Name: labeling and imaging of amyloid plaques in brain tissue using the natural polyphenol curcumin
Uploaded: 2019-11-01T14:30:00
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这项研究的支持来自圣玛丽阿森松的菲尔德神经科学研究所。

这里描述的所有方法都已获得萨吉诺谷州立大学动物护理和使用委员会（ACUC）的批准。人体组织是从亚利桑那州班纳太阳健康研究所15、16日建立的脑库获得的。
1. 动物灌注
<ol><li>准备固定和灌注缓冲液。<ol>
<li>通过加入 80 g 氯化钠 （NaCl）、2 g 氯化钾 （KCl）、21.7 g 磷酸氢钠 （Na2HPO4+7H2O）、2.59 克磷酸二...

<ol>
	<li>Cummings, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alzheimer's+disease.">Alzheimer's disease.</a> New England Journal of Medicine. 351 (1), 56-67 (2004).</li><li>Jack, C. R., Holtzman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarker+modeling+of+Alzheimer's+disease.">Biomarker modeling of Alzheimer's disease.</a> Neuron. 80 (6), 1347-1358 (2013).</li><li>Tarawneh, R., Holtzman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+problem+of+symptomatic+Alzheimer+disease+and+mild+cognitive+impairment.">The clinical problem of symptomatic Alzheimer disease and mild cognitive impairment.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (5), (2012).</li><li>Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology+of+protein+misfolding:+the+examples+of+Alzheimer's+and+Parkinson's+diseases.">Cell biology of protein misfolding: the examples of Alzheimer's and Parkinson's diseases.</a> Nature Cell Biology. 6 (11), 1054-1061 (2004).</li><li>Hardy, J., Allsop, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid+deposition+as+the+central+event+in+the+aetiology+of+Alzheimer's+disease.">Amyloid deposition as the central event in the aetiology of Alzheimer's disease.</a> Trends in Pharmacological Sciences. 12 (10), 383-388 (1991).</li><li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+curcumin+in+diagnosis,+prevention,+and+treatment+of+Alzheimer's+disease.">Use of curcumin in diagnosis, prevention, and treatment of Alzheimer's disease.</a> Neural Regeneration Research. 13 (4), 742-752 (2018).</li><li>Maiti, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+study+of+dietary+curcumin,+nanocurcumin,+and+other+classical+amyloid-binding+dyes+for+labeling+and+imaging+of+amyloid+plaques+in+brain+tissue+of+5x-familial+Alzheimer's+disease+mice.">A comparative study of dietary curcumin, nanocurcumin, and other classical amyloid-binding dyes for labeling and imaging of amyloid plaques in brain tissue of 5x-familial Alzheimer's disease mice.</a> Histochemistry and Cell Biology. 146 (5), 609-625 (2016).</li><li>Maiti, P., Dunbar, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Curcumin,+a+Natural+Polyphenol+for+Targeting+Molecular+Pathways+in+Treating+Age-Related+Neurodegenerative+Diseases.">Use of Curcumin, a Natural Polyphenol for Targeting Molecular Pathways in Treating Age-Related Neurodegenerative Diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (6), (2017).</li><li>Maiti, P., Dunbar, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+Neuroprotective+Effects+of+Dietary+Curcumin+and+Solid+Lipid+Curcumin+Particles+in+Cultured+Mouse+Neuroblastoma+Cells+after+Exposure+to+Abeta42.">Comparative Neuroprotective Effects of Dietary Curcumin and Solid Lipid Curcumin Particles in Cultured Mouse Neuroblastoma Cells after Exposure to Abeta42.</a> International Journal of Alzheimer's Disease. , (2017).</li><li>den Haan, J., Morrema, T. H. J., Rozemuller, A. J., Bouwman, F. H., Hoozemans, J. J. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sun+Health+Research+Institute+Brain+Donation+Program:+Description+and+Experience,+1987-2007.">The Sun Health Research Institute Brain Donation Program: Description and Experience, 1987-2007.</a> Cell Tissue Bank. 9 (3), 229-245 (2008).</li><li>Green, S. J., Killiany, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subregions+of+the+inferior+parietal+lobule+are+affected+in+the+progression+to+AD.">Subregions of the inferior parietal lobule are affected in the progression to AD.</a> Neurobiology of Aging. 31 (8), 1304-1311 (2010).</li><li>Ono, K., Hasegawa, K., Naiki, H., Yamada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin+has+potent+anti-amyloidogenic+effects+for+Alzheimer's+beta-amyloid+fibrils+in+vitro.">Curcumin has potent anti-amyloidogenic effects for Alzheimer's beta-amyloid fibrils in vitro.</a> Journal of Neuroscience Research. 75 (6), 742-750 (2004).</li><li>Garcia-Alloza, M., Borrelli, L. A., Rozkalne, A., Hyman, B. T., Bacskai, B. 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K., Nakayama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+binding+of+curcumin+to+various+types+of+canine+amyloid+proteins.">The binding of curcumin to various types of canine amyloid proteins.</a> Journal of Veterinary Medical Science. 74 (4), 481-483 (2012).</li><li>Liu, L., Komatsu, H., Murray, I. V., Axelsen, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+amyloid+beta+protein+misfolding+and+fibrillogenesis+by+a+lipid+oxidation+product.">Promotion of amyloid beta protein misfolding and fibrillogenesis by a lipid oxidation product.</a> Journal of Molecular Biology. 377 (4), 1236-1250 (2008).</li><li>Wu, C., Scott, J., Shea, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+of+Congo+red+to+amyloid+protofibrils+of+the+Alzheimer+Abeta(9-40)+peptide+probed+by+molecular+dynamics+simulations.">Binding of Congo red to amyloid protofibrils of the Alzheimer Abeta(9-40) peptide probed by molecular dynamics simulations.</a> Biophysical Journal. 103 (3), 550-557 (2012).</li><li>Wu, C., Wang, Z., Lei, H., Zhang, W., Duan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+binding+modes+of+Congo+red+to+amyloid+protofibril+surface+observed+in+molecular+dynamics+simulations.">Dual binding modes of Congo red to amyloid protofibril surface observed in molecular dynamics simulations.</a> Journal of the American Chemical Society. 129 (5), 1225-1232 (2007).</li><li>Gutierrez, I. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+Method+to+Detect+Neuronal+Degeneration+and+Amyloid+beta+Accumulation+in+Free-Floating+Brain+Sections+With+Fluoro-Jade.">Alternative Method to Detect Neuronal Degeneration and Amyloid beta Accumulation in Free-Floating Brain Sections With Fluoro-Jade.</a> ASN Neuro Methods. 10, 1-7 (2018).</li><li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin+inhibits+formation+of+amyloid+beta+oligomers+and+fibrils,+binds+plaques,+and+reduces+amyloid+in+vivo.">Curcumin inhibits formation of amyloid beta oligomers and fibrils, binds plaques, and reduces amyloid in vivo.</a> Journal of Biological Chemistry. 280 (7), 5892-5901 (2005).</li></ol>

我们的假设是，与其他经典淀粉样结合染料以及 A+ 特异性抗体相比，Cur 可用作在死后 AD 脑组织中标记和图像 A+ 斑块的最快速、最简单和最便宜的方法。本研究的目的是确定Cur在死后AD脑组织中标记和图像A+斑块所需的最短时间，并确定Cur是否可以作为A+抗体的替代物来标记A+斑块。为此，在不同时间点观察到Cur的A+标记能力。Cur 能够在一分钟内将 A+ 贴上标签。此外，Cur 对 A+ 的标记大于其他常规?...

阿尔茨海默氏病（AD）是最常见的、与年龄有关、渐进的神经系统疾病之一，也是全球1、2日死亡的主要原因之一。学习、记忆和认知障碍，以及神经精神障碍，是AD3中常见的症状。虽然AD的病因尚未完全阐明，但现有的遗传、生化和实验证据表明，A+的逐渐沉积是AD4的明确生物标志物。这种错误折叠的蛋白质积累在细胞内和细胞外空间，被认为是参与突触损失，增加神经炎症，和神经退化在受AD5影响的大脑的皮质和海马区域。因此，在AD组织中组织化学检测A+是开发无毒抗淀粉样药物以防止AD进展的关键的第一步。
在过去的几十年中，许多研究实验室使用几种染料和抗体来标记和图像脑组织中的 A+ 斑块，但其中一些方法耗时，使用的染料或抗体昂贵，需要多种附件化学品。因此，开发一种廉价的方法来检测AD大脑中的A+斑块将是一个受欢迎的新工具。许多实验室开始使用Cur，一种有前途的抗淀粉样天然多酚，用于标记和成像A+，以及AD6，7，8，9的治疗剂。其疏水性和嗜血性性质、与经典淀粉样结合染料的结构相似性、强大的荧光活性以及与 A+ 结合的强烈亲和力使其成为 AD 组织 10 中 A+ 斑块标记和成像的理想荧光素.Cur与A+斑块和寡聚物结合，其存在也在细胞内空间7，11，12，13中检测到。此外，已经表明，最小量（1⁄10 nM）的Cur可以标记A+斑块在5倍家族性阿尔茨海默氏病（5xFAD）脑组织7。虽然 1 nM 浓度不能为 A+ 斑块计数提供最佳荧光强度，但 Cur 的浓度为 10 nM 或更高。Ran和他的同事14日报告说，剂量低至0.2 nM的二氟龙衍生的Cur几乎可以检测体内A+沉积物和红外探头。此剂量是否足以标记组织中的 A+ 斑块仍不清楚。以前的大多数研究都使用 20-30 分钟使用 Cur 染色 A+ 斑块，但最佳染色可能需要的时间要少得多。
本研究旨在测试 Cur 在 AD 脑组织中标记 A+ 斑块所需的最短时间，并比较 5xFAD 小鼠在与其他常规小鼠染色后，在脑组织中标记和成像 A+ 斑块的灵敏度A+ 结合染料，如硫黄素-S（硫-S）、刚果红 （CR） 和氟-玉 C （FJC）。这些经典淀粉样结合染料的A+标记能力与5xFAD小鼠和年龄匹配的人类AD和控制脑组织的石蜡嵌入和冷冻冠状脑部分的Cur染色进行了比较。研究结果表明，Cur以类似于A+特异性抗体（6E10）的方式标记A+斑块，并比Thio-S、CR或FJC中更好。此外，当Cur到5xFAD小鼠的腹内注射被注射2~5天时，它越过了血脑屏障，并与A+斑块7结合。有趣的是，在5xFAD脑组织7，14中，纳米摩尔浓度已经被用来标记和图像A+斑块。此外，形态上截然不同的A+斑块，如核心、神经质、扩散和烧坏斑块，可以比任何其他传统的淀粉样结合染料7更高效地标记Cur。总体而言，Cur 可以以简单且廉价的方式应用于 AD 动物模型和/或人类 AD 组织死后脑组织中的 A+ 斑块的标签和图像，作为 A+ 特异性抗体的可靠替代品。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>IHC world, Woodstock, MD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aanimal model of Alzheimer&#39;s disease</td>
			<td>Jackson&#39;s laboratory, Bar Harbor, ME</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute alcohol</td>
			<td>VWR,Radnor, PA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 594</td>
			<td>Santacruz Biotech, Dallas, TX</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody 6E10</td>
			<td>Biolegend, San Diego, CA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody A11</td>
			<td>Millipore, Burlington, MA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compound light microscope</td>
			<td>Olympus, Shinjuku, Japan</td>
			<td>Olympus BX51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Congo red</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>GMI, Ramsey, MN</td>
			<td>LeicaCM1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curcumin</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium hydrogen phosphate</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dystyrene plasticizer xylene</td>
			<td>BDH, Dawsonville, GA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter papers</td>
			<td>Fisher scientific, Pittsburgh, PA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst-33342</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted fluorescent microscope</td>
			<td>Leica, Buffalo Grove, IL</td>
			<td>Leica DMI 6000B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted fluorescent microscope</td>
			<td>Olympus, Shinjuku, Japan</td>
			<td>Olympus 1x70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ploy-lysine coated charged glass slide</td>
			<td>Globe Scientific Inc, Mahwah, NJ</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>EMD Millipore, Burlington, MA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pentobarbital</td>
			<td>Vortex Pharmaceuticals limited, Dearborn, MI</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thioflavin-S</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X-100</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>VWR,Radnor, PA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

labeling and imaging of amyloid plaques in brain tissue using the natural polyphenol curcumin

淀粉样β蛋白（A+）在细胞外和细胞内空间沉积是阿尔茨海默氏病（AD）的显著疾病之一。因此，检测AD脑组织中A+的存在是开发新的治疗方法，防止AD进展的宝贵工具。几种经典的淀粉样结合染料、氟铬、成像探针和A+特异性抗体已用于检测AD脑组织中的A+组织。使用这些化合物进行A+检测既昂贵又耗时。然而，由于其强烈的荧光活性，高亲和力，和特殊性A+，以及结构相似性，传统的淀粉样结合染料，姜黄素（Cur）是一个有前途的候选标签和成像A+斑块在死后脑组织。它是来自草本姜黄龙的天然多酚。在本研究中，Cur在一分钟内从5倍家族性阿尔茨海默氏病（5xFAD）的遗传小鼠模型和人类AD组织中，用组织化学方式标记A+斑块。Cur 的标签能力与传统的淀粉样结合染料（如硫黄素-S（硫黄素-S）、刚果红 （CR） 和氟玉 C （FJC） 以及 A+ 特异性抗体 （6E10 和 A11）进行了比较。我们观察到，与这些传统染料相比，Cur 是最廉价、最快速的标记和图像 A+ 斑块的方法，与 A+ 特异性抗体相媲美。此外，Cur 与大多数 A+ 物种结合，如寡聚物和纤维蛋白。因此，Cur 可用作 A+ 斑块最经济、简单、快速的氟铬检测剂。

姜黄素在一分钟内标记A+斑块。当我们用Cur染色5xFAD组织时，我们发现Cur标签A+斑块在1分钟内。虽然Cur的孵育时间略有增加A+斑块的荧光强度，但观察到的A+斑块数量在1分钟至5分钟的染色时间之间没有显著差异（图1）。
Cur 可以在冷冻制备的石蜡嵌入小鼠和人类 AD 组织中标记 A+ 斑块，与小鼠 AD 脑组织中 A...

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Labeling and Imaging of Amyloid Plaques in Brain Tissue Using the Natural Polyphenol Curcumin

姜黄素是一种理想的荧光素，用于标记和成像脑组织中的淀粉样贝塔蛋白斑块，因为它优先结合淀粉样贝塔蛋白，并且与其他传统的淀粉样蛋白结合染料的结构相似。与传统方法相比，它可用于更高效、更廉价地标记和图像淀粉样β蛋白斑块。

使用天然多酚姜黄素对脑组织淀粉样斑块进行标记和成像

Deposition of amyloid beta protein (A&#946;) in extra- and intracellular spaces is one of the hallmark pathologies of Alzheimer&#39;s disease (AD). ...

与淀粉样抗体相比，该协议是准确标记β-淀粉样斑块的最有效和最具成本效益的方法，目前淀粉样抗体是标记这些斑块的黄金标准。这种技术需要更少的时间，并且与任何常用的淀粉样标签方法一样有效。姜黄素与淀粉样斑块紧密结合，在大脑 PET 扫描期间用作成像探针，并使用视网膜扫描进行相对非侵入性筛查。姜黄素还与阿尔茨海默病、帕金森病中的α合成素和亨廷顿舞蹈症中的突变亨廷顿蛋白结合在一起。与潘查南·迈蒂一起演示这个程序的将是研究生扎克里·鲍尔斯和来自我实验室的研究科学家亚历山德拉·普莱蒙斯。在确认麻醉的12个月大的阿尔茨海默氏症模型小鼠对疼痛反射缺乏反应后，将小鼠放在手术托盘上的超前位置，然后通过隔膜将切口切入腹部。将 21 量量灌注针插入切口，并在右侧尿管上做一个小切口，使灌注液从体内排出。使用重力注入灌注系统，让冰冷 0.1 摩尔 PBS 液体以每分钟 20 到 25 毫升的流速流入针头 5 到 6 分钟。如果灌注正确进行，将观察到一个明确的肝脏。适当的动物灌注是必不可少的，因为如果血液没有完全去除，姜黄素可能会与血管结合，并产生绿色荧光背景信号。当所有 PBS 已交付后，将缓冲阀切换到冰冷的 4% 半甲醛溶液 8 到 10 分钟，然后使用剪刀和钳子将大脑从头骨中释放出来。然后用铲子将大脑放入4%的半成甲醛小瓶中，至少是组织体积的10倍，储存4摄氏度，直到处理。为了获得低温分段，请按顺序将大脑浸入分级蔗糖溶液中，每次浓度为24小时，然后使用负22摄氏度的低温热器获得40微米分段，将每井10至20节放在含有PBS的六井板中，并辅以0.02%的azide。获得所有样品后，将部分存放在摄氏四度，直到进一步处理。为了获得石蜡分段，脱水后固定透水脑组织与连续分级酒精溶液每浓度两小时，然后两个一小时100%酒精浸入和两个一小时二甲苯浸入室温。最后一次二甲苯浸入后，用一对一二甲苯至石蜡溶液两次穿透组织，在56摄氏度的玻璃锥形玻璃中孵育一小时，用铝箔覆盖，然后将组织浸入56摄氏度石蜡中4至6小时。在孵育结束时，在室温下使用旋转微切，获得5微米厚的部分，在收集时将部分放置在45摄氏度的组织水浴中。对于低温统计组织部分淀粉样β斑块的姜黄素标签，每次洗涤用PBS冲洗三次，每次洗涤五分钟，然后将部分浸入70%乙醇中，在室温下煮两分钟。当这些部分孵育时，将一毫升的库存姜黄素溶解在甲醇中，用70%乙醇稀释溶液，最终工作浓度为10微摩尔。在孵育结束时，将部分浸入工作姜黄素溶液中，在室温下以每分钟 50 次旋转沉浸 10 分钟。在染色期结束时，丢弃姜黄素溶液，用三次两分钟用70%乙醇清洗。上次洗涤后，将截面转移到聚硅涂层玻璃滑轨上，并使用适当的有机安装介质将盖滑到每个滑轨上。然后使用 10 倍或 20 倍的物镜以及适当的激发和发射过滤器查看荧光显微镜上的部分。对于深石蜡组织部分的组化学标记，将五微米厚的部分浸入二甲苯中两次，在室温下浸入五分钟，然后进行分级一分钟酒精溶液浸入的补液。在孵育结束时，用分级酒精溶液清洗部分，每次浓度两分钟，然后用两次五分钟二甲苯浸入液清洗。第二次二甲苯浸入后，将每个部分安装到显微镜幻灯片上，并配有适当的安装介质，用于荧光显微镜成像，如所证明的。对于使用抗A-β抗体标记低温分段样品，在12孔板的个别孔中用新鲜PBS清洗样品三次，然后阻断PBS中10%正常山羊血清和0.5%三吨x-100在室温下一小时的非特异性结合。在孵育结束时，丢弃阻断溶液，在4摄氏度和每分钟150次旋转下，用β特异性抗体孵育样品。第二天早上，每次洗涤用3个10分钟的新鲜PBS清洗，然后用适当的二次抗体与红色荧光团结合孵育，在室温下保持1小时，防止光线。在孵育结束时，用PBS洗三次，然后用70%酒精洗一次。酒精洗涤后，在室温下用10微摩尔姜黄素孵育10分钟，然后3分钟70%酒精洗涤。上次洗涤后，每次浓缩一分钟，用90%和100%酒精脱水，每次浸入2次，每次浸泡用新鲜的二甲苯清除两次。。然后安装并成像演示的部分。对于细胞内淀粉样蛋白β共定位，用抗淀粉样β抗体染色部分，随后在室温下用姜黄素染色，每分钟50次旋转，防止光线受到光。在孵育结束时，在室温下用适当的核染料对进行10分钟的反染色，每分钟50次旋转，防止光线，然后用PBS进行三次洗涤。然后安装和成像部分的荧光显微镜，如所示。虽然用姜黄素增加孵育时间会稍微增加 A beta 斑块的荧光强度，但观察到的斑块数量在一到五分钟的染色时间之间没有显著差异。姜黄素可用于染色一个β斑块和冷冻，石蜡嵌入，和人类阿尔茨海默病组织样本。在姜黄素染色前用β特异性抗体标记表明，姜黄素与结合抗体的同一斑块中与Β完全结合。使用标有β寡聚物的姜黄素染色后，姜黄素与寡聚物共同定位可以在β斑块中观察到。同样，姜黄素还与细胞内空间中的 A beta 特异性抗体共同本地化，确认该污渍可以标记细胞内 A β。姜黄素标签也比传统的淀粉样结合染料更突出。姜黄提取物中发现的姜黄素衍生物标签 A beta 斑块相对与人类阿尔茨海默病脑组织中姜黄素，无论使用什么类型的安装介质。此外，姜黄素免疫荧光信号和反染色强度即使在染色与典型的核污渍和其他细胞标记后保持。我们遇到了恒定部分应该比40微米薄。此训练程序应保持在30分钟以下，最佳姜黄素浓度为1至2微摩尔。双水平迟钝生物标志物可以在同一组织上进行，并可以提供更高特异性的脑细胞类型正在被水平。鉴于姜黄素可以减少淀粉样斑块的负荷，目前正在细胞和分子水平上研究这个过程的精确机制。

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Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

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Modeling Amyloid-&#946;42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

Modeling Amyloid-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

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Visualization of Amyloid &#946; Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

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Visualizing Axonal Growth Cone Collapse and Early Amyloid &#946; Effects in Cultured Mouse Neurons

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