Name: a decentralized (ex vivo) murine bladder model with the detrusor muscle removed for direct access to the suburothelium during bladder filling
Uploaded: 2019-11-28T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling at JoVE.com

Detta arbete stöddes av det nationella institutet för diabetes och mag-och njursjukdomar Grant DK41315.

Alla förfaranden med djur som beskrivs i detta manuskript genomfördes enligt National Institutes of Health Guide för vård och användning av försöksdjur och den institutionella djuranvändning och omsorg kommittén vid University of Nevada.
Obs: den modell som presenteras här består av avlägsnande av detrusormuskeln muskeln medan urotel och subu/LP förbli intakt (figur 1B) för att utredarna direkttillgång till...

<ol>
	<li>Apodaca, G., Balestreire, E., Birder, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+uroepithelial-associated+sensory+web.">The uroepithelial-associated sensory web.</a> Kidney International. 72, 1057-1064 (2007).</li><li>Fry, C. H., Vahabi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+Mucosa+in+Normal+and+Abnormal+Bladder+Function.">The Role of the Mucosa in Normal and Abnormal Bladder Function.</a> Basic and Clinical Pharmacology and Toxicology. , 57-62 (2016).</li><li>Merrill, L., Gonzalez, E. J., Girard, B. M., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptors,+channels,+and+signalling+in+the+urothelial+sensory+system+in+the+bladder.">Receptors, channels, and signalling in the urothelial sensory system in the bladder.</a> Nature Reviewes Urology. 13, 193-204 (2016).</li><li>Ferguson, D. R., Kennedy, I., Burton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+is+released+from+rabbit+urinary+bladder+epithelial+cells+by+hydrostatic+pressure+changes--a+possible+sensory+mechanism?.">ATP is released from rabbit urinary bladder epithelial cells by hydrostatic pressure changes--a possible sensory mechanism?.</a> Journal of Physiology. 505, 503-511 (1997).</li><li>Wang, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+and+purinergic+receptor-dependent+membrane+traffic+in+bladder+umbrella+cells.">ATP and purinergic receptor-dependent membrane traffic in bladder umbrella cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 115, 2412-2422 (2005).</li><li>Miyamoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+for+Piezo1+in+stretch-evoked+Ca(2)(+)+influx+and+ATP+release+in+urothelial+cell+cultures.">Functional role for Piezo1 in stretch-evoked Ca(2)(+) influx and ATP release in urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 289, 16565-16575 (2014).</li><li>Mochizuki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TRPV4+cation+channel+mediates+stretch-evoked+Ca2++influx+and+ATP+release+in+primary+urothelial+cell+cultures.">The TRPV4 cation channel mediates stretch-evoked Ca2+ influx and ATP release in primary urothelial cell cultures.</a> Journal of Biological Chemistry. 284, 21257-21264 (2009).</li><li>McLatchie, L. M., Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+release+from+freshly+isolated+guinea-pig+bladder+urothelial+cells:+a+quantification+and+study+of+the+mechanisms+involved.">ATP release from freshly isolated guinea-pig bladder urothelial cells: a quantification and study of the mechanisms involved.</a> BJU International. 115, 987-993 (2015).</li><li>Birder, L. A., Apodaca, G., de Groat, W. C., Kanai, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenergic-+and+capsaicin-evoked+nitric+oxide+release+from+urothelium+and+afferent+nerves+in+urinary+bladder.">Adrenergic- and capsaicin-evoked nitric oxide release from urothelium and afferent nerves in urinary bladder.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 275, F226-F229 (1998).</li><li>Birder, L. A., Kanai, A. J., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DMSO:+effect+on+bladder+afferent+neurons+and+nitric+oxide+release.">DMSO: effect on bladder afferent neurons and nitric oxide release.</a> Journal of Urology. 158, 1989-1995 (1997).</li><li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vanilloid+receptor+expression+suggests+a+sensory+role+for+urinary+bladder+epithelial+cells.">Vanilloid receptor expression suggests a sensory role for urinary bladder epithelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 98, 13396-13401 (2001).</li><li>Birder, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-adrenoceptor+agonists+stimulate+endothelial+nitric+oxide+synthase+in+rat+urinary+bladder+urothelial+cells.">Beta-adrenoceptor agonists stimulate endothelial nitric oxide synthase in rat urinary bladder urothelial cells.</a> Journal of Neuroscience. 22, 8063-8070 (2002).</li><li>Durnin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+bladder+model+with+detrusor+smooth+muscle+removed+to+analyse+biologically+active+mediators+released+from+the+suburothelium.">An ex vivo bladder model with detrusor smooth muscle removed to analyse biologically active mediators released from the suburothelium.</a> Journal of Physiology. 597, 1467-1485 (2019).</li><li>Yoshida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-neuronal+cholinergic+system+in+human+bladder+urothelium.">Non-neuronal cholinergic system in human bladder urothelium.</a> Urology. 67, 425-430 (2006).</li><li>Beckel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin+1+channels+mediate+the+release+of+ATP+into+the+lumen+of+the+rat+urinary+bladder.">Pannexin 1 channels mediate the release of ATP into the lumen of the rat urinary bladder.</a> Journal of Physiology. 593, 1857-1871 (2015).</li><li>Collins, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OnabotulinumtoxinA+significantly+attenuates+bladder+afferent+nerve+firing+and+inhibits+ATP+release+from+the+urothelium.">OnabotulinumtoxinA significantly attenuates bladder afferent nerve firing and inhibits ATP release from the urothelium.</a> BJU International. 112, 1018-1026 (2013).</li><li>Daly, D. M., Nocchi, L., Liaskos, M., McKay, N. G., Chapple, C., Grundy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+afferent+pathways+and+urothelial+function+in+the+male+mouse+bladder.">Age-related changes in afferent pathways and urothelial function in the male mouse bladder.</a> Journal of Physiology. 592, 537-549 (2014).</li><li>Durnin, L., Hayoz, S., Corrigan, R. D., Yanez, A., Koh, S. D., Mutafova-Yambolieva, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urothelial+purine+release+during+filling+of+murine+and+primate+bladders.">Urothelial purine release during filling of murine and primate bladders.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 311, F708-F716 (2016).</li><li>Gonzalez, E. J., Heppner, T. J., Nelson, M. T., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinergic+signalling+underlies+transforming+growth+factor-beta-mediated+bladder+afferent+nerve+hyperexcitability.">Purinergic signalling underlies transforming growth factor-beta-mediated bladder afferent nerve hyperexcitability.</a> Journal of Physiology. 594, 3575-3588 (2016).</li></ol>

Urinblåsan har två funktioner: lagring och tömning av urin. Normal drift av dessa funktioner kräver ordentlig mekanisk avkänning av svalgmanometri volym och tryck och transduktion av signaler genom celler i urinblåsan väggen för att reglera detrusormuskeln muskel retbarhet. Urinblåsan slemhinnan (urotel) tros reglera urinblåsan retbarhet genom att släppa en mängd olika signalmolekyler i SubU/LP som påverkar många celltyper i urinblåsan väggen. För närvarande, de flesta försök till karakterisering av u...

Syftet med denna modell är att möjliggöra direkttillgång till submucosala sidan av urinblåsan slemhinnan under olika faser av urinblåsan fyllning.
Urinblåsan måste avstå från för tidig sammandragning under fyllning och tömma när kritisk volym och tryck uppnås. Onormal kontinens eller tömning av urin är ofta förknippade med onormal retbarhet av detrusormuskeln glatta muskeln (DSM) i samband med blåsa fyllning. Retbarhet av DSM bestäms av faktorer som är inneboende i glatta muskelceller och av influenser som genereras av olika celltyper i urinblåsan väggen. Väggen i urinblåsan består av urotel (slemhinna), suburothelium (SubU)/lamina propria (LP), detrusormuskeln glattmuskulatur (DSM) och Serosa (figur 1a). Urotelet består av paraply celler (dvs. det yttersta skiktet av urotelet), mellanliggande celler, och basal celler (dvs. det innersta skiktet av urotelet). Olika typer av celler, inklusive interstitiella celler, fibroblaster, afferenta nervterminaler, små blodkärl, och immunceller bor i SubU/LP. Det är allmänt antas att urinblåsan urotelet är ett sensoriskt organ som initierar reflex urinering och kontinens genom att frigöra medlare i submucosa som påverkar celler i subu/lp och DSM1,2,3. För det mesta är sådana antaganden baserade på studier som har visat frisättning av medlare: från bitar av slemhinna som utsätts för förändringar i hydrostatiska trycket4,5; från odlade uroteliala celler som utsätts för stretch6,7, hypotonicitet-inducerad cell svullnad7 eller dragkrafter8; från isolerade blåsa vägg remsor på receptor-eller nerv aktivering9,10,11,12,13,14; och i urinblåsan lumen vid slutet av urinblåsan fyllning15,16,17,18,19. Medan sådana studier var avgörande för att demonstrera frisättning av medlare vid mekanisk stimulering av urinblåsan väggsegment eller odlade urotelceller, de måste stödjas av direkta bevis för frisättning av medlare i submucosa som framkallas av fysiologiska stimuli som reproducera blåsa fyllning. Detta är en utmanande uppgift med tanke på att SubU/LP ligger djupt i urinblåsan väggen hindrar enkel tillgång till närheten av SubU/LP underblåsa fyllning.
Här illustrerar vi en decentraliserad (ex vivo) murina urinblåsa modell med detrusormuskeln muskeln bort13 som utvecklades för att underlätta studier på lokala mekanismer för mechanotransduction som deltar i signalering mellan urinblåsan urotel, DSM och andra celltyper i urinblåsan väggen. Detta tillvägagångssätt är överlägsen med hjälp av platta urinblåsan vägg lakan, blåsa vägg remsor eller odlade urotelcellscancer celler eftersom det tillåter direkta mätningar i närheten av subu/lp av urotel-härledda medlare som släpps eller bildas som svar på fysiologiska tryck och volymer i urinblåsan och undviker potentiella fenotypiska förändringar i cellkulturen. Det kan användas för att mäta tillgänglighet, frisättning, metabolism och transurotelial transport av medlare i SubU/LP i olika stadier av blåsa fyllning (figur 1b). Preparatet kan också användas för att undersöka urotelial signalering och mechanotransduction i modeller av överaktiv och under aktiv blåsa syndrom.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>C79</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>D16</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion Pump</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>GenieTouch</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P217</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P284</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>SCHOTT ACEI</td>
			<td></td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus SZX7</td>
			<td></td>
			<td>Flexible to use any scope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M33</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S671</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S233</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles 25G</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305122</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ bath</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td>Flexible source; We made it from Radnoti dissecting dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-20 tubing</td>
			<td>Intramedic</td>
			<td>427405</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure transducer</td>
			<td>AD instrument</td>
			<td></td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00632-11</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software pressure-volume</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>Power lab</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Nylon, 6-0</td>
			<td>AD surgical</td>
			<td>S-N618R13</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Silk, 6-0</td>
			<td>Deknatel via Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td>07J1500190</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 ml</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309602</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water circulator</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>K-MOD 100</td>
			<td>Source flexible</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a decentralized (ex vivo) murine bladder model with the detrusor muscle removed for direct access to the suburothelium during bladder filling

Tidigare studier har etablerat frisättning av kemiska ämnen från platta urinblåsan slemhinna ark anbringas i Ussing kammare och utsätts för förändringar i hydrostatiska trycket eller mekanisk stretch och från odlade urotelcellscancer celler vid hydrostatiska trycket förändringar, stretch, cell svullnad, eller dragkrafter, och i urinblåsan lumen vid slutet av fyllning. Sådana fynd ledde till antagandet att dessa medlare också släpps i suburothelium (SubU)/lamina propria (LP) underblåsa fyllning, där de påverkar celler djupt i urinblåsan väggen för att slutligen reglera urinblåsan retbarhet. Det finns minst två uppenbara begränsningar i sådana studier: 1) ingen av dessa metoder ger direkt information om närvaron av medlare i SubU/LP, och 2) de stimuli som används är inte fysiologiska och inte recapitulate autentiska fyllning av urinblåsan. Här diskuterar vi ett förfarande som möjliggör direkttillgång till suburotelial ytan av urinblåsan slemhinnan i samband med blåsa fyllning. Den murina detrusormuskeln-fri förberedelse vi skapade liknar fyllning av intakt urinblåsan och tillåter tryck-volym studier som skall utföras på urinblåsan i avsaknad av confounding signalering från spinal reflexer och detrusormuskeln glatt mus kula man. Med hjälp av romanen detrusor-Free blåsa modell, vi visade nyligen att intravesikal mätningar av medlare inte kan användas som en proxy till vad som har släppts eller finns i subu/LP underblåsa fyllning. Modellen möjliggör undersökning av urotel-härledda signalmolekyler som frigörs, genereras genom metabolism och/eller transporteras till SubU/LP under loppet av urinblåsan fyllning för att överföra information till nervceller och glatt mus kula i urinblåsan och reglera dess retbarhet under kontinens och micturition.

Väggen i murina detrusor-fri blåsa beredning är intakt och innehåller alla skikt utom DSM och Serosa. Proof-of-princip studier visade att den DSM-fria urinblåsan väggen inkluderar urotel och SubU/LP medan Tunica muscularis hinna och Serosa är frånvarande (figur 2)13.
Fyllning av detrusor-fria blåsan approximerar normal blåsa fyllning. F...

Watch this Scientific Journal Video about A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling at JoVE.com

A Decentralized Ex Vivo Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling

Den detrusor-fri blåsa modell möjliggör direkttillgång till suburothelium att studera lokala mekanismer för reglering av biologiskt aktiv medlare tillgänglighet i suburothelium/lamina propria under lagring och tömning av urin. Preparatet liknar fyllning av en intakt urinblåsa och gör att tryck volym studier kan utföras utan systemisk påverkan.

En decentraliserad (ex vivo) murin urinblåsa modell med detrusor muskeln avlägsnas för direkttillgång till Suburothelium underblåsa fyllning

Previous studies have established the release of chemical substances from flat bladder mucosa sheets affixed in Ussing chambers and exposed to changes in ...

Vår urinblåsa modell med en borttagna detrusor muskel är en ny experimentell metod för att studera samtidigt tillgången på urotelial medlare i lamia propria och urinblåsan lumen under urinblåsan fyllning. Denna modell kan ge nya insikter i signalmekanismerna mellan urothelium, suburothelium, och detrusor muskel som reglerar urinblåsan retbarhet under fyllning. Börja med att placera intakt murinblåsan exemplaret i en dissekering skålen under en dissekering mikroskop som innehåller 10 grader celsius syresatt KBS och rensa ut bind-och fettvävnader runt urinblåsan.Pin en liten del av kupolen av isolerade urinblåsan hela vägen genom den yttersta kanten av detrusor muskeln långt från den innersta kanten av muskeln som vetter mot suburothelium lamia propria till en sylgard omfattas dissekera skålen fylld med KBS, och stift ureters och urinblåsan hals för att visa den intakta urinblåsan beredning. Med hjälp av finspetsade tång, dra försiktigt en bit av serosa i hörnet mellan urinledaren och urinblåsan kroppen och justera ljuset i mikroskopet för att öka öppenheten och för att skilja marginalen på submucosa under denrusor muskeln. För att undvika att preparatväggen perforeras, se till att skära bort detrusormuskeln endast medan den laterala kanten av blåsslemhinnan är tydligt synlig.Med hjälp av finspetsade saxar, börja skära blåsväggen längs den inre ytan av detrusor muskellagret samtidigt försiktigt dra snittsegmentet bort från preparatet var försiktig att den laterala kanten av slemhinnan kan observeras samtidigt som man undviker att vidröra kanten av vävnaden. Lämna en liten bit av detrusor muskeln ovanpå urinblåsan kupolen att möjliggöra beredning att vara immobiliserade under de återstående stegen i protokollet och fylla en två centimeter bit 20 polyeten slangar med 37 grader celsius syresatt KBS. Efter att katetern förts in i urinrörets öppning, tryck försiktigt katetern tills kateterspetsen når den ungefärliga mitten av blåsan.Sedan säkra katetern i den omgivande vävnaden i blåsan halsen med en dubbel slinga 6,0 nylon sutur. Efter kontroll av vävnaden för läckor, placera den denuded urinblåsan beredningen i en tre milliliter kammare av 37 grader celsius vatten mantlat orgel skålen med en sylgard botten och säkra katetern till sidan av kammaren så att preparatet inte flyter ovanför ytan av perfusionslösningen. Anslut blåskatetern till en bit polyeten 20 slangar som är ansluten till en trevägsstopptövning och en infusionsspruta fylld med 37 grader celsius syresatt KBS och starta infusionspumpen för att fylla blåsan med KBS var noga med att övervaka fyllnadsvolymen i det intravesiska trycket under fyllningen.För att upptäcka medlare inom suburothelium lamina propria aspekten av preparatet, samla in alikvoter av badlösningen vid olika lämpliga experimentella tidpunkter och bearbeta proverna enligt den planerade nedströmsanalysen. Denuded urinblåsan förberedelse väggen innehåller urothelium och suburothelium men inte detrusor glatt muskulatur. Tryckvolymen relationer är anmärkningsvärt lika i intakt och denuded preparat.Lämpligheten av modellen för mätning av urothelium-härledda medlare som frigörs i suburothelium lamina propria sidan under fyllning kan testas genom att mäta utsläpp av purin medlare i lösningen bada suburothelium lamina propria av denuded beredningen. Som visats kan försumbara mängder puriner detekteras i ett bad som innehåller en isolerad urinblåsan beredning med en intakt detrusor muskel;medan mängderna av dessa puriner är betydligt högre i prover som samlats in från badet som innehåller en denuded urinblåsan preparatet. I synnerhet skiljer sig fördelningen av puriner och metaboliter i prover som samlats in från lumen och suburotheliumlaminapropria i slutet av fyllningen avsevärt.Tillägg av atheno ATP, en mycket fluorescerande analog av ATP, till suburothelial sidan av detrusor-fri förberedelse resulterar i en minskning av aten ATP och en ökning av atheno ATP produkter, atheno ADP, atheno AMP, och atheno ADO. Likaså resulterar tillägg av atheno ATP till lumen beredningen i en minskning av aten ATP och en ökning av atheno ADP, atheno AMP, och atheno ADO i lumen. Vidare resulterar tillsats av aten atp till suburothelium lamina propria sidan av denuded preparatet i utseendet av atheno AMP och atheno ADO inom lumen.Likaså lägger atheno ATP till lumen resulterar i uppkomsten av atheno AMP och atheno ADO i suburothelium lamina propria. Efter detta förfarande kan tillgängligheten för excitatoriska och hämmande medlare mätas vid lamina propria och i urinblåsan lumen i olika stadier av urinblåsan fyllning. Bilateral transurethral transport av medlare och metabolism av medlare kan också studeras med hjälp av denna modell.Med hjälp av denna nya urinblåsan modellen kommer att resultera i ny förståelse av inneboende, lokala mekanosensitive signalering mellan urothelium och detrusor glatt muskulatur som styr blås retbarhet i hälsa och sjukdom.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Decentralized (Ex Vivo) Murine Bladder Model with the Detrusor Muscle Removed for Direct Access to the Suburothelium during Bladder Filling

Mouse Bladder Wall Injection

Mus blåsväggen Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

En Orthotopic Modell av murina blåscancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

Användning av cystometri i smågnagare: En studie av urinblåsan Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

En ortotopisk blåstumör modell och utvärdering av Intravesikal Sarna behandling

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

En Orthotopic blåscancer modell för Gene Delivery Studier

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

High-throughput Flödescytometri cellbaserad analys för att detektera antikroppar till N-metyl-D-aspartat-receptor-eller dopamin-2-receptor i humant serum

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

Minimalinvasiva Etablering av murina Orthotopic Bladder implanterad

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Urinblåsa Dilatation Evoked Visceromotor svar som en modell för smärtor i urinblåsan hos möss

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

Bladder Smooth Muscle Strip Kontraktilitet som en metod för att utvärdera Lower Urinary Tract farmakologi

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modell för att studera Hormone Action i Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...