Name: generation of porcine testicular organoids with testis specific architecture using microwell culture
Uploaded: 2019-10-03T15:00:00
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Ce travail a été soutenu par NIH/NICHD HD091068-01 à la Dre Ina Dobrinski.

REMARQUE : Les testicules des porcelets d'une semaine ont été obtenus à partir d'une ferme porcine commerciale comme sous-produit de la castration de porcs commerciaux. L'approvisionnement en testicules a été approuvé par le Comité des soins aux animaux de l'Université de Calgary.
1. Préparation de solutions enzymatiques pour la digestion des tissus
REMARQUE : Trois solutions enzymatiques différentes sont nécessaires, qui comprennent deux solutions différe...

<ol>
	<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lgr5(+ve)+stem+cells+drive+self-renewal+in+the+stomach+and+build+long-lived+gastric+units+in+vitro.">Lgr5(+ve) stem cells drive self-renewal in the stomach and build long-lived gastric units in vitro.</a> Cell Stem Cell. 6 (1), 25-36 (2010).</li><li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unlimited+in+vitro+expansion+of+adult+bi-potent+pancreas+progenitors+through+the+Lgr5/R-spondin+axis.">Unlimited in vitro expansion of adult bi-potent pancreas progenitors through the Lgr5/R-spondin axis.</a> Embo Journal. 32 (20), 2708-2721 (2013).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li><li>Takebe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascularized+and+functional+human+liver+from+an+iPSC-derived+organ+bud+transplant.">Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant.</a> Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).</li><li>Quadrato, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+diversity+and+network+dynamics+in+photosensitive+human+brain+organoids.">Cell diversity and network dynamics in photosensitive human brain organoids.</a> Nature. 545 (7652), 48-53 (2017).</li><li>Abbott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+culture:+biology's+new+dimension.">Cell culture: biology's new dimension.</a> Nature. 424 (6951), 870-872 (2003).</li><li>Pendergraft, S. S., Sadri-Ardekani, H., Atala, A., Bishop, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+testicular+organoid:+a+novel+tool+for+the+study+of+human+spermatogenesis+and+gonadotoxicity+in+vitrodagger.">Three-dimensional testicular organoid: a novel tool for the study of human spermatogenesis and gonadotoxicity in vitrodagger.</a> Biology of Reproduction. 96 (3), 720-732 (2017).</li><li>Strange, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+testicular+organoid+system+as+a+novel+tool+to+study+Zika+virus+pathogenesis.">Human testicular organoid system as a novel tool to study Zika virus pathogenesis.</a> Emerging Microbes &amp; Infections. 7 (1), 82-82 (2018).</li><li>Alves-Lopes, J. P., Soder, O., Stukenborg, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testicular+organoid+generation+by+a+novel+in+vitro+three-layer+gradient+system.">Testicular organoid generation by a novel in vitro three-layer gradient system.</a> Biomaterials. 130, 76-89 (2017).</li><li>Baert, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Human+Testicular+Cells+Self-Organize+into+Organoids+with+Testicular+Properties.">Primary Human Testicular Cells Self-Organize into Organoids with Testicular Properties.</a> Stem Cell Reports. 8 (1), 30-38 (2017).</li><li>Sakib, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+organotypic+testicular+organoids+in+microwell+culture.">Formation of organotypic testicular organoids in microwell culture.</a> Biology of Reproduction. , (2019).</li><li>Razian, G., Yu, Y., Ungrin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+Large+Numbers+of+Size-controlled+Tumor+Spheroids+Using+Microwell+Plates.">Production of Large Numbers of Size-controlled Tumor Spheroids Using Microwell Plates.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), 50665 (2013).</li><li>Sakib, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+organotypic+testicular+organoids+in+microwell+culture.">Formation of organotypic testicular organoids in microwell culture.</a> Biology of Reproduction. 100 (6), 1648-1660 (2019).</li><li>Gonz&#225;lez, R., Dobrinski, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+the+Mouse+Monopoly:+Studying+the+Male+Germ+Line+in+Domestic+Animal+Models.">Beyond the Mouse Monopoly: Studying the Male Germ Line in Domestic Animal Models.</a> ILAR Journal. 56 (1), 83-98 (2015).</li><li>Oatley, J. M., Brinster, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+germline+stem+cell+niche+unit+in+mammalian+testes.">The germline stem cell niche unit in mammalian testes.</a> Physiological Reviews. 92 (2), 577-595 (2012).</li><li>Chen, L. Y., Willis, W. D., Eddy, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Gdnf+Gene+in+peritubular+myoid+cells+disrupts+undifferentiated+spermatogonial+cell+development.">Targeting the Gdnf Gene in peritubular myoid cells disrupts undifferentiated spermatogonial cell development.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 113 (7), 1829-1834 (2016).</li></ol>

Nous avons établi une méthode simple qui permet la génération cohérente et reproductible d'un grand nombre d'organoïdes testiculaires avec l'architecture de tissu qui est semblable au testicule in vivo12. Bien que l'approche ait été développée à l'aide de cellules de testicules porcines, elle s'applique plus largement aussi aux testicules de souris, de primates non humains et de testicules humains12. Un certain nombre de méthodes différentes ont été rapporté...

Ces dernières années, il y a eu un regain d'intérêt pour les organoïdes tridimensionnels (3D). Différents organes tels que l'intestin1, estomac2, pancréas3,4, foie5, et le cerveau6 ont été avec succès dérivés dans les systèmes organoïdes 3D. Ces organoïdes ont des similitudes architecturales et fonctionnelles avec les organes in vivo et sont plus biologiquement pertinents pour l'étude du microenvironnement tissulaire que les systèmes de culture monocouches7. En conséquence, organoïdes testiculaires ont commencé à susciter l'intérêt ainsi8,9,10,11,12. La majorité des méthodes signalées jusqu'à présent sont complexes, sans haut débit10 et nécessitent l'ajout de protéines ECM8,10. Cette complexité entraîne également des problèmes de reproductibilité. Une méthode simple et reproductible est nécessaire qui permet la génération d'organoïdes testiculaires avec des cellules-associations qui sont comme le testicule in vivo.
Nous avons récemment signalé un système pour répondre à ces exigences12. En utilisant le porc comme modèle, nous avons utilisé une approche centrifuge d'agrégation forcée dans le système de micropuits. Dans le système de micropuits, chaque puits contient un grand nombre de micropuits identiques plus petits13. Cela permet la génération de nombreux sphéroïdes de taille uniforme. Le système de micropuits a permis la génération d'un grand nombre d'organoïdes uniformes avec une architecture spécifique aux testis. Le système est simple et ne nécessite pas l'ajout de protéines ECM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mm ultra low attachment tissue culture dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#CLS3262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm tissue culture dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#353803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aggrwell 400</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>#34411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Adherence Rinsing Solution</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>#07010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type IV from Clostridium histolyticum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#C5138</td>
			<td>referred as Collagenase IV S</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type IV Worthington</td>
			<td>Worthington-Biochem</td>
			<td>#LS004189</td>
			<td>referred as Collagenase IV W</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#DN25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#11330-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium - high glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#D6429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal Growth Factor</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>#236-EG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell Strainers 70 &#181;m</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>#352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell Strainers 40 &#181;m</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>#352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#12483-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Transferrin-Selenium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#41400-045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porcine testicular tissue</td>
			<td>Sunterra Farms Ltd (Alberta, Canada)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip-GP Sterile Centrifuge Tube Top Filter Unit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>#SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>#T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of porcine testicular organoids with testis specific architecture using microwell culture

Les organoïdes sont des structures tridimensionnelles composées de plusieurs types de cellules qui sont capables de récapituler l'architecture tissulaire et les fonctions des organes in vivo. La formation d'organoïdes a ouvert différentes voies de recherche fondamentale et translationnelle. Ces dernières années, les organoïdes testiculaires ont suscité l'intérêt dans le domaine de la biologie de la reproduction masculine. Les organoïdes testiculaires permettent l'étude des interactions cellules-cellules, du développement des tissus et du microenvironnement de niche des cellules germinales et facilitent le dépistage des médicaments à haut débit et de la toxicité. Une méthode est nécessaire pour générer de façon fiable et reproductible des organoïdes testiculaires avec l'architecture spécifique de tissu de testicule. Le système de culture des micropuits contient un réseau dense de micropuits en forme de pyramide. Les cellules testiculaires dérivées des testicules pré-puberté sont centrifugeuses dans ces micropuits et cultivées pour produire des organoïdes testiculaires avec l'architecture de tissu testis-spécifique et les associations cellulaires. Des milliers d'organoïdes homogènes peuvent être générés par ce processus. Le protocole rapporté ici sera d'un grand intérêt pour les chercheurs qui étudient la reproduction masculine.

Cellules isolées de testicules porcins d'une semaine qui ont été cultivés dans les micropuits auto-organisés en sphéroïdes (Figure 1A, Figure 2), avec un extérieur délimité et distinct (épithélium séminifère) et des compartiments intérieurs ( interstitium) (Figure 1B, Figure 2). Les deux compartiments ont été séparés p...

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Generation of Porcine Testicular Organoids with Testis Specific Architecture using Microwell Culture

Ici, nous présentons un protocole pour la génération reproductible des organoïdes testiculaires porcins avec l'architecture spécifique de tissu de testicule utilisant le système commercial disponible de culture de microwell.

Génération d'organoïdes testiculaires porcins avec l'architecture spécifique de Testis utilisant la culture de Microwell

Organoids are three dimensional structures composed of multiple cell types that are capable of recapitulating tissue architecture and functions of organs ...

Ce protocole est significatif parce qu’il permet la génération d’organoïdes testicules, qui peuvent être utilisés comme une plate-forme pour étudier la morphogenèse des testicules et pour les dépistages de médicaments tropo élevés et de toxicité. Le principal avantage de cette technique est qu’elle est hautement reproductible, nécessite un nombre relativement faible de cellules et peut être utilisée pour générer un grand nombre d’organoïdes testiculaires avec une architecture spécifique aux testicules. Cette méthode peut être appliquée pour étudier d’autres systèmes, tels que les cellules souches pluripotentes ou les cellules des îlots pancréatiques avec les optimisations nécessaires.Anna Voigt, doctorante de mon laboratoire, démontrera la procédure de digestion enzymatique des tissus testiculaires. Recueillir les testicules dans un bécher stérile et laver avec PBS contenant 1% de streptomycine de pénicilline. Après lavage transférer le testicilline à un plat de culture de tissu de 100 millimètres avec PBS contenant 1% de streptomycine de pénicilline.Utilisez des ciseaux et des forceps autoclavés pour enlever le tunica vaginalis et l’épididyme. Transférer les testicules isolés dans un nouveau plat de 100 millimètres et bien laver avec du PBS contenant 1% de streptomycine de pénicilline. Couper les testicules le long de l’axe longitudinal directement sous la tunica.Peler ensuite les testicules de la tunica à l’aide de deux forceps et les placer dans un nouveau plat de 100 millimètres contenant 1 millilitre de DMEM avec 1% de streptomycine de pénicilline. Hacher les testicules pelés avec des ciseaux stériles en morceaux de tissu d’un à deux millimètres. Après hacher utiliser des forceps stériles pour enlever les fragments blancs de tissu conjonctif.Transférer les morceaux de tissu hachés dans la solution A dans un tube de 50 millilitres et le recharger jusqu’à 50 millilitres avec DMEM pour obtenir une concentration de 0,4 milligramme par millilitre pour la colagénase 4S et une concentration de 0,8 milligramme par millilitre pour colagenase 4W. Placez le tube contenant les morceaux de tissu dans un bain d’eau de 37 degrés Celsius pendant 30 minutes. Inverser doucement le tube toutes les cinq minutes.Après 30 minutes, centrifuger le tube à 90 fois G avec des pauses à 25 degrés Celsius pendant 1,5 minutes. Jetez le supernatant, annoncez 40 millilitres de solution B, et rechargez jusqu’à 50 millilitres avec DMEM pour obtenir une concentration de 1,2 milligramme par millilitre de colagenase 4W. Placez le tube dans un bain d’eau de 37 degrés Celsius pendant 30 minutes et inversez doucement le tube toutes les cinq minutes.Centrifuger le tube à 90 fois G avec des pauses à 25 degrés Celsius pendant 1,5 minutes. Après cela jeter le supernatant, et laver une fois avec PBS avec 1% streptocotomycine pénicilline. Recueillir soigneusement les tubules par le haut et les placer dans un nouveau tube de 50 millilitres.Recharger le tube avec PBS jusqu’à 50 millilitres. Centrifuger les tubules à 90 fois G avec des pauses à 25 degrés Celsius pendant 1,5 minutes. Jetez le supernatant et ajoutez du PBS frais pour le laver deux fois de plus.Après le dernier lavage PBS enlever le supernatant et re-suspendre les tubules séminifères en cinq millilitres de PBS. Ensuite, ajouter 15 millilitres de 0,25%Trypsin EDTA aux tubules. Placez le tube dans un bain d’eau de 37 degrés Celsius et inversez doucement toutes les deux minutes.Après cinq minutes évaluer la digestion enzymatique des tubules à des cellules simples sous le microscope avec 10 microlitres d’échantillon sur une plaque de culture tissulaire. Toutes les deux minutes, placez l’échantillon sous le microscope pour l’observer. Si la plupart des cellules simples peuvent être détectées arrêter la réaction avec cinq millilitres de FBS et filtrer à travers un maillage de 70 microns, puis à travers un maillage de 40 microns.Centrifuger les cellules individuelles à 500 fois G avec des pauses à 25 degrés Celsius pendant cinq minutes. Re-suspendre en 50 millilitres de milieu d’enrichissement, et compter le nombre de cellules viables à l’aide d’un hémomètre. Transférer 20 millions de cette population de cellules de départ dans chacune des deux boîtes de Pétri ultra-faibles de 100 millimètres et incuber dans un incubateur de culture tissulaire à 37 degrés Celsius, 5 % de dioxyde de carbone et 21 % d’oxygène pendant deux jours.Céder 20 à 25 millions de cellules de la population restante de cellules de départ par plat de culture tissulaire de 100 millimètres dans un volume total de huit millilitres de milieu d’enrichissement. Placez le plat dans un incubateur et après 1h30 assurez-vous que la majorité des cellules sertoli sont fixées à l’assiette. Inclinez légèrement deux plaques pour recueillir et combiner les supernatants dans une nouvelle plaque de 100 millimètres et placez-la de nouveau dans l’incubateur.Après une heure, mélanger à nouveau les supernatants de deux plaques à une nouvelle plaque de 100 millimètres. Remettre les assiettes dans l’incubateur toute la nuit. Puis recueillir les cellules germinales enrichies en deux fractions, fraction non adhérente et fraction légèrement adhérente.Recueillir le supernatant comme la fraction non adhérente. Pour la fraction légèrement adhérente laver les assiettes doucement avec PBS et traiter avec deux millilitres d’une dilution d’un à 20 de 0,25%Trypsin EDTA pendant cinq minutes à température ambiante. Arrêter la réaction en ajoutant deux millilitres de milieu d’enrichissement et de recueillir dans le tube fraction non adhérent.Combinez la préparation des cellules de départ et les cellules germinales enrichies dans un tube pour obtenir une préparation cellulaire de travail contenant 25% de cellules germinales. Centrifugeuse à 500 fois G avec des pauses à 25 degrés Celsius pendant cinq minutes. Jetez le supernatant et suspendez les cellules en 20 millilitres de milieu de formation organoïde pour atteindre une concentration de 2,4 millions de cellules par millilitre.Dans un nouveau tube ajouter un millilitre de la solution contenant des cellules. Ajouter 0,5 millilitres de solution de rinçage surfactant à chaque puits dans une plaque de micro puits. Assurez-vous qu’aucune bulle d’air n’est emprisonnée dans le puits.Pour enlever les bulles d’air centrifuger la plaque à 2000 fois G avec des pauses à 25 degrés Celsius pendant deux minutes. Observez la plaque sous un microscope inversé à faible grossissement pour vérifier que les bulles ont été retirées des micro puits. Couvrir la plaque d’un couvercle et incuber pendant 30 minutes à température ambiante.Une fois le traitement terminé, retirez la solution de rinçage et lavez immédiatement la plaque avec de l’eau stérile ou du PBS. Ajouter 0,5 millilitres de milieu de formation organoïde à chaque puits et centrifugeuse à 2000 fois G avec des pauses à 25 degrés Celsius pendant deux minutes pour éliminer les bulles d’air emprisonnées. Observez le puits sous un microscope inversé à faible grossissement pour vérifier que les bulles d’air ont été enlevées.Ajouter 0,5 millilitres de la suspension de la cellule de travail et mélanger délicatement en pipetting de haut en bas. Centrifugeuse à 500 fois G avec des pauses à 25 degrés Celsius pendant cinq minutes. Utilisez un microscope inversé pour vérifier que les cellules se sont regroupées dans les micro puits.Transférer la plaque dans un incubateur de culture cellulaire et la culture pendant cinq jours. Changez la moitié du milieu tous les deux jours. Pour récupérer les organoïdes, utilisez une pipette à large bouche pour pipette doucement le milieu de haut en bas.Cela permet aux organoïdes de sortir des micro puits. Recueillir les organoïdes, fixer et effectuer la cytochimie immuno pour marqueur de cellules germinales, marqueur cellulaire Sertoli, marqueur cellulaire myoïde péritubulaire et marqueur cellulaire Leydig et visualiser sous un microscope confocal. Dans cette étude, les cellules isolées des testicules porcins d’une semaine qui ont été cultivés dans des micro puits auto-organisés en sphéroïdes avec des compartiments extérieurs et intérieurs délimités et distincts.Les deux compartiments ont été séparés par une membrane positive de sous-sol de collagène IV. Les cellules sertoli positives GATA4 et les cellules germinales positives UCHL1 se trouvaient dans le compartiment extérieur de la membrane du sous-sol. Les cellules myoïdes péri tubulaires positives d’aSMA ont été localisées le long de l’intérieur de la membrane de sous-sol tandis que les cellules positives de Leydig de CYP450 étaient au centre de l’interstitium.Cette structure est similaire aux conditions in situ, où les cellules Leydig, cellules myoïdes péri-tubulaires, sont situées dans l’interstitium, dans le compartiment interstitiel et les cellules germinales, les cellules sertoli sont situées à l’épithélium séminifère. Il est important de s’assurer que les cellules utilisées pour générer des organoïdes ont une qualité optimale. Une attention particulière doit être accordée pendant le stade de trypsinisation de la digestion enzymatique.Après cette procédure, les organoïdes peuvent être cultivés à long terme pour étudier la différenciation des cellules germinales ou analyser l’expression des gènes et les protéines ou hormones sécrétées. La capacité de créer des organoïdes avec des associations cellulaires spécifiques aux testicules fournit un nouveau système in vitro pour étudier les interactions cellule-cellule importantes pour le développement des testicules et la fonction des cellules germinales.

Research

JoVE Journal

Medicine

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