Name: microsatellite dna genotyping and flow cytometry ploidy analyses of formalin-fixed paraffin-embedded hydatidiform molar tissues
Uploaded: 2019-10-20T15:00:00
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作者感谢索菲·帕特里亚尔和玛丽安·帕雷西分享了原始的流式细胞测定方案，以及Promega和Qiagen提供用品和试剂。这项工作得到了生殖研究和加拿大卫生研究所（MOP-130364）到R.S.的支持。

这项研究得到了麦吉尔机构审查委员会的批准。所有患者提供书面同意参加研究，并让他们的FFPE产品受孕（POCs）从不同的病理部门检索。
注：虽然通过流式细胞测定方法有几种方法进行基因分型和策略测定，但此处提供的协议描述了一种分析方法，每种方法都使用一个平台。
1. 基因分型
<ol><li>
选择最佳 FFPE 块
	<ol>
<li>对于每?...

<ol>
	<li>Szulman, A. E., Surti, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+syndromes+of+hydatidiform+mole.+II.+Morphologic+evolution+of+the+complete+and+partial+mole.">The syndromes of hydatidiform mole. II. Morphologic evolution of the complete and partial mole.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology. 132 (1), 20-27 (1978).</li><li>Fukunaga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+and+intraobserver+variability+in+the+diagnosis+of+hydatidiform+mole.">Interobserver and intraobserver variability in the diagnosis of hydatidiform mole.</a> The American Journal of Surgical Pathology. 29 (7), 942-947 (2005).</li><li>Gupta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+reproducibility+of+hydatidiform+moles:+ancillary+techniques+(p57+immunohistochemistry+and+molecular+genotyping)+improve+morphologic+diagnosis+for+both+recently+trained+and+experienced+gynecologic+pathologists.">Diagnostic reproducibility of hydatidiform moles: ancillary techniques (p57 immunohistochemistry and molecular genotyping) improve morphologic diagnosis for both recently trained and experienced gynecologic pathologists.</a> The American Journal of Surgical Pathology. 36 (12), 1747-1760 (2012).</li><li>Howat, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+histopathologists+reliably+diagnose+molar+pregnancy?.">Can histopathologists reliably diagnose molar pregnancy?.</a> Journal of Clinical Pathology. 46 (7), 599-602 (1993).</li><li>Banet, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+hydatidiform+moles:+analysis+of+a+prospective+series+with+p57+immunohistochemistry+and+molecular+genotyping.">Characteristics of hydatidiform moles: analysis of a prospective series with p57 immunohistochemistry and molecular genotyping.</a> Modern Pathology. 27 (2), 238-254 (2014).</li><li>Lipata, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precise+DNA+genotyping+diagnosis+of+hydatidiform+mole.">Precise DNA genotyping diagnosis of hydatidiform mole.</a> Obstetrics &amp; Gynecology. 115 (4), 784-794 (2010).</li><li>Buza, N., Hui, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+hydatidiform+mole:+histologic+parameters+in+correlation+with+DNA+genotyping.">Partial hydatidiform mole: histologic parameters in correlation with DNA genotyping.</a> International Journal of Gynecologic Pathology. 32 (3), 307-315 (2013).</li><li>Fisher, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency+of+heterozygous+complete+hydatidiform+moles,+estimated+by+locus-specific+minisatellite+and+Y+chromosome-specific+probes.">Frequency of heterozygous complete hydatidiform moles, estimated by locus-specific minisatellite and Y chromosome-specific probes.</a> Human Genetics. 82 (3), 259-263 (1989).</li><li>Murdoch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+NALP7+cause+recurrent+hydatidiform+moles+and+reproductive+wastage+in+humans.">Mutations in NALP7 cause recurrent hydatidiform moles and reproductive wastage in humans.</a> Nature Genetics. 38 (3), 300-302 (2006).</li><li>Parry, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+causing+familial+biparental+hydatidiform+mole+implicate+c6orf221+as+a+possible+regulator+of+genomic+imprinting+in+the+human+oocyte.">Mutations causing familial biparental hydatidiform mole implicate c6orf221 as a possible regulator of genomic imprinting in the human oocyte.</a> American Journal of Human Genetics. 89 (3), 451-458 (2011).</li><li>Nguyen, N. M., Slim, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+and+Epigenetics+of+Recurrent+Hydatidiform+Moles:+Basic+Science+and+Genetic+Counselling.">Genetics and Epigenetics of Recurrent Hydatidiform Moles: Basic Science and Genetic Counselling.</a> Current Obstetrics and Gynecology Reports. 3, 55-64 (2014).</li><li>Sebire, N. J., Savage, P. M., Seckl, M. J., Fisher, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathological+features+of+biparental+complete+hydatidiform+moles+in+women+with+NLRP7+mutations.">Histopathological features of biparental complete hydatidiform moles in women with NLRP7 mutations.</a> Placenta. 34 (1), 50-56 (2013).</li><li>Nguyen, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+genotype-phenotype+correlations+between+NLRP7+mutations+and+the+balance+between+embryonic+tissue+differentiation+and+trophoblastic+proliferation.">Comprehensive genotype-phenotype correlations between NLRP7 mutations and the balance between embryonic tissue differentiation and trophoblastic proliferation.</a> Journal of Medical Genetics. 51 (9), 623-634 (2014).</li><li>Brown, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrent+pregnancy+loss+in+a+woman+with+NLRP7+mutation:+not+all+molar+pregnancies+can+be+easily+classified+as+either+"partial"+or+"complete"+hydatidiform+moles.">Recurrent pregnancy loss in a woman with NLRP7 mutation: not all molar pregnancies can be easily classified as either "partial" or "complete" hydatidiform moles.</a> International Journal of Gynecologic Pathology. 32 (4), 399-405 (2013).</li><li>Colgan, T. J., Chang, M. C., Nanji, S., Kolomietz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Reappraisal+of+the+Incidence+of+Placental+Hydatidiform+Mole+Using+Selective+Molecular+Genotyping.">A Reappraisal of the Incidence of Placental Hydatidiform Mole Using Selective Molecular Genotyping.</a> The International Journal of Gynecological Cancer. 26 (7), 1345-1350 (2016).</li><li>Murphy, K. M., McConnell, T. G., Hafez, M. J., Vang, R., Ronnett, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genotyping+of+hydatidiform+moles:+analytic+validation+of+a+multiplex+short+tandem+repeat+assay.">Molecular genotyping of hydatidiform moles: analytic validation of a multiplex short tandem repeat assay.</a> The Journal of Molecular Diagnostics. 11 (6), 598-605 (2009).</li></ol>

HM是具有异质病因的异常人类妊娠，具有不同的组织学和基因类型，这使得其准确的分类和诊断具有挑战性。组织形态学评估往往被证明是不准确的，因此本身是不可靠的，将HM分类为CHM和PHM，并将其与非摩尔流产区分开来。因此，对HM的准确诊断需要使用其他方法，如多路微卫星DNA基因分型、流式细胞测定策略分析、FISH的多向分析以及p57KIP2免疫血症分析。这些方法各有其局限性和优势。...

水合体摩尔（HM）是一种异常的人类妊娠，其特征是胚胎发育异常、营养素增殖和胆汁性分裂（CV）的水分退化。从历史上看，HM过去分为两种类型，即完全HM（CHM）和部分HM（PHM），仅基于形态学评估1。然而，已经表明，仅仅形态学评估不足以将HM分类为两个亚型（CHM和PHM），并将其与非摩尔流产2、3、4区分开来。
由于 CHM 和 PHM 具有不同的恶性肿瘤倾向，因此必须准确确定 HM 的基因性类型，以便为患者提供适当的随访和管理。因此，在过去几十年中，为了确定父母对摩尔组织的贡献，并得出正确的HM分类，已经制定并发展了几种方法。其中包括核糖核代分析、染色体带状多态性、人类白细胞抗原（HLA）血清类型、限制片段长度多态性、可变串联重复数、微卫星基因分型、流动细胞学和p57KIP2免疫性化学。这允许根据父母对其基因组的贡献对HM概念进行准确的细分，如下所示：CHM，这是双倍体和共生单精子或双倍体和共基因破坏，和PHM，这是三倍体，在99%和在1%的病例中，单精子5，6，7，8。此外，在过去二十年中出现了另一种基因性类型的HM，即双亲双亲。后者大多反复发生，可能影响一个家庭成员（单例病例）或至少两个家庭成员（家庭案件）。这些双亲摩尔主要是由NLRP7或KHDC3L在患者9，10，11，12的隐性突变引起的。在NLRP7中隐性突变的患者中双亲HM可以通过形态分析诊断为CHM或PHM，这似乎与患者13、14突变的严重程度有关。除了根据基因型对HM进行分类外，采用和使用几种基因分型方法，使各种摩尔实体与非摩尔流产（如非倍体双亲概念和其他类型的概念5，15。这种概念可能有一些营养性增殖和异常的绒布形态，在一定程度上模仿HM的一些形态特征。
本文的目的是为形式固定石蜡嵌入（FFPE）组织的多路基因分型和流式细胞学提供详细的方案，并全面分析这些方法的结果及其与其他方法的集成。对摩尔组织的正确和结论性诊断。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BD FACS Canto II</td>
			<td>BD BioSciences</td>
			<td>338960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillary electrophoresis instrument: Genomes Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer</td>
			<td>Applied biosystems</td>
			<td>313001R</td>
			<td>Service offered by the Centre for Applied Genomics (http://www.tcag.ca)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>251275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal 60, histopathology mounting medium</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>23244257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y stock solution (1%)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>SE23-500D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FCSalyzer - flow cytometry analysis software</td>
			<td>SourceForge</td>
			<td>-</td>
			<td>https://sourceforge.net/projects/fcsalyzer/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FFPE Qiagen kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>80234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11295-51</td>
			<td>For sectioning and for the cleaning process</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial Acetic Acid (Concentrated)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A6283-500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips: Cover Glass</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-541a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>CS401-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Highly deionized formamide: Hi-Di Formamide</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>4311320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IHC platform: Benchmark Ultra</td>
			<td>Roche</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Ultident</td>
			<td>30-34120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blades</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-634-1C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitex filtering mesh, 48 microns</td>
			<td>Filmar</td>
			<td>74011</td>
			<td>http://www.filmar.qc.ca/index.php?filet=produits&#38;id=51&#38;lang=en ; any other filter is suitable, but this is an inexpensive and effective option from a non-research company</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p57 antibody</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>457M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>VWR</td>
			<td>53499-632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR machine</td>
			<td>Perkin Elmer, Applied Biosystems</td>
			<td>GeneAmp PCR System 9700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PeakScanner 1.0</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4381867</td>
			<td>Software for genotyping analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pepsin from porcine gastric mucosa</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene round-bottom tubes</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Positively charged slides: Superfrost Plus 25x75mm</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1255015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerPlex 16 HS System</td>
			<td>Promega Corporation</td>
			<td>DC2102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ribonuclease A from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R4875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Separation matrix: POP-7 Polymer</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>4352759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure Agarose</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>16500-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>X3P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microsatellite dna genotyping and flow cytometry ploidy analyses of formalin-fixed paraffin-embedded hydatidiform molar tissues

水合体摩尔（HM）是一种异常的人类妊娠，其特征是营养性过度增殖和胚胎发育异常。有两种类型的HM基于微观形态学评估，完整的HM（CHM）和部分HM（PHM）。这些可以根据父母对摩尔基因组的贡献进一步细分。通过形态学和基因型分析，HM的这种特征对于患者管理和对这种有趣的病理学的基本理解至关重要。据大量记录，HM 的形态分析受到广泛的观察者间变异性的影响，本身不足以准确分类 HM 到 CHM 和 PHM，并将其与水性非摩尔流产区分开来。基因分型分析主要针对受孕的正规固定石蜡嵌入（FFPE）产物的DNA和组织，其质量低于最佳质量，因此可能导致错误的结论。本文提供了FFPE摩尔组织的多路基因分型和流细胞学分析的详细方案，以及这些方法结果的解释、故障排除和与形态评估的集成，p57KIP2免疫组织化学，荧光原位杂交（FISH）达到正确可靠的诊断。在这里，作者分享了过去10年从大约400种受孕产物的分析中学到的方法和教训。

摩尔组织的复杂性和它们可能具有各种基因型的事实需要严格的分析和使用几种方法，如形态评估、p57免疫组织化学、微卫星基因分型、流式细胞测定和FISH。例如，一名患者（1790）被转诊了两个PHM，仅通过POCs的微阵列分析发现是三元组。因此，患者被诊断为复发性PHM。微型卫星基因分型她的两个"PHM"以及病人的DNA和她的伴侣发现，虽然病人的第一摩尔是三毛虫分虫（<stro...

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Microsatellite DNA Genotyping and Flow Cytometry Ploidy Analyses of Formalin-fixed Paraffin-embedded Hydatidiform Molar Tissues

水合体摩尔是异常的人类怀孕与异质的异质性，可以根据其形态特征和父母对摩尔基因组的贡献进行分类。本文详细介绍了多路微卫星DNA基因分型和形式固定石蜡嵌入摩尔组织的流式细胞测定方案，以及结果的解释和集成。

微卫星DNA基因分型和流细胞学比较分析形式固定石蜡嵌入水合体摩尔组织

Hydatidiform mole (HM) is an abnormal human pregnancy characterized by excessive trophoblastic proliferation and abnormal embryonic development. There are ...

我们的基因分型协议的主要优点是，它最大限度地减少了母体DNA的污染，这是基因分型固定、石蜡嵌入的摩尔组织时的主要挑战。流细胞学是一种快速而廉价的方法，大大方便了对子宫内子摩尔的诊断。对于每个形式固定石蜡嵌入，或FFPE，受孕的产物，准备一个四微米厚的赤氧树脂和 eosin 染色部分，详见本视频，通过显微镜进行形态学评估。将 FFPE 块放在冰上 15 分钟，以便于进行剖切。调整显微原子以切割四微米厚的截面，进行微观形态评估。将冷块放在微管中，从每个块中切一个部分进行 H&E 染色。使用钳子，将每个部分转移到 45 摄氏度的水浴。使用铅笔使用带样品标识编号的带正带电的幻灯片从水浴中拾取该部分。将包含部分的幻灯片放在烤箱中，温度为 65 摄氏度，以便这些部分粘附在幻灯片上。将幻灯片放在烤箱中 25 分钟。通过将幻灯片淹没到文本协议中表格中的正确时间段中，执行 H&E 染色。使用安装介质安装四微米部分，进行形态分析。用玻璃盖滑盖。使用 H&E 幻灯片和光学显微镜，选择具有最大胆碱量的 FFPE 块。如果可能的话，有胆碱分离的块，而不是与母体组织混在一起。调整显微原子以切割10微米厚的片段，用于DNA提取。切割 10 到 30 节，具体取决于块中胆小音的量。与之前一样使用幻灯片拾取部分后，将包含部分的幻灯片放在烤箱中，温度为 65 摄氏度，以便这些部分粘附在幻灯片上。将幻灯片放在烤箱中 20 分钟。通过将幻灯片淹没到文本协议中表格中的正确时间段中，执行 H&E 染色。将幻灯片留在烟罩下至少三个小时，以便有毒二甲苯气味消散。使用钳子，从湿润的纸擦中撕下一小张纸。在光学立体显微镜下，使用钳子和小块水湿纸巾刮掉所有不需要的母体组织，从 H&E 污渍 10 微米厚的部分。这一步的关键是耐心，尤其是对于具有挑战性的方块。同样重要的是让别人看看，以确保没有错过产妇组织。现在，从湿润的纸湿巾中撕下一张新纸，并用它来收集巧克力。将纸巾片及其附着的巧克力 villi 放入标有 1.5 ml 的管中。尽量减少此步骤中使用的纸擦拭量，因为太多纸擦量可能会堵塞 DNA 提取柱，从而减少最终收集的 DNA 量。按照 FFPE 试剂盒的 DNA 提取协议执行 DNA 提取。使用实验室分光光度计，加载 1 微升 DNA，并在 216 nm 测量吸收度以进行定量。在 2%agarose 凝胶上加载 1 微升 DNA，并在 80 至 100 伏的电压下运行凝胶电泳，进行定性评估。根据DNA评价结果，选择多路复用短串联重复PCR扩增中使用的DNA体积。目标是使用至少1000纳米的DNA。继续进行PCR扩增、毛细管电泳和数据分析，如文本协议中所述。要选择理想的 FFPE 块，请使用光学显微镜上的 H&E 幻灯片选择具有大约 50% 到 70% 的组织由胆碱组成的 FFPE 块。对于没有理想量的胆碱的块，在执行分节时丰富巧克力维利。为此，根据相应的 H&E 幻灯片，确定新切节的哪一侧包含更多的胆碱。然后，使用刀片切断另一半，需要丢弃，以丰富巧克力 villi 。要执行最佳 FFPE 块的剖切，请使用微原子切割四个 50 微米厚的截面。在没有理想的FFPE块的情况下，旨在保持胆碱与母体组织的比例。例如，如果只有30%的块是由胆碱，而其余的有母体组织，然后删除至少一半的部分，包含母体组织，并使用更多的部分来补偿。将截面放在标有 15 mL 的管中。对于去分离和补液，在烟罩中工作以添加每个试剂，并等待文本协议中表格中的适当时间段。然后，用巴斯德移液器通过真空吸气去除试剂。接下来，在15 mL管中加入4摄氏度的柠檬酸溶液。在80摄氏度的水浴中放置两个小时后，让溶液冷却至室温。通过真空吸气去除柠檬酸盐溶液。加入六毫升1x PBS，漩涡，等待一到两分钟，让组织沉淀到底部。如果需要，以 1000 RPM 将样品离心 30 秒。通过真空吸气去除 1X PBS。现在加入一 mL 预热辣椒溶液，放在 37 摄氏度的干浴中 30 分钟。每10分钟一次漩涡。在孵育的最后10分钟中准备碘二白糖酶A溶液。再加入6 mL的1xPBS，漩涡，并等待一到两分钟，让组织稳定到底部。再次，通过真空吸气去除 1x PBS。加入550微升的碘二碘核糖酶溶液溶液，将样品放在37摄氏度的干浴中30分钟。使用钳子将五厘米 x 五厘米的 48 微米过滤网放在聚苯乙烯圆形底部管的顶部，用于流式细胞仪。通过将液体通过网状物移入管中过滤溶液。样品现在可以在流量环测仪上运行。将它们包裹在铝箔中，直到它们准备好运行。最后，执行文本协议中描述的流式细胞测量和数据分析。部分催眠摩尔的微卫星基因分型，以及患者及其伴侣的DNA，揭示了患者的摩尔是三倍体脱皮。第一个标记显示了受孕产品中的两个峰值。第一个峰起源于母亲，因为只有母亲有这种大小的峰。按照同样的推理，第二个峰值来自父亲，因为他共享相同的等位基因。请注意，第二个峰值比第一个峰值高很多，表明该峰值中可能有两剂同一父级等位基因。在受孕的这种产品中，母体污染非常小，因为它在第二个母体等位位置显示一个非常微小的峰值。第二个标记显示了受孕产品中的三个峰值。其中两个山峰来自父亲，一个来自母亲。第三个和第四个标记类似于第一个标记，还显示来自父亲的两个等位基因和来自母亲的等位基因。由于所有四个标记始终显示三个等位基因，两个来自父亲，一个来自母亲，我们可以得出结论，这个受孕的产物是三倍体性，并确认部分摩尔的诊断。对于基因分型结果的解释，重要的是要根据清洁步骤中记下的笔记来了解污染程度。在某些情况下，我们无法按照这两种方法得出结论。在这种情况下，我们使用其他方法，如 FISH，以揭示真正的基因型。微型卫星基因分型允许精确的摩尔诊断，并为更好地了解与二甲二甲状摩尔的各种特征相关的基因型铺平了道路。

Research

JoVE Journal

Genetics

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科研

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