Name: a decentralized (ex vivo) murine bladder model with the detrusor muscle removed for direct access to the suburothelium during bladder filling
Uploaded: 2019-11-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling at JoVE.com

이 작품은 당뇨병과 소화 및 신장 질환 보조금 DK41315의 국립 연구소에 의해 지원되었다.

이 원고에 기술 된 동물과 관련된 모든 절차는 실험실 동물의 관리 및 사용을위한 건강 가이드의 국립 연구소와 네바다 대학의 기관 동물 사용 및 관리위원회에 따라 수행되었습니다.
참고: 여기에 제시 된 모델은 비뇨기와 SubU / LP가 그대로 남아있는 동안 detrusor 근육의 제거로 구성되어 있습니다(그림 1B)연구원은 방광 ?...

<ol>
	<li>Apodaca, G., Balestreire, E., Birder, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+uroepithelial-associated+sensory+web.">The uroepithelial-associated sensory web.</a> Kidney International. 72, 1057-1064 (2007).</li><li>Fry, C. H., Vahabi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+Mucosa+in+Normal+and+Abnormal+Bladder+Function.">The Role of the Mucosa in Normal and Abnormal Bladder Function.</a> Basic and Clinical Pharmacology and Toxicology. , 57-62 (2016).</li><li>Merrill, L., Gonzalez, E. J., Girard, B. M., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptors,+channels,+and+signalling+in+the+urothelial+sensory+system+in+the+bladder.">Receptors, channels, and signalling in the urothelial sensory system in the bladder.</a> Nature Reviewes Urology. 13, 193-204 (2016).</li><li>Ferguson, D. R., Kennedy, I., Burton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+is+released+from+rabbit+urinary+bladder+epithelial+cells+by+hydrostatic+pressure+changes--a+possible+sensory+mechanism?.">ATP is released from rabbit urinary bladder epithelial cells by hydrostatic pressure changes--a possible sensory mechanism?.</a> Journal of Physiology. 505, 503-511 (1997).</li><li>Wang, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+and+purinergic+receptor-dependent+membrane+traffic+in+bladder+umbrella+cells.">ATP and purinergic receptor-dependent membrane traffic in bladder umbrella cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 115, 2412-2422 (2005).</li><li>Miyamoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+for+Piezo1+in+stretch-evoked+Ca(2)(+)+influx+and+ATP+release+in+urothelial+cell+cultures.">Functional role for Piezo1 in stretch-evoked Ca(2)(+) influx and ATP release in urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 289, 16565-16575 (2014).</li><li>Mochizuki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TRPV4+cation+channel+mediates+stretch-evoked+Ca2++influx+and+ATP+release+in+primary+urothelial+cell+cultures.">The TRPV4 cation channel mediates stretch-evoked Ca2+ influx and ATP release in primary urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 284, 21257-21264 (2009).</li><li>McLatchie, L. M., Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+release+from+freshly+isolated+guinea-pig+bladder+urothelial+cells:+a+quantification+and+study+of+the+mechanisms+involved.">ATP release from freshly isolated guinea-pig bladder urothelial cells: a quantification and study of the mechanisms involved.</a> BJU International. 115, 987-993 (2015).</li><li>Birder, L. A., Apodaca, G., de Groat, W. C., Kanai, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenergic-+and+capsaicin-evoked+nitric+oxide+release+from+urothelium+and+afferent+nerves+in+urinary+bladder.">Adrenergic- and capsaicin-evoked nitric oxide release from urothelium and afferent nerves in urinary bladder.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 275, F226-F229 (1998).</li><li>Birder, L. A., Kanai, A. J., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DMSO:+effect+on+bladder+afferent+neurons+and+nitric+oxide+release.">DMSO: effect on bladder afferent neurons and nitric oxide release.</a> Journal of Urology. 158, 1989-1995 (1997).</li><li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+expression+suggests+a+sensory+role+for+urinary+bladder+epithelial+cells.">Vanilloid receptor expression suggests a sensory role for urinary bladder epithelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 98, 13396-13401 (2001).</li><li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-adrenoceptor+agonists+stimulate+endothelial+nitric+oxide+synthase+in+rat+urinary+bladder+urothelial+cells.">Beta-adrenoceptor agonists stimulate endothelial nitric oxide synthase in rat urinary bladder urothelial cells.</a> Journal of Neuroscience. 22, 8063-8070 (2002).</li><li>Durnin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+bladder+model+with+detrusor+smooth+muscle+removed+to+analyse+biologically+active+mediators+released+from+the+suburothelium.">An ex vivo bladder model with detrusor smooth muscle removed to analyse biologically active mediators released from the suburothelium.</a> Journal of Physiology. 597, 1467-1485 (2019).</li><li>Yoshida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-neuronal+cholinergic+system+in+human+bladder+urothelium.">Non-neuronal cholinergic system in human bladder urothelium.</a> Urology. 67, 425-430 (2006).</li><li>Beckel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin+1+channels+mediate+the+release+of+ATP+into+the+lumen+of+the+rat+urinary+bladder.">Pannexin 1 channels mediate the release of ATP into the lumen of the rat urinary bladder.</a> Journal of Physiology. 593, 1857-1871 (2015).</li><li>Collins, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OnabotulinumtoxinA+significantly+attenuates+bladder+afferent+nerve+firing+and+inhibits+ATP+release+from+the+urothelium.">OnabotulinumtoxinA significantly attenuates bladder afferent nerve firing and inhibits ATP release from the urothelium.</a> BJU International. 112, 1018-1026 (2013).</li><li>Daly, D. M., Nocchi, L., Liaskos, M., McKay, N. G., Chapple, C., Grundy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+afferent+pathways+and+urothelial+function+in+the+male+mouse+bladder.">Age-related changes in afferent pathways and urothelial function in the male mouse bladder.</a> Journal of Physiology. 592, 537-549 (2014).</li><li>Durnin, L., Hayoz, S., Corrigan, R. D., Yanez, A., Koh, S. D., Mutafova-Yambolieva, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urothelial+purine+release+during+filling+of+murine+and+primate+bladders.">Urothelial purine release during filling of murine and primate bladders.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 311, F708-F716 (2016).</li><li>Gonzalez, E. J., Heppner, T. J., Nelson, M. T., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinergic+signalling+underlies+transforming+growth+factor-beta-mediated+bladder+afferent+nerve+hyperexcitability.">Purinergic signalling underlies transforming growth factor-beta-mediated bladder afferent nerve hyperexcitability.</a> Journal of Physiology. 594, 3575-3588 (2016).</li></ol>

방광에는 소변의 저장 그리고 무효화의 2개의 기능이 있습니다. 이러한 기능의 정상적인 작동은 방광 벽에 있는 세포를 통해 신호의 내발량 및 압력 및 전달의 적절한 기계적 감지를 필요로 하여 분리기 근육 흥분성을 조절합니다. 방광 점막 (urothelium)는 방광 벽에 있는 수많은 세포 모형에 영향을 미치는 SubU/LP에 있는 신호 분자의 다양한 방출해서 방광 흥분성을 통제하는 것으로 믿어집니다. 현?...

이 모형의 목적은 방광 충진의 다른 단계 도중 방광 점막의 점막 측에 직접 접근을 가능하게 하기 위한 것입니다.
방광은 중요한 부피와 압력에 도달할 때 충전하는 동안 조기 수축을 자제하고 비어 있어야합니다. 소변의 이상한 요실금 또는 무효화는 방광 충진 의 과정에서 분리 평활근 (DSM)의 비정상적인 흥분성과 자주 연관됩니다. DSM의 흥분성은 평활근 세포에 내재된 요인과 방광 벽 내의 다른 세포 유형에 의해 생성된 영향에 의해 결정됩니다. 오줌 방광의 벽은 요로 외(점막), suburi(SubU)/라미나 프로피아(LP), 방파제 평활근(DSM) 및 세로사(그림1A)로구성됩니다. 요로 테륨은 우산 세포 (즉, 요로 류의 가장 바깥쪽 층), 중간 세포 및 기저 세포 (즉, 요로 의 가장 안쪽 층)로 구성됩니다. 간질 세포, 섬유아세포, 구심성 신경 말단, 작은 혈관 및 면역 세포를 포함한 다양한 유형의 세포가 SubU/LP에 있습니다. 방광 요로는 SubU/LP 및 DSM1,2,3의세포에 영향을 미치는 점막내로 매개체를 방출함으로써 반사 배뇨 및 요실금을 개시하는 감각 기관이라고 널리 가정됩니다. 대부분의 경우, 이러한 가정은 중재자의 방출을 입증 한 연구를 기반으로합니다 : 점막의 조각에서 정수압의 변화에 노출4,5; 배양 된 비뇨기 세포에서 스트레칭 에 노출6,7,hypotonicity 유도 세포 팽윤7 또는 드래그 힘8; 수용체 또는 신경 활성화 시 고립 된 방광 벽 스트립에서9,10,11,12,13,14; 그리고 방광 의 끝에 루멘15,16,17,18,19. 그 같은 연구 결과는 방광 벽 세그먼트 또는 배양된 비뇨기과 세포의 기계적인 자극에 중재자의 방출을 설명하는 중요한 동안, 방광 충전을 재생하는 생리적 자극에 의해 유도되는 submucosa에 있는 중재자의 방출을 위한 직접적인 증거에 의해 지원될 필요가 있습니다. 이것은 SubU/LP가 방광 충전 도중 SubU/LP의 부근에 간단한 접근을 방해하는 방광 벽의 깊은 곳에 있다는 것을 주어진 도전적인 작업입니다.
여기서, 우리는 방광 요로, DSM 및 방광 벽에 있는 그밖 세포 모형 사이 신호에 참여하는 메카노트랜스덕션의 국소 기계장치에 대한 연구를 촉진하기 위하여 개발된 detrusor 근육제거된 13를 가진 분권화된 (ex vivo) 뮤린 방광 모형을 예시합니다. 이 접근법은 방광의 생리적 압력 과 부피에 반응하여 방출되거나 형성되는 비뇨기과 유래 매개체의 SubU/LP 부근에서 직접 측정을 허용하고 세포 배양에서 잠재적인 현상학적 변화를 피하기 때문에 평평한 방광 벽 시트, 방광 벽 스트립 또는 배양 된 비뇨 기 세포를 사용하는 것이 우수합니다. 방광 충진의 상이한 단계에서 SubU/LP의 중재자의 가용성, 방출, 대사 및 경부 수송을 측정하는데 사용될 수있다(그림 1B). 준비는 또한 과민성 및 저활동 방광 증후군의 모형에 있는 비뇨기과 신호 및 mechanotransduction를 검토하기 위하여 이용될 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>C79</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>D16</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion Pump</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>GenieTouch</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P217</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P284</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>SCHOTT ACEI</td>
			<td></td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus SZX7</td>
			<td></td>
			<td>Flexible to use any scope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M33</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S671</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S233</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles 25G</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305122</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ bath</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Flexible source; We made it from Radnoti dissecting dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-20 tubing</td>
			<td>Intramedic</td>
			<td>427405</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure transducer</td>
			<td>AD instrument</td>
			<td></td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00632-11</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software pressure-volume</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>Power lab</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Nylon, 6-0</td>
			<td>AD surgical</td>
			<td>S-N618R13</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Silk, 6-0</td>
			<td>Deknatel via Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td>07J1500190</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 ml</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309602</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water circulator</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>K-MOD 100</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a decentralized (ex vivo) murine bladder model with the detrusor muscle removed for direct access to the suburothelium during bladder filling

이전 연구는 Ussing 챔버에 부착 된 평평한 방광 점막 시트에서 화학 물질의 방출을 확립하고 정수압 변화, 스트레칭, 세포 부종 또는 항력, 충전 말기의 방광 루멘에 따라 정수압 또는 기계적 스트레칭 및 배양 된 비뇨기 세포에서 변화에 노출되었습니다. 그 같은 사실 인정은 이 매개체가 또한 방광 충전 도중 suburothelium (SubU)/lamina propria (LP)에서 풀어 놓인다는 가정으로 이끌어 냈습니다, 어디 그(것)들은 궁극적으로 방광 흥분성을 통제하기 위하여 방광 벽에 깊은 세포에 영향을 미칩니다. 그러한 연구 결과에 있는 적어도 2개의 명백한 한계가 있습니다: 1) 이 접근의 아무도는 SubU/LP에 있는 중재자의 존재에 관하여 직접적인 정보를 제공하지 않으며, 2) 사용된 자극은 생리적이지 않으며 방광의 본격적인 충진을 되풀이하지 않습니다. 여기에서는 방광 을 채우는 과정에서 방광 점막의 지하 표면에 직접 접근 할 수있는 절차에 대해 논의합니다. 우리가 만든 뮤린 detrusor-free 준비는 그대로 방광의 채우기와 밀접하게 유사하고 척추 반사 및 detrusor 평활근에서 혼란스러운 신호가없는 방광에 압력 볼륨 연구를 수행 할 수 있습니다. 새로운 detrusor 자유로운 방광 모형을 사용하여, 우리는 최근에 방광 충전 도중 SubU/LP에서 풀어 놓인 무슨에 대리인으로 중재자의 내측정을 사용할 수 없다는 것을 보여주었습니다. 이 모델은 방광 충전 과정에서 신진 대사에 의해 생성되거나 SubU/LP로 이송되어 방광의 뉴런과 평활근에 정보를 전달하고 요실금 및 분뇨 중 흥분성을 조절하는 비뇨생식기 유래 신호 분자를 검사할 수 있습니다.

뮤린 detrusor 없는 방광 준비의 벽은 손상되지 않으며 DSM과 serosa를 제외한 모든 층을 포함합니다. 원리 증명 연구는 DSM이없는 방광 벽이 투로 신경과 수U / LP를 포함하고 튜니카 근육질및 혈청이 없는 것으로 입증되었습니다(그림 2)13.
방광이 없는 방광을 채우는 것은 정상적인 방?...

Watch this Scientific Journal Video about A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling at JoVE.com

A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling

detrusor-free 방광 모형은 소변의 저장 그리고 무효화 도중 suburothem/lamina propria에 있는 생물학적으로 활성 매개체 가용성의 규칙에 대한 지역 기계장치를 공부하기 위하여 suburothem에 직접 접근할 수 있습니다. 준비는 밀접하게 손상되지 않은 방광의 채우기를 닮은 및 압력 볼륨 연구는 전신 영향없이 수행 할 수 있습니다.

방광 충진 중 수부에 직접 접근할 수 있도록 제거된 분리기 근육이 있는 분권화된(Ex Vivo) 뮤린 방광 모델

Previous studies have established the release of chemical substances from flat bladder mucosa sheets affixed in Ussing chambers and exposed to changes in ...

제거된 detrusor 근육을 가진 우리의 방광 모형은 방광 보충 도중 lamia propria 및 방광 루멘에 있는 비뇨기과 중재자의 가용성을 동시에 공부하는 새로운 실험적인 접근입니다. 이 모델은 비뇨기운, suburothelium 및 충전 하는 동안 방광 흥분성을 조절 하는 detrusor 근육 사이 신호 메커니즘에 새로운 통찰력을 제공할 수 있습니다. 10섭씨 KBS를 함유한 해부 현미경으로 그대로 소명방 표본을 해부 접시에 넣고 방광 주변의 결합 및 지방 조직을 청소하는 것으로 시작하십시오.외식방의 돔의 작은 부분을 염기부근육의 가장 바깥쪽 가장자리를 통해 SUBurothelium lamia propria를 마주보고 있는 근육의 가장 안쪽 가장자리를 통해 KBS로 채워진 실가드 덮인 해부 접시에 고정하고, 요관과 방광목을 고정하여 방광 준비를 그대로 표시합니다. 미세 한 포셉을 사용하여, 부드럽게 요관과 방광 몸 사이의 모서리에 세로사의 조각을 당기고 투명성을 높이고 detrusor 근육 아래 의 부막의 마진을 구별하기 위해 현미경의 빛을 조절합니다. 준비 벽을 천공하지 않으려면 방광 점막의 측면 가장자리가 명확하게 보이는 동안에만 분리근을 잘라야합니다.미세 기울어진 가위를 사용하여, 조직의 가장자리를 만지는 것을 피하면서 점막의 측면 가장자리를 관찰 할 수있는 준비를 통해 절단 된 부분을 부드럽게 당기면서 분리근 층의 내부 표면을 따라 방광 벽을 자르기 시작합니다. 방광 돔 위에 작은 조각의 분리근을 남겨 서 프로토콜의 나머지 단계에서 고정 될 수 있도록 하 고 37 섭씨 37 섭씨 산소로 20 폴리에틸렌 튜브의 2 센티미터 조각을 채우기 위해. 카테터를 방광 요도의 오리피스에 삽입한 후 카테터 팁이 방광의 대략적인 중앙에 도달할 때까지 카테터를 부드럽게 밀어 넣습니다.그런 다음 이중 루프 6.0 나일론 봉합사로 방광 목의 주변 조직에서 카테터를 고정하십시오. 누출 조직을 확인한 후, 실가드 바닥으로 37도의 물자 켓 오르간 접시에 방광 을 넣고 카테터를 챔버 의 측면에 고정하여 관류 용액의 표면 위로 부동하지 않도록하십시오. 방광 카테터를 3방향 스톱콕과 37°C의 산소로 채워진 주입 주사기에 연결된 폴리에틸렌 20 튜브 조각에 연결하고, 충전 중 내막 압력의 충진량을 모니터링하기 위해 KBS를 돌보는 것으로 방광을 채우기 위해 주입 펌프를 시작합니다.제제의 서브우로테리움 라미나 프로프리아 양내 중재자를 검출하기 위해, 다양한 적절한 실험 시점에서 목욕 용액의 알리쿼트를 수집하고 계획된 다운스트림 분석에 따라 샘플을 처리한다. 방광 준비 벽은 비뇨기과 서브로텔륨을 포함하지만, 분리 부드러운 근육은 없습니다. 압력 볼륨 관계는 손상되지 않고 비설된 준비에서 현저하게 유사합니다.충전 중 서브우루알 라미나 프로프리아 측에서 방출되는 비뇨기류 유래 중재자를 측정하는 모델의 적합성은 퓨린 중재자의 방출을 용액으로 측정하여 시험할 수 있다. 입증된 바와 같이, 그대로 분리된 방광 제제를 함유한 욕조에서 무시할 수 있는 양의 퓨린을 검출할 수 있으며, 이러한 퓨린의 양은 방광 제제를 함유한 욕조에서 수집된 샘플에서 훨씬 더 높습니다. 특히, 충진의 끝에 루멘과 suburothelium lamina propria에서 수집된 견본에 있는 purines 및 대사산물의 분포는 현저하게 다릅니다.ATP의 높은 형광 아날로그아테노 ATP를 첨가하여, 분리기 없는 제제의 서브우로살리알 측에 아테노 ATP의 감소와 아테노 ATP 제품, 아테노 ADP, 아테노 AMP 및 아테노 ADO의 증가를 초래한다. 마찬가지로, 루멘 제제에 아테노 ATP를 첨가하면 아테노 ATP의 감소와 아테노 ADP, 아테노 AMP 및 아테노 아도의 증가가 루멘에서 발생한다. 또한, 아테노 ATP를 서브우로텔륨 라미나 프로프리아 측에 첨가하면 루멘 내의 아테노 AMP 및 아테노 ADO의 출현이 초래되었다.마찬가지로, 루멘에 아테노 ATP를 추가하면 아테노 AMP와 아테노 ADO가 서브로테륨 라미나 프로프리아에 나타난다. 이 절차에 따라, 흥분 및 억제 중재자의 가용성은 방광 충진의 다른 단계에서 라미나 프로프리아와 방광 루멘에서 측정 될 수있다. 중재자의 양자 간 트랜스우레컬 운송 및 중재자의 대사또한이 모델을 사용하여 연구 할 수 있습니다.이 새로운 방광 모형을 사용하여 건강과 질병에서 방광 흥분성을 통제하는 비뇨기과 분리기 평활근 사이 본질적인, 현지 mechanosensitive 신호의 새로운 이해 귀착될 것입니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Decentralized (Ex Vivo) Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling

Mouse Bladder Wall Injection

마우스 블레더 월 주입

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

연구

의학

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

Murine 방광 암의 Orthotopic 모델

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

작은 쥐의 Cystometry의 사용 : 방광 Chemosensation의 연구

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

Orthotopic 방광 종양 모델 및 Intravesical saRNA 트리 트먼트의 평가

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

유전자 전달 연구 동소 방광암 모델

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

인간 혈청에있는 N-메틸-D-아스파 라진 산염 수용체 또는 도파민 2 수용체에 대한 항체를 검출하는 높은 처리량 유동 세포 계측법 세포 기반 분석

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

쥐과 동 소성 방광 이종 이식의 최소 침습 설립

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

쥐의 방광 통증 모델로 방광 팽창 유발 내장 운동 응답

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

하부 요로 약리학을 평가하는 방법으로 방광 평활근 스트립 수축성

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

<em&gt; 생체 내</em&gt; 모델은 인간의 유방암에서 호르몬 행동을 연구하기 위해

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...