Name: a decentralized (ex vivo) murine bladder model with the detrusor muscle removed for direct access to the suburothelium during bladder filling
Uploaded: 2019-11-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af National Institute of diabetes og fordøjelses-og nyresygdomme Grant DK41315.

Alle procedurer, der involverer dyr beskrevet i dette manuskript blev gennemført i henhold til National Institutes of Health guide til pleje og brug af forsøgsdyr og den institutionelle dyr brug og pleje udvalg på University of Nevada.
Bemærk: den model, der præsenteres her, består af fjernelsen af detrusor-musklen, mens har og SUBU/lp forbliver intakt (figur 1B) for at gøre det muligt for investigatorerne at få d...

<ol>
	<li>Apodaca, G., Balestreire, E., Birder, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+uroepithelial-associated+sensory+web.">The uroepithelial-associated sensory web.</a> Kidney International. 72, 1057-1064 (2007).</li><li>Fry, C. H., Vahabi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+Mucosa+in+Normal+and+Abnormal+Bladder+Function.">The Role of the Mucosa in Normal and Abnormal Bladder Function.</a> Basic and Clinical Pharmacology and Toxicology. , 57-62 (2016).</li><li>Merrill, L., Gonzalez, E. J., Girard, B. M., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptors,+channels,+and+signalling+in+the+urothelial+sensory+system+in+the+bladder.">Receptors, channels, and signalling in the urothelial sensory system in the bladder.</a> Nature Reviewes Urology. 13, 193-204 (2016).</li><li>Ferguson, D. R., Kennedy, I., Burton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+is+released+from+rabbit+urinary+bladder+epithelial+cells+by+hydrostatic+pressure+changes--a+possible+sensory+mechanism?.">ATP is released from rabbit urinary bladder epithelial cells by hydrostatic pressure changes--a possible sensory mechanism?.</a> Journal of Physiology. 505, 503-511 (1997).</li><li>Wang, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+and+purinergic+receptor-dependent+membrane+traffic+in+bladder+umbrella+cells.">ATP and purinergic receptor-dependent membrane traffic in bladder umbrella cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 115, 2412-2422 (2005).</li><li>Miyamoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+for+Piezo1+in+stretch-evoked+Ca(2)(+)+influx+and+ATP+release+in+urothelial+cell+cultures.">Functional role for Piezo1 in stretch-evoked Ca(2)(+) influx and ATP release in urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 289, 16565-16575 (2014).</li><li>Mochizuki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TRPV4+cation+channel+mediates+stretch-evoked+Ca2++influx+and+ATP+release+in+primary+urothelial+cell+cultures.">The TRPV4 cation channel mediates stretch-evoked Ca2+ influx and ATP release in primary urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 284, 21257-21264 (2009).</li><li>McLatchie, L. M., Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+release+from+freshly+isolated+guinea-pig+bladder+urothelial+cells:+a+quantification+and+study+of+the+mechanisms+involved.">ATP release from freshly isolated guinea-pig bladder urothelial cells: a quantification and study of the mechanisms involved.</a> BJU International. 115, 987-993 (2015).</li><li>Birder, L. A., Apodaca, G., de Groat, W. C., Kanai, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenergic-+and+capsaicin-evoked+nitric+oxide+release+from+urothelium+and+afferent+nerves+in+urinary+bladder.">Adrenergic- and capsaicin-evoked nitric oxide release from urothelium and afferent nerves in urinary bladder.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 275, F226-F229 (1998).</li><li>Birder, L. A., Kanai, A. J., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DMSO:+effect+on+bladder+afferent+neurons+and+nitric+oxide+release.">DMSO: effect on bladder afferent neurons and nitric oxide release.</a> Journal of Urology. 158, 1989-1995 (1997).</li><li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+expression+suggests+a+sensory+role+for+urinary+bladder+epithelial+cells.">Vanilloid receptor expression suggests a sensory role for urinary bladder epithelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 98, 13396-13401 (2001).</li><li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-adrenoceptor+agonists+stimulate+endothelial+nitric+oxide+synthase+in+rat+urinary+bladder+urothelial+cells.">Beta-adrenoceptor agonists stimulate endothelial nitric oxide synthase in rat urinary bladder urothelial cells.</a> Journal of Neuroscience. 22, 8063-8070 (2002).</li><li>Durnin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+bladder+model+with+detrusor+smooth+muscle+removed+to+analyse+biologically+active+mediators+released+from+the+suburothelium.">An ex vivo bladder model with detrusor smooth muscle removed to analyse biologically active mediators released from the suburothelium.</a> Journal of Physiology. 597, 1467-1485 (2019).</li><li>Yoshida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-neuronal+cholinergic+system+in+human+bladder+urothelium.">Non-neuronal cholinergic system in human bladder urothelium.</a> Urology. 67, 425-430 (2006).</li><li>Beckel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin+1+channels+mediate+the+release+of+ATP+into+the+lumen+of+the+rat+urinary+bladder.">Pannexin 1 channels mediate the release of ATP into the lumen of the rat urinary bladder.</a> Journal of Physiology. 593, 1857-1871 (2015).</li><li>Collins, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OnabotulinumtoxinA+significantly+attenuates+bladder+afferent+nerve+firing+and+inhibits+ATP+release+from+the+urothelium.">OnabotulinumtoxinA significantly attenuates bladder afferent nerve firing and inhibits ATP release from the urothelium.</a> BJU International. 112, 1018-1026 (2013).</li><li>Daly, D. M., Nocchi, L., Liaskos, M., McKay, N. G., Chapple, C., Grundy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+afferent+pathways+and+urothelial+function+in+the+male+mouse+bladder.">Age-related changes in afferent pathways and urothelial function in the male mouse bladder.</a> Journal of Physiology. 592, 537-549 (2014).</li><li>Durnin, L., Hayoz, S., Corrigan, R. D., Yanez, A., Koh, S. D., Mutafova-Yambolieva, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urothelial+purine+release+during+filling+of+murine+and+primate+bladders.">Urothelial purine release during filling of murine and primate bladders.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 311, F708-F716 (2016).</li><li>Gonzalez, E. J., Heppner, T. J., Nelson, M. T., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinergic+signalling+underlies+transforming+growth+factor-beta-mediated+bladder+afferent+nerve+hyperexcitability.">Purinergic signalling underlies transforming growth factor-beta-mediated bladder afferent nerve hyperexcitability.</a> Journal of Physiology. 594, 3575-3588 (2016).</li></ol>

Blæren har to funktioner: opbevaring og tømning af urin. Normal drift af disse funktioner kræver korrekt mekanisk sensing af intraluminal volumen og tryk og transduktion af signaler gennem celler i blære væggen til at regulere detrusor muskel excitabilitet. Blæren slimhinde (urothelium) menes at regulere blære ophidelse ved at frigive en række signalering molekyler i SubU/LP, der påvirker talrige celletyper i blære væggen. I øjeblikket er de fleste forsøg på karakterisering af urothelium-afledte mediatorer ...

Formålet med denne model er at give direkte adgang til submucosavævet side af blære slimhinde under forskellige faser af blære påfyldning.
Blæren skal afstå fra for tidlig sammentrækning under påfyldning og tomt, når kritisk volumen og tryk er nået. Unormal kontinens eller tømning af urin er ofte forbundet med unormal ophidning af detrusor glatte muskulatur (DSM) i løbet af blære fyldning. Excitabilitet af DSM bestemmes af faktorer iboende til de glatte muskelceller og af påvirkninger genereret af forskellige celletyper i blære væggen. Væggen af urinblæren består af har (slimhinde), suburothelium (SUBU)/lamina propria (LP), detrusor glatte muskulatur (DSM) og serøse hinder (figur 1a). Har består af paraply celler (dvs. det yderste lag af har), mellemliggende celler og basal celler (dvs. det inderste lag af har). Forskellige typer af celler, herunder interstitiel celler, fibroblaster, afferent nerve terminaler, små blodkar, og immunceller bor i SubU/LP. Det er almindeligt antaget, at blæren har er et sensorisk organ, der indleder refleks vandladning og kontinens ved at frigive mæglere i submucosa, der påvirker cellerne i SUBU/lp og DSM1,2,3. For det meste er sådanne antagelser baseret på undersøgelser, der har påvist frigivelse af mæglere: fra stykker af slimhinder udsat for ændringer i hydrostatisk tryk4,5; fra dyrkede urotheliale celler udsat for stretch6,7, hypotonicity-induceret celle hævelse7 eller trække kræfter8; fra isolerede blære væg strimler ved receptor eller nerve aktivering9,10,11,12,13,14; og i blæren lumen i slutningen af blæren påfyldning15,16,17,18,19. Mens sådanne undersøgelser var medvirkende til at demonstrere frigivelse af mæglere på mekanisk stimulering af blære væg segmenter eller dyrkede urotheliale celler, de har brug for at blive understøttet af direkte beviser for frigivelse af mæglere i submucosa, der er fremkaldt af fysiologiske stimuli, der gengiver blære påfyldning. Dette er en udfordrende opgave, da SubU/LP er placeret dybt i blære væggen hæmmer den ligetil adgang til nærheden af SubU/LP under blære fyldning.
Her illustrerer vi en decentraliseret (ex vivo) murine blære model med detrusor muskel fjernet13 , der blev udviklet for at lette undersøgelser af lokale mekanismer af mekanisotransduktion, der deltager i signalering mellem blæren UROTHELIUM, DSM og andre celletyper i blære væggen. Denne fremgangsmåde er bedre end at bruge flad blære Vægplader, blære væg strimler eller kulturperler urotheliale celler, fordi det giver mulighed for direkte målinger i nærheden af SubU/LP af urothelium-afledte mediatorer, der frigives eller dannes som reaktion på fysiologiske belastninger og volumener i blæren og undgår potentielle fænotypiske ændringer i cellekultur. Det kan bruges til at måle tilgængelighed, frigivelse, metabolisme og transurothelial transport af mæglere i SubU/LP på forskellige stadier af blære fyldning (figur 1b). Præparatet kan også anvendes til at undersøge urothelialt signalering og mekanisotransduktion i modeller af overaktiv og under aktiv blære syndromer.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>C79</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>D16</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion Pump</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>GenieTouch</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P217</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P284</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>SCHOTT ACEI</td>
			<td></td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus SZX7</td>
			<td></td>
			<td>Flexible to use any scope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M33</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S671</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S233</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles 25G</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305122</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ bath</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Flexible source; We made it from Radnoti dissecting dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-20 tubing</td>
			<td>Intramedic</td>
			<td>427405</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure transducer</td>
			<td>AD instrument</td>
			<td></td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00632-11</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software pressure-volume</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>Power lab</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Nylon, 6-0</td>
			<td>AD surgical</td>
			<td>S-N618R13</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Silk, 6-0</td>
			<td>Deknatel via Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td>07J1500190</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 ml</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309602</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water circulator</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>K-MOD 100</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a decentralized (ex vivo) murine bladder model with the detrusor muscle removed for direct access to the suburothelium during bladder filling

Tidligere undersøgelser har etableret frigivelse af kemiske stoffer fra flade blære slimhinde ark anbragt i Ussing kamre og udsat for ændringer i hydrostatisk tryk eller mekanisk strækning og fra dyrkede urotheliale celler ved hydrostatiske trykændringer, stræk, celle hævelse, eller trække kræfter, og i blæren lumen ved slutningen af påfyldning. Sådanne fund førte til den antagelse, at disse mæglere også frigives i suburothelium (SubU)/lamina propria (LP) under blære fyldning, hvor de påvirker celler dybt i blære væggen til i sidste ende regulere blære ophidelse. Der er mindst to indlysende begrænsninger i sådanne undersøgelser: 1) ingen af disse tilgange giver direkte oplysninger om tilstedeværelsen af mæglere i SubU/LP, og 2) de anvendte stimuli er ikke fysiologiske og ikke rekapitulere autentisk fyldning af blæren. Her diskuterer vi en procedure, der giver direkte adgang til suburothelial overflade af blære slimhinden i løbet af blære fyldningen. Den murine detrusor-fri forberedelse vi skabt tæt ligner påfyldning af den intakte blære og tillader tryk-volumen undersøgelser, der skal udføres på blæren i fravær af forstyrrende signalering fra spinal reflekser og detrusor glatte muskler. Ved hjælp af romanen detrusor-fri blære model, vi for nylig påvist, at intravesikal målinger af mæglere ikke kan bruges som en proxy til, hvad der er blevet frigivet eller til stede i SUBU/lp under blære fyldning. Modellen muliggør undersøgelse af urothelium-afledte signalerings molekyler, der frigives, genereres ved metabolisme og/eller transporteres ind i SubU/LP i løbet af blære fyldning for at transmittere oplysninger til neuroner og glat muskulatur i blæren og regulere dens ophidelighed under kontinens og vandladning.

Væggen af murine detrusor-fri blære præparat er intakt og indeholder alle lag undtagen DSM og serosa. Proof-of-princip undersøgelser viste, at den DSM-fri blære væg omfatter har og SUBU/lp, mens tunika muscularis og serøse hinder er fraværende (figur 2)13.
Påfyldning af detrusor-fri blære tilnærme normal blære fyldning. Figur 3</stron...

Watch this Scientific Journal Video about A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling at JoVE.com

A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling

Den detrusor-fri blære model giver direkte adgang til suburothelium at studere lokale mekanismer til regulering af biologisk aktive mediator tilgængelighed i suburothelium/lamina propria under oplagring og tømning af urin. Præparatet minder meget om påfyldning af en intakt blære og tillader, at der udføres tryk volumen undersøgelser uden systemisk påvirkning.

En decentraliseret (ex vivo) murine blære model med detrusor musklen fjernet for direkte adgang til Suburothelium under blære fyldning

Previous studies have established the release of chemical substances from flat bladder mucosa sheets affixed in Ussing chambers and exposed to changes in ...

Vores blære model med en fjernet detrusor muskel er en ny eksperimentel tilgang til at studere samtidig tilgængeligheden af urothelial mæglere i lamia propria og blære lumen under blærefyldning. Denne model kan give ny indsigt i signalmekanismer mellem urothelium, suburothelium, og detrusor muskel, der regulerer blære ophidselse under påfyldning. Begynd med at placere den intakte murine blære prøve i en dissektion fad under en dissektion mikroskop, der indeholder 10 grader celsius iltet KBS og rense de bindevæv og fedtvæv omkring blæren.Pin en lille del af kuplen af den isolerede blære hele vejen gennem den yderste kant af detrusor musklen langt fra den inderste kant af musklen, der vender mod suburothelium lamia propria til en sylgard dækket dissekere skål fyldt med KBS, og pin ureters og blære hals til at vise den intakte blære forberedelse. Ved hjælp af fint tippede kraftbefængte, forsigtigt trække et stykke af serosa på hjørnet mellem ureter og blæren kroppen og justere lyset af mikroskopet for at øge gennemsigtigheden og skelne margenen af submucosa under detrusor musklen. For at undgå perforering af forberedelsesvæggen skal du kun skære detrusormusklen væk, mens blæreslimhindens laterale kant er tydeligt synlig.Ved hjælp af fint tippet saks, begynde at skære blærevæggen langs den indvendige overflade af detrusor muskel lag, mens forsigtigt trække det afskårne segment væk fra præparatet passe på, at den laterale kant af slimhinden kan observeres og samtidig undgå at røre kanten af vævet. Efterlad et lille stykke af detrusor musklen på toppen af blærekuplen for at gøre det muligt at immobilisere forberedelsen under de resterende trin i protokollen og fylde et stykke 20 centimeter af 20 polyethylenrør med 37 grader celsius iltet KBS. Efter indsættelse af kateteret i blæren urinrørets åbning, skubbes kateteret forsigtigt, indtil kateterspidsen når den omtrentlige midten af blæren.Derefter fastgør kateteret i det omgivende væv i blærehalsen med en dobbelt løkke 6,0 nylonsutur. Efter kontrol af vævet for lækager, placere denuded blære forberedelse i en tre milliliter kammer af 37 grader celsius vand jacketed orgel fad med en sylgard bund og fastgør kateteret til siden af kammeret, således at præparatet ikke flyder over overfladen af perfusion opløsningen. Tilslut blærekateteret til et stykke polyethylen 20 slanger forbundet til en tre-vejs stophane og en infusionssprøjt fyldt med 37 grader celsius iltet KBS og start infusionspumpen for at fylde blæren med KBS, der skal overvåge påfyldningsmængden i det intravesiske tryk under fyldet.For at detektere mæglere inden for præparatets suburothelium lamina propria-aspekt indsamles der prøver af badeopløsningen på forskellige relevante forsøgstidspunkter, og prøverne behandles i overensstemmelse med den planlagte downstream-analyse. Den denuded blære forberedelse væg indeholder urothelium og suburothelium, men ikke detrusor glat muskel. Trykvolumenrelationerne er bemærkelsesværdigt ens i de intakte og denuded præparater.Modellens egnethed til måling af urotheliumafledte mediatorer, der frigives i suburothelium lamina propria-siden under påfyldningen, kan afprøves ved at måle frigivelsen af purin mediatorer i opløsningsbadningen af suburothelium lamina propria af det denuded præparat. Som påvist kan ubetydelige mængder puriner påvises i et bad, der indeholder et isoleret blærepræparat med en intakt detrusormuskel, mens mængderne af disse puriner er betydeligt højere i prøver, der er indsamlet fra badet, og som indeholder et bulet blærepræparat. Især fordelingen af puriner og metabolitter i prøver indsamlet fra lumen og suburothelium lamina propria ved påfyldningens afslutning er meget forskellig.Tilsætning af atheno ATP, en meget fluorescerende analog af ATP, til den suburotheliale side af detrusorfri forberedelse resulterer i et fald i atheno ATP og en stigning i atheno ATP produkter, atheno ADP, atheno AMP, og atheno ADO. På samme måde resulterer tilføjelsen af atheno ATP til lumenpræparatet i et fald i atheno ATP og en stigning i atheno ADP, atheno AMP og atheno ADO i lumen. Endvidere, tilføjelsen af atheno ATP til suburothelium lamina propria side af denuded forberedelse resulterer i fremkomsten af atheno AMP og atheno ADO i lumen.Ligeledes, tilføje atheno ATP til lumen resulterer i fremkomsten af atheno AMP og atheno ADO i suburothelium lamina propria. Efter denne procedure, tilgængeligheden af excitatoriske og hæmmende mediatorer kan måles ved lamina propria og i blæren lumen på forskellige stadier af blærefyldning. Bilateral transuretral transport af mæglere og metabolisme af mæglere kan også studeres ved hjælp af denne model.Ved hjælp af denne nye blære model vil resultere i ny forståelse af iboende, lokale mechanosensitive signalering mellem urothelium og detrusor glat muskel, der styrer blære ophidselse i sundhed og sygdom.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Decentralized (Ex Vivo) Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling

Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

En Orthotopisk blæretumor Model og evaluering af Intravesikal Sarna behandling

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

High-throughput Flowcytometri cellebaseret assay til påvisning af antistoffer til N-methyl-D-aspartat-receptor eller dopamin-2-receptoren i humant serum

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

Minimalt invasiv Etablering af murine ortotopisk Blære xenotransplantater

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Urinblæren Udspilning Evoked Visceromotor Responses som en model for blæresmerter i mus

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

Glat muskulatur i blæren Strip Kontraktilitet som en metode til at evaluere nedre urinveje Farmakologi

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Model til Uddannelse hormonvirkning i Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...