Name: a decentralized (ex vivo) murine bladder model with the detrusor muscle removed for direct access to the suburothelium during bladder filling
Uploaded: 2019-11-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling at JoVE.com

עבודה זו נתמכת על ידי המכון הלאומי לסוכרת ומחלות עיכול וכליות גרנט DK41315.

כל ההליכים הכרוכים בבעלי חיים המתוארים בכתב יד זה נערכו על פי מכון הבריאות הלאומי לטיפול והשימוש בבעלי חיים מעבדתיים והשימוש בבעלי חיים מוסדיים וועדת הטיפול באוניברסיטת נבאדה.
הערה: הדגם המוצג כאן מורכב מהסרת השריר הדטראאו בעוד שהאורוטאום וסובו/LP מנותרים לל?...

<ol>
	<li>Apodaca, G., Balestreire, E., Birder, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+uroepithelial-associated+sensory+web.">The uroepithelial-associated sensory web.</a> Kidney International. 72, 1057-1064 (2007).</li><li>Fry, C. H., Vahabi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+Mucosa+in+Normal+and+Abnormal+Bladder+Function.">The Role of the Mucosa in Normal and Abnormal Bladder Function.</a> Basic and Clinical Pharmacology and Toxicology. , 57-62 (2016).</li><li>Merrill, L., Gonzalez, E. J., Girard, B. M., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptors,+channels,+and+signalling+in+the+urothelial+sensory+system+in+the+bladder.">Receptors, channels, and signalling in the urothelial sensory system in the bladder.</a> Nature Reviewes Urology. 13, 193-204 (2016).</li><li>Ferguson, D. R., Kennedy, I., Burton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+is+released+from+rabbit+urinary+bladder+epithelial+cells+by+hydrostatic+pressure+changes--a+possible+sensory+mechanism?.">ATP is released from rabbit urinary bladder epithelial cells by hydrostatic pressure changes--a possible sensory mechanism?.</a> Journal of Physiology. 505, 503-511 (1997).</li><li>Wang, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+and+purinergic+receptor-dependent+membrane+traffic+in+bladder+umbrella+cells.">ATP and purinergic receptor-dependent membrane traffic in bladder umbrella cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 115, 2412-2422 (2005).</li><li>Miyamoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+for+Piezo1+in+stretch-evoked+Ca(2)(+)+influx+and+ATP+release+in+urothelial+cell+cultures.">Functional role for Piezo1 in stretch-evoked Ca(2)(+) influx and ATP release in urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 289, 16565-16575 (2014).</li><li>Mochizuki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TRPV4+cation+channel+mediates+stretch-evoked+Ca2++influx+and+ATP+release+in+primary+urothelial+cell+cultures.">The TRPV4 cation channel mediates stretch-evoked Ca2+ influx and ATP release in primary urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 284, 21257-21264 (2009).</li><li>McLatchie, L. M., Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+release+from+freshly+isolated+guinea-pig+bladder+urothelial+cells:+a+quantification+and+study+of+the+mechanisms+involved.">ATP release from freshly isolated guinea-pig bladder urothelial cells: a quantification and study of the mechanisms involved.</a> BJU International. 115, 987-993 (2015).</li><li>Birder, L. A., Apodaca, G., de Groat, W. C., Kanai, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenergic-+and+capsaicin-evoked+nitric+oxide+release+from+urothelium+and+afferent+nerves+in+urinary+bladder.">Adrenergic- and capsaicin-evoked nitric oxide release from urothelium and afferent nerves in urinary bladder.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 275, F226-F229 (1998).</li><li>Birder, L. A., Kanai, A. J., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DMSO:+effect+on+bladder+afferent+neurons+and+nitric+oxide+release.">DMSO: effect on bladder afferent neurons and nitric oxide release.</a> Journal of Urology. 158, 1989-1995 (1997).</li><li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+expression+suggests+a+sensory+role+for+urinary+bladder+epithelial+cells.">Vanilloid receptor expression suggests a sensory role for urinary bladder epithelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 98, 13396-13401 (2001).</li><li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-adrenoceptor+agonists+stimulate+endothelial+nitric+oxide+synthase+in+rat+urinary+bladder+urothelial+cells.">Beta-adrenoceptor agonists stimulate endothelial nitric oxide synthase in rat urinary bladder urothelial cells.</a> Journal of Neuroscience. 22, 8063-8070 (2002).</li><li>Durnin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+bladder+model+with+detrusor+smooth+muscle+removed+to+analyse+biologically+active+mediators+released+from+the+suburothelium.">An ex vivo bladder model with detrusor smooth muscle removed to analyse biologically active mediators released from the suburothelium.</a> Journal of Physiology. 597, 1467-1485 (2019).</li><li>Yoshida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-neuronal+cholinergic+system+in+human+bladder+urothelium.">Non-neuronal cholinergic system in human bladder urothelium.</a> Urology. 67, 425-430 (2006).</li><li>Beckel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin+1+channels+mediate+the+release+of+ATP+into+the+lumen+of+the+rat+urinary+bladder.">Pannexin 1 channels mediate the release of ATP into the lumen of the rat urinary bladder.</a> Journal of Physiology. 593, 1857-1871 (2015).</li><li>Collins, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OnabotulinumtoxinA+significantly+attenuates+bladder+afferent+nerve+firing+and+inhibits+ATP+release+from+the+urothelium.">OnabotulinumtoxinA significantly attenuates bladder afferent nerve firing and inhibits ATP release from the urothelium.</a> BJU International. 112, 1018-1026 (2013).</li><li>Daly, D. M., Nocchi, L., Liaskos, M., McKay, N. G., Chapple, C., Grundy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+afferent+pathways+and+urothelial+function+in+the+male+mouse+bladder.">Age-related changes in afferent pathways and urothelial function in the male mouse bladder.</a> Journal of Physiology. 592, 537-549 (2014).</li><li>Durnin, L., Hayoz, S., Corrigan, R. D., Yanez, A., Koh, S. D., Mutafova-Yambolieva, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urothelial+purine+release+during+filling+of+murine+and+primate+bladders.">Urothelial purine release during filling of murine and primate bladders.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 311, F708-F716 (2016).</li><li>Gonzalez, E. J., Heppner, T. J., Nelson, M. T., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinergic+signalling+underlies+transforming+growth+factor-beta-mediated+bladder+afferent+nerve+hyperexcitability.">Purinergic signalling underlies transforming growth factor-beta-mediated bladder afferent nerve hyperexcitability.</a> Journal of Physiology. 594, 3575-3588 (2016).</li></ol>

שלפוחית השתן יש שתי פונקציות: אחסון ו-ווצמה של שתן. הפעולה הרגילה של פונקציות אלה דורש חישה מכנית נאותה של נפח intraluminal והלחץ והתמרה של אותות דרך תאים בקיר שלפוחית השתן כדי לווסת את השרירים שרירים או מרגש. רירית שלפוחית השתן (אורוטאלינום) הוא האמין לווסת את הרגש שלפוחית השתן על ידי שחרור מגוו?...

מטרת מודל זה היא לאפשר גישה ישירה לצד submucosal של רירית שלפוחית השתן במהלך שלבים שונים של מילוי שלפוחית השתן.
שלפוחית השתן חייבת להימנע התכווצות מוקדמת במהלך מילוי וריק כאשר הנפח הקריטי והלחץ מגיעים. מסלול לא תקין או הרקה של שתן משויכים לעתים קרובות עם מרגש נורמלי של שריר הדטרואו חלק (DSM) במהלך מילוי שלפוחית השתן. הרגש של DSM נקבע על ידי גורמים פנימיים לתאי השריר חלקה ועל ידי השפעות שנוצרו על ידי סוגי תאים שונים בתוך הקיר שלפוחית השתן. הקיר של שלפוחית השתן מורכב מאורואלינום (רירית), סובורוטנום (SubU)/לאמינה קינאה (LP), שריר החלקה (DSM) ו serosa (איור 1A). האורוטנום מורכב מתאי מטריה (כלומר, השכבה החיצונית ביותר של האורואלינום), תאי ביניים ותאי בסיס (כלומר, השכבה הפנימית ביותר של האורואלינום). סוגים שונים של תאים, כולל תאים ביניים, תאי מסופים, מסופי עצבים כלי לימפה, כלי דם קטנים, ותאים חיסוניים שוכנים subu/LP. ההנחה היא ששלפוחית השתן היא עוגב חושי היוזם מיקרו-מתווכים של רפלקס ומוסר על ידי שחרור המגשרים לתוך רירית המשנה המשפיעים על התאים ב-subu/LP ו-DSM1,2,3. לרוב, הנחות כאלה מבוססות על מחקרים שהפגינו שחרור מגשרים: מפיסות רירית חשופים לשינויים בלחץ ההידרוסטטי4,5; מתוך מגוון התאים המתורבתות חשופים למתיחה6,7, היפוטונזה המושרה תא נפיחות7 או לגרור כוחות8; מתוך שלפוחית בודדה רצועות קיר על הקולטן או הפעלה עצביים9,10,11,12,13,14; ובשלפוחית השתן לומן בסוף שלפוחית השתן מילוי15,16,17,18,19. בעוד שמחקרים כאלה היו אינסטרומנטלי להפגין שחרור של מגשרים על גירוי מכני של מקטעי קיר שלפוחית השתן או תאים מתורבתים של אורוטאליאל, הם צריכים להיות נתמכים על ידי ראיות ישירות לשחרור של מגשרים ברירית המשנה כי הוא הרוויח על ידי גירויים פיסיולוגיים לשכפל מילוי שלפוחית השתן. זוהי משימה מאתגרת בהתחשב בעובדה SubU/LP ממוקם עמוק בתוך הקיר שלפוחית השתן מכניסה את הגישה הישירה לקרבת SubU/LP במהלך מילוי שלפוחית השתן.
כאן, אנו להמחיש מבוזר (ex vivo) מודל שלפוחית השתן murine עם שריר השריר הוסר13 אשר פותחה כדי להקל על מנגנונים מקומיים של המנגנון המנגנון השתתפות האיתות בין שלפוחית השתן urothelium, DSM וסוגי תאים אחרים בקיר שלפוחית השתן. גישה זו היא מעולה לשימוש סדינים שטוח הקיר, רצועות הקיר שלפוחית השתן או התאים התרבותיים אורוטאליאל משום שהוא מאפשר מדידות ישירה בקרבת SubU/LP של urothelial המגשרים, כי הם שוחרר או הוקמה בתגובה ללחצים פיזיולוגיים וכלי שלפוחית השתן וימנע השינויים הפוטנציאליים בתרבות התא ניתן להשתמש בו כדי למדוד זמינות, שחרור, חילוף החומרים והעברת התחבורה של המגשרים SubU/LP בשלבים שונים של מילוי שלפוחית השתן (איור 1B). ההכנה יכולה לשמש גם כדי לבחון את האיתות האורואליאל והמכונה במודלים של תסמונות שלפוחית השתן הפרוע.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>C79</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>D16</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion Pump</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>GenieTouch</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P217</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P284</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>SCHOTT ACEI</td>
			<td></td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus SZX7</td>
			<td></td>
			<td>Flexible to use any scope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M33</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S671</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S233</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles 25G</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305122</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ bath</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Flexible source; We made it from Radnoti dissecting dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-20 tubing</td>
			<td>Intramedic</td>
			<td>427405</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure transducer</td>
			<td>AD instrument</td>
			<td></td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00632-11</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software pressure-volume</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>Power lab</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Nylon, 6-0</td>
			<td>AD surgical</td>
			<td>S-N618R13</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Silk, 6-0</td>
			<td>Deknatel via Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td>07J1500190</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 ml</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309602</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water circulator</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>K-MOD 100</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a decentralized (ex vivo) murine bladder model with the detrusor muscle removed for direct access to the suburothelium during bladder filling

מחקרים קודמים הקימו את שחרורו של חומרים כימיים מן הסדינים שטוח רירית השלפוחית מודבקת בתאי Ussing וחשופים שינויים בלחץ הידרוסטטי או למתוח מכני ומתאי אורוטאליאל מתורבת על שינויי לחץ הידרוסטטי, למתוח, תא נפיחות, או לגרור כוחות, ובשלפוחית השתן בסוף מילוי. ממצאים כאלה הובילו את ההנחה כי מגשרים אלה שוחררו גם suburothelium (SubU)/lamina קינא (LP) במהלך מילוי שלפוחית השתן, שם הם משפיעים על התאים עמוק בקיר שלפוחית השתן כדי להסדיר בסופו של דבר את שלפוחית השתן. יש לפחות שתי מגבלות ברורות במחקרים כאלה: 1. אף אחת מגישות אלה אינה מספקת מידע ישיר על נוכחות המגשרים בסובו/LP, ו-2) הגירויים ששימשו אינם פיסיולוגיים ואינם ממלאים את השלפוחית במילוי אותנטי של שלפוחית השתן. כאן, אנו דנים הליך המאפשר גישה ישירה אל פני השטח suburothelial של רירית שלפוחית השתן במהלך מילוי שלפוחית השתן. ההכנה המבטלת-חופשית שיצרנו דומה מאוד למילוי של שלפוחית השתן ומאפשרת מחקרים בלחץ-נפח שיבוצעו על שלפוחית השתן בהעדר איתות מתוך רפלקסים מעמוד השדרה והשריר החלק. באמצעות מודל שלפוחית השתן הרומן הספר, הדגמנו לאחרונה כי מדידות הפנימי של המגשרים אינם יכולים לשמש כפרוקסי למה שוחרר או נוכח SubU/LP במהלך מילוי שלפוחית השתן. המודל מאפשר בדיקת מולקולות איתות נגזרות מסוג urothelium שפורסמו, שנוצר על-ידי חילוף החומרים ו/או מועברים לתוך SubU/LP במהלך מילוי שלפוחית השתן כדי להעביר מידע לנוירונים ושריר חלק של שלפוחית השתן ולווסת את הרגש שלה במהלך המשך ו-micturition.

קיר של הכנת שלפוחית השתן מורטין ללא פגע והוא מכיל את כל השכבות מלבד DSM ו serosa. לימודי הוכחת העיקרון הוכיחו שחומת השלפוחית החופשית של ה-DSM כוללת את האורואלינום וסובו/LP, בעוד שבטונאיקה מוסקולריס והסראוסה נעדרים (איור 2)13.
<p class="jove_content" fo:keep-tog...

Watch this Scientific Journal Video about A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling at JoVE.com

A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling

מודל שלפוחית השתן מאפשר גישה ישירה לסובורוטנום כדי ללמוד מנגנונים מקומיים לוויסות זמינות מגשרת פעילה ביולוגית בסווברואלינום/לאמה קינאה במהלך אחסון ובדיקת שתן. ההכנה דומה מאוד למילוי של שלפוחית השתן והיא מאפשרת לבצע מחקרים בלחץ-נפח שיבוצעו ללא השפעות מערכתיות.

מבוזרים (Ex Vivo) מורלין מודל שלפוחית השתן עם השריר הדטראאור הוסר עבור גישה ישירה Suburothelium במהלך מילוי שלפוחית השתן

Previous studies have established the release of chemical substances from flat bladder mucosa sheets affixed in Ussing chambers and exposed to changes in ...

מודל שלפוחית השתן שלנו עם שריר detrusor הוסר היא גישה ניסיונית חדשה ללמוד בו זמנית את הזמינות של מתווכים urothelial ב propria lamia ולומן שלפוחית השתן במהלך מילוי שלפוחית השתן. מודל זה יכול לספק תובנות חדשות על מנגנוני האיתות בין אורותליום, תת-אורותל ושריר דטרוסור המווסת את עצבנות שלפוחית השתן במהלך המילוי. התחל על ידי הצבת דגימת שלפוחית השתן מורין שלם לתוך צלחת ניתוח תחת מיקרוסקופ ניתוח המכיל 10 מעלות צלזיוס מחומצן KBS וניקוי רקמות החיבור והשומן סביב שלפוחית השתן.הצמד חלק קטן של הכיפה של שלפוחית השתן המבודדת לאורך כל הדרך דרך הקצה החיצוני ביותר של שריר detrusor הרחק מהקצה הפנימי ביותר של השריר כי מול תת-אורותל למיה פרופריה כדי צלחת ניתוח מכוסה sylgard מלא KBS, ולהצמיד את השופכים ואת צוואר שלפוחית השתן כדי להציג את הכנת שלפוחית השתן שלם. בעזרת ממטרות עדינות, מושכים בעדינות חתיכת סרוסה בפינה שבין השופן לגוף שלפוחית השתן ומתאימים את אור המיקרוסקופ כדי להגביר את השקיפות ולהבדיל את שולי התת-מארז שמתחת לשריר הדיטרוסור. כדי למנוע ניקוב קיר ההכנה, הקפד לחתוך את שריר detrusor רק בעוד הקצה האחורי של רירית שלפוחית השתן גלוי בבירור.באמצעות מספריים עדין, להתחיל לחתוך את קיר שלפוחית השתן לאורך המשטח הפנימי של שכבת שריר detrusor תוך משיכת בעדינות את קטע לחתוך מן ההכנה דואג כי הקצה האחורי של רירית ניתן לראות תוך הימנעות נגיעה בקצה הרקמה. השאירו חתיכה קטנה של שריר detrusor על גבי כיפת שלפוחית השתן כדי לאפשר הכנה להיות משותק במהלך השלבים הנותרים של הפרוטוקול ולמלא חתיכה של שני סנטימטרים של צינורות פוליאתילן 20 עם 37 מעלות צלזיוס מחומצן KBS. לאחר החדרת הקטטר לתוך פתח השופכה של שלפוחית השתן, בעדינות לדחוף את הקטטר עד קצה הקטטר מגיע לאמצע המשוער של שלפוחית השתן.לאחר מכן לאבטח את הקטטר ברקמה שמסביב של צוואר שלפוחית השתן עם לולאה כפולה 6.0 תפר ניילון. לאחר בדיקת הרקמה עבור דליפות, מניחים את הכנת שלפוחית השתן denuded לתוך תא שלושה מיליליטר של 37 מעלות צלזיוס מים מעיל תבשיל איברים עם תחתית sylgard ולאבטח את הקטטר לצד התא, כך ההכנה אינה צפה מעל פני השטח של פתרון חליטה. חבר את קטטר שלפוחית השתן לחתיכת צינורות פוליאתילן 20 המחוברים לפטופקוק תלת-סטרי ומזרק עירוי מלא ב- KBS מחומצן של 37 מעלות ולהתחיל את משאבת העירוי כדי למלא את שלפוחית השתן ב- KBS תוך כדי טיפול כדי לפקח על נפח המילוי בלחץ התוך-רווי במהלך המילוי.כדי לזהות מתווכים בתוך היבט suburothelium למינה פרופריה של ההכנה, לאסוף aliquots של פתרון האמבטיה בנקודות זמן ניסיוניות מתאימות שונות לעבד את הדגימות על פי הניתוח המתוכנן במורד הזרם. קיר ההכנה של שלפוחית השתן מכיל את האורותל ואת הסובורותליום אך לא את השריר החלק. יחסי נפח הלחץ דומים להפליא בהכנות שלמות ומוזגות.התאמת המודל למדידת מתווכים שמקורם באורוטליום המשתחררים בצד הפרובריה של תת-אורותליום למינה במהלך המילוי יכולה להיבדק על ידי מדידת שחרורם של מתווכים פורין לתוך הפתרון רחצה פרובריה lamina suburothelium של ההכנה denuded. כפי שהוכח, כמויות זניחות של purines ניתן לזהות באמבטיה המכילה הכנת שלפוחית השתן מבודדת עם שריר detrusor שלם;ואילו כמויות של purines אלה גבוהים באופן משמעותי בדגימות שנאספו מהאמבטיה המכיל הכנת שלפוחית השתן denuded. יש לציין, התפלגות של purines ו מטבוליטים בדגימות שנאספו מן לומן ואת propria למינה suburothelium בסוף מילוי שונים באופן משמעותי.תוספת של אתנו ATP, אנלוגי פלואורסצנטי מאוד של ATP, לצד suburothelial של ההכנה detrusor חינם תוצאות ירידה אתנו ATP ועלייה במוצרי ATP אתנו, אתנו ADP, אתנו AMP, ואתנו ADO. כמו כן, התוספת של אתנו ATP להכנת לומן גורמת לירידה באתנו ATP ולעלייה באתנו ADP, אתנו AMP ואתנו ADO בלומן. יתר על כן, התוספת של אתנו ATP לצד פרובריה lamina suburothelium של ההכנה denuded תוצאות המראה של אתנו AMP ואתנו ADO בתוך לומן.כמו כן, הוספת אתנו ATP ללומן גורמת להופעתם של אתנו AMP ואתנו ADO בסובורותל למינה פרופריה. בעקבות הליך זה, ניתן למדוד את הזמינות של מתווכים רגשנים ומעכבים בלמינה פרופריה ובלומן שלפוחית השתן בשלבים שונים של מילוי שלפוחית השתן. תחבורה transurethral דו-צדדית של מתווכים ומטבוליזם של מתווכים ניתן גם ללמוד באמצעות מודל זה.שימוש במודל חדש זה של שלפוחית השתן יגרום להבנה חדשה של איתות פנימי, מכני מקומי בין urothelium ושריר חלק detrusor לשלוט רגישות שלפוחית השתן בבריאות ומחלות.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Decentralized (Ex Vivo) Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling

Mouse Bladder Wall Injection

שלפוחית ​​השתן עכבר וול Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

השימוש בCystometry במכרסמים קטנים: חקר Chemosensation שלפוחית ​​השתן

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

שלפוחית ​​השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

סרטן שלפוחית ​​השתן לדגם orthotopic ג&#39;ין משלוח לימודים

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

Assay המבוסס תא זרימת cytometry תפוקה גבוהה לזיהוי נוגדנים לN-מתיל-D-aspartate קולטן דופמין או-2 קולטן בסרום אדם

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן xenografts

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

תגובות שתן בשלפוחית ​​השתן ההתנפחות העוררת Visceromotor כמודל לשלפוחית ​​שתן כאב בעכברים

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

שריר חלק בשלפוחית ​​השתן רצועת התכווצות כשיטה להערכת נמוכה יותר בדרכי שתן פרמקולוגיה

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

<em&gt; Ex vivo</em&gt; דגם לחקר הורמוני פעולה בשד האדם

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...