Name: simultaneous flow cytometric characterization of multiple cell types retrieved from mouse brain/spinal cord through different homogenization methods
Uploaded: 2019-11-19T01:00:00
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这项研究由波士顿儿童医院的启动基金资助给A.B.，ALSA赠款nr.17-IIP-343 到 M.P.，以及助理国防部长办公室通过肌萎缩性侧索硬化研究计划，根据第 No.W81XWH-17-1-0036 到 M.P.我们感谢 DFCI 流式细胞学核心的技术支持。

此处描述的所有方法均已获得达纳法伯癌症研究所的机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准（协议号16-024）。
1. 准备实验所需的解决方案
<ol><li>用无菌水稀释10xHBSS，制备1x汉克的平衡盐溶液（HBSS）。在冰上预冷溶液。每个样品至少需要25 mL的溶液。</li>
	<li>通过将 10 倍无菌 HBSS 1：10 与密度梯度介质（即 Percoll）混合，制备等值贴贴胶溶液 （IPS）。在冰上预冷。 注：IP...

<ol>
	<li>Deverman, B. E., Ravina, B. M., Bankiewicz, K. S., Paul, S. M., Sah, D. W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+neurological+disorders:+progress+and+prospects.">Gene therapy for neurological disorders: progress and prospects.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 17 (9), 641-659 (2018).</li><li>Teleanu, D., Negut, I., Grumezescu, V., Grumezescu, A., Teleanu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomaterials+for+Drug+Delivery+to+the+Central+Nervous+System.">Nanomaterials for Drug Delivery to the Central Nervous System.</a> Nanomaterials. 9 (3), 371 (2019).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+Viral+Vectors+as+Neuroscience+Tools.">Recombinant Viral Vectors as Neuroscience Tools.</a> Current Protocols in Neuroscience. 87 (1), 67 (2019).</li><li>Alves, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultramicroscopy+as+a+novel+tool+to+unravel+the+tropism+of+AAV+gene+therapy+vectors+in+the+brain.">Ultramicroscopy as a novel tool to unravel the tropism of AAV gene therapy vectors in the brain.</a> Scientific Reports. 6 (1), 28272 (2016).</li><li>Peviani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral+vectors+carrying+enhancer+elements+of+Hb9+promoter+drive+selective+transgene+expression+in+mouse+spinal+cord+motor+neurons.">Lentiviral vectors carrying enhancer elements of Hb9 promoter drive selective transgene expression in mouse spinal cord motor neurons.</a> Journal of Neuroscience Methods. 205 (1), 139-147 (2012).</li><li>Baumgarth, N., Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+approach+to+multicolor+flow+cytometry+for+immunophenotyping.">A practical approach to multicolor flow cytometry for immunophenotyping.</a> Journal of Immunological Methods. 243 (1-2), 77-97 (2000).</li><li>Sykora, M. M., Reschke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunophenotyping+of+Tissue+Samples+Using+Multicolor+Flow+Cytometry.">Immunophenotyping of Tissue Samples Using Multicolor Flow Cytometry.</a> Methods in Molecular Biology. 1953, 253-268 (2019).</li><li>Legroux, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+method+to+process+mouse+CNS+to+simultaneously+analyze+neural+cells+and+leukocytes+by+flow+cytometry.">An optimized method to process mouse CNS to simultaneously analyze neural cells and leukocytes by flow cytometry.</a> Journal of Neuroscience Methods. 247, 23-31 (2015).</li><li>Lee, J. K., Tansey, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+Isolation+from+Adult+Mouse+Brain.">Microglia Isolation from Adult Mouse Brain.</a> Methods in Molecular Biology. 1041, 17-23 (2013).</li><li>Grabert, K., McColl, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Phenotyping+of+Adult+Mouse+Microglial+Cells.">Isolation and Phenotyping of Adult Mouse Microglial Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1784, 77-86 (2018).</li><li>Nikodemova, M., Watters, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+isolation+of+live+microglia+with+preserved+phenotypes+from+adult+mouse+brain.">Efficient isolation of live microglia with preserved phenotypes from adult mouse brain.</a> Journal of Neuroinflammation. 9 (1), 635 (2012).</li><li>Garcia, J. A., Cardona, S. M., Cardona, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+analysis+of+mouse+microglial+cells.">Isolation and analysis of mouse microglial cells.</a> Current Protocols in Immunology. 104 (1), 1-15 (2014).</li><li>Papa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+Nanovector+Mediated+Treatment+of+Activated+Proinflammatory+Microglia/Macrophages+in+Spinal+Cord+Injury.">Selective Nanovector Mediated Treatment of Activated Proinflammatory Microglia/Macrophages in Spinal Cord Injury.</a> ACS Nano. 7 (11), 9881-9895 (2013).</li><li>Peviani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+the+Sigma-1+receptor+(S1R)+agonist+PRE-084,+in+a+mouse+model+of+motor+neuron+disease+not+linked+to+SOD1+mutation.">Neuroprotective effects of the Sigma-1 receptor (S1R) agonist PRE-084, in a mouse model of motor neuron disease not linked to SOD1 mutation.</a> Neurobiology of Disease. 62, 218-232 (2014).</li><li>Peviani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+polymeric+nanoparticles+administered+in+the+cerebrospinal+fluid:+Brain+biodistribution,+preferential+internalization+in+microglia+and+implications+for+cell-selective+drug+release.">Biodegradable polymeric nanoparticles administered in the cerebrospinal fluid: Brain biodistribution, preferential internalization in microglia and implications for cell-selective drug release.</a> Biomaterials. 209, 25-40 (2019).</li><li>Meng, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD73-derived+adenosine+controls+inflammation+and+neurodegeneration+by+modulating+dopamine+signalling.">CD73-derived adenosine controls inflammation and neurodegeneration by modulating dopamine signalling.</a> Brain. 142 (3), 700-718 (2019).</li><li>Nedeljkovic, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+regulation+of+ecto-5'-nucleotidase/CD73+and+A2AR-mediated+adenosine+signaling+at+neurovascular+unit:+A+link+between+acute+and+chronic+neuroinflammation.">Complex regulation of ecto-5'-nucleotidase/CD73 and A2AR-mediated adenosine signaling at neurovascular unit: A link between acute and chronic neuroinflammation.</a> Pharmacological Research. 144, 99-115 (2019).</li></ol>

本文介绍一种协议，用于对小鼠大脑和脊髓中一些最相关的CNS细胞进行共纯化和并发流细胞学分析。传统上，组织学分析已应用于描述纳米粒子的分布或病毒载体在CNS5，13的转导效率，或提供在病理学或药理治疗期间特定细胞类型发生的形态和分子变化的见解14。然而，组织学缺乏过程性，由于可以同时分析的标记数量有限，因此无法...

基因和药物输送技术（如病毒载体和纳米粒子）已成为一个强大的工具，可以应用来获得对神经退行性疾病中改变的特定分子途径的更好见解，并开发创新的治疗方法1，2，3。这些工具的优化取决于以下方面：（1） 不同管理途径在中枢神经系统的渗透程度，以及（2） 针对特定细胞群。组织学分析通常应用于可视化荧光报告基因或荧光标记纳米粒子在不同的CNS区域和不同的细胞类型，通过免疫染色特定细胞标记4，5识别。尽管这种方法提供了关于施用基因或药物输送工具的生物分布的宝贵信息，但该技术可能非常耗时和耗费大量人力，因为它需要：（1） 组织固定、冷冻保存或石蜡嵌入和切片;（2） 组织固定、冷冻保存或石蜡嵌入和切片;（2） 有时需要抗原检索的特定细胞标记物的染色;（3） 通过荧光显微镜采集，通常允许在同一实验中分析有限数量的不同标记;（4）图像处理，允许对感兴趣的信号进行适当的量化。
流式细胞学已成为一种广泛使用的技术，它利用非常特殊的荧光标记，不仅允许根据表面或细胞内抗原的表达对细胞悬浮液中的不同细胞表型进行快速定量评估，而且还允许功能测量（例如，凋亡率、增殖率、细胞周期分析等）。也可以通过荧光活化细胞分类对细胞进行物理分离，从而进一步进行下游应用（例如，细胞培养、RNAeq、生化分析等）6，7，8.
组织均质化是获得单细胞悬浮液以进行可靠和可重复的下游流细胞测量的关键步骤。对成人脑组织均质化有不同的方法，主要目的是分离微胶质细胞9、10、11;它们可分为两大类：（1）机械分离， 它使用研磨或剪切力通过Dce均质剂（DH）撕开细胞从他们的利基，并形成一个相对均质的单细胞悬浮液，和（2）酶消化，它依赖于在37°C的分块组织块在存在蛋白酶，如胰蛋白酶，如胰蛋白酶，如胰蛋白酶，有利于细胞外基质的降解，以创建一个相当均质的细胞悬浮液12。
无论使用哪种方法，在组织均质化后，建议通过密度梯度上的离心或磁选择9、12去除骨髓，然后再转移到下游应用。
在这里，我们描述了一种基于木瓜素消化（PD）的组织处理方法，随后在密度梯度上进行纯化，经过优化，以时间敏感的方式从小鼠大脑或脊髓获得可行的异质细胞悬浮液，并适合流动细胞学。此外，我们描述了一个9色流细胞测定面板和我们在实验室采用的浇注策略，允许同时区分不同的CNS人群、活/死细胞或荧光报告机的积极性，如绿色荧光蛋白或罗达明染料。通过应用这种流式细胞测定分析，我们可以比较不同的组织处理方法，即PD与DH，在保持细胞活力和不同细胞类型的产量方面。
我们本文提供的细节可以指导根据感兴趣的特定细胞类型和下游分析（例如，温度敏感度）在流式细胞测定面板中使用的同质化协议和抗体组合。应用、特定荧光标记的跟踪、体外培养、功能分析）。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10X HBSS (Calcium, Magnesium chloride, and Magnesium Sulfate-free)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14185-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 mm Cell Strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACSA/ACSA2 anti-mouse antibody</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-117-535</td>
			<td>APC conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9647-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b rat anti-mouse antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>47-0112-82</td>
			<td>APC-eFluor 780 conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 rat anti-mouse antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>562939</td>
			<td>BV421 conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 rat anti-mouse antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103138</td>
			<td>Brilliant Violet 510 conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD90.1/Thy1.1 rat anti-mouse antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>202518</td>
			<td>PE/Cy7 conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD90.2/Thy1.2 rat anti-mouse antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>1005325</td>
			<td>PE/Cy7 conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes (15 mL)</td>
			<td>CellTreat</td>
			<td>229411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes (50 mL)</td>
			<td>CellTreat</td>
			<td>229422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dounce Tissue Grinder set (Includes Mortar as well as Pestles A and B)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9063-1SET</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fc (CD16/CD32) Block rat anti-mouse antibody</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>553142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Benchmark</td>
			<td>100-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neural Tissue Dissociation Kit (P)</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-092-628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O4 anti mouse/rat/human antibody</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-095-895</td>
			<td>Biotin conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>10266569</td>
			<td>sold as not sterile reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>65455529</td>
			<td>sterile reagent (to be used for applications requiring sterility)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll PLUS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GE17-5445-01</td>
			<td>reagent containing very low traces of endotoxin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>S3258</td>
			<td>Alexa Fluor 680 conjugated</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simultaneous flow cytometric characterization of multiple cell types retrieved from mouse brain/spinal cord through different homogenization methods

病毒载体和纳米材料科学的最新进展为研究或操纵中枢神经系统（CNS）的新方法开辟了道路。然而，这些技术的进一步优化将受益于在体内病毒载体或纳米粒子的培养后，能够快速和简化地确定中枢神经系统和细胞特定靶向的范围的方法。在这里，我们提出一个协议，利用流式细胞学的高通量和多路复用功能，允许从小鼠大脑或脊髓中分离的不同细胞亚型，即微胶质/巨噬细胞、淋巴细胞、星细胞、寡核苷酸细胞、神经元和内皮细胞进行直接定量。我们应用这种方法来突出两个组织均质方法在细胞产量、活力和组成方面的重要差异。这可以指示用户根据感兴趣的单元格类型和特定应用程序选择最佳方法。此方法不适合分析解剖分布，因为组织是同质化的，以产生单细胞悬浮液。然而，它允许与活细胞一起工作，它可以与细胞分类相结合，为几种应用开辟了道路，这些应用可以扩大神经科学家手中的工具范围，从建立从纯细胞种群衍生的初级培养物，到基因表达分析以及神经退行性疾病背景下明确定义的细胞亚型的基因表达或功能测定，在药物治疗或基因治疗时。

我们比较了应用于小鼠大脑和脊髓的两种不同的均质化方法（DH与PD），以测试检索适合下游应用的不同可行细胞类型的效率。为此，我们利用了一个9色流细胞测定面板，设计成在同一样本中，包括微胶质、淋巴细胞、神经元、星形细胞、寡核苷酸和内皮球在内的不同中枢神经系统细胞类型。
从不同的小鼠（n = 6）中检索大脑和脊髓组织，纵向分成两半，使用Duce均质器（DH方?...

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Simultaneous Flow Cytometric Characterization of Multiple Cell Types Retrieved from Mouse Brain/Spinal Cord Through Different Homogenization Methods

我们提出了一种流式细胞测定方法，用于识别从小鼠大脑或脊髓中检索到的不同细胞类型。该方法可用于分离或描述神经退行性疾病中的纯细胞群，或量化细胞靶向在体内给病毒载体或纳米粒子的靶向范围。

通过不同的均质化方法从小鼠大脑/脊髓中检索到的多种细胞类型的同步流细胞测量特征

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central ...

开发选择性基因和药物输送工具来治疗神经退行性疾病，需要细胞靶向的定量和表征，在重新给药时，或病毒载体，或纳米粒子。它们具有流量细胞学的吞吐量和多路复用能力，能够从小鼠大脑和脊髓中直接同时识别多种细胞类型。展示这个程序的将是弗朗西斯科·哈维尔·莫利纳·埃斯特维兹，亚历山大实验室的博士后。从一只八周大的C57 Black 6小鼠中采集大脑和脊髓后，将组织放入六孔板的单个孔中，每口冰井含有两毫升冰冷HPSS。将每个收获的组织分成两个相等的部分。用剪刀把每个组织样本的一半切碎成一到两毫米厚的碎片。当所有组织都支离破碎时，在HPSS中预冲洗经过修改的1000微升移液器尖端，并使用移液器将每个组织悬浮液转移到单独的15毫升锥形管中。每口井再冲洗两毫升 HPSS。并在相应的15毫升锥形管中拉洗涤。通过离心沉淀样品。从神经组织分离套件中混合 50 微升酶 P，每个样品的试剂盒中混合 1，900 微升缓冲 X。在37摄氏度下加热酶混合物至少10分钟。并且从每个组织收集管中吸出上因。当酶混合物准备就绪时，在每个样品中加入1.95毫升溶液。轻轻的涡流重新悬浮颗粒。接下来，在37摄氏度的车轮上孵育样品15分钟，将10微升酶 A 与每个样品20微升缓冲Y混合。在37摄氏度下预热第二个酶溶液，在摇动孵育结束时将溶液的30微升添加到每个组织溶液中。使用 1，000 微升移液器尖端，用 HPSS 预冲洗，轻轻混合每个样品。在37摄氏度下将试样返回车轮15分钟。在孵育结束时，用10毫升的冰冷HPSS来阻止酶反应。通过离心沉淀样品。离心结束时，将颗粒重新悬浮在每管 7 毫升冰冷的 HPSS 中。轻轻旋转每个样品，然后把管子放在冰上。为了组织均质化，在豆组织研磨机的预冷玻璃砂浆中加入三毫升预冷却HPSS，并将收获的大脑或脊髓组织样本的后半部分转移到砂浆中。用 10 次佩斯特尔 A 轻轻搅拌组织，然后进行 10 次佩斯特尔 B，然后将均质化混合物转移到新的 15 毫升锥形管中。用预冷的 HPSS 将管子填充到 10 毫升的最终体积，用于离心。在将样品放在冰上之前，将颗粒重新悬浮在7毫升新鲜HPSS中，并带漩涡。对于清除碎屑，在每个消化或均质样品中加入三毫升预冷却同位素珀科尔溶液。轻轻旋转样品，确保样品均匀混合。接下来，将样品离心，小心地清除漂浮在溶液表面的碎屑和梅林的白盘。丢弃碎屑后，从每个管中收集上最后100微升的上一部分，而不会干扰颗粒。将每个颗粒重新悬浮在一毫升的 FACS BL 溶液中，将其转移到单独的 1.5 毫升微离心管中。与 Percoll 解决方案集成后，必须非常小心地清除碎屑盘和上经剂，而不会使细胞颗粒脱去，以避免样品损失。离心后，小心地从每个管中吸出上经剂，并在每管350微升新鲜FACS BL中重新悬浮颗粒。对于分离细胞类型的流动细胞测量分析，每管每毫升FC块孵育5微克，在4摄氏度下孵育10分钟，然后根据表中概述的站立协议向每个管中加入适当的抗体。漩涡每个管五秒钟混合。将样品放在4摄氏度，15分钟，防止光线。在孵育结束时，用每管一毫升 PBS 清洗样品，并离心机。每管中适当体积的链球素中重新悬浮颗粒。在涡旋混合后，在4摄氏度下孵育样品10分钟，防止光线。并清洗细胞与一毫升PBS每管如证明。丢弃超钠后，每管将300微升新鲜FACS BL中的颗粒重新悬浮。并给每个样品贴上5个7-AAD微升的标签。然后将样品储存在四摄氏度，防止光线，直到细胞氟测量分析。同质化方法从大脑和脊髓整体产生更高的细胞产量，但检索到的大多数细胞通常都已经死亡，结果只有大约14%的活细胞从大脑中愈合，大约10%的细胞从脊髓愈合。相比之下，木瓜消化方法可整体上更好地保存细胞的生存能力。通过九色双流细胞学分析大脑和脊髓细胞悬浮液，可以发现CD45+CD11b+微胶质和巨噬细胞的存在。和CD45+CD11b淋巴细胞在两个组织。然后，CD45细胞群群可以根据其对星细胞或寡头细胞标记或铁皮和内皮表面标记表达式的积极性进行区分。使用均质法，32%至38%的活细胞为造血源。虽然酶消化方法导致获得一个非常大的非造血CD45细胞的很大一部分。值得注意的是，CD45+CD11b+微胶质和巨噬细胞代表了最丰富的可行细胞分数与均质化方法。然而，消化方法产生细胞类型的异构表示，包括星细胞、寡头细胞、内皮细胞和神经元。该协议用途广泛，可用于多种下游应用，如特定细胞亚细胞的定量或分离、原培养、生化或RNA测序分析。我们实施了此协议，以评估不同CNS种群的基因表达和功能特征，或在小鼠模型内萎缩性侧索硬化治疗后。

Research

JoVE Journal

Medicine

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科研

医学

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人牙髓干细胞的分离，鉴定和比较性恒牙使用两种不同的方法，得出

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

收集，分离，和人类宫颈样品的流式细胞仪分析

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

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High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter ...

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