Name: glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation
Uploaded: 2020-08-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation at JoVE.com

Denna forskning stöddes av Dutch Kidney Foundation (bidrag 14A3D104) och Nederländernas organisation för vetenskaplig forskning (NWO VIDI-stipendium: 016.156.363).

Alla djurförsök utfördes i enlighet med riktlinjerna från den djuretiska kommittén vid Radboud-universitetet Nijmegen.
Obehandlade, friska vilda möss (WT) möss (n = 4) och cd44-/- (n = 4) möss offrades vid en ålder av 12−16 veckor. Både han- och honmöss användes. Alla möss var på C57Bl/6 bakgrund.
1. Mus njure dissekering
<ol><li>Offra friska WT möss eller genetiskt modifierade möss genom livmoderhalscancer störning.</li>
	<li>Dissekera...

<ol>
	<li>Fatima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cell+activation+marker+in+early+recurrence+of+FSGS+in+the+transplant.">Parietal epithelial cell activation marker in early recurrence of FSGS in the transplant.</a> Clinical journal of the American Society of Nephrology: CJASN. 7 (11), 1852-1858 (2012).</li><li>Dijkman, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferating+cells+in+HIV+and+pamidronate-associated+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis+are+parietal+epithelial+cells.">Proliferating cells in HIV and pamidronate-associated collapsing focal segmental glomerulosclerosis are parietal epithelial cells.</a> Kidney International. 70 (2), 338-344 (2006).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+histological+patterns+in+glomerular+epithelial+cells+in+secondary+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Common histological patterns in glomerular epithelial cells in secondary focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 88 (5), 990-998 (2015).</li><li>Dijkman, H., Smeets, B., van der Laak, J., Steenbergen, E., Wetzels, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parietal+epithelial+cell+is+crucially+involved+in+human+idiopathic+focal+segmental+glomerulosclerosis.">The parietal epithelial cell is crucially involved in human idiopathic focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 68 (4), 1562-1572 (2005).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+participate+in+the+formation+of+sclerotic+lesions+in+focal+segmental+glomerulosclerosis.">Parietal epithelial cells participate in the formation of sclerotic lesions in focal segmental glomerulosclerosis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 22 (7), 1262-1274 (2011).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+origin+of+glomerular+extracapillary+lesions+from+parietal+epithelial+cells.">Tracing the origin of glomerular extracapillary lesions from parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2604-2615 (2009).</li><li>Smeets, B., Moeller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parietal+epithelial+cells+and+podocytes+in+glomerular+diseases.">Parietal epithelial cells and podocytes in glomerular diseases.</a> Seminars in Nephrology. 32 (4), 357-367 (2012).</li><li>Ryu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+leakage+through+glomerular+basement+membrane+ruptures+triggers+the+proliferation+of+parietal+epithelial+cells+and+crescent+formation+in+non-inflammatory+glomerular+injury.">Plasma leakage through glomerular basement membrane ruptures triggers the proliferation of parietal epithelial cells and crescent formation in non-inflammatory glomerular injury.</a> The Journal of Pathology. 228 (4), 482-494 (2012).</li><li>Eymael, J., Smeets, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+fate+of+the+regenerating+cells+of+the+kidney.">Origin and fate of the regenerating cells of the kidney.</a> European Journal of Pharmacology. 790, 62-73 (2016).</li><li>Smeets, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+progenitor+cells+contribute+to+hyperplastic+lesions+of+podocytopathies+and+crescentic+glomerulonephritis.">Renal progenitor cells contribute to hyperplastic lesions of podocytopathies and crescentic glomerulonephritis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (12), 2593-2603 (2009).</li><li>Eymael, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+is+required+for+the+pathogenesis+of+experimental+crescentic+glomerulonephritis+and+collapsing+focal+segmental+glomerulosclerosis.">CD44 is required for the pathogenesis of experimental crescentic glomerulonephritis and collapsing focal segmental glomerulosclerosis.</a> Kidney International. 93 (3), 626-642 (2018).</li><li>Roeder, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+ERK1/2+increases+CD44+in+glomerular+parietal+epithelial+cells+leading+to+matrix+expansion.">Activated ERK1/2 increases CD44 in glomerular parietal epithelial cells leading to matrix expansion.</a> Kidney International. 91 (4), 896-913 (2017).</li><li>Appel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+podocytes+from+glomerular+parietal+epithelial+cells.">Recruitment of podocytes from glomerular parietal epithelial cells.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (2), 333-343 (2009).</li><li>Yaoita, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visceral+epithelial+cells+in+rat+glomerular+cell+culture.">Visceral epithelial cells in rat glomerular cell culture.</a> European Journal of Cell Biology. 67 (2), 136-144 (1995).</li><li>Kuppe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigations+of+Glucocorticoid+Action+in+GN.">Investigations of Glucocorticoid Action in GN.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 28 (5), 1408-1420 (2017).</li><li>Ohse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+conditionally+immortalized+mouse+glomerular+parietal+epithelial+cells+in+culture.">Establishment of conditionally immortalized mouse glomerular parietal epithelial cells in culture.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 19 (10), 1879-1890 (2008).</li></ol>

Med hjälp av protokollet som beskrivs i denna artikel, kan man använda enstaka inkapslade glomeruli att utvärdera parietal epitelial cell spridning som är en följd av parietal epitelial cell aktivering. Denna ex vivo modell kommer att göra det möjligt för oss att studera i detalj de molekylära vägar, som är involverade i parietal epitelial cell aktivering. Den beskrivna metoden bygger på det enkla begreppet njurdissektion och siktning för att isolera och kultur inkapslade glomeruli och att jämföra spridnin...

Glomerular sjukdomar är en viktig grupp av njursjukdomar och utgör en viktig orsak till slutstadiet njursjukdom (ESRD). Tyvärr är specifika behandlingsalternativ begränsade och progression till ESRD är oundviklig. Glomerular sjukdomar definieras av närvaron av glomerular skada och kan grupperas i inflammatoriska och icke-inflammatoriska sjukdomar. Även om den ursprungliga förolämpningen är annorlunda, nyligen genomförda studier har visat att en gemensam cellulär mekanism leder till glomerular epitelial cell hyperplasi och i slutändan till glomeruloskleros i alla glomerular sjukdomar, oavsett den underliggande orsaken1,2,3,4.
Närmare bestämt visade det sig att glomerulosclerotic lesioner huvudsakligen består av aktiverade parietala epitelceller5,6. Under fysiologiska förhållanden, parietala epitelceller är platt quiescent epitelceller som kantar Bowman kapsel av glomerulus. Eventuella glomerära skador antingen på grund av genetiska mutationer (t.ex. podocyter specifika eller mitokondriella cytopatier), inflammation eller hyperfiltrering (t.ex., orsakad av minskad njurmassa, hypertoni, fetma eller diabetes mellitus) kan utlösa aktivering av parietala epitelceller. Aktiverade parietala epitelceller förökar sig och deponerar extracellulär matris som resulterar i bildandet av cellulära halvmånar eller sklerotiska lesioner5,,7,8. Progression av dessa processer resulterar i förlust av njurfunktion9. Därför är parietal epitelial cell aktivering en viktig faktor i utvecklingen och utvecklingen av glomeruloskleros i både inflammatoriska och icke-inflammatoriska glomerular sjukdomar1,2,3,4,10.
De molekylära processer som förmedlar parietal epitelial cell aktivering är fortfarande i stort sett okänd. Nyligen genomförda studier visar att aktiverade parietala epitelceller de novo express CD44, en receptor som är viktig för aktivering av olika vägar som är involverade i cellulär spridning och migration. Dessutom, hämning av CD44 visade sig hämma parietal epitelial cell aktivering och dämpa utvecklingen av halvmåne bildning och glomeruloskleros i djurmodeller av inflammatoriska samt icke-inflammatoriska glomerular sjukdomar11,12.
Som parietal epitelial cell aktivering är en viktig aktör för utveckling av glomeruloskleros och halvmåne bildning, hämning av dessa celler kan bromsa utvecklingen av glomerular sjukdomar. Förtydligande av de molekylära vägar som driver parietal epitelial cell aktivering kan leda till utveckling av specifika terapeutiska interventioner som försvaga bildandet av hyperplastiska och glomerulosclerotic skador i glomerular sjukdom.
I experimentella djurmodeller är det ofta svårt att bevisa en direkt effekt av ett förändrat genuttryck (knock-out-modeller eller transgena musmodeller) eller läkemedelsbehandling på parietala epitelceller. I en konventionell knock-out mus de observerade in vivo förändringar kan förklaras av direkta förändringar i parietal epitelceller. Men eftersom genuttrycket också ändras i andra celltyper i musen, kan man inte utesluta indirekta effekter som medierats av andra celltyper. Utvecklingen av villkorliga cre-lox möss som drivs av promotorer främst verksamma inom parietal epitelceller har gett en lösning i vissa fall13. Icke desto mindre är villkorliga transgena modeller komplexa och även om fler villkorade linjer blir tillgängliga, finns det ännu inte något villkorat substitut för många av de konventionella knock-out- eller transgena muslinjerna.
För att studera de direkta effekterna på parietala epitelceller har vår grupp utvecklat en ex vivo-analys med hjälp av enstaka inkapslade glomeruli isolerade från musnjurar för att mäta och analysera parietal epitelial cellproliferation och migration. Denna metod kommer att göra det möjligt för oss att bestämma parietal epitelial cell specifika effekter och att hitta ansvariga vägar för parietal epitelial cell aktivering och test behandlingsalternativ för att hämma denna aktivering.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >24-well cell culture plate</td>
			<td >Corning Costar</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >anti-CD31</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Endothelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >chicken-anti-rat Alexa 647</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI-Fluoromount G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>Mounting medium containing DAPI</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Digital inverted light microscope</td>
			<td>Westburg, EVOS fl microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-goat Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >donkey-anti-rabbit Alexa 568</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>&#160;(used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s medium&#160;</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EBM-MV Single Quots kit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>containing hydrocortisone, hEGF, GA-1000, FBS and BBE</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal Calf Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescent microscope</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >goat-anti-synaptopodin</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>Podocyte marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hanks&#39;Balanced Salt Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ImageJ software</td>
			<td >FIJI 1.51n</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >petri dish</td>
			<td >Sarstedt</td>
			<td>size 100</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-claudin1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:100)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rabbit-anti-SSeCKS</td>
			<td>Roswell Park Comprehensive Cancer Center,Buffalo, NY, USA</td>
			<td>kindly provided by Dr. E. Gelman, Parietal epithelial cell marker</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >rat-anti-CD44</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>Parietal epithelial cell marker (used concentration 1:200)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >scalpel</td>
			<td >Dahlhausen</td>
			<td>size 10</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sieves&#160;</td>
			<td >Endecotts Ltd</td>
			<td>size 300 &#181;m, 75 &#181;m, 53 &#181;m, steel</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >syringe</td>
			<td >BD Plastipak</td>
			<td>size: 20 ml</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ultra-Low Attachment Microplates&#160;</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>6-well plates</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

glomerular outgrowth as an ex vivo assay to analyze pathways involved in parietal epithelial cell activation

Parietal epitelial cell (PEC) aktivering är en av de viktigaste faktorerna som deltar i utvecklingen och utvecklingen av glomerulosclerosis. Hämning av vägar som deltar i parietal epitelial cell aktivering kan därför vara ett verktyg för att dämpa utvecklingen av glomerular sjukdomar. Denna artikel beskriver en metod för att odla och analysera parietala epitelial cell utväxt av inkapslade glomeruli isolerade från musen njure. Efter dissekering isolerade mus njurar, vävnaden mals, och glomeruli isoleras genom siktning. Inkapslade glomeruli samlas in, och enda glomeruli odlas i 6 dagar för att få glomerular utväxt av parietal epitelceller. Under denna period kan parietal epitelial cell spridning och migration analyseras genom att bestämma cellnummer eller yta av utväxta celler. Denna analys kan därför användas som ett verktyg för att studera effekterna av ett förändrat genuttryck hos transgena- eller knockout-möss eller effekterna av odlingsförhållanden på parietala epitelaliska tillväxtegenskaper och signalering. Med denna metod kan viktiga vägar som är involverade i processen för parietal epitelial cell aktivering och därmed i glomeruloskleros studeras.

Ett systematiskt diagram över metoden för att utföra den glomerular utväxtanalysen visas i figur 1. Figur 2A-D visar glomerular utväxter av inkapslade glomeruli vid olika tidpunkter som observerats med hjälp av ljusmikroskopi. Utväxter visas på dag 2, 4 och 6(Figur 2B-D) i kultur efter glomerulus isolering från mus njure. För att bekräfta att de utväxta c...

Watch this Scientific Journal Video about Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation at JoVE.com

Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation

Denna artikel beskriver en metod för odling och analysera glomerular parietal epitelial cell utväxter av inkapslade glomeruli isolerade från musen njure. Denna metod kan användas för att studera vägar som är involverade i parietal epitelial cell spridning och migration.

Glomerular Utväxt som en Ex Vivo-analys för att analysera vägar som är inblandade i parietal epitelial cellaktivering

Parietal epithelial cell (PEC) activation is one of the key factors involved in the development and progression of glomerulosclerosis. Inhibition of ...

Aktivering av parietal epitelceller är i nyckelfaktor i utvecklingen av ärrvävnad i njurens glomerulus. Med hjälp av denna metod, Vi kan studera de cellulära processer som är involverade i denna aktivering och förhoppningsvis hitta behandlingsalternativ för att bromsa eller till och med stoppa sjukdomsprogression. Den största fördelen med vår teknik är att vi använder primära celler som växer direkt från den isolerade glomeruli.Efter att ha befriat njurarna, som beskrivs i textmanuskriptet, håller njuren med de kirurgiska tlykorna och använder ett annat par tlyk för att dra av njurkapslarna. Efter detta placerar njurarna i brunnarna på en sex brunnskulturplatta som var och en innehåller två milliliter HBSS och placerar odlingsplattan på is. Först överför njurarna till en 100 millimeter Petri-skålen och använda två skalpell för att finhacka dem i små bitar som är ungefär en till två millimeter.Håll de malda njurbitarna våta med HBSS. Därefter placerar njurbitarna ovanpå en 300 mikrometer metallsikt och trycker på njuren genom silen med hjälp av kolven från en 20 milliliters spruta. Skölj vid upprepade tillfällen silen med HBSS mittemellan och använd en serologisk pipett för att samla in genomströmningen och överföra den till en ren Petriskål.Använd en skalpell för att skrapa bort allt som återstår i silens botten och överför den till det uppsamlade njurhomogenatet. Skölj njurhomogenatet genom en 75- och 53 mikrometersikt med HBSS. Sedan tvätta båda siktar med HBSS för att ta bort alla de mindre strukturerna.Samla njure strukturer och material som kvar i siktarna genom att tvätta den övre ytan av varje med DMEM kompletteras med 20%fetala kalv serum och överföra materialet till brunnarna i en sex väl ultra-låg fastsättning mikroplatta. Ta ultra-låg fastsättning mikroplatta till en inverterad ljus mikroskop och använda en 20 microliter pipett tog samla enda inkapslade och eller decapsulated glomeruli. Efter att ha fångat en enda glomerulus i pipetten spets, tillsätt färsk DMEM medium utan samlas njure material i samma pipett spets till en volym av 20 mikroliter.Överför den enda glomerulus med DMEM mediet till centrum av en brunn av en 24 väl cell kultur plattan och inkubera vid 37 grader Celsius med 5%koldioxid i tre timmar för att möjliggöra fastsättning av glomerulus till mitten av brunnen. Efter inkubationen kommer glomerulus att fästas vid brunnens mitt. Tillsätt försiktigt 500 mikroliter av endotel Basal medium kompletterat med en tillväxtfaktor kit och ytterligare 5%FBS och 1%penicillin och streptomycin till varje brunn.Odla den enda glomeruli vid 37 grader Celsius med 5%koldioxid i sex dagar. Efter sex dagars inkubation, använd ett digitalt inverterat ljusmikroskop för att ta bilder och analysera den glomerulära utväxten. Med hjälp av en bildanalysprogramvara, bestämma ytan av glomerular utväxt genom att öppna en av bildfilerna med en skala bar.Rita en rak linje på skalan bar och klicka på Analysera, sedan mäta för att bestämma avståndet i pixlar. Du bestämmer skalan genom att klicka på Analysera och Ange skala och mata in det kända avståndet i pixlar, det kända avståndet och på längdenhet. Klicka på Okej när det är klart.Klicka på Analysera och Ställ in mått. Kontrollera sedan alternativen för Area och Display Label. Klicka på Okej när det är klart.Därefter rita ett frihandsval runt den glomerular utväxten. Klicka på Analysera och mät om du vill visa en resultattabell, som innehåller ytan för utväxt i den tidigare fastställda skalan. i denna studie, den glomerular parietalt epitelial cell outgrowths av inkapslade glomeruli isoleras från mus njurar, odlade, och analyseras.Representativa ljusmikroskopibilder visar de glomerular utväxten vid olika tidpunkter under kulturen efter att glomerulus isolerats från mus njurarna. För att validera att de utväxande cellerna är parietala epitelceller, isoleras och odlas också de inkapslade glomeruli i sex dagar. Avkapslade glomeruli visar ingen cell utväxt under denna inkubationstid.Immunofluorescerande färgning utförs sedan för olika parietal epitelial cell markörer, foto plats specifika markörer, samt endotel cell markörer. Resultaten bekräftar att de utväxande cellerna, faktiskt, är parietala epitelceller. Glomeruli associerad från CD44 knockout möss visar ett minskat antal utväxande celler, samt en minskad yta av glomerular utväxt jämfört med glomeruli isolerade från vilda typ möss.Detta tyder på en viktig roll för CD44 i parietal epitelial cell aktivering. Med hjälp av denna teknik, Det är också möjligt att studera effekterna på droger på parietal epitelial cell aktivering. Detta kan göras genom att behandla den isolerade glomeruli med drogen som du väljer och att analysera skillnaderna i celltillväxt och cell migration.

Research

JoVE Journal

Biology

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex vivo Kultur av primära humana äggledaren epitelceller

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Aktivering av apoptos genom cytoplasmiska mikroinjektion av cytokrom C</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

Kromatin Isolering av RNA Rening (chirp)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

Snabb genetisk analys av Epithelial-mesenkymala Signaling Under Hair Regeneration

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

Ett<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur systemet studerar Thyroid Utveckling

The thyroid is a bilobated endocrine gland localized at the base of the neck, producing the thyroid hormones T3, T4, and calcitonin. T3 and T4 are ...

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Mus Fetal Hela tarm Kultur System för<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Manipulering av signaleringsvägar och Tredimensionell Live avbildning av Villus Development

Most morphogenetic processes in the fetal intestine have been inferred from thin sections of fixed tissues, providing snapshots of changes over ...

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Real Time Analys av Metabolic profil i<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mouse Intestinal Crypt organoid kulturer

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and ...

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

C-FOS Protein Immunohistological Detection: ett användbart verktyg som en markör centralbanks involverade i specifika fysiologiska reaktioner<em&gt; In Vivo</em&gt; och<em&gt; Ex vivo</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

In Vitro och In Vivo -metoder för att fastställa tarmens epitelceller permeabilitet

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

Tvingade salivering som en metod att analysera vektor kompetens av myggor

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...