Name: a decentralized (ex vivo) murine bladder model with the detrusor muscle removed for direct access to the suburothelium during bladder filling
Uploaded: 2019-11-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل المعهد الوطني للسكري والجهاز الهضمي وامراض الكلي المنحة DK41315.

وأجريت جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوانية الموصوفة في هذه المخطوطة وفقا للدليل الوطني للمعاهد الصحية لرعاية واستخدام المختبرات الحيوانية واللجنة المؤسسية لاستخدام ورعاية الماشية في جامعه نيفادا.
ملاحظه: النموذج المعروض هنا يتكون من أزاله العضلات العضلية ?...

<ol>
	<li>Apodaca, G., Balestreire, E., Birder, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+uroepithelial-associated+sensory+web.">The uroepithelial-associated sensory web.</a> Kidney International. 72, 1057-1064 (2007).</li><li>Fry, C. H., Vahabi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+Mucosa+in+Normal+and+Abnormal+Bladder+Function.">The Role of the Mucosa in Normal and Abnormal Bladder Function.</a> Basic and Clinical Pharmacology and Toxicology. , 57-62 (2016).</li><li>Merrill, L., Gonzalez, E. J., Girard, B. M., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptors,+channels,+and+signalling+in+the+urothelial+sensory+system+in+the+bladder.">Receptors, channels, and signalling in the urothelial sensory system in the bladder.</a> Nature Reviewes Urology. 13, 193-204 (2016).</li><li>Ferguson, D. R., Kennedy, I., Burton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+is+released+from+rabbit+urinary+bladder+epithelial+cells+by+hydrostatic+pressure+changes--a+possible+sensory+mechanism?.">ATP is released from rabbit urinary bladder epithelial cells by hydrostatic pressure changes--a possible sensory mechanism?.</a> Journal of Physiology. 505, 503-511 (1997).</li><li>Wang, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+and+purinergic+receptor-dependent+membrane+traffic+in+bladder+umbrella+cells.">ATP and purinergic receptor-dependent membrane traffic in bladder umbrella cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 115, 2412-2422 (2005).</li><li>Miyamoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+for+Piezo1+in+stretch-evoked+Ca(2)(+)+influx+and+ATP+release+in+urothelial+cell+cultures.">Functional role for Piezo1 in stretch-evoked Ca(2)(+) influx and ATP release in urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 289, 16565-16575 (2014).</li><li>Mochizuki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TRPV4+cation+channel+mediates+stretch-evoked+Ca2++influx+and+ATP+release+in+primary+urothelial+cell+cultures.">The TRPV4 cation channel mediates stretch-evoked Ca2+ influx and ATP release in primary urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 284, 21257-21264 (2009).</li><li>McLatchie, L. M., Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+release+from+freshly+isolated+guinea-pig+bladder+urothelial+cells:+a+quantification+and+study+of+the+mechanisms+involved.">ATP release from freshly isolated guinea-pig bladder urothelial cells: a quantification and study of the mechanisms involved.</a> BJU International. 115, 987-993 (2015).</li><li>Birder, L. A., Apodaca, G., de Groat, W. C., Kanai, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenergic-+and+capsaicin-evoked+nitric+oxide+release+from+urothelium+and+afferent+nerves+in+urinary+bladder.">Adrenergic- and capsaicin-evoked nitric oxide release from urothelium and afferent nerves in urinary bladder.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 275, F226-F229 (1998).</li><li>Birder, L. A., Kanai, A. J., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DMSO:+effect+on+bladder+afferent+neurons+and+nitric+oxide+release.">DMSO: effect on bladder afferent neurons and nitric oxide release.</a> Journal of Urology. 158, 1989-1995 (1997).</li><li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+expression+suggests+a+sensory+role+for+urinary+bladder+epithelial+cells.">Vanilloid receptor expression suggests a sensory role for urinary bladder epithelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 98, 13396-13401 (2001).</li><li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-adrenoceptor+agonists+stimulate+endothelial+nitric+oxide+synthase+in+rat+urinary+bladder+urothelial+cells.">Beta-adrenoceptor agonists stimulate endothelial nitric oxide synthase in rat urinary bladder urothelial cells.</a> Journal of Neuroscience. 22, 8063-8070 (2002).</li><li>Durnin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+bladder+model+with+detrusor+smooth+muscle+removed+to+analyse+biologically+active+mediators+released+from+the+suburothelium.">An ex vivo bladder model with detrusor smooth muscle removed to analyse biologically active mediators released from the suburothelium.</a> Journal of Physiology. 597, 1467-1485 (2019).</li><li>Yoshida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-neuronal+cholinergic+system+in+human+bladder+urothelium.">Non-neuronal cholinergic system in human bladder urothelium.</a> Urology. 67, 425-430 (2006).</li><li>Beckel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin+1+channels+mediate+the+release+of+ATP+into+the+lumen+of+the+rat+urinary+bladder.">Pannexin 1 channels mediate the release of ATP into the lumen of the rat urinary bladder.</a> Journal of Physiology. 593, 1857-1871 (2015).</li><li>Collins, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OnabotulinumtoxinA+significantly+attenuates+bladder+afferent+nerve+firing+and+inhibits+ATP+release+from+the+urothelium.">OnabotulinumtoxinA significantly attenuates bladder afferent nerve firing and inhibits ATP release from the urothelium.</a> BJU International. 112, 1018-1026 (2013).</li><li>Daly, D. M., Nocchi, L., Liaskos, M., McKay, N. G., Chapple, C., Grundy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+afferent+pathways+and+urothelial+function+in+the+male+mouse+bladder.">Age-related changes in afferent pathways and urothelial function in the male mouse bladder.</a> Journal of Physiology. 592, 537-549 (2014).</li><li>Durnin, L., Hayoz, S., Corrigan, R. D., Yanez, A., Koh, S. D., Mutafova-Yambolieva, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urothelial+purine+release+during+filling+of+murine+and+primate+bladders.">Urothelial purine release during filling of murine and primate bladders.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 311, F708-F716 (2016).</li><li>Gonzalez, E. J., Heppner, T. J., Nelson, M. T., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinergic+signalling+underlies+transforming+growth+factor-beta-mediated+bladder+afferent+nerve+hyperexcitability.">Purinergic signalling underlies transforming growth factor-beta-mediated bladder afferent nerve hyperexcitability.</a> Journal of Physiology. 594, 3575-3588 (2016).</li></ol>

المثانة لديها وظيفتين: تخزين وتفريغ البول. التشغيل العادي لهذه الوظائف يتطلب الاستشعار الميكانيكي السليم لحجم داخل ألومنيوم والضغط وتوصيل الإشارات من خلال الخلايا في جدار المثانة لتنظيم الاستثارة العضلية. ويعتقد ان الغشاء المخاطي المثانة (اوروثثيلال) لتنظيم استثاره المثانة عن طريق الإ?...

والغرض من هذا النموذج هو تمكين الوصول المباشر إلى الجانب تحت المخاطية من الغشاء المخاطي في المثانة خلال مراحل مختلفه من ملء المثانة.
يجب ان تمتنع المثانة عن الانكماش السابق لأوانه اثناء التعبئة والتفريغ عند الوصول إلى الحجم الحرج والضغط. غالبا ما ترتبط الزهد غير الطبيعية أو إفراغ البول مع استثاره غير طبيعيه للعضلات الملساء (DSM) في سياق ملء المثانة. يتم تحديد الاستثارة من DSM من قبل العوامل المتاصله في خلايا العضلات الملساء والتاثيرات المتولدة عن أنواع مختلفه من الخلايا داخل جدار المثانة. يتكون جدار المثانة البولية من اوروثيثيلال (الغشاء المخاطي) ، وسوبيوروثثيلال (سوبو)/لأمينا بروبروسا (LP) ، العضلات الملساء (DSM) و مصلي (الشكل 1a). يتكون المسالك البولية من خلايا شمسيه (اي الطبقة الخارجية لمجري البول البولي) ، والخلايا المتوسطة ، والخلايا القاعدية (اي الطبقة الأعمق من المسالك البولية). أنواع مختلفه من الخلايا ، بما في ذلك الخلايا الخلالي ، الليفية ، والمحطات العصبية الزبائ ، والاوعيه الدموية الصغيرة ، والخلايا المناعية الموجودة في subu/LP. ومن المفترض علي نطاق واسع ان المثانة البولية هو الجهاز الحسي الذي يبدا الزهد منعكس والإفراج عن وسطاء في الغشاء المخاطي الذي يؤثر علي الخلايا في subu/LP و DSM1,2,3. وتستند هذه الافتراضات في معظمها إلى الدراسات التي أظهرت إطلاق الوسطاء: من قطع الغشاء المخاطي المعرضة للتغيرات في الضغط الهيدروستاتيكي4,5; من الخلايا البولية المستزرعة المعرضة لتمتد6,7, الوتر الناجمة عن تورم الخلية7 أو سحب القوات8; من معزولة جدار المثانة شرائط علي مستقبلات أو تنشيط العصب9,10,11,12,13,14; وفي تجويف المثانة في نهاية المثانة ملء15،16،17،18،19. في حين ان هذه الدراسات كانت مفيده لإظهار الإفراج عن الوسطاء علي التحفيز الميكانيكي للأجزاء جدار المثانة أو الخلايا البولية المستزرعة ، فانها تحتاج إلى ان تكون مدعومة بادله مباشره للإفراج عن وسطاء في الغشاء المخاطي الذي يتم استخلاصه من قبل المحفزات الفسيولوجية التي تتكاثر ملء المثانة. هذه مهمة صعبه بالنظر إلى ان SubU/LP يقع عميقا في جدار المثانة يعوق الوصول المباشر إلى المنطقة المجاورة لل SubU/LP اثناء ملء المثانة.
هنا ، ونحن نوضح لامركزية (الجسم الغريب) نموذج المثانة murine مع أزاله العضلات deدعامات13 التي تم تطويرها لتسهيل الدراسات علي أليات المحلية للمحولات الميكانيكية التي تشارك في الإشارات بين المثانة البولية ، DSM وأنواع الخلايا الأخرى في جدار المثانة. ويمكن استخدامه لقياس التوافر ، والإفراج ، والتمثيل الغذائي والنقل الترانسوروثيليال للوسطاء في SubU/LP في مراحل مختلفه من ملء المثانة (الشكل 1B). ويمكن أيضا ان تستخدم اعداد لفحص الإشارات البولية والميكانيكية في نماذج من فرط نشاط ومتلازمات المثانة السفلي.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>C79</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>D16</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion Pump</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>GenieTouch</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P217</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P284</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>SCHOTT ACEI</td>
			<td></td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus SZX7</td>
			<td></td>
			<td>Flexible to use any scope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M33</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S671</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S233</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles 25G</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305122</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ bath</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Flexible source; We made it from Radnoti dissecting dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-20 tubing</td>
			<td>Intramedic</td>
			<td>427405</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure transducer</td>
			<td>AD instrument</td>
			<td></td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00632-11</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software pressure-volume</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>Power lab</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Nylon, 6-0</td>
			<td>AD surgical</td>
			<td>S-N618R13</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Silk, 6-0</td>
			<td>Deknatel via Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td>07J1500190</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 ml</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309602</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water circulator</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>K-MOD 100</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a decentralized (ex vivo) murine bladder model with the detrusor muscle removed for direct access to the suburothelium during bladder filling

وقد أدت هذه النتائج إلى الافتراض بأنه يتم أيضا إطلاق سراح هؤلاء الوسطاء في سوبيوروثثيلال (SubU)/لأمينا بروبرونا (LP) اثناء ملء المثانة ، حيث تؤثر علي الخلايا العميقة في جدار المثانة لتنظيم استثاره المثانة في نهاية المطاف. هناك ما لا يقل عن اثنين من القيود الواضحة في مثل هذه الدراسات: 1) اي من هذه النهج توفر معلومات مباشره عن وجود وسطاء في SubU/LP ، و 2) المحفزات المستخدمة ليست فسيولوجية ولا تلخص ملء أصيله من المثانة. هنا ، نناقش الاجراء الذي يتيح الوصول المباشر إلى سطح سوبوروثيليال من الغشاء المخاطي للمثانة في سياق ملء المثانة. الاعداد الخالي من الدعامات التي انشاناها بشكل وثيق يشبه ملء المثانة السليمة ويسمح باجراء دراسات حجم الضغط علي المثانة في غياب الإشارات المربكة من ردود الفعل الشوكية والعضلات الملساء. وباستخدام نموذج المثانة الخالي من الدعامات الجديدة ، أظهرنا مؤخرا انه لا يمكن استخدام القياسات المثانته للوسطاء كوكيل لما تم الإفراج عنه أو تقديمه في السوبو/LP اثناء ملء المثانة. يسمح النموذج بفحص جزيئات الإشارات المشتقة من اوروثيثيلال التي يتم إصدارها ، والتي يتم إنشاؤها عن طريق الأيض و/أو نقلها إلى السوبو/LP اثناء ملء المثانة لنقل المعلومات إلى الخلايا العصبية والعضلات الملساء للمثانة وتنظيم استثاره لها اثناء الزهد والولادة.

الجدار من murine خاليه من المثانة اعداد خاليه سليمه ويحتوي علي جميع الطبقات باستثناء DSM و serosa. أظهرت الدراسات إثبات من المبدا ان الجدار المثانة DSM خاليه تشمل اوروثثيلال وسوبو/LP في حين ان موسكولاريس غلاله والمصلي غائبه (الشكل 2)13.
<p class="jove_cont...

Watch this Scientific Journal Video about A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling at JoVE.com

A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling

ويتيح نموذج المثانة الخالي من الدعامات امكانيه الوصول المباشر إلى السوبوروثثيلال لدراسة أليات المحلية لتنظيم توافر الوسيط النشط بيولوجيا في بروبيوروثيلال/لأمينا بروبروا اثناء تخزين وتفريغ البول. التحضير يشبه بشكل وثيق ملء المثانة السليمة ويسمح باجراء دراسات حجم الضغط دون التاثيرات الجهازية.

A لامركزية (فيفو السابقين) نموذج المثانة Murine مع أزاله العضلات ديتروور للوصول المباشر إلى السوبوروثثيلال اثناء ملء المثانة

Previous studies have established the release of chemical substances from flat bladder mucosa sheets affixed in Ussing chambers and exposed to changes in ...

نموذج المثانة لدينا مع إزالة العضلات detrusor هو نهج تجريبي جديد لدراسة في وقت واحد توافر وسطاء urothelial في لاميا propria وتجويف المثانة أثناء ملء المثانة. يمكن أن يوفر هذا النموذج رؤى جديدة في آليات الإشارات بين urothelium، suburothelium، والعضلات الطاردة التي تنظم استثارة المثانة أثناء الملء. تبدأ عن طريق وضع عينة المثانة مورين سليمة في طبق تشريح تحت مجهر تشريح تحتوي على 10 درجة مئوية أكسيجينت ك.م.م وتنظيف الأنسجة الضامة والدهون حول المثانة.دبوس جزء صغير من قبة المثانة المعزولة على طول الطريق من خلال الحافة الخارجية للعضلات detrusor بعيدا عن الحافة الأعمق للعضلات التي تواجه suburothelium lamia propria إلى طبق تشريح sylgard المغطاة مليئة KBS، ودبوس الحالبين والرقبة المثانة لعرض إعداد المثانة سليمة. باستخدام ملقط ناعم، سحب بلطف قطعة من سيروزا في الزاوية بين الحالب والجسم المثانة وضبط ضوء المجهر لزيادة الشفافية والتمييز هامش submucosa تحت العضلات detrusor. لتجنب ثقب جدار التحضير ، تأكد من قطع العضلات الطاردة فقط في حين أن الحافة الجانبيّة للمثانة الغشاء المخاطي واضحة للعيان.باستخدام مقص ذو رؤوس دقيقة، ابدأ في قطع جدار المثانة على طول السطح الداخلي لطبقة العضلات المقنّة بينما تسحب الجزء المقطوع برفق بعيداً عن التحضير مع الحرص على أن الحافة الجانبيّة للغشاء المخاطي يمكن ملاحظتها مع تجنب لمس حافة النسيج. ترك قطعة صغيرة من عضلة detrusor على رأس قبة المثانة للسماح للتحضير لشل خلال الخطوات المتبقية من البروتوكول وملء قطعة سنتيمترين من 20 أنابيب البولي إيثيلين مع 37 درجة مئوية أكسيجيند KBS. بعد إدخال القسطرة في فتحة مجرى البول في المثانة، ادفع القسطرة بلطف حتى يصل طرف القسطرة إلى منتصف المثانة تقريبيًا.ثم تأمين القسطرة في الأنسجة المحيطة من عنق المثانة مع حلقة مزدوجة 6.0 خياطة النايلون. بعد فحص الأنسجة للتسريبات، ضع إعداد المثانة المهترئة في غرفة ثلاث ملليلتر من 37 درجة مئوية من الماء سترة طبق الجهاز مع أسفل sylgard وتأمين القسطرة إلى جانب الغرفة بحيث لا تطفو التحضير فوق سطح محلول الضخ. توصيل قسطرة المثانة إلى قطعة من البولي ايثيلين 20 أنابيب متصلة بسدكوك ثلاثية الاتجاه وحقنة ضخ مليئة بـ 37 درجة مئوية من الأوكسجين KBS وابدأ بمضخة التسريب لملء المثانة مع KBS مع الحرص على مراقبة حجم التعبئة في الضغط داخل الجسم أثناء الملء.للكشف عن الوسطاء داخل suburothelium الجانب بروبريا لامينا من إعداد، وجمع aliquots من حل الحمام في مختلف النقاط الزمنية التجريبية المناسبة ومعالجة العينات وفقا لتحليل المصب المخطط لها. يحتوي جدار إعداد المثانة المشوه على urothelium و suburothelium ولكن ليس ديترور العضلات الملساء. علاقات حجم الضغط متشابهة بشكل ملحوظ في الاستعدادات سليمة ومهتكة.يمكن اختبار ملاءمة النموذج لقياس الوسطاء المشتقين من urothelium التي يتم إصدارها في جانب suburothelium lamina propria أثناء الملء عن طريق قياس إطلاق وسطاء البيورين في الحل الذي يستحم بروبريا الصفيحة suburothelium من إعداد مُنَح. كما هو موضح, يمكن الكشف عن كميات لا تذكر من البيورينات في حمام يحتوي على إعداد المثانة المعزولة مع عضلة detrusor سليمة;في حين أن كميات من هذه البيورينات هي أعلى بكثير في العينات التي تم جمعها من الحمام تحتوي على إعداد المثانة ينحي. وتجدر الإشارة إلى أن توزيع البيورينات والمستقلبات في العينات التي تم جمعها من تجويف الأرض وpourothelium lamina propria في نهاية الملء يختلف اختلافا كبيرا.إضافة atheno ATP، وهو التناظرية الفلورية للغاية من ATP، إلى الجانب دون المسالك الفرعية من نتائج إعداد detrusor خالية في انخفاض في ATP atheno وزيادة في المنتجات ATP atheno، atheno ADP، atheno AMP، و Atheno ADO. وبالمثل، إضافة ATP atheno إلى إعداد تجويف النتائج في انخفاض في ATP atheno وزيادة في ADP atheno، Atheno AMP، و ATHENO ADO في التجويف. علاوة على ذلك، إضافة atheno ATP إلى الجانب suburothelium لامينا بروبريا من نتائج إعداد denuded في ظهور atheno AMP و Atheno ADO داخل تجويف.وبالمثل، إضافة attheno ATP إلى نتائج التجويف في ظهور AMP atheno و Atheno ADO في بروبريا lamina suburothelium. بعد هذا الإجراء، يمكن قياس توافر الوسطاء مثير ومثبطة في بروبريا لامينا وفي تجويف المثانة في مراحل مختلفة من ملء المثانة. ويمكن أيضا دراسة النقل الثنائي للوسطاء والتنمين من الوسطاء باستخدام هذا النموذج.استخدام هذا النموذج الجديد المثانة سوف يؤدي إلى فهم جديد لل، إشارة الحساسية المحلية الجوهرية بين urothelium والعضلات الملساء النتوء التي تتحكم في استثارة المثانة في الصحة والمرض.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Decentralized (Ex Vivo) Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling

Mouse Bladder Wall Injection

حقن المثانة الماوس الجدار

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

نموذج مثلي من سرطان المثانة الفئران

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

استعمال قياس المثانة في القوارض الصغيرة: دراسة في Chemosensation المثانة

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

ورم في المثانة Orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

وسرطان المثانة نموذج مثلي للدراسات توصيل الجينات

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

الإنتاجية العالية التدفق الخلوي القائم على الفحص لكشف خلية أضداد N-ميثيل مد اسبارتاتي مستقبلات الدوبامين-2 أو مستقبلات في مصل الإنسان

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

مؤسسة المناظير الفئران مثلي المثانة Xenografts

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

الردود المثانة البولية انتفاخ مستدعى الحشوي الحركي نموذجا لألم المثانة في الفئران

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

المثانة العضلات الملساء قطاع انقباض كوسيلة لتقييم المسالك البولية السفلى الصيدلة

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

ل<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; نموذج لدراسة هرمون العمل في الثدي البشري

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...