación de ARN (chirp)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

El análisis genético rápido de epitelio-mesenquimal de señalización durante la regeneración del cabello

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

Un<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sistema de Cultura para estudiar el desarrollo de la tiroides

The thyroid is a bilobated endocrine gland localized at the base of the neck, producing the thyroid hormones T3, T4, and calcitonin. T3 and T4 are ...

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Sistema de Cultura ratón fetal Whole Intestino para<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Manipulación de vías de señalización y tridimensional de imágenes en vivo del desarrollo de vellosidades

Most morphogenetic processes in the fetal intestine have been inferred from thin sections of fixed tissues, providing snapshots of changes over ...

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Bienes Análisis Tiempo de perfil metabólico en<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Culturas ratón intestinal Cripta organoides

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and ...

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

La proteína c-Fos detección inmunohistoquímico: una herramienta útil como marcador de vías centrales implicados en las respuestas fisiológicas específicas<em&gt; En Vivo</em&gt; y<em&gt; Ex Vivo</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

In Vitro e In Vivo métodos para determinar la permeabilidad de la célula epitelial Intestinal

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

Forzado de la salivación como un método para analizar la competencia de vectores de mosquitos

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...